中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

GB5009.258—2016

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

食品中棉子糖的測(cè)定

2016-08-31發(fā)布2016-09-20實(shí)施

中華人民共和國(guó)

國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)

發(fā)布

GB5009.258—2016

1

食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)

食品中棉子糖的測(cè)定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中棉子糖含量測(cè)定的離子色譜方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于嬰幼兒配方食品、嬰幼兒谷類輔助食品、嬰幼兒罐裝輔助食品、飲料及豆粉食品中棉

子糖含量的測(cè)定。

2原理

試樣采用乙腈沉淀、高速離心的方式去除樣品中的蛋白質(zhì)和脂肪,經(jīng)固相萃取柱凈化后,注入離子

色譜儀,氫氧化鈉溶液為淋洗液,經(jīng)陰離子交換柱分離,脈沖安培檢測(cè)器檢測(cè)。保留時(shí)間定性,外標(biāo)法

定量。

3試劑和材料

除非另有說明,本方法所用試劑均為優(yōu)級(jí)純,水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1乙腈(C2H3N):色譜純。

3.1.250%氫氧化鈉溶液(NaOH):色譜純。

3.1.3α-淀粉酶:酶活力≥1.5U/

mg

。

3.1.4氮?dú)?N2):純度≥99.99%。

3.2試劑配制

氫氧化鈉溶液(

250mmol

/L):在2L塑料試劑瓶中加入500mL經(jīng)過0.

22μm尼龍濾膜過濾的蒸

餾水,移取13.

1mL氫氧化鈉(3.1.2)溶液至水面以下,加蒸餾水至1000mL,通入氮?dú)獗Ｗo(hù)后,搖勻

備用。

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

棉子糖標(biāo)準(zhǔn)品(

C18H32O16):純度≥99.0%。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1000mg/L):準(zhǔn)確稱取棉子糖100mg(精確到0.1mg)于50mL燒杯中,用蒸餾

水溶解,轉(zhuǎn)移到100mL容量瓶中,用水定容。搖勻,

4℃保存,有效期為1個(gè)月。

3.4.2標(biāo)準(zhǔn)使用溶液(50.0mg/L):準(zhǔn)確吸取5mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于100mL容量瓶中,用蒸餾水定容

至刻度。現(xiàn)用現(xiàn)配。

3.4.3標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取棉子糖標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0mL、1mL、2mL、5mL、10mL、

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20mL、50mL于100mL容量瓶中,用蒸餾水定容。得到標(biāo)準(zhǔn)曲線工作溶液濃度分別為0.000mg/L、

0.500mg/L、1.00mg/L、2.50mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、25.0mg/L。

4儀器和設(shè)備

4.1離子色譜儀:配置脈沖安培檢測(cè)器。

4.2天平:感量為0.1mg。

4.3離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥10000r/min。

4.4渦旋混合器。

4.5超聲波清洗器。

4.6固相萃取裝置。

4.7培養(yǎng)箱:60℃±2℃。

4.8固相萃取柱:OnGuardⅡRP柱(填料為反相聚二乙烯基苯聚合物)和OnGuardⅡH柱(填料為

H型聚苯乙烯基強(qiáng)酸樹脂),或其他等效柱。規(guī)格為1.0mL,H柱為650mg,RP柱為350mg。

4.90.22μm水性濾膜針頭濾器。

4.10注射器:15mL。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1試樣預(yù)處理

5.1.1.1乳粉、米粉、豆粉等試樣:取試樣約100g(其他固體試樣先進(jìn)行粉碎、研磨),裝入能夠容納2倍

試樣體積的帶蓋容器中,通過反復(fù)搖晃和顛倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。

5.1.1.2液體試樣:取試樣約100mL,裝入能夠容納2倍試樣體積的帶蓋容器中,通過反復(fù)搖晃和顛

倒容器使試樣充分混勻直到使試樣均一化。

5.1.1.3肉泥等其他半固體試樣:稱取試樣50.0g,稱取等量的水與之混合,渦旋混勻,超聲20min。

5.2試樣處理

5.2.1米粉等含淀粉的試樣:稱取混合均勻的試樣1g~5g(精確至0.1mg,含有棉子糖約為20mg)于

離心管中,加入1gα-淀粉酶,固體試樣需用約50mL45℃~50℃的水使其溶解,混合均勻后充氮,蓋

上管蓋,置于60℃±2℃培養(yǎng)箱內(nèi)酶解30min。冷卻至室溫后,用水定容至100mL。

5.2.2乳粉、豆粉、飲料、肉泥等其他試樣:稱取混合均勻的試樣1g~5g(精確至0.1mg,含有棉子糖

約為20mg)于100mL燒杯中,加水溶解,固體試樣需用約50mL45℃~50℃的水使其溶解,轉(zhuǎn)移到

100mL容量瓶中,用水定容。

5.3凈化

5.3.1吸取5mL經(jīng)過處理的試樣溶液于50mL具塞錐形瓶中,加入10mL水,搖勻,超聲30min,轉(zhuǎn)

移到50mL容量瓶中,加入30mL乙腈,用水定容。轉(zhuǎn)移到50mL離心管中,于10000r/min離心

10min,取上清液備用(可以根據(jù)樣液中棉子糖含量調(diào)整稀釋倍數(shù))。

5.3.2固相萃取柱的活化:將OnGuardⅡRP柱使用前依次用10mL甲醇、15mL蒸餾水進(jìn)行活化;

OnGuardⅡH柱用10mL蒸餾水進(jìn)行活化。必要時(shí)可以使用固相萃取裝置,液體流速控制在1mL/min。

5.3.3將15mL注射器的柱筒部分、0.22μm水性濾膜針頭濾器、OnGuardⅡRP柱、OnGuardⅡH

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柱順序連接,接在固相萃取裝置上。取備用的上清液(

5.3.1)約15.0mL加入注射器柱筒,調(diào)節(jié)固相萃

取裝置,液體流速控制在1mL/min。棄去前面3mL流出液,收集后面的流出液待測(cè)。

5.4儀器參考條件

5.4.1色譜柱:CarboPacPA20(150mm×3mm);保護(hù)柱:CarboPacPA20(30mm×3mm),或性能相

當(dāng)?shù)碾x子色譜柱。

5.4.2淋洗液:水+250mmol

/L氫氧化鈉溶液=58+42,等度洗脫。

5.4.3流速:0.4mL/min。

5.4.4檢測(cè)器:脈沖安培檢測(cè)器,金電極,

Ag

/AgCl參比電極,檢測(cè)池溫度為30℃。

5.4.5柱溫:30℃。

5.4.6進(jìn)樣體積:10μL。

5.5測(cè)定

5.5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液按照從低濃度到高濃度的順序依次進(jìn)樣,得到各濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖。以

棉子糖的濃度(

mg

/L)為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線或計(jì)算線性回歸方程(標(biāo)準(zhǔn)溶液離子

色譜圖見圖A.

1)。

5.5.2測(cè)定

在與標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定相同的工作條件下,取10μL試樣溶液注入離子色譜儀,以保留時(shí)間定性,測(cè)得

峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)樣液中棉子糖的濃度(試樣溶液離子色譜圖參見圖A.

2)。

6分析結(jié)果的表述

試樣中棉子糖含量按式(

1)計(jì)算:

X=C

×V×K

m×1000

……(1)

式中:

X———試樣中棉子糖的含量,單位為克每千克(g/

kg

);

C———試樣測(cè)定液中棉子糖質(zhì)量濃度,單位為毫克每升(

mg

/L);

V———試樣制備時(shí)定容體積,單位為毫升(mL);

K———試樣溶液稀釋倍數(shù),包括試樣制備和凈化過程的兩步稀釋;

m———試樣質(zhì)量,單位為克(g)。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示,結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

8其他

檢出限和定量限:取樣量為1.

0g,定容體積為100mL,稀釋倍數(shù)為10時(shí),測(cè)定棉子糖的檢出限為

0.1g/

kg

;定量限為0.

3g

/

kg