1、第七章 色譜分析法 Chromatography,第一節(jié) 概述 Introduction,色譜法是一種重要的分離分析方法，它是根據(jù)組分在兩相中作用能力不同而達(dá)到分離目的的。,一、歷史,Tswett 研究植物色素分離，提出色譜法概念；,t,s,1941 Martin和Synge提出液-液色譜理論；,1952 James和Martin發(fā)展了氣相色譜；,1956 Van Deemter提出速率理論；,1967 Kirkland等研制高效液相色譜法；,80年代以后 出現(xiàn)毛細(xì)管電泳和毛細(xì)管電動(dòng)色譜等一系列新的色譜分析方法。,二、分類,三、基本概念與術(shù)語(yǔ),1、色譜流出曲線 （chromatogram） 指

2、樣品注入色譜柱后，信號(hào)隨時(shí)間變化的曲線。,色譜流出曲線示意圖,Wb,W1/2,1/2h,0.607h,2、常用術(shù)語(yǔ),（1）基線 無(wú)組分通過(guò)色譜柱時(shí)，檢測(cè)器的噪音隨時(shí)間變化的曲線。,（2）峰寬 峰底寬Wb 峰半寬W1/2標(biāo)準(zhǔn)偏差,色譜參數(shù)示意圖,1/2h,0.607h,W1/2,Wb,tR,t0,（3）保留值 保留時(shí)間tR進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰的時(shí)間 保留體積VR進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰時(shí)消耗的流動(dòng)相體積 死時(shí)間t0流動(dòng)相流過(guò)色譜柱的時(shí)間 死體積V0色譜柱的空隙體積,F流動(dòng)相流動(dòng)線速度,（4）相對(duì)保留值,（5）分配系數(shù)和分配比（容量因子）,分配系數(shù)：一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相濃度的比值

3、,分配比（容量因子）：一定溫度與壓力下兩相達(dá)平衡后，組分在固定相和流動(dòng)相量的比值,固定相重量 流動(dòng)相重量,K與k的關(guān)系：,（6）容量因子k與保留值的關(guān)系,證明：當(dāng)組分一半流出色譜柱時(shí),色譜基本保留方程,四、分離效能指標(biāo),1、選擇性（相對(duì)保留值）,相對(duì)保留值由兩組分的熱力學(xué)性質(zhì)決定，與色譜柱的長(zhǎng)短粗細(xì)無(wú)關(guān)。,2、峰寬度,3、分離度,分離度考慮了保留時(shí)間和峰寬度，是一個(gè)綜合指標(biāo)：,R 1.0兩峰明顯重疊 R = 1.0兩峰達(dá)97.7%分離 R 1.5兩峰完全分開(kāi),小結(jié),色譜法研究的核心： 選擇最適合的色譜體系和條件、在最短的時(shí)間達(dá)到最佳的分離效果。,第二節(jié)色譜理論,一、塔板理論,目的從理論上得到描

4、述色譜流出曲線的方程，并通過(guò)這一方程各參數(shù)來(lái)研究影響分離的因素。,假設(shè)（1）色譜柱存在多級(jí)塔板; （2）組分通過(guò)時(shí)在每級(jí)塔板兩相間達(dá)到一次平衡;,下表列出經(jīng)過(guò)各級(jí)轉(zhuǎn)移后組分在每一級(jí)塔板中的量：,當(dāng)經(jīng)過(guò)1次轉(zhuǎn)移（N=1）以后：,第0級(jí)塔板：r = 0,組分的分量 =,若抽象成一個(gè)規(guī)律：,由上表可以看出，經(jīng)N次轉(zhuǎn)移后，組分在各級(jí)塔板上的量符合二相式分布，即,當(dāng)N = 4時(shí)，組分分布在5級(jí)塔板上：,以A組分為例，5級(jí)塔板上的分量分別是：,任一級(jí)塔板上的分量為 的展開(kāi)式對(duì)應(yīng)的一項(xiàng)，可用一個(gè)通式表示：,當(dāng)求 最后一級(jí)塔板的組分的量時(shí)，r = n，以,作圖，即得色譜流出曲線，因此上式稱為流出曲線方程。,對(duì)

5、于兩個(gè)組分A和B，如果k不同，則流出曲線的形狀不同：,由于所獲得的流出曲線在N很大時(shí)呈正態(tài)分布，因此可將流出曲線方程轉(zhuǎn)化為正態(tài)分布方程形式：,將此方程與標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布曲線方程比較：,或：,n 稱為色譜柱的理論塔板數(shù)。 因?yàn)閠R是熱力學(xué)常數(shù)，當(dāng)色譜柱的長(zhǎng)度一定，理論板數(shù)目n越大，色譜峰越窄。,neff 與 n 的關(guān)系：,1、從理論上得到了描述色譜流出曲線的方程，通過(guò)該方程可以預(yù)測(cè)具有不同分配系數(shù)K的兩種物質(zhì)在塔板數(shù)為n的色譜柱上分離的情況；,小結(jié),2、通過(guò)這一方程看出影響柱效率的因素是理論板數(shù)n，其值越大，色譜峰越窄，分離效果越好；,3、既然色譜分離的依據(jù)是組分在兩相中的分配能力差異，因此，兩相不

6、限于液-固相，對(duì)氣體成分而言，亦可是氣-固項(xiàng)或氣-液相。,問(wèn)題,怎樣提高色譜柱的理論塔板數(shù)n，從而提高色譜柱的效率？,二、速率理論,1、塔板理論的不足 塔板理論雖然指出了理論板數(shù)n或理論板高度H對(duì)色譜柱效率的影響，但是沒(méi)有指出影響塔板高度的因素，因此無(wú)法在理論指導(dǎo)下從實(shí)驗(yàn)上提高色譜柱的效率。,2、Van Deemter方程 1956年Van Deemter提出速率方程，指出了提高柱效率的途徑：,渦流擴(kuò)散示意圖,式中： r彎曲因子，填充柱 r 1 空心柱r = 1 Dm組分在流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù),由于組分在液相中的擴(kuò)散系數(shù)只有氣體中的1/105，因此在液相色譜中B可以忽略。,（3）Cu傳質(zhì)阻力項(xiàng)

7、指組分在流動(dòng)相和固定相之間傳質(zhì)的阻力,固定相傳質(zhì)阻力流動(dòng)相傳質(zhì)阻力,q 和 為與兩相的構(gòu)型和性質(zhì)有關(guān)的常數(shù) dp 和 df 為固定相顆粒直徑和固定液膜的厚度,問(wèn)題： 1、怎樣裝柱才能使色譜柱的效率提高？,2、空心柱是否能夠用于色譜分離？,3、如何獲得色譜最佳流速？,u 在上述方程各項(xiàng)中存在矛盾，因此，應(yīng)求出最佳值：,3、影響譜帶展寬的其它因素 柱前展寬、柱后展寬、柱外效應(yīng),三、分離條件的選擇 綜合塔板理論和速率理論，可獲得影響色譜分離效率的因素：,第三節(jié) 氣相色譜法,一、氣相色譜儀,氣相色譜儀主要包括四部分： 1、載氣系統(tǒng) 2、進(jìn)樣系統(tǒng) 3、分離系統(tǒng) 4、檢測(cè)系統(tǒng),1、載氣系統(tǒng) 載氣由壓縮氣體

8、鋼瓶供給，經(jīng)減壓閥、穩(wěn)壓閥控制壓強(qiáng)和流速，由壓強(qiáng)計(jì)指示氣體壓強(qiáng)，然后進(jìn)入檢測(cè)器熱導(dǎo)池的參考臂，繼而進(jìn)入色譜柱。最后通過(guò)熱導(dǎo)池、流量計(jì)而放入大氣。,氣相色譜對(duì)載氣的基本要求： （1）純凈 通過(guò)活性炭或分子篩凈化器，除去載氣中的水分、氧等有害雜質(zhì)。 （2）穩(wěn)定 采用穩(wěn)壓閥或雙氣路方式：,（3）常用的載氣： 氮?dú)鈿錃夂?2、進(jìn)樣系統(tǒng) 包括進(jìn)樣裝置和汽化室。 進(jìn)樣通常用微量注射器和進(jìn)樣閥將樣品引入。液體樣品引入后需要瞬間汽化。汽化在汽化室進(jìn)行。 對(duì)汽化室的要求是：（1）體積??；（2）熱容量大；（3）對(duì)樣品無(wú)催化作用,載氣入口,接色譜柱,散熱片,加熱塊,汽化室示意圖,對(duì)高分子樣品，采用裂解裝置： 管式

9、爐裂解器 熱絲裂解器 居里點(diǎn)裂解器,尼龍6/66共聚物在6500C的裂解色譜圖,3、分離系統(tǒng),（1）固體固定相： 固體吸附劑包括活性碳、硅膠、Al2O3、分子篩等；用于H2、O2、N2、CO、CO2、C1-C4的分離；,固定液的選擇： 依據(jù)極性原則,（A）非極性組分分離非極性固定液 ，組分出峰的順序由蒸汽壓決定，沸點(diǎn)高保留時(shí)間長(zhǎng),（B）中等極性組分分離中等極性固定相，沸點(diǎn)與分子間力同時(shí)起作用,（C）強(qiáng)極性組分分離強(qiáng)極性固定相，分子間力起作用，按極性大小出峰,（D）極性+非極性組分分離極性固定相,例如：苯和環(huán)己烷的色譜分離 苯沸點(diǎn)80.10C 環(huán)己烷沸點(diǎn)80.70C 采用非極性固定液 ，因組分出

10、峰的順序由蒸汽壓決定，所以分不開(kāi)；,但是苯容易極化tR(苯）/tR（環(huán)己烷） （1）用弱極性的鄰苯二甲酸二辛酯1.5 （2）用極性的聚乙二醇-4003.9 （3）用，氧二丙氰6.3,問(wèn)題 怎樣判斷一個(gè)固定液的極性大?。?固定液極性測(cè)量： 以丁二烯、正丁烷為分析對(duì)象，以、-氧二丙氰和角沙烷為固定液制成色譜柱,求出 q (、”-氧二丙氰)、q （角沙烷）、q（x）,利用下式求出固定液的相對(duì)極性數(shù)據(jù)：,當(dāng) qx = qjpx = 0 當(dāng) qx = qpx = 100 其它固定液的極性介于0-100之間,幾種常見(jiàn)固定液的相對(duì)極性,恒溫和程序升溫分析烴類化合物,5、檢測(cè)器 作用：將色譜分離后的各組分的量

11、轉(zhuǎn)變成可測(cè)量的電信號(hào)，然后紀(jì)錄下來(lái)。,要求：靈敏度高線性范圍寬 響應(yīng)速度快結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單 通用性強(qiáng),常用檢測(cè)器：熱導(dǎo)檢測(cè)器 氫火焰離子化檢測(cè)器 電子捕獲檢測(cè)器,一、熱導(dǎo)檢測(cè)器 (Thermal Conductivity Detector, TCD),某些氣體和蒸汽的熱導(dǎo)系數(shù),氣體 00C1000C氣體 00C1000C H217.4122.4甲烷3.014.56 He14.5717.41乙烷1.803.06 N22.433.14丙烷1.512.64 空氣2.173.14正丁烷 1.342.34 CO21.472.22甲醇1.422.30,熱導(dǎo)檢測(cè)器的主要特點(diǎn): (1) 結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單 (2) 對(duì)無(wú)機(jī)物和有

12、機(jī)物都有響應(yīng) (3) 靈敏度不高,二、氫火焰離子化檢測(cè)器 Flame Ionization Detector (FID) 有機(jī)物在火焰中電離形成離子流，根據(jù)離子流的出現(xiàn)和大小進(jìn)行分析。,載氣+樣品組分,H2,空氣,極化極,收集極,放大記錄,離子流方向,氫火焰離子化檢測(cè)器的特點(diǎn)： （1）靈敏度高，線性范圍寬 （2）適于有機(jī)物的檢測(cè) （3）不能檢測(cè)惰性氣體、空氣、水、CO、CO2、NO、SO2等氣體,鹵素等含電負(fù)性的原子捕獲電子生成穩(wěn)定的負(fù)離子，并與載氣正離結(jié)合，使基流信號(hào)下降，根據(jù)信號(hào)是否降低和降低程度，可檢測(cè)組分。,放射源 （-）,不銹鋼棒 （+）,放大與 檢測(cè)系統(tǒng),電子俘獲檢測(cè)器的特點(diǎn)： （

13、1）對(duì)鹵素、硫、磷、氮、氧有很強(qiáng)的響應(yīng)； （2）靈敏度高，可用于痕量農(nóng)藥殘留物的分析； （3）線性范圍較窄,4、火焰光度檢測(cè)器 （Flame Photometric Detector，F(xiàn)PD） 是一種對(duì)硫磷選擇性的檢測(cè)器，這兩種元素燃燒中被激發(fā)，從而、發(fā)射特征的光信號(hào)：,載氣+組分,H2,PMT,濾光片,1800-29000C,？,新型檢測(cè)器,Reaction of organic compounds on nano-particle,Large area of surface,Red,O2,Ox,Nano-particle,catalyst,一種醇在兩種納米材料表面的發(fā)光行為,Chemilu

14、minescence on the surface of nano-materials,Chemiluminescence spectra of C2H5OH gas on the surface of nanosized semiconductor,CCD攝像儀收集化學(xué)發(fā)光譜圖,valve,column,detector,Computer,Gas chromatography with “Dots No.” Detector?,5、其它檢測(cè)器 （1）GC-MS （2）GC-FTIR,6、檢測(cè)器的性能指標(biāo) （1）靈敏度（Sensitivity） 指樣品量變化引起信號(hào)變化的程度，程度越大靈敏度越

15、高。,R 峰高mV 面積A=（mV）2,Q濃度mg/ml，ml/ml 質(zhì)量 g/s,S濃度mV ml/mg A ml/mg 質(zhì)量mV s/g A s/g,（2）檢測(cè)限（Detection Limit） 二倍噪音所相當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)的量稱為檢測(cè)限,N為噪音，單位為mV,（3）線性范圍（Linear range） 指檢測(cè)器信號(hào)與樣品濃度（或量）之間成正比關(guān)系的范圍。,小結(jié) 氣相色譜儀主要包括四部分： 1、載氣系統(tǒng) 2、進(jìn)樣系統(tǒng) 3、分離系統(tǒng) 4、檢測(cè)系統(tǒng),二、氣相色譜分析方法 1、定性分析,（1）保留時(shí)間定性法（已知物對(duì)照方法） 在一定的色譜系統(tǒng)和操作條件下，每種物質(zhì)都有一定的保留時(shí)間，如果在相同色譜條件

16、下，未知物的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)相同，則可初步認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。 為了提高定性分析的可靠性，還可進(jìn)一步改變色譜條件（分離柱、流動(dòng)相、柱溫等）或在樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，如果被測(cè)物的保留時(shí)間仍然與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一致，則可認(rèn)為它們?yōu)橥晃镔|(zhì)。,（2）保留指數(shù)（I）定性法,以正購(gòu)?fù)闊N為參考標(biāo)準(zhǔn)，某一未知組分的保留行為用兩個(gè)緊靠近它的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（正構(gòu)烷烴）來(lái)標(biāo)定：,I = 100 NN為碳原子數(shù),例如：正己烷 I = 600 正辛烷 I = 800 其它化合物 Ix = 100 x x為組分相當(dāng)于正構(gòu)烷烴C原子的數(shù),例如：苯在某柱子上的Ix = 733 表示苯在該柱上的保留值相當(dāng)于含7.33個(gè)碳原子的正構(gòu)烷烴的保

17、留值。 所以保留指數(shù)可計(jì)算如下：,N，N+n 分別為兩個(gè)正構(gòu)烷烴的碳原子數(shù), n最好等于1,（3）與其他儀器聯(lián)用定性 將具有定性能力的分析儀器如紅外（IR）、核磁（NMR）、質(zhì)譜（MS）、原子光譜（AAS、AES等儀器作為色譜儀的檢測(cè)器獲得比較準(zhǔn)確的定性信息。,由于保留值（保留時(shí)間、保留指數(shù)等）定性受溫度影響，因此應(yīng)嚴(yán)格控制溫度； 當(dāng)兩個(gè)化合物的保留值相同或相近時(shí)，容易出現(xiàn)錯(cuò)判。,絕對(duì)校正因子受實(shí)驗(yàn)條件的影響，定量分析時(shí)必須與實(shí)際樣品在相同條件下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的校正因子。 因此常用相對(duì)校正因子：,相對(duì)校正因子f 指某物質(zhì)i與一選擇的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)S的絕對(duì)校正因子之比。 即 相對(duì)校正因子只與檢測(cè)器類型有

18、關(guān)，而與色譜條件無(wú)關(guān)。 常用于作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)S的有苯（熱導(dǎo)檢測(cè)器）和庚烷（氫火焰離子化檢測(cè)器）等。,（2）定量分析的方法 A、歸一化法,歸一化法是將所有組分的峰面積Ai分別乘以它們的相對(duì)校正因子后求和，即所謂“歸一” 采用歸一化法進(jìn)行定量分析的前提條件是樣品中所有成分都要能從色譜柱上洗脫下來(lái)，并能被檢測(cè)器檢測(cè)。,B、外標(biāo)法 將某組分的峰面積與該組分標(biāo)準(zhǔn)峰面積直接比較定量?；虿捎脴?biāo)準(zhǔn)曲線法定量：,A,tR,Ax,tRx,C、 內(nèi)標(biāo)法 比較標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)和被測(cè)組分的峰面積，從而確定被測(cè)組分的濃度。,由于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和被測(cè)組分處在同一基體中，因此可以消除基體帶來(lái)的干擾。而且當(dāng)儀器參數(shù)和洗脫條件發(fā)生非人為的變化時(shí)，

19、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和樣品組分都會(huì)受到同樣影響，這樣消除了系統(tǒng)誤差。,內(nèi)標(biāo)物應(yīng)滿足的要求： l在所給定的色譜條件下具有一定的化學(xué)穩(wěn)定性； l在接近所測(cè)定物質(zhì)的保留時(shí)間內(nèi)洗脫下來(lái)； l與兩個(gè)相鄰峰達(dá)到基線分離； l物質(zhì)特有的校正因子應(yīng)為已知的或者可測(cè)定； l與待測(cè)組分有相近的濃度和類似的保留行為； l具有較高的純度。,氣相色譜的應(yīng)用舉例,第四節(jié) 高效液相色譜法 High Performance Liquid Chromatography, HPLC,一、概述 氣相色譜只適合分析較易揮發(fā)、且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的有機(jī)化合物，而HPLC則適合于分析那些用氣相色譜難以分析的物質(zhì)，如揮發(fā)性差、極性強(qiáng)、具有生物活性、熱穩(wěn)定性

20、差的物質(zhì)。所以，HPLC的應(yīng)用范圍已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)氣相色譜。,通常將液相色譜法按分離機(jī)理分成吸附色譜法、分配色譜法、離子色譜法和凝膠色譜法四大類。其實(shí)，有些液相色譜方法并不能簡(jiǎn)單地歸于這四類。,二、高效液相色譜儀,輸液系統(tǒng) 進(jìn)樣系統(tǒng) 分離系統(tǒng) 檢測(cè)系統(tǒng) 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),1、輸液系統(tǒng),(1) 高壓輸液泵 高壓輸液泵是液相色譜儀的關(guān)鍵部件，其作用是將流動(dòng)相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜系統(tǒng)。 輸液泵的穩(wěn)定性直接關(guān)系到分析結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。,高壓輸液泵 在線脫氣裝置,(2)在線脫氣裝置 在線脫氣裝置用于脫去流動(dòng)相中的溶解氣體，流動(dòng)相先經(jīng)過(guò)脫氣裝置再輸送到色譜柱。 除在線脫氣裝置外，目前也采用超聲脫氣、真

21、空脫氣等方式。,脫氣不好時(shí)有氣泡，導(dǎo)致流動(dòng)相流速不穩(wěn)定，造成基線飄溢，噪音增加。,（3）梯度洗脫裝置 通過(guò)兩個(gè)輸液泵流速的變化，改變流動(dòng)相的洗脫能力，其作用與氣相色譜的程序升溫類似。,A,B,A,B,C,C,2、進(jìn)樣系統(tǒng) 通常采用六通伐進(jìn)樣：,色譜柱,色譜柱,泵,泵,1,2,進(jìn)樣,3、色譜柱,Normal column5-um、4.6-um Narrow bore column1-3 um Micro column 1 um,色譜柱是實(shí)現(xiàn)分離的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能穩(wěn)定。柱性能與柱結(jié)構(gòu)、填料特性、填充質(zhì)量和使用條件有關(guān)。,4、檢測(cè)器,作用 用來(lái)連續(xù)監(jiān)測(cè)經(jīng)色譜柱分離后的流出物的組成

22、和含量變化的裝置。 目前最常用的檢測(cè)器主要有：,紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器 熒光檢測(cè)器 電化學(xué)檢測(cè)器 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器 質(zhì)譜檢測(cè)器,（1）紫外-可見(jiàn)檢測(cè)器,光源,檢測(cè)室,光柵,二極管陣列檢測(cè)器,（2）熒光檢測(cè)器 許多有機(jī)化合物，特別是芳香族化合物、被一定強(qiáng)度和波長(zhǎng)的紫外光照射后，發(fā)射出較激發(fā)光波長(zhǎng)要長(zhǎng)的熒光。但可以與發(fā)熒光物質(zhì)反應(yīng)衍生化后檢測(cè)。 特點(diǎn)： 有非常高的靈敏度和良好的選擇性，靈敏度要比紫外檢測(cè)法高23個(gè)數(shù)量級(jí)，特別適合于藥物和生物化學(xué)樣品的分析。,熒光檢測(cè)器結(jié)構(gòu)示意圖,光源,檢測(cè)器,濾光片,檢測(cè)室,（3）蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,蒸發(fā)光散射檢測(cè)器適合于無(wú)紫外吸收、無(wú)電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測(cè)。,（4

23、）電化學(xué)檢測(cè)器（以電導(dǎo)檢測(cè)器為例）,問(wèn)題 電導(dǎo)檢測(cè)器怎樣消除流動(dòng)相電導(dǎo)的干擾？ 例如，采用陽(yáng)離子交換色譜分離堿金屬離子時(shí)，通常用HCl作為流動(dòng)相。,三、液相色譜分離模式,一、吸附色譜（adsorption chromatography） 原理：基于被測(cè)組分在固定相表面具有吸附作用，且各組分的吸附能力不同，使組分在固定相中產(chǎn)生保留和實(shí)現(xiàn)分離。 固定相： 固定相通常是活性硅膠、氧化鋁、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固體吸附劑，所以吸附色譜也稱液固吸附色譜?；钚怨枘z最常用。,流動(dòng)相： 弱極性有機(jī)溶劑或非極性溶劑與極性溶劑的混合物，如正構(gòu)烷烴（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。,二、分

24、配色譜,應(yīng)用： 吸附色譜用于結(jié)構(gòu)異構(gòu)體分離和族分離仍是最有效的方法，如農(nóng)藥異構(gòu)體分離、石油中烷、烯、芳烴的分離。 缺點(diǎn)是容易產(chǎn)生不對(duì)稱峰和拖尾現(xiàn)象。,原理： 主要基于樣品分子在流動(dòng)相和固定相間的溶解度不同（分配作用）而實(shí)現(xiàn)分離的液相色譜分離模式。,液-液分配色譜固定相的液體往往容易溶解到流動(dòng)相中去，所以重現(xiàn)性很差，不大為人們所采用。 后來(lái)發(fā)展起來(lái)的鍵合固定相以化學(xué)鍵合的方法將功能分子結(jié)合到惰性載體上，固定相就不會(huì)溶解到流動(dòng)相中去了。,鍵合固定相,非極性鍵合固定相： 鍵合在載體表面的功能分子是烷基、苯基等非極性有機(jī)分子。如最常用的ODS（Octa Decyltrichloro Silane）柱或C18柱就是最典型的代表，其極性很小。 極性鍵合固定相： 鍵合在載體表面的功能分子是具有二醇基、醚基、氰基、氨基等極性基團(tuán)的有機(jī)分子。,正相HPLC（normal phase HPLC）： 是由極性固定相和非極性（或弱極性）流動(dòng)相所組成的HPLC體系。其代表性的固定相是改性硅膠、氰基柱等，代表性的流動(dòng)相是正己烷。吸附色譜也屬正相HPLC。 反相HPLC（reversed phase HPLC）： 由非極性固定相和極性流動(dòng)相所組成的液相色譜體系，與正相HPLC體系正好相反。其代表性