1、.,1,抗腫瘤壞死因子藥物 和重組細(xì)胞因子,楊春華 講師 2014.5.21,2,.,抗腫瘤壞死因子藥物,重組細(xì)胞因子,3,.,腫瘤壞死因子（Tumor Necrosis Factor,TNF) 1975年由Carswell在研究中觀察到，經(jīng)卡介苗致敏的小鼠被注射大腸桿菌內(nèi)毒素后，血清中出現(xiàn)一種物質(zhì)，該物質(zhì)在體內(nèi)可以使移植腫瘤發(fā)生出血、壞死，遂將該物質(zhì)命名為腫瘤壞死因子TNF。 TNF-主要由單核巨噬細(xì)胞分泌，又稱為惡液素； TNF-主要由活化的T淋巴細(xì)胞分泌。 兩型TNF有不同的細(xì)胞來源,DNA水平上也僅有28%的核苷酸序列同源,但兩者結(jié)合于相同的膜受體,并且具有非常相似的生物學(xué)功能。,4,

2、.,1984年P(guān)ennica等首次克隆了人TNF-的cDNA，并在大腸桿菌中表達(dá)成功。 20世紀(jì)80年代末，西方國家就已批準(zhǔn)了人TNF治療惡性腫瘤的臨床試驗(yàn)，但因毒副作用太強(qiáng)而未能進(jìn)行下去。 1995年，第四軍醫(yī)大學(xué)研制的突變體新型人重組腫瘤壞死因子（nrhTNF），其殺傷腫瘤細(xì)胞的活性是天然人TNF的100倍，毒性降低了3倍。2003年8月，正式獲得新藥生產(chǎn)文號。這是目前世界上第一個(gè)被批準(zhǔn)生產(chǎn)的重組改構(gòu)人腫瘤壞死因子藥物。,1-7,8-P-S-D-10,8- R-L-R -10,157L,157P,1,233,5,.,免疫：TNF是一種真正的多效因子，具有多種生物學(xué)效應(yīng)。它可直接作用于T細(xì)胞

3、、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞， 在細(xì)胞水平上發(fā)揮作用。 抗腫瘤：TNF通過受體介導(dǎo)對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用，抑制細(xì)胞生長和誘導(dǎo)凋亡，通過損傷腫瘤的血供系統(tǒng)而導(dǎo)致腫瘤的壞死，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥，增加對化療藥物的敏感性。 炎癥反應(yīng)：TNF誘導(dǎo)黏附分子表達(dá)，促進(jìn)白細(xì)胞黏附于血管內(nèi)皮細(xì)胞，使白細(xì)胞向炎癥部位滲出，誘導(dǎo)其他炎性細(xì)胞因子的合成。 抗感染：抑制瘧原蟲生長、抑制病毒復(fù)制、抑制病毒蛋白合成、抑制病毒顆粒產(chǎn)生和感染性以及殺傷病毒感染細(xì)胞。 其他,6,.,感染性休克 ：目前認(rèn)為革蘭氏陰性桿菌或腦膜炎球菌引起的彌漫性血管內(nèi)凝血、中毒性休克是由于細(xì)菌內(nèi)毒素刺激機(jī)體產(chǎn)生過量TNF-，引起發(fā)熱，心臟、腎

4、上腺嚴(yán)重?fù)p害，呼吸循環(huán)衰竭，甚至引起死亡，其TNF水平與病死率正相關(guān)。,惡液質(zhì) ：TNF-又稱惡液素（cachectin)，可誘發(fā)機(jī)體發(fā)生惡液質(zhì)。,TNF與病毒復(fù)制的關(guān)系 ：TNF還具有類似IFN抗病毒作用，阻止病毒早期蛋白質(zhì)的合成，從而抑制病毒的復(fù)制，并與TNF-等協(xié)同抗病毒作用。另一方面，TNF誘導(dǎo)HIV-基因在T細(xì)胞中表達(dá)。TNF和HIV感染的CD4+細(xì)胞中活化或誘導(dǎo)NF-kB，NF-kB結(jié)合于HIV的長末端重復(fù)序列（LTR）的增強(qiáng)子部位，活化HIV基因，可能與艾滋病發(fā)病有關(guān)。艾滋病患者單核細(xì)胞TNF-產(chǎn)生增加，血清中TNF-水平升高。,7,.,TNF與類風(fēng)濕疾病,類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎( RA

5、) 是一種以關(guān)節(jié)疼痛、腫脹、僵直、變形為主要臨床表現(xiàn)的慢性全身性自身免疫性疾病。早期表現(xiàn)為關(guān)節(jié)游走性疼痛和功能障礙, 晚期則表現(xiàn)為關(guān)節(jié)僵硬、畸形、廢而不用。,8,.,類風(fēng)濕的發(fā)生部位及機(jī)理,9,.,雷公藤：,消炎痛、布洛芬、阿司匹林、美舒寧等環(huán)氧化酶抑制劑,柳氮磺吡啶、甲氨蝶呤（MTX）、氯喹及青霉胺、金制劑等,糖皮質(zhì)激素,腫瘤壞死因子(TNF)-拮抗劑，包括依那西普單抗(etanercept)、英夫利西單抗(infliximab)和阿達(dá)木單抗(adalimumab),亦可使用雷公藤、白芍總苷、青藤堿等植物制劑緩解關(guān)節(jié)疼痛或采用手術(shù),10,.,11,.,抗腫瘤壞死因子藥物,重組細(xì)胞因子,12,

6、.,牛奶中添加OMP，即造骨牛奶蛋白（Osteoblasts Milk Protein），一種微量存在于牛乳中的天然活性蛋白，在有效提高人體骨密度方面。,OMP實(shí)際上是國外研究很多的一種生長因子IGF-1(insulin-like growth factors -1,類胰島素生長因子)，不僅不能造骨，還有致癌風(fēng)險(xiǎn)。,鑒于目前我國未對OMP的安全性做出明確規(guī)定，IGF-1物質(zhì)不是傳統(tǒng)食品原料，也未列入食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)，如人為添加上述物質(zhì)，不符合現(xiàn)有法律法規(guī)的規(guī)定。 國家質(zhì)檢總局,13,.,細(xì)胞因子（cytokine）是由由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞

7、（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）產(chǎn)生的一類調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的高活性、多功能的多肽分子，不包括免疫球蛋白、補(bǔ)體和一般生理性的細(xì)胞產(chǎn)物。,14,.,細(xì)胞因子的特點(diǎn)： 可溶性（soluble），胞外蛋白（extracellular） 大小為150氨基酸左右 可由許多細(xì)胞產(chǎn)生，主要由淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞和上皮細(xì)胞產(chǎn)生 細(xì)胞受傷害或感染時(shí)誘導(dǎo) 靶細(xì)胞可為多種類型 與靶細(xì)胞上的受體結(jié)合后起作用 調(diào)控免疫系統(tǒng) 調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化、死亡以及血管生成,15,.,重組細(xì)胞因子是利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)的細(xì)胞因子產(chǎn)品，作為藥物用于治療腫瘤、感染、造血障礙等，可收到良好的療效。近十多年來，重組細(xì)胞因子類藥物的研制有較快發(fā)展，

8、相關(guān)的新藥陸續(xù)上市。,16,.,細(xì)胞因子根據(jù)功能可大致分為六大類： 腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF） 干擾素（interferon, IFN） 白細(xì)胞介素（interleukins，ILs） 集落刺激因子(colony- stimulating factor，CSF) 趨化因子（chemokines） 生長因子（growth factor，GF）,17,.,干擾素,干擾素是由病毒和其他種類的干擾素誘導(dǎo)劑，刺激網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)（人體免疫系統(tǒng)的一種）、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及體細(xì)胞所產(chǎn)生的一種糖蛋白。這種蛋白具有多種生物活性，包括抗增殖、免疫調(diào)節(jié)、抗病毒和誘導(dǎo)分化作用

9、。,干擾素種類繁多，分子量也不同，亦有不同的抗原性。目前了解由人的不同細(xì)胞產(chǎn)生的干擾素至少有三種不同的抗原成分： 白細(xì)胞干擾素抗原(Le)- IFN- 人成纖維細(xì)胞干擾素抗原（F）- IFN- T淋巴細(xì)胞干擾素抗原（T）- IFN-,18,.,根據(jù)來源、基因序列和氨基酸組成分類 I 型干擾素： IFN、IFN、IFN 、IFN 來源：白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、病毒感染的組織細(xì)胞等 功能 ：抗病毒感染、抗腫瘤生長 免疫調(diào)節(jié)(較弱）其中IFN-為多基因產(chǎn)物，有23種以上的亞型。 II 型干擾素：干擾素（IFN) 來源：活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生 功能：免疫調(diào)節(jié),19,.,干擾素不能直接滅活病毒，而是通過

10、誘導(dǎo)細(xì)胞合成抗病毒蛋白（AVP）發(fā)揮效應(yīng)，實(shí)現(xiàn)對病毒的抑制作用。 免疫調(diào)節(jié)作用表現(xiàn)在對宿主免疫細(xì)胞活性的影響，如對巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞和NK細(xì)胞等均有一定作用。,干擾素不殺死病毒，只是阻礙病毒合成,20,.,天然干擾素 人體淋巴母細(xì)胞樣多亞型天然干擾素（IFN-N1），葛蘭素威康公司（英國）生產(chǎn)，商品名為惠福仁。 重組干擾素 IFN1b：世界上第一個(gè)采用中國人干擾素基因克隆和表達(dá)的IFN1b型干擾素，商品名為賽若金，深圳科興生物制品有限公司生產(chǎn)，有300萬U/支和500萬U/支兩種劑量。 IFN-2a：羅氏公司（瑞士）生產(chǎn)的羅擾素，有300萬U/支和450萬U/支兩種劑量；沈陽三生公司生產(chǎn)

11、的因特芬，每支300萬U；遼寧衛(wèi)星生物研究所生產(chǎn)的迪恩安，每支300萬U和500萬U兩種劑型。 IFN2b：先靈葆雅（美國）公司生產(chǎn)的干擾能300萬U/支和500萬U/支；天津華立達(dá)公司生產(chǎn)的安福隆，300萬U/支；安徽安科公司生產(chǎn)的安達(dá)芬，100萬U/支、300萬U/支、500萬U/支；合肥兆峰科大藥業(yè)有限公司，尤靖安，1.0*105IU/g 。,21,.,干擾素在臨床上廣泛應(yīng)用于慢性乙型肝炎、丙型肝炎以及腎癌、表淺膀胱癌、黑色素瘤、尖銳濕疣、血液系統(tǒng)疾病、艾滋病相關(guān)的卡波濟(jì)肉瘤等的治療。 在國內(nèi)重組人干擾素和重組人生長激素市場，呈現(xiàn)國產(chǎn)藥品和進(jìn)口藥品并存的格局。進(jìn)口重組人干擾素為長效干擾素

12、，價(jià)格偏高，單價(jià)均在1000元左右。國產(chǎn)重組人干擾素為普通干擾素，最高劑量的單價(jià)只在100元左右，普通干擾素市場競爭也主要集中在國內(nèi)生產(chǎn)企業(yè)之間。,22,.,1972年發(fā)現(xiàn)第一個(gè)成員IL-1。 1983年發(fā)現(xiàn)IL-2，其在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮核心調(diào)節(jié)作用。 到2001年，已有23個(gè)成員，從IL-1到IL-23。 只有IL-2和IL-11成功開發(fā)為基因工程藥物。 IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-15正在研究開發(fā)，有的已進(jìn)入臨床二期試驗(yàn)。,白細(xì)胞介素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生并作用于多種細(xì)胞的一類細(xì)胞因子。由于最初是由白細(xì)胞產(chǎn)生又在白細(xì)胞間發(fā)揮作用，所以由此得名，現(xiàn)仍一直沿用。 白細(xì)胞介素(in

13、ter leukin)縮寫為IL。,白細(xì)胞介素,.,23,白細(xì)胞介素IL-2和IL-11,.,24,白細(xì)胞介素IL-2處于調(diào)節(jié)機(jī)體免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的中心環(huán)節(jié)，誘導(dǎo)和激活免疫活性細(xì)胞 通過自分泌活化T細(xì)胞，促細(xì)胞因子產(chǎn)生；刺激NK細(xì)胞增殖，增強(qiáng)NK殺傷活性及產(chǎn)生細(xì)胞因子，誘導(dǎo)LAK細(xì)胞產(chǎn)生；促B細(xì)胞增殖和分泌抗體。 腫瘤治療，批準(zhǔn)治療的有腎細(xì)胞癌、血管肉瘤和黑色素瘤；抗感染治療，對病毒性、細(xì)菌性和細(xì)胞內(nèi)寄生蟲等疾病具有療效；對先天性和后天性免疫缺陷癥有一定療效,.,25,白細(xì)胞介素IL-11是造血微環(huán)境中一個(gè)多功能的調(diào)節(jié)因子。 促進(jìn)血小板生成；誘導(dǎo)T細(xì)胞、B細(xì)胞的發(fā)育、分化并對特異性抗原反

14、應(yīng)產(chǎn)生免疫球蛋白；調(diào)節(jié)肝細(xì)胞血漿蛋白基因的表達(dá)，誘導(dǎo)急性期蛋白生成 實(shí)體瘤、非髓性白血病化療后、度血小板減少癥的治療；骨髓造血功能障礙性血小板減少癥的治療，可縮短血小板減少的持續(xù)時(shí)間,26,.,集落刺激因子,集落刺激因子(colony stimulating factor, CSF) 可刺激骨髓未成熟細(xì)胞分化成熟并在體外刺激集落形成的細(xì)胞因子。 用集落培養(yǎng)方法發(fā)現(xiàn)的造血細(xì)胞生長因子 不同的CSF刺激生成由不同細(xì)胞系組成的細(xì)胞集落,27,.,根據(jù)細(xì)胞因子刺激不同造血細(xì)胞系或不同分化階段的細(xì)胞在半固體培養(yǎng)基中形成不同細(xì)胞集落，分別命名: 粒細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte CSF, G-C

15、SF） 粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage CSF, GM-CSF) 巨噬細(xì)胞集落刺激因子（macrophage CSF, M-CSF) 多能集落刺激因子（muti-CSF） 紅細(xì)胞生成素（erythropoietin, EPO) 血小板生成素（thrombopoietin, TPO） 干細(xì)胞因子（stem cell factor, SCF),28,.,粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF) 促進(jìn)骨髓造血細(xì)胞增殖分化；形成粒細(xì)胞集落；誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞終末分化；增強(qiáng)中性粒細(xì)胞的功能 腫瘤病人放、化療后的輔助用藥，自體骨髓移植，治療骨髓再生不良綜合癥，治療重癥慢性粒細(xì)

16、胞減少癥，艾滋病,29,.,粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF) 維持粒細(xì)胞系和單核細(xì)胞系細(xì)胞存活，促進(jìn)其生長，誘導(dǎo)其分化，增強(qiáng)其功能，具有種屬特異性 腫瘤病人放、化療所致的造血障礙，骨髓移植，治療骨髓異常增生綜合癥，再生障礙性貧血艾滋病,30,.,巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF) 刺激巨噬細(xì)胞的前體增殖分化為巨噬細(xì)胞，誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生GM-CSF、G-CSF、TNF、前列腺素和活性氧，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞抗白色念珠菌和抗腫瘤的活性，具有單向種屬特異性 腫瘤病人放、化療后加速造血細(xì)胞的恢復(fù)，毒副作用有發(fā)熱、皮疹、頭痛、胸痛、肌肉痛、畏光等,31,.,三種主要集落刺激因子比較,32,.,33,.,思考題,細(xì)胞因子可分成幾類，各舉一個(gè)例子。,34,.,后面內(nèi)容直接刪除就行 資料可以編輯修改使用 資料可以編輯修改使用,35,.,主要經(jīng)營