1、球 菌,種類: 革蘭陽性 葡萄球菌屬、鏈球菌屬（鏈球菌、肺炎鏈球菌）、腸球菌屬、微球菌屬等 革蘭陰性 奈瑟菌屬、布蘭漢菌屬,四種革蘭陽性菌的比較,葡萄球菌屬,最常見的化膿性球菌 醫(yī)務(wù)人員的葡萄球菌帶菌率高 革蘭陽性、葡萄串狀排列 產(chǎn)生不同的脂溶性色素 觸酶試驗(yàn)陽性 發(fā)酵葡萄糖 金黃色葡萄球菌是主要致病菌,形態(tài)染色,革蘭陽性球菌、葡萄串狀排列 無鞭毛、無芽孢、一般不形成莢膜,葡萄球菌革蘭染色鏡下圖,染色性： 形態(tài)： 排列：,培養(yǎng)特性,生長條件 需氧、兼性厭氧 營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基上生長良好 耐鹽，1015NaCl上能生長,培養(yǎng)特性,生長現(xiàn)象 液體培養(yǎng)基：均勻混濁、少許沉淀 固體培養(yǎng)基：中等大

2、小菌落、圓形、凸起、邊緣整齊、光滑、濕潤的S型菌落,常用培養(yǎng)基及菌落特征,血平板（營養(yǎng)培養(yǎng)基）： 中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素、透明溶血環(huán)（致病葡萄球菌） 高鹽甘露醇平板（選擇鑒別培養(yǎng)基）： 淡橙黃色菌落（致病葡萄球菌） 卵黃高鹽瓊脂平板（選擇鑒別培養(yǎng)基）： 菌落周圍形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌）,生化反應(yīng),觸酶試驗(yàn)：+ 葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)：發(fā)酵+ 甘露醇分解試驗(yàn)：+（致病菌株）,抗原構(gòu)造,葡萄球菌A蛋白（SPA） 存在于金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁 可與人和其它哺乳動(dòng)物IgGFc段非特異性結(jié)合，應(yīng)用于協(xié)同凝集試驗(yàn) 抵抗吞噬細(xì)胞的吞噬 多糖抗原 具有型的特異性,有助于金葡菌感染的診斷,分類和分

3、型,葡萄球菌包括32種及亞種 根據(jù)產(chǎn)生色素的不同分類 根據(jù)產(chǎn)生凝固酶與否進(jìn)行分類 按噬菌體分型法分類,葡萄球菌傳統(tǒng)分類,金葡菌噬菌體分型,分型：分五個(gè)群，共22型 意義：追蹤傳染源,抵抗力,是抵抗力最強(qiáng)的無芽孢細(xì)菌 耐干燥 對龍膽紫敏感 易形成耐藥性：耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）已成為醫(yī)院感染最常見的致病菌,致病物質(zhì),凝固酶 葡萄球菌溶素 殺白細(xì)胞素 腸毒素 剝脫毒素 毒性休克綜合征毒素1,凝固酶,游離凝固酶：采用試管法檢測 結(jié)合凝固酶：采用玻片法檢測 金葡菌凝固酶試驗(yàn)均為陽性 凝固酶試驗(yàn)是鑒定金葡菌的重要標(biāo)志,游離凝固酶,協(xié)同因子,凝血酶,纖維蛋白原,纖維蛋白,血漿凝固,結(jié)合凝固酶（

4、位于菌體表面）,纖維蛋白原,纖維蛋白,細(xì)菌凝集,所致疾病,侵襲性疾病 化膿性感染：癤、癰、甲溝炎、中耳炎、腦膜炎、敗血癥等 毒素性疾病： 食物中毒、假膜性腸炎等,免疫性,有一定天然免疫力 病后獲得的免疫力作用不強(qiáng)、不持久,微生物學(xué)檢驗(yàn),細(xì)菌鑒定的基本程序,標(biāo)本采集,根據(jù)病種不同，采集不同標(biāo)本 膿液、創(chuàng)傷分泌液、穿刺液、血液、尿液、痰液、腦脊液、糞便,檢驗(yàn)程序,膿、穿刺液、尿液、痰,腦脊液,血液,糞便、嘔吐物,增菌培養(yǎng),分離培養(yǎng),分離培養(yǎng),分離培養(yǎng),直接涂片染色,鑒定試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn),菌落涂片染色,血漿凝固酶,耐熱核酸酶,藥敏試驗(yàn),其它試驗(yàn),報(bào)告,金葡菌膿標(biāo)本檢驗(yàn)程序,膿標(biāo)本,分離培養(yǎng)(血平板),

5、直接涂片染色,鑒定試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn),報(bào)告,涂片染色,檢驗(yàn)方法直接鏡檢,方法:取標(biāo)本直接涂片,革蘭染色后鏡檢 初步報(bào)告: “查見革蘭陽性葡萄串狀排列球菌，疑似葡萄球菌” “查見革蘭陽性球菌”,檢驗(yàn)方法分離培養(yǎng),膿、痰、腦脊液標(biāo)本接種血平板 菌落特征：光滑型、中等大小、脂溶性色素、透明溶血環(huán)（-溶血環(huán)）,檢驗(yàn)方法分離培養(yǎng),糞便標(biāo)本高鹽甘露醇平板 菌落特征：光滑型、中等大小、淡黃色菌落,檢驗(yàn)方法分離培養(yǎng),血標(biāo)本增菌（葡萄糖肉湯）分離培養(yǎng)（血平板） 生長現(xiàn)象：混濁、膠胨狀凝固、溶血,金葡菌的鑒定依據(jù),血平板上金黃色色素、-溶血環(huán) 血漿凝固酶 + 發(fā)酵甘露醇 + 耐熱核酸酶 +,凝固酶陰性葡萄球菌（CNS

6、）,條件致病菌 醫(yī)院內(nèi)感染的重要病原菌 對多種抗生素耐藥,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）和耐甲氧西林凝固酶陰性葡萄球菌（MRCNS）是院內(nèi)感染的重要病原菌之一，MRSA、MRCNS對多種抗生素耐藥，MRSA不僅對青霉素類、頭孢菌素類等內(nèi)酰胺類抗菌藥物耐藥，同時(shí)也對四環(huán)素、紅霉素、氯霉素、克林霉素及慶大霉素等常用抗菌藥物耐藥，對利褔平和磺胺的耐藥率也達(dá)30，但通常對萬古霉素敏感。MRSA、MRCNS常常引起院內(nèi)感染與播散，且難于治療和控制，病死率高。,有資料表明兩者的耐藥譜及機(jī)理都有許多相似的地方，其傳播方式是患者醫(yī)護(hù)人員患者之間的傳播，特別是醫(yī)護(hù)人員手的傳播，這些帶菌者是有可能成為傳染源

7、，推測病房醫(yī)護(hù)人員MRSA,MRCNS帶菌可能是由于長期工作在病房，接觸患者較多所致。,鑒定試驗(yàn)：血漿凝固酶試驗(yàn),玻片法：檢測結(jié)合型血漿凝固酶，簡便快速 試管法：檢測游離型血漿凝固酶，靈敏,生理鹽水,待檢細(xì)菌,新鮮兔血漿,協(xié)同凝集試驗(yàn),SPA,SPA,細(xì)胞膜,細(xì)胞質(zhì),細(xì)胞壁,鏈球菌屬,分布：自然界、人和動(dòng)物腸道、健康人鼻咽部 所致疾?。褐虏℃溓蚓鸶鞣N化膿性炎癥、猩紅熱、風(fēng)濕熱等疾病。,生物學(xué)性狀,形態(tài)染色 培養(yǎng)特點(diǎn) 生化反應(yīng) 抗原構(gòu)造 分類 抵抗力,形態(tài)染色,革蘭陽性球菌，鏈狀排列，無鞭毛，無芽孢，可形成莢膜 在液體培養(yǎng)基中易形成長鏈 致病性強(qiáng)的菌株多為長鏈 在膿汁標(biāo)本中多為短鏈,鏈球菌電

8、鏡圖,鏈球菌革蘭染色,培養(yǎng)特點(diǎn)生長條件,營養(yǎng)要求高，在含血液、血清培養(yǎng)基上生長良好 需氧、兼性厭氧 D群鏈球菌可在10、45 生長,培養(yǎng)特點(diǎn)生長現(xiàn)象,液體培養(yǎng)基：呈沉淀生長現(xiàn)象 血平板：灰白色、細(xì)小、圓形、光滑的、有不同溶血現(xiàn)象的菌落,鏈球菌在血平板上菌落特征,分類根據(jù)溶血現(xiàn)象分類,甲型鏈球菌：屬條件致病菌 乙型溶血性鏈球菌：致病力強(qiáng) 丙型鏈球菌：無致病力,分類根據(jù)抗原構(gòu)造分類,群特異性抗原（C抗原）：細(xì)胞壁多糖抗原，可將鏈球菌分為20群（A、B、C、D、E、D、E等），引起人類感染的鏈球菌90為A群。 型特異性抗原（表面抗原）：細(xì)胞壁蛋白抗原，有M、T、R、S四種，根據(jù)M抗原不同，可將A群分

9、為100型。,生化反應(yīng),觸酶試驗(yàn)（） A群鏈球菌：桿菌肽敏感試驗(yàn)（+） B群鏈球菌：CAMP試驗(yàn)（+）、馬尿酸鈉水解試驗(yàn)（+） D群鏈球菌：膽汁七葉苷試驗(yàn)（+）,肺炎鏈球菌生物學(xué)特性,形態(tài)染色：革蘭陽性球菌，矛尖狀，成雙排列，在人和動(dòng)物體內(nèi)形成莢膜 血平板上菌落特征：菌落細(xì)小、周圍有草綠色溶血環(huán)，48小時(shí)后，由于菌落自溶，呈現(xiàn)“臍窩狀” 生化反應(yīng)：Optochin敏感試驗(yàn)（+） 膽汁溶菌試驗(yàn)（+） 菊糖分解試驗(yàn)（+） 動(dòng)物試驗(yàn)：小白鼠毒力試驗(yàn)（+）,臨床意義A群鏈球菌,致病物質(zhì): 致熱外毒素：致熱、細(xì)胞毒作用、使皮膚產(chǎn)生紅疹、抗原性強(qiáng) 溶血素：溶解紅細(xì)胞、破壞血小板和白細(xì)胞，分為溶血素O和溶血

10、素S兩種 侵襲性酶：透明質(zhì)酸酶、鏈激酶、鏈道酶，有利于細(xì)菌在體內(nèi)擴(kuò)散 M蛋白：具有抗吞噬作用；與腎小球基底膜有共同抗原成分，與超敏反應(yīng)有關(guān),鏈球菌溶素O,對氧敏感、 抗原性強(qiáng)，刺激機(jī)體產(chǎn)生抗O抗體， 抗O試驗(yàn)可用于風(fēng)濕熱等鏈球菌感染所致超敏反應(yīng)性疾病的輔助診斷,臨床意義A群鏈球菌,所致疾病 化膿性感染：扁桃體炎、丹毒、蜂窩織炎、淋巴管炎、敗血癥等 猩紅熱 風(fēng)濕熱、鏈球菌感染后腎小球腎炎,臨床意義其他鏈球菌,B群鏈球菌：條件致病菌，是新生兒敗血癥和腦膜炎主要致病菌 肺炎鏈球菌：引起大葉性肺炎等疾病 甲型鏈球菌：條件致病菌，在一定條件下引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。 變異鏈球菌：與齲齒有密切關(guān)系,鏈球

11、菌常規(guī)檢驗(yàn),標(biāo)本采集,根據(jù)臨床標(biāo)本不同采集不同標(biāo)本,細(xì)菌鑒定的基本程序,膿、痰、咽拭,腦脊液,血液,增菌培養(yǎng),分離培養(yǎng),直接涂片染色,觀察菌落及溶血現(xiàn)象,觸酶試驗(yàn)（）,Optochin 敏感試驗(yàn),肺炎 鏈球菌,草綠色 鏈球菌,桿菌肽,膽汁 七葉苷,A群 鏈球菌,D群 鏈球菌,腸球菌,6.5 NaCl,血清學(xué) 分類,檢驗(yàn)方法直接鏡檢,方法:取標(biāo)本直接涂片,革蘭染色后鏡檢 初步報(bào)告: “查見革蘭陽性球菌” “查見革蘭陽性矛尖狀雙球菌，有莢膜，疑似肺炎鏈球菌” 莢膜腫脹試驗(yàn)可確診， “找到肺炎鏈球菌”,檢驗(yàn)方法分離培養(yǎng),膿、痰、腦脊液標(biāo)本接種血平板，進(jìn)行分離培養(yǎng) 菌落特征： 甲型鏈球菌：針尖樣菌落、

12、周圍有草綠色溶血環(huán)； 乙型鏈球菌：灰白色小菌落、周圍有透明溶血環(huán)； 丙型鏈球菌：灰白色菌落、無溶血環(huán) 肺炎鏈球菌：灰白色扁瓶小菌落、周圍有草綠色溶血環(huán)，培養(yǎng)較久形成臍窩樣菌落,檢驗(yàn)方法增菌培養(yǎng),增菌培養(yǎng)基：葡萄糖肉湯、硫酸鎂肉湯 血液與培養(yǎng)基比例：1：10，即5ml標(biāo)本，50ml增菌液。 拮抗劑：硫酸鎂（拮抗多種抗生素）、對氨基苯甲酸（拮抗磺胺）等 培養(yǎng)時(shí)間： 常規(guī)培養(yǎng)：1824小時(shí)至1周； 亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎：觀察7天至1月,鏈球菌鑒定,細(xì)菌形態(tài)及染色性 菌落特征 鑒定試驗(yàn) 桿菌肽敏感試驗(yàn) CAMP試驗(yàn) 膽汁七葉苷試驗(yàn) Optochin敏感試驗(yàn) 血清學(xué)分群快速膠乳凝集試驗(yàn),肺炎鏈球菌與甲型

13、鏈球菌的鑒別,乙型溶血性鏈球菌的鑒定,-溶血環(huán) 包括A、B、C、D、F、G群 C群可采用血清學(xué)鑒定 其它群采用生化反應(yīng)或其他鑒定試驗(yàn),非-溶血性鏈球菌鑒定,包括 肺炎鏈球菌 牛鏈球菌 無乳鏈球菌 草綠色鏈球菌 營養(yǎng)變異鏈球菌,草綠色鏈球菌鑒定,溶血或不溶血，膽汁七葉苷陰性，包括 變異鏈球菌群 唾液鏈球菌群 血液鏈球菌群 咽峽炎鏈球菌群,鑒定依據(jù),A群鏈球菌桿菌肽敏感試驗(yàn)（+） B 群鏈球菌CAMP試驗(yàn)（+）、馬尿酸鈉水解試驗(yàn)（+） D群鏈球菌膽汁七葉苷（+）、6.5氯化鈉生長（） 肺炎鏈球菌Optochin敏感試驗(yàn)（+）、膽汁溶菌試驗(yàn)（+）、形態(tài)和菌落特征典型 甲型鏈球菌 Optochin敏感