中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)

GB5009.265—2016

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品中多環(huán)芳烴的測定

2016-12-23發(fā)布2017-06-23實(shí)施

中華人民共和國國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會

國家食品藥品監(jiān)督管理總局

發(fā)布

GB5009.265—2016

1

食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)

食品中多環(huán)芳烴的測定

1范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中多環(huán)芳烴(萘、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[

a]蒽、、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒

蒽、苯并[

a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝的液相色譜測定方法和食品中

多環(huán)芳烴(萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[

a]蒽、、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]芘、茚

并[

1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝的氣相色譜-質(zhì)譜測定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中多環(huán)芳烴含量的測定。

第一法高效液相色譜法

2原理

試樣中的多環(huán)芳烴用有機(jī)溶劑提取,提取液濃縮至近干,溶劑溶解,用PSA(N-丙基乙二胺)和C

18

固相萃取填料凈化或用弗羅里硅土固相萃取柱凈化。經(jīng)濃縮定容后,通過高效液相色譜分離,測定各種

多環(huán)芳烴在不同激發(fā)波長和發(fā)射波長處的熒光強(qiáng)度,外標(biāo)法定量。

3試劑和材料

除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規(guī)定的一級水。

3.1試劑

3.1.1乙腈(CH3CN):色譜純。

3.1.2正己烷(C6H14):色譜純。

3.1.3二氯甲烷(CH2Cl2):色譜純。

3.1.4硅藻土:色譜純。

3.1.5硫酸鎂(MgSO4):優(yōu)級純。

3.1.6N-丙基乙二胺(PSA):粒徑40μm。

3.1.7封尾C18固相萃取填料:粒徑40μm~63μm。

3.1.8弗羅里硅土固相萃取柱:500mg,3mL。

3.1.9有機(jī)相型微孔濾膜:0.22μm。

3.2試劑配制

3.2.1正己烷-二氯甲烷混合溶液(1+1):量取500mL正己烷,加入二氯甲烷500mL,混勻。

3.2.2乙腈飽和的正己烷:量取800mL正己烷,加入200mL乙腈,振搖混勻后,靜置分層,上層正己

烷層即為乙腈飽和的正己烷。

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2

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

多環(huán)芳烴(萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、熒蒽、芘、苯并[

a]蒽、、苯并[b]熒蒽、苯并[k]熒蒽、苯并[a]

芘、茚并[

1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝有證標(biāo)準(zhǔn)溶液(200μg/mL),于-18℃下

保存。

警告———多環(huán)芳烴是已知的致癌、致畸、致突變的物質(zhì),并且致癌性隨著苯環(huán)數(shù)的增加而增加,測定

時(shí)應(yīng)特別注意安全防護(hù)。測定應(yīng)在通風(fēng)柜中進(jìn)行并戴手套,盡量減少暴露。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液(1000ng/mL):吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL,用乙腈定容至100mL。

在-18℃下保存。

3.4.2多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)系列工作液:分別吸取多環(huán)芳烴標(biāo)準(zhǔn)中間液0.10mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、

5.0mL、10.0mL,用乙腈定容至100mL,得到質(zhì)量濃度為1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、

50ng

/mL、

100ng

/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。

4儀器和設(shè)備

4.1高效液相色譜儀,帶熒光檢測器。

4.2電子天平:感量為0.01g。

4.3冷凍離心機(jī):轉(zhuǎn)速≥4500r/min。

4.4渦旋振蕩器。

4.5超聲波振蕩器。

4.6粉碎機(jī)。

4.7均質(zhì)器。

4.8氮吹儀。

4.9旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5分析步驟

5.1試樣制備

5.1.1干樣:取樣品約500g,經(jīng)粉碎機(jī)粉碎、混勻,分裝于潔凈盛樣袋中,密封標(biāo)識后于-18℃冷凍

保存。

5.1.2濕樣:取樣品約500g,將其可食部分先切碎,經(jīng)均質(zhì)器充分?jǐn)囁榫鶆?分裝于潔凈盛樣袋中,密

封標(biāo)識后于-18℃冷凍保存。

5.2試樣提取

5.2.1糧谷或水分少的食品

稱取2g~5g(精確至0.

01g)試樣于50mL具塞玻璃離心管

A中,按以下步驟處理:

a)加入10mL正己烷,渦旋振蕩30s后,放入40℃水浴超聲30min;以4500r/min離心5min,

吸取上清液于玻璃離心管B中;離心管A下層用10mL正己烷重復(fù)提取1次,提取液合并于

離心管B中,氮吹(溫度控制在35℃以下)除去溶劑,吹至近干。

b)在離心管B中,加入4mL乙腈,渦旋混合30s,再加入900mg硫酸鎂、100mgPSA和100mg

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3

C18填料,渦旋混合30s,以4500r/min離心3min,取上清液于10mL玻璃刻度離心管C中,

離心管B下層再用2mL乙腈重復(fù)提取1遍,合并提取液于離心管C中,氮吹蒸發(fā)溶劑至近

1mL,用乙腈定容至1mL,混勻后,過0.22μm有機(jī)相型微孔濾膜,制得試樣待測液。

5.2.2水產(chǎn)品、肉類和蔬菜等食品

稱取2g~5g(精確至0.

01g)試樣于50mL具塞玻璃離心管

A中,加1g~5g硅藻土,用玻棒攪

勻,以下按5.

2.1中a)、b)步驟處理,制得試樣待測液。

5.2.3含油脂高的食品或動植物油脂

稱取1g~4g(精確至0.

01g)試樣于50mL具塞玻璃離心管

A中,按以下步驟處理:

a)加入20mL乙腈和10mL乙腈飽和的正己烷,渦旋振蕩30s后,放入40℃水浴超聲30min;

搖勻后,以4500r/min冷凍(-4℃)離心5min,吸取下層乙腈層于100mL雞心瓶中,離心

管A中溶液用20mL乙腈重復(fù)提取1次,提取液合并于雞心瓶中,35℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近

干。加入5mL正己烷,渦旋振蕩30s溶解。

b)依次用5mL二氯甲烷和10mL正己烷活化弗羅里硅土固相萃取柱,將a)獲得的5mL提取樣

液全部移入弗羅里硅土固相萃取柱,再用5mL正己烷洗滌雞心瓶并入柱中,用8mL正己烷-

二氯甲烷混合溶液洗脫,收集所有流出物于20mL玻璃離心管B中。氮吹(溫度控制在35℃

以下)除去溶劑,吹至近干,加入0.

5mL乙腈渦旋振蕩10s,繼續(xù)氮吹至除盡正己烷-二氯甲

烷,用乙腈定容至1mL,混勻后,過0.

22μm有機(jī)相型微孔濾膜,制得試樣待測液。

5.3液相色譜參考條件

a)色譜柱:PAHC18反相鍵合固定相色譜柱,柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或同等性能

的色譜柱。

b)檢測器:熒光檢測器。

c)流動相:乙腈和水;梯度洗脫程序見表1,溶劑A為乙腈,溶劑B為水。

表1反相C

18柱梯度洗脫程序

色譜時(shí)間

min

溶劑A

%

溶劑B

%

05050

55050

201000

281000

325050

d)流速:1.5mL/min。

e)檢測波長:激發(fā)和發(fā)射波長見表2。

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表2多環(huán)芳烴的激發(fā)波長、發(fā)射波長及其切換色譜時(shí)間檢測參數(shù)

序號化合物名稱

時(shí)間

min

激發(fā)波長

nm

發(fā)射波長

nm

1

萘

苊

芴

0270324

2

菲

蒽

12.04248375

3

熒蒽

14.00280462

4

芘

苯并[

a]蒽14.85270385

5

苯并[

b]熒蒽18.93256446

6

苯并[

k]熒蒽

苯并[

a]芘

二苯并[

a,h]蒽

苯并[

g,h,i]苝

20.22292410

7

茚并[

1,2,3-c,d]芘23.33274507

f)柱溫:30℃。

g)進(jìn)樣量:20μL。

5.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入液相色譜儀中,測得相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為橫坐

標(biāo)、以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖參見圖A.

1。

5.5試樣溶液的測定

將試樣待測液注入液相色譜儀中,以保留時(shí)間定性,測得相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣待

測液中多環(huán)芳烴的質(zhì)量濃度。如果試樣待測液中被測物質(zhì)的響應(yīng)值超出儀器檢測的線性范圍,可適當(dāng)

稀釋后測定。

5.6空白試驗(yàn)

空白試驗(yàn)除不加試樣外,采用與試樣完全相同的分析步驟。

6分析結(jié)果的表述

試樣中多環(huán)芳烴的含量Xi按式(1)計(jì)算:

Xi=

ρi×V×1000

m×1000

…………(1)

式中:

Xi

———試樣中多環(huán)芳烴的含量,單位為微克每千克(

μg

/

kg

);

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5

ρi

———依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣待測液中多環(huán)芳烴i的濃度,單位為納克每毫升(

ng

/mL);

V

———試樣待測液最終定容體積,單位為毫升(mL);

1000———單位轉(zhuǎn)換;

m

———試樣質(zhì)量,單位為克(

g)。

含量大于等于10μg/

kg

時(shí),保留三位有效數(shù)字;含量小于10μg/

kg

時(shí),保留兩位有效數(shù)字。

注:計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

8其他

當(dāng)試樣取4g,定容體積為1mL時(shí),本方法的檢出限和定量限見表3。

表3液相色譜法的多環(huán)芳烴檢出限和定量限單位為微克每千克

化合物

蒽、苯并[

a]蒽、、茚并[1,2,3-c,d]芘、苯并[b]熒蒽、

苯并[

k]熒蒽、苯并[a]芘、二苯并[a,h]蒽、

苯并[

g,h,i]苝

菲萘熒蒽苊、芴、芘

檢出限

0.332.03.30.50.65

定量限

1.06.0101.52.0

第二法氣相色譜-質(zhì)譜法

9原理

試樣中的多環(huán)芳烴用有機(jī)溶劑提取,提取液濃縮至近干,用PSA(N-丙基乙二胺)和C

18固相萃取填

料凈化或用弗羅里硅土固相萃取柱凈化,經(jīng)濃縮定容后,用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測定,外標(biāo)法

定量。

10試劑和材料

同第3章。

11儀器和設(shè)備

11.1氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

11.2其余同4.2~4.9。

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6

12分析步驟

12.1試樣制備

同5.

1。

12.2試樣提取

同5.

2。

12.3空白試驗(yàn)

空白試驗(yàn)除不加試樣外,采用與試驗(yàn)完全相同的分析步驟。

12.4氣相色譜-質(zhì)譜參考條件

a)色譜柱:DB-5MS,柱長30m,內(nèi)徑0.25mm,膜厚0.25μm,或同等性能的色譜柱。

b)柱溫度程序:初始溫度90℃,以20℃/min升溫至220℃,再以5℃/min升溫至320℃,保持

2min;

c)進(jìn)樣口溫度:250℃;

d)色譜-質(zhì)譜接口溫度:280℃;

e)離子源溫度:230℃;

f)載氣:氦氣,純度≥99.999%,1.0mL/min;

g)電離方式:EI;

h)電離能量:70eV;

i)質(zhì)量掃描范圍:50amu~450amu;

j)測定方式:選擇離子監(jiān)測方式;

k)進(jìn)樣方式:不分流進(jìn)樣,2.0min后開閥;

l)進(jìn)樣量:1.0μL;

m)溶劑延遲:3min。

12.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液分別注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中,測得相應(yīng)的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)工作液的質(zhì)量濃度為

橫坐標(biāo)、以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

12.6試樣溶液的測定

將試樣待測液注入氣相色譜-質(zhì)譜儀中,測得相應(yīng)的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣待測液中多環(huán)

芳烴的質(zhì)量濃度。如果試樣待測液中被測物質(zhì)的響應(yīng)值超出儀器檢測的線性范圍,可適當(dāng)稀釋后測定。

12.7定性

如果試樣待測液中檢出的色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)工作溶液相一致,且選擇離子的相對豐度與標(biāo)準(zhǔn)

工作溶液的相對豐度兩者之差不大于允許相對偏差(相對豐度≥50%,允許±10%偏差;50%>相對豐

度>20%,允許±15%偏差;

10%<相對豐度<20%,允許±20%偏差;相對豐度≤10%,允許±50%偏

差),則可判斷試樣中存在對應(yīng)的被測物。在上述色譜條件下,總離子流圖參見圖B.

1。參考保留時(shí)間

和特征離子見表4。

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7

表4多環(huán)芳烴的參考保留時(shí)間和特征離子

序號化合物名稱

保留時(shí)間

min

選擇離子

定量離子定性離子豐度比

1

萘

4.0112864,102100∶6∶8

2

苊烯

5.8215263,76100∶5∶17

3

苊

6.04153154,76100∶94∶20

4

芴

6.66166165,82100∶92∶9

5

菲

7.9817889,152100∶9∶9

6

蒽

8.0517889,152100∶10∶7

7

熒蒽

10.31202101,200100∶13∶22

8

芘

10.85202101,200100∶16∶24

9

苯并[

a]蒽14.50228114,226100∶12∶23

1014.64228114,226100∶10∶36

11

苯并[

b]熒蒽18.38252126,250100∶15∶16

12

苯并[

k]熒蒽18.48252126,250100∶16∶20

13

苯并[

a]芘19.51252126,250100∶16∶22

14

茚苯[

1,2,3-c,d]芘23.35276138,277100∶19∶22

15

二苯并[

a,h]蒽23.47278138,276100∶12∶30

16

苯并[

g,h,i]苝24.14276138,277100∶24∶23

13分析結(jié)果的表述

試樣中多環(huán)芳烴的含量Xi按式(2)計(jì)算:

Xi=

ρi×V×1000

m×1000

…………(2)

式中:

Xi

———試樣中多環(huán)芳烴的含量,單位為微克每千克(

μg

/

kg

);

ρi

———依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的試樣待測液中多環(huán)芳烴i的濃度,單位為納克每毫升(

ng

/mL);

V

———試樣待測液最終定容體積,單位為毫升(mL);

1000———單位轉(zhuǎn)換;

m

———試樣質(zhì)量,單位為克(

g)。

含量大于等于10μg/

kg

時(shí),保留三位有效數(shù)字;含量小于10μg/

kg

時(shí),保留兩位有效數(shù)字。

注:計(jì)算結(jié)果應(yīng)扣除空白值。

14精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的20%。

GB5009.265—2016

8

15其他

當(dāng)試樣取4g,定容體積為1mL時(shí),本方法的檢出限和定量限見表5。

表5氣相色譜-質(zhì)譜法的多環(huán)芳烴檢出限和定量限單位為微克每千克

化合物名稱

苊、苊烯、蒽、熒蒽、、

苯并[

b]熒蒽、苯并[k]熒蒽

苯并[

a]蒽、

苯并[

a]芘、苯并[g,h,i]苝

菲、芘萘

芴、茚并[

1,2,3-c