1、開題答辯,楊杰 金圣凱,目錄,一、立論依據(jù),二、研究目標(biāo),三、研究內(nèi)容,四、特色與創(chuàng)新之處,六、目前研究和展望,五、進(jìn)展和成果,一、立論依據(jù),隨著生活水平的提高，人們的飲食結(jié)構(gòu)變得越來越會混亂，隨之而來的后果就是引發(fā)各種疾病。糖尿病就是由于飲食不合理而引發(fā)的疾病之一。糖尿病并不可怕，可怕的是它的并發(fā)癥.它會導(dǎo)致腦、心臟及足部等部位的動脈硬化，可造成腦中,風(fēng)、心肌梗塞及足部病變；足部血液供應(yīng)減少，造成間歇跛行、足部冰冷、感覺異常、足部易感染、傷口愈合慢。約有一半的截肢病人屬糖尿病病人。 而糖尿病人會出現(xiàn)阿茲海默癥，我們發(fā)現(xiàn)SIRT1對此有很大影響。,去乙?；窼IRT1（Sirtuin type

2、 1）是一種多功能蛋白。去乙?；窼IRT1是酵母Sir2基因在哺乳動物中的同源物，又常被稱做“長壽基因”，因其在熱量限制下，表達(dá)活性明顯上調(diào)，且可以促進(jìn)細(xì)胞存活，延長壽命。SIRT1廣泛表達(dá)于身體的各組織中，且參與了多種重要的細(xì)胞功能調(diào)節(jié)，例如細(xì)胞存活，凋亡和衰老等，最為重要的是SIRT1在細(xì)胞內(nèi)的糖脂代謝過程中也起著非常重要的調(diào)節(jié)作用。近期研究發(fā)現(xiàn)，SIRT1在腦認(rèn)知功能修復(fù)和突觸可塑性調(diào)節(jié)中起著非常重要的作用5，并且有報道顯示，胰島素受體和SIRT1在腦中存在共定位現(xiàn)象6。那么我們的假設(shè)就此提出，胰島素是否有可能通過影響海馬神經(jīng)元中SIRT1的活性從而參與了認(rèn)知功能的調(diào)節(jié)？,而在2型糖尿

3、病病人的外周血中檢測到SIRT1的表達(dá)水平要顯著低于正常對照人群7，表明SIRT1很可能參與了糖尿病的發(fā)生發(fā)展過程，大量研究主要針對SIRT1在外周組織中的糖脂代謝調(diào)節(jié)作用。例如在肝臟中，SIRT1通過去乙酰化修飾PGC1調(diào)節(jié)糖異生和糖酵解過程，還可通過去乙?；せ頛XR調(diào)節(jié)膽固醇的代謝和脂質(zhì)平衡；同時，SIRT1還可以通過下調(diào)蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸酶PTP1B的蛋白水平來改善肝細(xì)胞的胰島素敏感性，可見SIRT1是非常重要的多功能蛋白。,然而在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中對SIRT1的研究相對較少，主要集中在下丘腦區(qū)域，其表達(dá)可以調(diào)節(jié)動物的攝食行為及動物體重。最近研究發(fā)現(xiàn)SIRT1在海馬認(rèn)知功能和突觸可塑性調(diào)節(jié)中

4、也起著非常重要的作用8，而糖尿病患者的認(rèn)知功能是顯著下降的，其海馬區(qū)細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)及形態(tài)都發(fā)生了顯著的改變，那么在糖尿病狀態(tài)下SIRT1是否參與到了認(rèn)知功能下降的過程呢？其表達(dá)的改變又是否受到胰島素抵抗的影響呢？為探討2型糖尿病認(rèn)知功能障礙的發(fā)病機(jī)制提供線索。這一系列問題都需要進(jìn)一步的解答。,二、研究目標(biāo),研究目標(biāo)：本研究主要探索胰島素在中樞神經(jīng)系統(tǒng)海馬中的調(diào)節(jié)作用及途徑，為糖尿病患者認(rèn)知功能下降的發(fā)生機(jī)制提供線索。本研究從多功能蛋白去乙?；窼IRT1著手，探討在大腦海馬中胰島素是否通過影響細(xì)胞內(nèi)SIRT1蛋白的表達(dá)及活化，從而參與了神經(jīng)元認(rèn)知功能的調(diào)節(jié)過程。并探討SIRT1在糖尿病認(rèn)知功能

5、中的可能作用，為糖尿病患者認(rèn)知功能下降的發(fā)生機(jī)制提供線索。,三、研究內(nèi)容,1、研究小鼠糖尿病模型腦中SIRT1的表達(dá)分布情況，重點觀察海馬及下丘腦，以確定SIRT1主要的表達(dá)區(qū)域。觀察海馬CA1，CA3，齒狀回各區(qū)域是否有SIRT1的表達(dá)及區(qū)域差異； 2、腹腔注射胰島素后觀察腦中SIRT1的表達(dá)和分布變化,四、特色與創(chuàng)新之處,雖然目前已有關(guān)于胰島素、胰島素受體和SIRT1在腦中的表達(dá)和功能的研究，但研究胰島素對腦中SIRT1表達(dá)和分布影響的研究還很少見。本課題擬研究胰島素增加對腦中SIRT1表達(dá)的影響，具有創(chuàng)新性。,五、進(jìn)展和成果,2014年1月-4月：選取2-3月齡的雄性糖尿病小鼠db/db及對照小鼠db/m，購買實驗動物，分組飼養(yǎng)，基礎(chǔ)生理指標(biāo)的測定，例如體重，攝食量，血糖等。待穩(wěn)定后，開始進(jìn)行試驗。麻醉灌流取腦，進(jìn)行切片染色，觀察和對比SIRT1在db/db小鼠和db/m小鼠腦中的分布情況。采用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察糖尿病小鼠大腦中各腦區(qū)，SIRT1蛋白的表達(dá)分布情況，重點觀察海馬及下丘腦，以確定SIRT1主要的表達(dá)區(qū)域。觀察海馬CA1，CA3，齒狀回各區(qū)域是否有SIRT1的表達(dá)及區(qū)域差異，及與對照組之間的差異。,六、目前研究和展望,到目前為止