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文檔簡介

1、實訓(xùn)六.病毒液收取與血凝試驗（HA）,1,一.試驗的目的,掌握雞胚培養(yǎng)病毒的收集方法 掌握微量血凝試驗的整個操作過程,2,二.試驗原理,一些動物紅細胞(如雞、豚鼠等)以及人“O”型血紅細胞上有流感病毒受體，遇流感病毒可產(chǎn)生紅細胞凝集現(xiàn)象，簡稱血凝。,3,三.實驗材料,雞胚或病毒液、恒溫箱、蛋盤、鑷子、酒精燈、3%的碘酊棉球、75%的酒精棉球、無菌瓶子、96 孔微量血凝反應(yīng)板、微量移液器、吸頭、微量震蕩器、生理鹽水、病毒陽性血清、1%的雞紅細胞等。,4,四.方法步驟,1收毒： 將蛋胚放在冰箱內(nèi)冷凍半日或一夜，使血管收縮，以便得到無胎血的純尿囊液。 用碘酒消毒氣室處的卵殼，并用滅菌剪刀除去氣室的卵

2、殼。切開殼膜及其下面的絨毛尿囊膜，翻開到卵殼邊上。 將雞卵傾向一側(cè)，用滅菌吸管吸出尿囊液。一個蛋胚約可收獲6ml左右尿囊液。若操作時損傷了血管，則病毒會吸附在紅細胞上，影響后續(xù)實驗。收獲的尿囊液經(jīng)無菌試驗后可在4以下的溫度中保存。 觀察雞胚，看有無典型的癥狀。,5,2.血凝試驗操作步驟,1) 在 96 孔 V 形微量反應(yīng)板上進行,自左至右各孔加50ul 生理鹽水。 2) 于左側(cè)第 1孔加 50uL病毒原液或收獲液,混合均勻后,吸 50ul 至第 2 孔,混合均勻后至 第 3 孔,依次倍比稀釋,至第 11孔,吸棄50ul。稀釋后病毒稀釋度為第 1 孔1:2,第 2孔 1:4,第 3 孔 1:8.

3、最后一孔為對照。 3) 自左向右依次向各孔加 1%雞紅細胞 50ul，置微型混合器上振蕩1 分鐘或以固定轉(zhuǎn)圈震 蕩反應(yīng)板,使血球與病毒充分混合,在 37攝氏度溫箱中作用 15-30 分鐘,待對照孔紅細胞已沉淀可觀察結(jié)果。 4) 判斷結(jié)果:以100%凝集的病毒最大稀釋孔為該病毒血凝價,即一個凝集單位,不凝集者血細胞沉于孔低成點狀。沒有凝 集的紅細胞沉積在 V 形孔的底部，把 96 孔微量血凝反應(yīng)板傾斜適當角度時成線狀流下，凝集的紅細胞成絮狀在 V形孔的壁上，不成線狀流下。,6,15-分鐘,15-分鐘,血凝試驗流程圖,振蕩min后,7,五.結(jié)果與分析,凡能使雞血紅細胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，稱為該病毒的血凝度。,8,正確讀出血凝結(jié)果,9,補充.實驗報告的撰寫,一.實驗?zāi)康?二.實驗原理(可省略)

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