1、1、實(shí)驗(yàn)2、細(xì)菌培養(yǎng)基的制備、滅菌和接種、培養(yǎng)技術(shù)、2、第一部分細(xì)菌培養(yǎng)基的制備、滅菌、目的實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)方案、3、目的要求、玻璃容器的清洗和滅菌前的準(zhǔn)備。 掌握培養(yǎng)基和無(wú)菌水的制造方法。 掌握高壓蒸汽滅菌技術(shù)。 4、實(shí)驗(yàn)材料、藥品：牛肉膏、蛋白胨、氯化納金屬釷、瓊脂、蒸餾水等。 高壓蒸汽滅菌鍋，電烤箱，細(xì)菌過(guò)濾煙嘴，酒精燈。 其他：培養(yǎng)皿、試管、移液器、錐形瓶、燒酒、玻璃珠等。5、試驗(yàn)方案、玻璃容器的清洗和包裝制備培養(yǎng)基的無(wú)菌稀釋水調(diào)制培養(yǎng)基和玻璃器材等滅菌、6、試驗(yàn)方案1 (玻璃容器的清洗和包裝)、玻璃容器(例如培養(yǎng)皿、移液器、試管等)清洗并干燥。 棉塞的制造包裝培養(yǎng)皿和移液器等。7、試驗(yàn)方

2、案2 (培養(yǎng)基的種類(lèi))根據(jù)組成成分分為： 1 .合成培養(yǎng)基：各種純化學(xué)物質(zhì)以一定比例配制。 2 .半合成培養(yǎng)基：由一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。 3 .天然培養(yǎng)基：利用天然來(lái)源的有機(jī)物制備的。 從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來(lái)看，可分為1、液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液態(tài)培養(yǎng)基。 2 .固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入瓊脂至1530g/L左右。 3 .半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入瓊脂35g/L左右。8、試驗(yàn)方案2 (培養(yǎng)基種類(lèi))、常用凝固劑為瓊脂(其次為動(dòng)物膠)，又稱(chēng)洋菜、凍干粉。 取、9、試驗(yàn)方案2 (培養(yǎng)基的制備方法和步驟)、300mL燒杯，加入蒸餾水150mL。 2 .按處方準(zhǔn)確稱(chēng)量各成

3、分，依次加入水中溶解。 注意： a .前者的成分溶解后，可加入以下成分b。 促進(jìn)各成分溶解的c .加熱過(guò)程需要攪拌，使膠底不燒焦，適當(dāng)補(bǔ)充因蒸發(fā)而失去的水量。10、試驗(yàn)方案2 (培養(yǎng)基的制備方法和步驟)、3 .以調(diào)pH值： 10 NaOH將pH調(diào)節(jié)至7.6，用精密pH試驗(yàn)紙進(jìn)行對(duì)照。 4 .分注：將培養(yǎng)基分注5根試管，將其全部裝入250mL錐形瓶，分別裝棉塞。 注意不要弄臟綿塞和瓶口。 5 .用捆包好，加上標(biāo)簽條，標(biāo)明哪種培養(yǎng)基。 6 .滅菌預(yù)備：培養(yǎng)基滅菌后，應(yīng)在37中恒溫培養(yǎng)24h，確定無(wú)菌生長(zhǎng)后使用。 11、試驗(yàn)方案2 (培養(yǎng)基的分注和斜面培養(yǎng)基的制作)、每根試管的容納量為試管長(zhǎng)的1/4

4、1/3 .斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)的1/31/2 .12、試驗(yàn)方案2 (培養(yǎng)基的調(diào)制方法和步驟)、另外取5根18mm180mm的試管，分別加入蒸餾水9mL，裝入棉無(wú)菌稀釋水是微生物分離實(shí)驗(yàn)所必需的材料。14、試驗(yàn)方案4 (培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌)、加熱滅菌有干熱滅菌和濕熱滅菌。 干熱滅菌法：電氣電烤箱是干熱滅菌器的干熱滅菌的操作方法a .把應(yīng)該滅菌的放入恒溫箱，把溫度調(diào)節(jié)到160，維持2h的b .把恒溫箱的調(diào)節(jié)旋鈕調(diào)為零，溫度降低到50左右，然后取出物品。15、試驗(yàn)方案4 (培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌)、濕熱滅菌：按照高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法的操作順序，1 .在滅菌鍋內(nèi)加入一定量的水。 2 .將要

5、滅菌的東西放入鍋中，蓋好鍋蓋。 注意：器物不能裝滿(mǎn)。 3 .接通電源，加熱。 4 .可以排除高壓鍋內(nèi)的冷氣，打開(kāi)排氣閥，關(guān)閉排氣閥直到溫度修正指示溫度100，或者排出的蒸汽相當(dāng)激烈，微脫衣舞為藍(lán)色時(shí)關(guān)閉排氣閥。、16、試驗(yàn)方案4 (培養(yǎng)基和玻璃器材等的滅菌)、5 .當(dāng)壓力達(dá)到1.05kg/cm2 (滅菌器內(nèi)的溫度為121 )時(shí)開(kāi)始滅菌，維持1530min。 含有熱不穩(wěn)定的培養(yǎng)基，例如葡萄糖、氨基酸等時(shí)，適度降低壓力(0.56kg/cm2)，延長(zhǎng)時(shí)間。 6 .滅菌時(shí)間到了，切斷電源，等到壓力為零后，打開(kāi)排氣閥，打開(kāi)滅菌器蓋，取出物品，排出鍋內(nèi)殘留的水。 7 .培養(yǎng)基冷卻后在37恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h

6、，無(wú)菌成長(zhǎng)后放入冰箱和陰涼處保存。17、18、試驗(yàn)方案4 (培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌方法)、間歇滅菌法：即常壓滅菌，用于高溫破壞的培養(yǎng)基滅菌。 操作方法： a .滅菌后放入滅菌器或蒸籠中，每天蒸煮一次，每次100煮沸3060min，連續(xù)3d重復(fù)進(jìn)行。 b .在2次蒸煮期間，將物品(指培養(yǎng)基)在37恒溫條件下培養(yǎng)24h，可使蒸煮后未殺死的剩馀芽胞每次在營(yíng)養(yǎng)體上發(fā)芽，在下一次蒸煮時(shí)殺死。 c .第3次蒸煮后基本無(wú)菌，但為了確保無(wú)菌，在37恒溫條件下培養(yǎng)24h，確定無(wú)菌后使用。19、試驗(yàn)方案4 (培養(yǎng)基和玻璃器材滅菌方法)、過(guò)濾滅菌法：不能加熱滅菌的液體物質(zhì)(例如，維生素、血清)，一般可以用細(xì)菌過(guò)濾煙嘴

7、滅菌。20、第二部分細(xì)菌純種分離、培養(yǎng)和接種技術(shù)，目的是通過(guò)掌握實(shí)驗(yàn)材料試驗(yàn)方案、21、目的要求、從環(huán)境中分離培養(yǎng)細(xì)菌的方法，獲得一些細(xì)菌純培養(yǎng)技能。 掌握一些接種技術(shù)。22、實(shí)驗(yàn)材料、無(wú)菌培養(yǎng)皿(直徑90mm)10定徑套、無(wú)菌移液管1mL2根、10mL1根。 營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基1條，活性污泥或土壤或湖水1條，無(wú)菌稀釋水90mL1條，9mL5條。 其他：接種環(huán)、酒精燈、恒溫箱。23、試驗(yàn)方案、細(xì)菌的純種分離細(xì)菌的接種方法、24、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌的純種分離)、稀釋平板法、25、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌的純種分離稀釋平板法)、1、采樣2.1根90mL和5根9mL無(wú)菌水，用標(biāo)記依次排列101、102、103

8、 在無(wú)菌操作條件下，以10mL的無(wú)菌移液器吸引10mL的水樣(或其他樣品)，放入編號(hào)101的無(wú)菌水(包括玻璃珠)中，噴射清洗3次移液器，以10min手將球團(tuán)礦狀樣品分解。 即101濃度的菌液。 用無(wú)菌移液器1mL將101濃度的菌液1mL吸到編號(hào)102的無(wú)菌水中，噴射3次移液器進(jìn)行清洗，振蕩后變成102濃度的菌液。 以類(lèi)似方式，依次稀釋106。26、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌的純種分離稀釋平板法)、稀釋液的制備、27、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌的純種分離稀釋平板法)、3 .平板的制作是取無(wú)菌培養(yǎng)皿編號(hào)10定徑套、取104、105、106各3個(gè)的無(wú)菌移液器1根，從濃度小的菌液開(kāi)始，取0.5mL菌液106、105，

9、 按104的順序分別吸引到相應(yīng)編號(hào)的培養(yǎng)皿內(nèi)(每次吸引時(shí)，用移液器向菌液中噴射泡沫，將菌液混入一盞茶)。28、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌單純分離稀釋平板法)、3 .平板制作加熱培養(yǎng)基冷卻至45左右時(shí)，右手拿著裝有培養(yǎng)基的玉米瓶，左手拿著培養(yǎng)皿，中指、無(wú)名指和小拇指支撐皿底，用大拇哥和食指夾住皿蓋，接近火焰，29、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌純種分離稀釋) 3 .平板的制作與無(wú)菌培養(yǎng)皿對(duì)照，將平板倒下凝固后，皿蓋10分鐘后打開(kāi)蓋子，反轉(zhuǎn)為30培養(yǎng)2448h，觀(guān)察結(jié)果。30、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌的純粹分離平板劃線(xiàn)法)、1 .平板制作：將熔化至約50的冷卻肉漿瓊脂培養(yǎng)基放入無(wú)菌培養(yǎng)皿，使其凝固在平板上。2 .劃線(xiàn)：用接

10、種環(huán)取出一環(huán)樣品，用左手取出培養(yǎng)皿，用中指無(wú)名指和小拇指支承皿底，用大拇哥和食指夾住皿蓋，稍微傾斜培養(yǎng)皿，用左手大拇哥和食指半開(kāi)皿蓋，用右手將接種環(huán)放入培養(yǎng)皿內(nèi)，在平板上輕輕劃線(xiàn)(不要切培養(yǎng)基) 劃線(xiàn)結(jié)束后蓋上碟蓋，30培養(yǎng)2448h后觀(guān)察結(jié)果。 31、試驗(yàn)方案1 (細(xì)菌單純分離平板劃線(xiàn)法)、32、試驗(yàn)方案2 (細(xì)菌接種技術(shù))、接種方法：常用斜面接種法、平板接種法、液體接種法、試管深層固體培養(yǎng)基的穿刺接種法。 接種工具：常用的有接種針、接種環(huán)、接種鉤狀體、接種環(huán)、接種片和接種鍬、玻璃棒等。圖6、33、試驗(yàn)方案2 (細(xì)菌的接種技術(shù)斜面接種法)，左手扁平地支撐2根試管，大拇哥按壓2根試管。 外側(cè)為

11、菌種試管，內(nèi)側(cè)為接種空白斜面(兩試管的斜面向上云同步)。 用右手?jǐn)Q松棉塞，接種時(shí)容易拔出。 右手拿著接種環(huán)，在火焰上將環(huán)端烤紅滅菌后，可能進(jìn)入試管的那個(gè)侑部也通火滅菌。 將兩根試管上端對(duì)齊靠近火焰，用右手小拇指、無(wú)名指和手掌夾住兩根試管棉塞進(jìn)行挖墻腳，棉塞還夾在手里，將試管口慢慢地穿過(guò)火焰。1、2、3、34、試驗(yàn)方案2 (細(xì)菌的接種技術(shù)斜面接種法)，將焚燒后的接種環(huán)放入菌種試管內(nèi)。 首先蒸發(fā)制冷后，用環(huán)取出少許菌種，在抽出接種環(huán)接種的試管底部迅速放入，在斜面上從底部向上劃線(xiàn)。 抽出接種環(huán)，裝入棉塞，在試管支架中插入試管，最后再次燒制紅接種環(huán)，完成接種。 4、5、6、7、8、35、試驗(yàn)方案2 (細(xì)菌的接種技術(shù)液體接種和穿刺接種)、液體接種法(從斜面菌種):在接種環(huán)中采集斜面菌種，送入培養(yǎng)液中，在液體表面使環(huán)與管壁接觸，輕輕研磨，手掌輕碰洗凈環(huán)上所有菌種的試管，菌體均勻地分布在培養(yǎng)液中最后把接種環(huán)煎紅滅菌。 穿刺接種法(從斜面菌種中裝入(半)固體培養(yǎng)基):用接種針火焰滅菌后，取出少量菌種，從試管固體培養(yǎng)基的中心垂直通過(guò)底部，然后穿刺線(xiàn)緩慢拔出針，堵塞棉塞。 只需將紅色的接種針進(jìn)行烘烤滅菌，即可完成接種。 36、試驗(yàn)方案2 (細(xì)菌的接種技術(shù)稀釋平板涂布法)、稀釋樣品：方法該稀釋平板分離法逆平板：溶解冷卻至50左右的培養(yǎng)基放入無(wú)菌培