1、專題1微生物分離和純培養(yǎng)解釋教材內(nèi)容要點(diǎn)1培養(yǎng)基(1)培養(yǎng)基可以根據(jù)物理性質(zhì)分為液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中添加絮凝劑瓊脂后，制作瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。根據(jù)殖民地的特性，可以判斷是什么菌。(2)各種培養(yǎng)基通常含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽等四種茄子營(yíng)養(yǎng)素。為了微生物生長(zhǎng)，需要適當(dāng)?shù)膒H、氧氣的要求(根據(jù)微生物的要求提供有氧或無(wú)氧環(huán)境)、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。碳源：向微生物的代謝提供碳的物質(zhì)。CO2、NaHCO3等無(wú)機(jī)碳源；糖類、蛋白質(zhì)、脂肪等有機(jī)碳源。益陽(yáng)微生物只能利用有機(jī)碳源。元素碳不能用作碳源。氮源：為微生物的代謝提供氮的物質(zhì)。N2、NH3、N

2、O3-、NH4、蛋白質(zhì)、氨基酸等。只有固氮作用微生物才能利用N2。要點(diǎn)2無(wú)菌技術(shù)(1)獲得純培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來(lái)雜菌入侵，應(yīng)注意以下方面：實(shí)驗(yàn)操作的空間，操作者的穿著、手、清潔和消毒。滅菌用于微生物培養(yǎng)的碗、接種機(jī)構(gòu)、培養(yǎng)基等。為了避免周圍環(huán)境中微生物的污染，應(yīng)該在酒精等火焰附近進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，應(yīng)避免滅菌處理的材料用品與周圍物品接觸。(2)消毒與滅菌的區(qū)別消毒是指使用比較溫和的物理或化學(xué)方法，只殺死物體表面或內(nèi)部的一部分對(duì)人體有害的微生物(孢子和孢子除外)。消毒方法通常包括沸騰消毒法和化學(xué)劑(如酒精、氯、煤酸等)消毒、紅外線消毒。滅菌是指利用強(qiáng)異化因素殺死物體內(nèi)外的所有微生物。包括孢子

3、和孢子。滅菌方法有燃燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。點(diǎn)3制作牛肉奶油蛋白胨固體培養(yǎng)基(1)方法步驟：計(jì)算、計(jì)量、溶解、滅菌、逆板。(2)反轉(zhuǎn)名譽(yù)工作的步驟：將滅菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁邊的桌子上，右手拿著裝有培養(yǎng)基的錐子瓶，左手拔下棉塞。右手拿著錐子瓶，快速通過(guò)瓶口火焰。用左手拇指和食指打開(kāi)培養(yǎng)皿比瓶口稍大的縫隙，右手將錐子瓶里的培養(yǎng)基(約10 20毫升)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿盤(pán)子蓋。等待板冷卻凝固需要5 10分鐘左右。然后倒放盤(pán)子，使盤(pán)子蓋在下面，盤(pán)子下面。要點(diǎn)4純化大腸桿菌(1)微生物接種方法最常用的是平板線法和稀釋圖版法。(2)平板劃線法是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫(huà)線的工作

4、。(3)稀釋度板法是將菌液稀釋一系列梯度，然后將不同稀釋度的菌液分別涂在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為一系列稀釋工作和涂層板工作兩個(gè)階段。(4)用平板法和稀釋圖版法接種的目的是將聚集在一起的微生物分散到單個(gè)細(xì)胞中，在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)菌群，使菌種純化。(5)平面虛線操作步驟：在火焰中燃燒接種環(huán)，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，打開(kāi)棉塞。試管入口通過(guò)火焰。將冷卻后的接種環(huán)放入菌液中，拍攝環(huán)菌液。將試管通過(guò)火焰，插入棉塞。左手將盤(pán)子蓋打開(kāi)縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入板塊內(nèi)，劃出3-5條平行線，蓋上盤(pán)子蓋。注意不要撕培養(yǎng)皿。燃燒接種環(huán)，冷卻后，從第一個(gè)區(qū)域的下劃線末端向第二個(gè)區(qū)域的

5、內(nèi)部劃線。重復(fù)以上操作，在3、4、5區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要把最后一個(gè)區(qū)域的虛線與第一個(gè)區(qū)域連接起來(lái)。把盤(pán)子倒放在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)。(6)涂層板操作步驟：把涂布機(jī)泡在含有酒精的燒杯里。取少量菌液，在培養(yǎng)基表面放入鈴鐺。將沾有少量酒精的涂布機(jī)點(diǎn)燃火焰，酒精燒盡后冷卻8 10S。用涂布機(jī)將菌液均勻地涂抹在培養(yǎng)基表面。要點(diǎn)5種保存(1)對(duì)于經(jīng)常使用的菌種，可采用臨時(shí)保存方法。暫時(shí)保存方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在適當(dāng)?shù)臏囟认屡囵B(yǎng)。菌落長(zhǎng)大后，將試管放入4冰箱保存。今后每3 6個(gè)月就要將菌種從舊培養(yǎng)基移回新鮮培養(yǎng)基。缺點(diǎn)：牙齒方法保存時(shí)間不長(zhǎng)，菌種污染或容易變異。(2)對(duì)于需要保存器官的菌種，可以

6、使用藏甘油管的方法。(。在3mL甘油瓶子里放入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶子中，與甘油充分混合，然后保存在-20的冷凍箱中。要點(diǎn)6實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備和注意事項(xiàng)(a)在菌種保存中心購(gòu)買菌種后，教師必須首先純化平板生產(chǎn)線法培養(yǎng)的菌種，并根據(jù)學(xué)生隊(duì)伍的數(shù)量準(zhǔn)備多臺(tái)平板電腦。(2)完成第一課時(shí)基礎(chǔ)知識(shí)，學(xué)習(xí)各種操作方法，準(zhǔn)備培養(yǎng)基。蒸壓需要很長(zhǎng)時(shí)間，所以要利用上課時(shí)間完成。下課后完成第二節(jié)課大腸桿菌的純化培養(yǎng)。之后讓學(xué)生準(zhǔn)備連續(xù)觀察記錄3 4d。(3)準(zhǔn)備培養(yǎng)基時(shí)，教師應(yīng)該指示學(xué)生根據(jù)每個(gè)培養(yǎng)基消耗15-20毫升的量估計(jì)總使用量。全班的培養(yǎng)基可以收集并分批滅菌。(4)滅菌后培養(yǎng)基冷卻到55后

7、，要及時(shí)進(jìn)行逆板工作。不能及時(shí)操作的話，要把培養(yǎng)基放在55左右的電熱箱里保溫，防止瓊脂凝固。(5)如果打算做牙齒主題的第2，3題，牙齒作業(yè)不僅是平板電腦劃線作業(yè)，還應(yīng)該練習(xí)稀釋度板操作。為此，教師要提前一天用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，一夜培養(yǎng)，第二天將培養(yǎng)液分配給各組。(6)實(shí)驗(yàn)后使用的所有培養(yǎng)基、培養(yǎng)液等必須統(tǒng)一高壓蒸汽滅菌后銷毀。否則會(huì)造成環(huán)境污染。要點(diǎn)7問(wèn)題解決(1)生物的營(yíng)養(yǎng)營(yíng)養(yǎng)是指生物攝取和利用養(yǎng)分的過(guò)程。營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體的生命活動(dòng)、確保發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。人和動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和6種維生素。植物的營(yíng)養(yǎng)素：光質(zhì)元素、水、二氧化碳等三種茄子。微生物的

8、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、5種特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。(2)培養(yǎng)基制作是否合格的決定方法未接種的培養(yǎng)基在孵化器中保溫1 2天，無(wú)菌生長(zhǎng)，表明培養(yǎng)基的制備是成功的。否則要重新準(zhǔn)備。(3)無(wú)菌技術(shù)除了防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？無(wú)菌技術(shù)可以有效地防止操作員本身感染微生物。要點(diǎn)8回答和討論(a)側(cè)欄事故測(cè)試問(wèn)題1.無(wú)菌技術(shù)除了防止實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還有什么目的？答：無(wú)菌技術(shù)可以有效地防止操作員本身感染微生物。2.請(qǐng)判斷是否需要消毒或滅菌以下材料或工具。如果需要，請(qǐng)選擇相應(yīng)的方法。(1)細(xì)菌培養(yǎng)用培養(yǎng)基和培養(yǎng)盤(pán)子(2)滑動(dòng)條、試管、燒瓶和吸管(3)實(shí)驗(yàn)操作者

9、的手答：(1)，(2)需要滅菌。需要消毒。(b)倒置板操作的探討1.培養(yǎng)基滅菌后冷卻到50左右，才能用于皮瓣。你能用什么方法估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？提示：你可以用手觸摸裝有培養(yǎng)基的錐子瓶，當(dāng)錐子瓶的溫度不馬上變熱的時(shí)候，你可以感覺(jué)到它可以翻轉(zhuǎn)。(大衛(wèi)亞設(shè)，美國(guó)電視電視劇)2.為什么要讓錐蟲(chóng)病的瓶口通過(guò)火焰？答：通過(guò)燃燒滅菌防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板電腦凝結(jié)后，為什么要反轉(zhuǎn)平板電腦？答：板凝結(jié)后，盤(pán)子罩上的水滴凝結(jié)，凝固培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，板倒置會(huì)使培養(yǎng)基表面的水分更好揮發(fā)，防止盤(pán)子罩上的水滴落到培養(yǎng)基上，從而引起污染。4.在襟翼過(guò)程中，如果不小心把培養(yǎng)基濺到盤(pán)子蓋子和盤(pán)子地板之間的部

10、位，是否可以用牙齒板培養(yǎng)微生物？為什么？答：由于空氣中的微生物可以在盤(pán)子蓋子和盤(pán)子地板之間的培養(yǎng)基中繁殖，因此建議不要用牙齒平板來(lái)培養(yǎng)微生物。(c)平板標(biāo)記工作的探討1.為什么要在操作的第一階段和每次畫(huà)線之前先燒接種環(huán)？下劃線工作結(jié)束時(shí)還需要燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步是避免接種環(huán)中可能存在的微生物污染培養(yǎng)物。每次劃線前燃燒的接種環(huán)在最后一行結(jié)束后，為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，在劃下一行時(shí)，接種環(huán)上的菌種就出現(xiàn)在最后一條底線的末端，因此下劃線數(shù)增加，每劃一行，菌種數(shù)就會(huì)逐漸減少，從而得到菌落。劃線結(jié)束后燃燒接種環(huán)，可以及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細(xì)菌污染環(huán)境，感染操作員。2.燃燒接種環(huán)后，為什么要等到冷卻后再劃線？a:殺了菌種，以免接種環(huán)溫度太高。3.在進(jìn)行第二次和以后的劃線操作時(shí)，為什么總是在以前的劃線結(jié)束時(shí)開(kāi)始劃線？答：劃線后，善意端細(xì)菌數(shù)低于善意開(kāi)始部分，每次從最后一個(gè)善意結(jié)