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1、實(shí)驗(yàn)九 過氧化氫酶的活性測(cè)定紫外吸收法,原 理: H2O2在240nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收,過氧化氫酶能分解過氧化氫,使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測(cè)量吸光率的變化速度即可測(cè)出過氧化氫酶的活性。,材料與設(shè)備,實(shí)驗(yàn)材料: 海桐葉,實(shí)驗(yàn)器材:紫外分光光度計(jì);離心機(jī);研缽;0.5ml刻度吸管2支,2ml刻度吸管1支;10ml試管3支;恒溫水?。?試 劑: O.1mol/L過氧化氫;,0.1mo1/L磷酸緩沖液,pH7.0、 pH7.8,操作步驟:,1稱取植物材料0.3g,加入,0.1mo1/L磷酸緩沖液 (pH7.0) 6ml(分三次加入,最后兩次用于洗研缽),在研缽中研磨成勻漿,以
2、 6000rmin 離心15分鐘,傾出上清液。,操作步驟:,2.測(cè)定:取10ml試管3支,其中2支為樣品測(cè)定管,1支為空白管,按下表順序加入試劑。,紫外吸收法測(cè)定H2O2樣品液配置表,操作步驟:,3測(cè)定 25預(yù)熱后,逐管加入0.3ml 0.1mol/L的H2O2,每加完一管立即記時(shí),并迅速倒入石英比色杯中,240nm下測(cè)定吸光度,每隔1min讀數(shù)1次,共測(cè)2min,記錄數(shù)據(jù)。,4.按下式計(jì)算酶活性。,結(jié)果計(jì)算: 以1min內(nèi)A240減少0.1的酶量為1個(gè)酶活單位(u)。 過氧化氫酶活性(u/gFW/min)=,式中:,A240 = AS0-,AS0加入煮死酶液的對(duì)照管吸光值; AS1, AS2樣品管吸光值; Vt粗酶提取液總體積(ml); V1測(cè)定用粗酶液體積(ml); FW樣品鮮重(g); 0.1A240每下降0.1為1個(gè)酶活單位(u); t加過氧化氫到最后一次讀數(shù)時(shí)間(min)。,作 業(yè):,1.寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告 2.問題: (1)影
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