1、BIOLOG法,微生物鑒定,微生物群落結(jié)構(gòu),主要功能,One Technology,Clinical,Plant Disease,Food,Industrial QC,Veterinary,Education,Microbial Ecology,Research,Biologs Fundamental Technology,With a Vast Family of Applications And Products,應(yīng)用領(lǐng)域,檢測(cè)原理,BIOLOG公司獨(dú)特創(chuàng)的碳源利用方法，以微生物對(duì)不同碳源代謝率的差異，針對(duì)每一類(lèi)微生物篩選95種不同碳源，配合四唑類(lèi)顯色物質(zhì)（如TTC、TV），固定于96孔板

2、上，接種菌懸液后培養(yǎng)一定時(shí)間，通過(guò)檢測(cè)微生物細(xì)胞利用不同碳源進(jìn)行新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的氧化還原酶與顯色物質(zhì)反應(yīng)導(dǎo)致的顏色變化（吸光度）以及由于微生物生長(zhǎng)造成的濁度差異，與標(biāo)準(zhǔn)菌株數(shù)據(jù)庫(kù)比較，即可得出鑒定結(jié)果。,Biologs Multi-Trait Test Format,Reduction of Tetrazolium Violet,細(xì)菌和酵母的顯色物質(zhì)：四唑紫,Filamentous Fungi Database,絲狀真菌顯色物質(zhì)：INT,Development of the Biolog Microbial Identification System,Initially Screened

3、Over 500 Carbon Sources 130 Species GN Microbes 65,000 Data Points,Biolog GN MicroPlate,GN2 MicroPlate,GP2 MicroPlate,YT MicroPlate,Wells With Tetrazolium Violet,Wells Without Tetrazolium Violet,AN MicroPlate,FF MicroPlate,功能一：微生物鑒定,重點(diǎn)內(nèi)容,鑒定步驟,軟件應(yīng)用,鑒定實(shí)例,維護(hù)保養(yǎng),疑難解答,鑒定步驟,分離純化,平板擴(kuò)大培養(yǎng),制備菌懸液,調(diào)整濁度,接種培養(yǎng),獲取結(jié)果

4、,分離純化,保證純種是微生物鑒定的首要條件 分離純化采用常規(guī)微生物操作方法 可以用國(guó)產(chǎn)培養(yǎng)基或自己篩選的培養(yǎng)基,鑒定步驟總覽,BUG+B 或 TSA+B Air Typically 30 GN/GP-IF 52%T GN2-150l 4-6, 16-24,BUG+B 或 TSA+B Air Typically 35-37 GN/GP-IF+T 61%T GN2-150l 4-6, 16-24,CHOC 6.5%CO2 Typically 35-37 GN/GP-IF+T 20%T GN2-150l 4-6, 16-24,BUG+B Air/6.5%CO2 Typically 35-37 GN/

5、GP-IF+T 20%T GP2-150l 4-6, 16-24,BUG+M+T PLUS streaking Air Typically 30 GN/GP-IF 28%T GP2-150l 4-6, 16-24,BUA+B ANA Typically 35-37 AN-IF 65%T AN-100l 20-24,BUY Air 26 Water 47%T YT-100l 24,48,72,培養(yǎng)基,培養(yǎng)環(huán)境,培養(yǎng)溫度,接種液種類(lèi),菌懸液濁度,接種量,培養(yǎng)時(shí)間,GN-NENT,GN-ENT,GN-FAS,GP-COCCUS GP-ROD,GP-ROD SB,AN,YT,Oxi +,TSI=A/A

6、 or K/A,Oxi ,微生物,好氧菌,GN,GP,厭氧菌,酵母菌,2%ME Air Typically 26 FF-IF 75%T FF-100l 24,48,72,96,霉菌,FF,TSI=K/K or K/A,說(shuō)明1,除嗜熱菌外，其它均在26，30或3537 需要在巧克力培養(yǎng)基或需CO2的微生物，以及在BUG+B上形成的菌落小于1mm的微生物，為FAS(苛生菌) 農(nóng)業(yè)微生物不必在BUG培養(yǎng)基中加B(血) 對(duì)于GN-NENT，如果A1孔陽(yáng)性，則需在接種液加疏基乙酸鈉 對(duì)于GP-COCCUS,GP-ROD，如果A1孔陽(yáng)性，接種液中除加疏基乙酸鈉外，還需加水楊酸鈉。,說(shuō)明2,氧化酶反應(yīng)：判斷

7、細(xì)菌是否產(chǎn)氧化酶，其產(chǎn)生的氧離子與氧化酶試劑(對(duì)鹽酸四甲基對(duì)苯二胺或鹽酸二甲基對(duì)苯二胺) 反應(yīng)生醌類(lèi)物質(zhì)，顏色變化為：粉紅紫色藍(lán)色黑色,TSI反應(yīng)：用于觀察細(xì)菌對(duì)糖的利用和硫化氫（變黑）的產(chǎn)生。該培養(yǎng)基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1，只能利用葡萄糖的細(xì)菌，葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類(lèi)不被氧化，所以仍保持黃色。 而發(fā)酵乳糖的細(xì)菌(E.coli)，則產(chǎn)生大量的酸，使整個(gè)培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。 如培養(yǎng)基接種后產(chǎn)生黑色沉淀，是因?yàn)槟承┘?xì)菌能分解含硫氨基酸，生

8、成硫化氫，硫化氫和培養(yǎng)基中的鐵鹽反應(yīng)，生成黑色的硫化亞鐵沉淀。 K/K整支試管斜面紅色 K/Aw斜面表面紅色，底部淺黃色 A/A整支試管黃色 K/A斜面表面淺紅色，中部和底部中黃色,TSI(三糖鐵)瓊脂實(shí)驗(yàn)反應(yīng),A/A,A/K,K/K,K/Aw,乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例為10:10:1,遇酸變黃色,硫酸亞鐵銨、酚紅、硫代硫酸鈉,志賀氏菌：能分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖，不產(chǎn)H2S 大腸桿菌：能分解葡萄糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣，能分解乳糖，不產(chǎn)生H2S 沙門(mén)氏菌：能分解葡萄糖，多數(shù)產(chǎn)氣，不發(fā)酵乳糖，產(chǎn)生H2S，,志,沙,大,說(shuō)明3：厭氧菌,如果發(fā)現(xiàn)厭氧菌是革蘭氏陰性桿菌，必須做卡那霉素藥敏試驗(yàn)。 如果

9、抑菌圈10mm，說(shuō)明此菌對(duì)卡那霉素敏感，為假設(shè)梭菌。 如果無(wú)抑菌圈或抑菌圈10mm，說(shuō)明此菌對(duì)卡那霉素不敏感，為假設(shè)擬桿菌和普雷沃菌,擬桿菌和普雷沃菌,其它厭氧菌,從鋁箔袋中取出，立即接種,從鋁箔袋中取出，曝露20min后再接種,接種過(guò)程不能超過(guò)5min,接種過(guò)程不能超過(guò)5min,接種完后，等10min后再放入?yún)捬豕?接種完后，等10min后再放入?yún)捬豕?厭氧菌培養(yǎng)環(huán)境不能含氫氣，因含強(qiáng)氫化酶的微生物在有氫氣時(shí)會(huì)降解四唑類(lèi)顯然物質(zhì)。,厭氧菌培養(yǎng)20-24小時(shí)后，陽(yáng)性孔應(yīng)該有明顯的紫色。一旦曝露在空氣中，陰性孔也慢慢變成微弱的藍(lán)綠色。如果在從厭氧罐中取出前發(fā)現(xiàn)存在藍(lán)綠色，則說(shuō)明厭氧環(huán)境有問(wèn)題。,

10、返回,常見(jiàn)疑難解答,關(guān)鍵之一：菌懸液濃度,Enterococcus malodoratus (35%T),Enterococcus malodoratus (20%T),關(guān)鍵之二：培養(yǎng)溫度,Staphylococcus xylosus (30C),Staphylococcus xylosus (35C),關(guān)鍵之三：消除菌塊,Bacillus licheniformis (w/ clumps),Bacillus licheniformis (w/o clumps),關(guān)鍵之四：使用抗凝聚劑,Micrococcus diversus MicroLog release 3.5,Micrococcus

11、diversus MicroLog release 4.0,常見(jiàn)疑難解答,1、為什么純培養(yǎng)一定要用BIOLOG的培養(yǎng)基？ 答：由于培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)決定微生物的代謝趨勢(shì)，BIOLOG的數(shù)據(jù)庫(kù)是用其特有的培養(yǎng)基建立的，故欲得到最佳的鑒定結(jié)果，務(wù)必在接種前一步使用廠家提供的培養(yǎng)基。 有些用戶說(shuō)其篩選到的微生物在BIOLOG的培養(yǎng)基上長(zhǎng)不出，必須用自己的培養(yǎng)基才能長(zhǎng)出，這種情況十之八九這種微生物不包含在BIOLOG的數(shù)據(jù)庫(kù)中，用戶可以用自己的培養(yǎng)基做鑒定，但數(shù)據(jù)只能用于分析研究用。,2、GN與GN2的區(qū)別？ 答：GN2是GN的升級(jí)板，GN與GN2的碳源完全相同，不同是營(yíng)養(yǎng)基礎(chǔ)，如無(wú)機(jī)鹽、膠質(zhì)等。,3、微孔

12、鑒定板的保存與質(zhì)量鑒定？ 答：鑒定板應(yīng)保存在2-8 冰箱中。使用前應(yīng)目測(cè)觀察鑒定板的 質(zhì)量，一般微孔底部有微弱的黃棕色或粉紅色印跡是正常的，如 覺(jué)得質(zhì)量有問(wèn)題，可采用加水或菌懸液的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，如果一 加樣品馬上呈現(xiàn)明顯的顏色，則可能碳源已經(jīng)變質(zhì)。另外 可以采 用ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株做驗(yàn)證試驗(yàn)。如果結(jié)果準(zhǔn)確，則,4、鑒定凍干種時(shí)需要如何處理？ 答：凍干種鑒定前應(yīng)該用液體培養(yǎng)基連續(xù)活化2-3次，再進(jìn)行純培養(yǎng)。,5、為什么一定要嚴(yán)格控制接種液的濁度？ 答：BIOLOG的鑒定原理與氧含量關(guān)系較大，而菌懸液的濃度又決定 了氧的含量，而且其數(shù)據(jù)庫(kù)是在一定的菌懸液濃度下建立的，為獲得 準(zhǔn)確的鑒定結(jié)果，務(wù)必嚴(yán)格

13、控制接種菌懸液的濁度。,6、BIOLOG的濁度標(biāo)準(zhǔn)品是否與McFarland標(biāo)準(zhǔn)品有無(wú)可比性？ 答：BIOLOG的濁度標(biāo)準(zhǔn)品與Mcfarlands濁度標(biāo)準(zhǔn)品無(wú)可比性，BIOLOG 標(biāo)準(zhǔn)品用于校準(zhǔn)接種液的細(xì)胞濃度，它關(guān)系到鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。,7、非腸道菌和腸道菌分別在 30 和35-37 培養(yǎng)，可否用32-33 的培養(yǎng)箱代替二者？ 答：微生物有其最佳的培養(yǎng)溫度，如果采用上述方法，極可能得不 到好的鑒定結(jié)果。,8、手工讀數(shù)時(shí)，如果有些微孔有些顏色，但不明顯，如何判斷？ 答：將顏色不明顯的孔與A1孔比較，如明顯深于A1孔，則判斷為 陽(yáng)性?；蛘邔⑵渑袛酁檫吔缰担丛谶M(jìn)行數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)時(shí)不予以考慮。,9、許

14、多Microlog1和Microlog2的用戶用自己的酶標(biāo)儀讀數(shù)，是否可行？讀出的數(shù)據(jù)如何處理？ 答：用其它酶標(biāo)儀讀出的數(shù)據(jù)也是吸光度值，但必須通過(guò)一定的算法轉(zhuǎn)換。 也可根據(jù)A1孔的讀數(shù)直接判斷陰性或陽(yáng)性。一般來(lái)說(shuō)吸光度值小于0.2則判斷為陰性，大于0.2則判斷為陽(yáng)性，這是一種粗略的判斷方法，如需準(zhǔn)確判斷，應(yīng)采用陳列圖方法，確定邊界值，將干擾的反應(yīng)排除，才能得到較佳的結(jié)果。,10、有些用戶單獨(dú)購(gòu)買(mǎi)微孔鑒定板用于研究，對(duì)獲得的數(shù)據(jù)如何進(jìn)行分析？ 答：一般這類(lèi)用戶多用鑒定板做微生物群落分析和營(yíng)養(yǎng)特性研究，其 接種的菌懸液甚至是混合菌液，如有BIOLOG的軟件，可采用Cluster 分析功能模塊，對(duì)

15、不同試驗(yàn)的結(jié)果進(jìn)行比較。也可用PCA軟件(主要化 合物分析)或CLPP軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，這兩種軟件由其它公司提供， 可以在網(wǎng)上找到，但需支付一定費(fèi)用。,13、BIOLOG數(shù)據(jù)庫(kù)中的放線菌包含在哪一類(lèi)數(shù)據(jù)庫(kù)中？ 答：放線菌的數(shù)據(jù)庫(kù)主要包含在細(xì)菌的數(shù)據(jù)庫(kù)中。,11、鑒定細(xì)菌時(shí)，如果4小時(shí)鑒定的結(jié)果與16-24小時(shí)的結(jié)果不同， 該如何判斷結(jié)果？ 答：一般這種情況多數(shù)是菌種不夠純?cè)斐?，或接種過(guò)程污染嚴(yán)重。 如果這兩種情況都排除仍存在這個(gè)問(wèn)題，則選取SIM值大的做為最 佳結(jié)果。,12、質(zhì)控套裝有何用處？哪些客戶需要它？ 答：每套系統(tǒng)在出廠時(shí)已經(jīng)做過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)控鑒定，一般用戶無(wú)需 在首次安裝時(shí)購(gòu)買(mǎi)質(zhì)控套裝

16、。對(duì)于一些要求較高且預(yù)算允許的情 況下，如藥廠、醫(yī)院等單位，則要求最好做質(zhì)控工作。另外，儀 器使用較長(zhǎng)時(shí)間后，對(duì)讀數(shù)儀和濁度儀進(jìn)行校準(zhǔn)后，最后用質(zhì)控 套裝確認(rèn)儀器的性能。,結(jié)束,操作過(guò)程實(shí)例,BIOLOG微生物鑒定操作步驟,以革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌的鑒定為例,接種至鑒定板，培養(yǎng),調(diào)整濁度,制備菌懸液,接種至BUG+M+T 平板 純培養(yǎng),制備BUG+M+T 平板,術(shù)語(yǔ),前言,讀取結(jié)果,返回,OVERVIEW,Main menu,Gram-positive, spore-forming Bacilli (GP-Rod SB) have traditionally been difficult to s

17、peciate. They begin to sporulate within minutes of being introduced in a growth-limiting medium. Sporulation slows the organism metabolism, which results in loss of activity on biochemical test media. They grow readily on enriched media, but tend to clump, slime, harden, become grainy, and form pell

18、icles (skin-like films). These factors make it difficult to prepare uniform suspensions for identification in commercial test kits. You can use traditional biochemicals, but this means having all the needed biochemical test media and reagents on hand. It also usually takes more time to set up and in

19、terpret all the biochemicals visually. BIOLOG has simplified the identification of GP-Rod SB by controlling the environment and conditions in which the bacteria are grown and by using special set up procedures to give fast, consistent and reliable results.,專業(yè)術(shù)語(yǔ),Main menu,SECTION 1,Section 1 (Slide 1

20、 of 2)專業(yè)術(shù)語(yǔ),開(kāi)始 BUG 瓊脂培養(yǎng)基 （BUG瓊脂加0.25%麥芽糖） 7.66% 疏基乙酸鈉,Press right arrow key to advance Left arrow to go back,木制接種棒 長(zhǎng)棉簽 胰蛋白胨大豆瓊脂 GN/GP-IF革蘭氏陰性/陽(yáng)性菌接種液,V型水槽 濁度標(biāo)準(zhǔn)液 移液器 讀數(shù)儀,SELECT FROM ANY OF THE FOLLOWING OPTIONS,Press right arrow key to advance Left arrow to go back,Section 1 (Slide 2 of 2)TERMINOLOGY,濁

21、度計(jì) 回主菜單,BUG = BIOLOG UNIVERSAL GROWTH AGAR,BUG瓊脂培養(yǎng)基是一種通用的、高營(yíng)養(yǎng)的用于培養(yǎng)好氧菌的瓊脂培養(yǎng)基，其中強(qiáng)化了可提高微生物代謝活性的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以優(yōu)化鑒定板的性能。 BIOLOG的好氧菌數(shù)據(jù)庫(kù)建立時(shí)都是采用BUG培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)，故一定要用BUG培養(yǎng)基進(jìn)行接種前的純培養(yǎng)。,Section menu,BUG + M = BUG AGAR + 0.25% MALTOSE,BUG + M = BUG 瓊脂加0.25%麥芽糖，用于革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌，麥芽糖作為一種附加的糖源，提供特殊的營(yíng)養(yǎng)，并抑制芽孢的形成。,Section menu,7.66% TH

22、IOGLYCOLATE AMPOULE,Section menu,7.66% 疏基乙酸鈉溶液由BIOLOG提供。用BUGM瓊脂培養(yǎng)革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌時(shí)需稀釋使用 疏基乙酸鈉有利于革蘭氏陽(yáng)性芽孢桿菌在接種液中形成懸濁液,STREAKERZ STICKS,Section menu,Streakerz是一要長(zhǎng)6英寸(152mm)的木棒，頂端為錐 形。 Streakerz 非常適合用于挑取菌落及干管分散技術(shù),LONGSWABS 長(zhǎng)棉簽,長(zhǎng)棉簽長(zhǎng)7英寸(178mm) ，專門(mén)設(shè)計(jì)用于挑取菌落和制備菌懸液，特點(diǎn)是易可以抻至試管底部.,Section menu,TSA = 胰蛋白胨大豆瓊脂,TSA可替代BUG

23、瓊脂。其中的蛋白胨是經(jīng)胰酶處理大豆蛋白和酪蛋白。 TSA培養(yǎng)基中含5%的脫纖羊血，提供額外的營(yíng)養(yǎng)。,Section menu,GRAM-NEGATIVE/GRAM-POSITIVE INOCULATING FLUID (GN/GP-IF),GN/GP-IF接種液是經(jīng)滅菌的溶液，它由各種組分組成，以保證微生物正常生長(zhǎng)的滲透壓，并使接種的微生物達(dá)到良好的乳化分散效果，以保證接種液的均一性。 每管含19mL接種液.,Section menu,GP2 微孔鑒定板,GP2微孔板執(zhí)行95種離散的代謝測(cè)試，用于鑒定和分析革蘭氏陽(yáng)性好氧菌。目前的這部分的數(shù)據(jù)庫(kù)為341種。 每個(gè)孔都進(jìn)行一種獨(dú)特的基于四唑變化的

24、氧化還原反應(yīng)。 鑒定過(guò)程無(wú)需加任何其它試劑,Section menu,RESERVOIR加樣槽,V型加樣槽用于方便的吸取制備好的菌懸液。,Section menu,BIOLOG GP-Rod SB TURBIDITY STANDARD濁度標(biāo)準(zhǔn)液,GB-Rod SB濁度標(biāo)準(zhǔn)液為28%T，管規(guī)格為20 x 150 mm ，與濁度計(jì)的檢測(cè)孔相匹配。,Section menu,8頭電動(dòng)加液器預(yù)設(shè)有四個(gè)程序用于BIOLOG的微生物鑒定。: 1) 150l/well, multiple rows 2) 150l/well, single row 3) 100l/well, multiple rows 4)

25、 100l/well, single row.,BIOLOG PIPETTOR,Section menu,The Biolog MicroStation 一種功能強(qiáng)大的硬件和軟件平臺(tái)，可鑒定細(xì)菌、酵母和絲狀真菌。,BIOLOG MICROSTATION,Section menu,BIOLOG TURBIDIMETER,濁度計(jì)采用直流9V電壓，由鎳鉻充電電池供電。 電池使用之前應(yīng)充電12小時(shí),Section menu,BUG+M+T瓊脂平板的制備,Main menu,SECTION 2,Section 2BUG+M+T瓊脂平板的制備,開(kāi)始 準(zhǔn)備3mL無(wú)菌水 擠破安瓿瓶 加8滴疏基乙酸鈉至試管,將

26、疏基乙酸鈉溶液均勻涂布于平板上 晾干平板 回主菜單,Press right arrow key to advance Left arrow to go back,準(zhǔn)備3mL無(wú)菌水,取一支滅菌的玻璃或塑料試管 無(wú)菌條件下加3mL無(wú)菌水,Section menu,打開(kāi)疏基乙酸鈉瓶,取一塑料套將裝有疏基乙酸鈉的安瓿瓶擠破,Video clip-click on image,Section menu,加疏基乙酸鈉,加8滴疏基乙酸鈉溶液至3mL無(wú)菌水中。,Section menu,混合均勻,搖勻,Section menu,涂布疏基乙酸鈉溶液于平板上,取一支長(zhǎng)棉簽. 將棉簽浸入疏基乙酸鈉溶液中 取出棉簽，

27、在平板直徑方向劃一條線 在與線條垂直方向來(lái)回劃線，均勻涂布。 將平板轉(zhuǎn)動(dòng)90度后，均勻涂布 直到疏基乙酸鈉溶液均勻涂布于平板上。 此平板即稱為 BUG + M + T. 如果菌落生長(zhǎng)較緩慢，應(yīng)同時(shí)接23個(gè)平板，保證足夠制備適當(dāng)濃度的菌懸液,Video clip-click on image,Section menu,制備 BUG + M + T平板的目的,麥芽糖和疏基乙酸鈉可刺激微生物細(xì)胞進(jìn)入活力旺盛的生長(zhǎng)期，減少胞外代謝產(chǎn)物的分泌，防止制備菌懸液時(shí)結(jié)塊。,Section menu,晾干,晾干兩分鐘 未晾干易使細(xì)菌擴(kuò)散,Section menu,SECTION 3,純培養(yǎng),Main menu,

28、開(kāi)始 挑取分離良好的單菌落 芽孢菌接種技術(shù) BUG + M + T 平板 接種后的平板外觀,不易生長(zhǎng)的芽孢菌接種技術(shù) 回主菜單,Press right arrow key to advance Left arrow to go back,Section 3 INOCULATING PLATES TO FORM A PLUS,SELECT FROM ANY OF THE FOLLOWING OPTIONS,挑取菌落,用木制接種棒挑取分離良好的單菌落,Section menu,芽孢菌的接種技術(shù),在BUG + M + T 瓊脂平板上劃十字接種 如果待接微生物容易擴(kuò)展生長(zhǎng)，僅需劃單條的十字線,Vide

29、o clip-click on image,Section menu,接種后的瓊脂平板外觀,該接種技術(shù)的目的是在瓊脂平板上中部形成一個(gè)窄十字交叉線 芽孢桿菌在營(yíng)養(yǎng)缺乏時(shí)易形成芽孢。劃窄線的目的是保證充足的營(yíng)養(yǎng)，避免形成芽孢,Section menu,不易生長(zhǎng)的芽孢菌接種技術(shù),如芽孢菌不易擴(kuò)展生長(zhǎng)，可在同一個(gè)方向上以之字形來(lái)回劃三條線，線間距盡可能短。,Video clip-click on image,Section menu,培養(yǎng),在30C空氣中培養(yǎng)16-24hr. 如果微生物生長(zhǎng)快速，僅需培養(yǎng)16小時(shí)即可。,Section menu,制備菌懸液,Main menu,SECTION 4,開(kāi)始

30、 培養(yǎng)后的純培養(yǎng)平板 在每條邊上做標(biāo)記 挑取菌落,Press right arrow key to advance Left arrow to go back,Section 4 制備菌懸液,制備菌懸液 菌懸液的外觀 回主菜單,培養(yǎng)1624小時(shí)后的純培養(yǎng)平板,培養(yǎng)1624小時(shí)后純培養(yǎng)平板外觀,Section menu,每條邊做標(biāo)記,用接種棒在四條邊的中點(diǎn)處劃一標(biāo)記線 僅挑取每條邊外半部分的菌落. 十字的中間部分菌落有產(chǎn)芽孢趨勢(shì)。如挑取中間部分的菌落，由于菌落呈休眠狀態(tài)，反應(yīng)微弱，易產(chǎn)生假陰性結(jié)果。,Video clip-click on image,Section menu,干管分散技術(shù),用一

31、支接種棒，挑取外半部分的菌落 將接種棒小心插入一支干的試管中。 此步驟中使用的干管為20 x 150 mm 已滅菌的。 首先將試接種棒沿試管內(nèi)壁旋轉(zhuǎn)幾圈，將菌落轉(zhuǎn)至試管內(nèi)壁，然后用接種棒上下劃動(dòng)，并轉(zhuǎn)動(dòng)試管，將菌落均勻分散。 再挑取另三條邊的菌落，用同樣的方法進(jìn)行分散。,Video clip-click on image,Section menu,挑取菌落時(shí)的注意事項(xiàng),Section menu,不要挑起平板上的培養(yǎng)基，否則會(huì)帶入其它碳源。 鑒定芽孢菌時(shí)，這一步驟非常關(guān)鍵，關(guān)系到能否得出正確的鑒定結(jié)果。,制備菌懸液,Video clip-click on image,Section menu,取

32、一支無(wú)菌吸管，移取3-5 ml GN/GP-IF接種液，加至分散良好的干管中。 用一支無(wú)菌棉簽將試管內(nèi)壁的菌落洗下與GN/GP-IF 均勻混合。 洗下后應(yīng)該可以看到均勻的象牛奶樣的懸濁液。 將剩余的 GN/GP-IF接種液移入試管中。 混合均勻,懸濁液外觀,最后的懸濁液呈乳白色,Section menu,調(diào)整濁度,Main menu,SECTION 5,開(kāi)始 讀標(biāo)準(zhǔn)濁度液 測(cè)菌懸液的濁度 設(shè)定,制備菌懸液時(shí)三種可能的結(jié)果 減小濁度 增加濁度 靜置后再測(cè)濁度,Section 5 調(diào)整濁度,Press right arrow key to advance Left arrow to go back

33、,主菜單,讀空白值,用吸水紙擦干凈GN/GP-IF接種液的試管外壁,Section menu,空白對(duì)照測(cè)量,將GN/GP-IF空白液置于濁度計(jì)中，調(diào)整指針至 100% T.,Section menu,用GP-Rod SB 標(biāo)準(zhǔn)濁度液檢查濁度儀的準(zhǔn)確性。,讀標(biāo)準(zhǔn)濁度液,Section menu,STANDARD READING,標(biāo)準(zhǔn)濁度液的讀數(shù)應(yīng)該為 28% T 3%.,Section menu,讀菌懸液,Section menu,擦干凈試管外壁. 將試管插入. 菌懸液濁度 28%T 3% *,靜置,如菌懸液達(dá)到要求的濁度，將試管置于試管架上靜置5分鐘。,Section menu,菌懸液的目標(biāo)濁

34、度為 28%T 3.,有三種可能的結(jié)果,Target,Section menu,菌懸液的目標(biāo)濁度為 28%T 3. 圖示菌懸液的濁度小于目標(biāo)濁度（透光率比標(biāo)準(zhǔn)濁度液高）,Target,三種可能的結(jié)果,Section menu,菌懸液的目標(biāo)濁度為 28%T 3. 圖示菌懸液的濁度小于目標(biāo)濁度（透光率比標(biāo)準(zhǔn)濁度液高） 圖示菌懸液的濁度高于目標(biāo)濁度（透光率比標(biāo)準(zhǔn)濁度液低）,Target,三種可能的結(jié)果,Section menu,如果菌懸液的濁度在要求的濁度范圍內(nèi)，無(wú)需再調(diào)整。 如果菌懸液的濁度不在要求的濁度范圍內(nèi)，必需調(diào)整濁度。,三種可能的結(jié)果,Section menu,降低濁度,繼續(xù)加接種液，直至

35、達(dá)到要求的濁度。,Video clip-click on image,Section menu,增加濁度,挑取菌落到另一支干管，采用同樣的干管技術(shù)分散菌落。 加接種液制備濁度高的菌懸液。 取該菌懸液用于增加濁度。,Video clip-click on image,Section menu,靜置,靜置5分鐘.,Section menu,靜置后測(cè)定濁度,5分鐘后，濁度應(yīng)為 28% T 3%.,Section menu,接種至鑒定板,Main menu,SECTION 6,開(kāi)始 將菌懸液傾入V型加樣槽 將菌懸液加至鑒定板中,培養(yǎng)24小時(shí)，讀取結(jié)果 回主菜單,Section 6 接種至鑒定板,Pre

36、ss right arrow key to advance Left arrow to go back,將菌懸液傾入V型加樣槽,濁度調(diào)整好后，將菌懸液傾入V型加樣槽。 保留最后的1mL菌懸液在試管中，不要傾入加樣槽。,Video clip-click on image,Section menu,移取菌懸液至鑒定板中,用8頭移液器取菌懸液。 每個(gè)孔加150uL菌懸液 加滿所有的微孔。,Video clip-click on image,Section menu,培養(yǎng),為防止微孔板水分蒸發(fā)，應(yīng)將微孔鑒定板旋轉(zhuǎn)在一帶蓋塑料盒中，底部墊一濕毛巾保濕. 2. 放置在30度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng). 3. 培養(yǎng)時(shí)間

37、為 4-6 小時(shí)或 16-24 小時(shí).,Section menu,Video clip-click on image,結(jié)果解釋,Main menu,SECTION 7,開(kāi)始 將鑒定板放入讀數(shù)儀 打開(kāi)應(yīng)用程序 設(shè)置相關(guān)參數(shù),切換至數(shù)據(jù)輸入欄 讀板 生化測(cè)試結(jié)果 鑒定結(jié)果,Section 7 Interpretation,SELECT FROM ANY OF THE FOLLOWING OPTIONS,Press right arrow key to advance Left arrow to go back,主菜單,The MicroLog application is opened by do

38、uble clicking on the Icon found on the Windows desktop.,Section menu,點(diǎn)擊SET UP，初始化設(shè)置,Section menu,如果人工讀數(shù)，直接按DATA進(jìn)入,Section menu,DATA ENTRY,選擇培養(yǎng)時(shí)間,Section menu,輸入樣品編號(hào),Section menu,選擇鑒定板類(lèi)型,Section menu,在 “Strain type”下拉菜單中選擇 GP-Rod SB,Section menu,讀取結(jié)果,培養(yǎng)后的鑒定板放入讀數(shù)儀的托架上，取下蓋子。,Section menu,Video clip-cli

39、ck on image,按 “Read Next” 鍵開(kāi)始讀數(shù),Section menu,讀數(shù)儀掃描鑒定板后，自動(dòng)彈出，結(jié)果顯示在電腦屏幕上。,Video clip-click on image,Section menu,READ PLATE,白色圓點(diǎn)代表陰性結(jié)果，紫色圓點(diǎn)代表陽(yáng)性結(jié)果，白色和綠色各半代表邊界值,Section menu,Biochemical test results,如果鑒定結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)匹配良好，將顯示鑒定的結(jié)果在綠色狀態(tài)條上。,Section menu,Identification results,第C5 & C9孔標(biāo)記有“”號(hào)，表示鑒定結(jié)果與數(shù)據(jù)庫(kù)不匹配，數(shù)據(jù)庫(kù)中該種微生物應(yīng)該為陽(yáng)性，而不是陰性。,Section menu,Section menu,如果鑒定結(jié)果不可靠，結(jié)果欄為黃色，顯示 “NO ID”. 但仍列出最可能的十個(gè)結(jié)果.,十個(gè)結(jié)果按可能性從大到小列于滾動(dòng)欄中。,Section menu,每個(gè)結(jié)果均顯示三種重要的參數(shù). 即可能性 probability (PROB), 相似性Similarity (SIM) and 位距Distance (DIS) .,Section menu,DIS 和SIM是最重要的兩