1、分離含酚污水降解菌，一、目的是學(xué)習(xí)從含酚工業(yè)廢水、活性污泥中篩選降酚菌。 通過(guò)活性污泥培養(yǎng)學(xué)習(xí)苯酚耐受力的馴化與分離，二、實(shí)驗(yàn)原理許多微生物能夠從不同的化學(xué)基物中獲得能量，具有分解某些特殊污染物的能力，這是當(dāng)前環(huán)境微生物研究的重點(diǎn)。 本次實(shí)驗(yàn)以分離、純化和篩選含酚污水降解菌為例，介紹了一種特殊污染物微生物降解菌的篩分法. 傾斜平板法分離純化等微生物不能在含酚培養(yǎng)基中生長(zhǎng)，酚耐藥菌株的篩選可以采用與藥物耐藥菌株的篩選同樣的傾斜扳手法。 即在培養(yǎng)基中加入定量的藥物。 使大量細(xì)胞球中的少數(shù)耐受力菌細(xì)胞在平板上一定量的藥品部位發(fā)生菌落生長(zhǎng)。 判定該菌的酚耐受力。 三、實(shí)驗(yàn)材料1、含菌源酚工業(yè)污水或含酚

2、廢水負(fù)感作用池中的活性污泥2、培養(yǎng)基耐酚細(xì)菌培養(yǎng)基、固體(平板、斜面)和液體兩種。 固體：牛肉糊蛋白蛋白胨固體培養(yǎng)基，滅菌后，加入苯酚6g/L。 3、用于其他物品稀釋分離的裝有無(wú)菌水的試管，每組6根。 無(wú)菌移液器，每組2根。 四、分步實(shí)驗(yàn)分離耐酚菌馴化性能測(cè)定，四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1傾斜平板在現(xiàn)有菌培養(yǎng)皿中調(diào)制，先倒下710 ml不含酚的現(xiàn)有菌細(xì)菌或真菌培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿側(cè)置于木條上，使皿中的培養(yǎng)基傾斜，恰好完全復(fù)蓋培養(yǎng)皿底部，培養(yǎng)基凝固后， 平整培養(yǎng)皿，再倒下溶解了710 m1的無(wú)菌耐酚性真菌培養(yǎng)基或耐酚性細(xì)菌培養(yǎng)基(苯酚的最終濃度為75mg/100 m1 )，恰好復(fù)蓋下層斜面，由于苯酚的擴(kuò)散作用，上層

3、培養(yǎng)基薄部分的苯酚濃度大大降低，上層培養(yǎng)基厚，因此薄。 (1)分離苯酚分解菌1的傾斜平板，先倒下710 ml不含苯酚的現(xiàn)有菌的細(xì)菌培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿側(cè)置于木棒上，使培養(yǎng)皿的培養(yǎng)基傾斜，恰好完全復(fù)蓋培養(yǎng)皿的底部，培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)皿平整， 倒下溶解了710 m1的無(wú)菌耐酚細(xì)菌培養(yǎng)基，恰好完全復(fù)蓋下層斜面，由于酚的擴(kuò)散作用，上層培養(yǎng)基薄部分的酚濃度大幅降低，上層培養(yǎng)基從厚度減少到薄酚濃度的梯度，梯度平板的制備及菌落的生長(zhǎng)狀況， 2涂布法的分離是將采集的樣品用稀釋涂布法分離，培養(yǎng)37個(gè)后，在半板上生長(zhǎng)的菌落也形成密度梯度，上層培養(yǎng)基的薄部分在耐酚細(xì)菌培養(yǎng)基平板或耐酚真菌培養(yǎng)基平板上連續(xù)拉絲分離該菌落

4、，最后選擇單菌落，接種到耐酚斜面培養(yǎng)基上(二)放入耐酚菌馴化處的活性污泥、酚無(wú)機(jī)培養(yǎng)液中，30振蕩培養(yǎng)610 d，使酚分解菌大量繁殖，淘汰不適合酚的微生物，再加入酚無(wú)機(jī)培養(yǎng)液(酚終濃度增加到100mg/L 30，振蕩培養(yǎng)46d )。 苯酚無(wú)機(jī)培養(yǎng)液(苯酚終濃度增加到250 mg/L ) 30振蕩培養(yǎng)46d，再加入250 mg/l苯酚無(wú)機(jī)培養(yǎng)液，30培養(yǎng)4d后從其中選擇對(duì)苯酚強(qiáng)的苯酚分解，(3)性能測(cè)定1，用初篩調(diào)制不同濃度的苯酚含量的平板培養(yǎng)基將篩過(guò)初篩精制的菌種分別放入碳源對(duì)照培養(yǎng)液和酚培養(yǎng)液中，用20振蕩培養(yǎng)48h、發(fā)酵0、12、24、36、48h取樣，用OD600檢測(cè)光密度值(OD )。