1、2020/8/24,1,血型鑒定常見的疑難問題分析及處理,2020/8/24,2,概述,隨著輸血醫(yī)學(xué)的發(fā)展，輸血安全問題日益引起各方面的關(guān)注，輸血安全主要體現(xiàn)在兩方面內(nèi)容，一是經(jīng)血傳播疾病問題，二是血液免疫學(xué)方面的問題即血型血清方面的問題。,2020/8/24,3,概述,血型血清學(xué)不同于一般的臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)，有其自身特點(diǎn)。一般臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的工作流程十分明了，即接受臨床醫(yī)生的申請(qǐng)，按各項(xiàng)檢驗(yàn)的操作規(guī)程完成其申請(qǐng)內(nèi)容并反饋結(jié)果。而血型血清學(xué)方面的檢查則與此有很大的不同，臨床醫(yī)生及各醫(yī)院輸血科向血站和血液中心血型參比實(shí)驗(yàn)室提出的檢測(cè)申請(qǐng)不外有以下幾種情況:,2020/8/24,4,血型參比實(shí)驗(yàn)室涉及的

2、檢測(cè)內(nèi)容,血型鑒定困難 交叉配血困難 輸血反應(yīng)原因分析 其它：如母嬰血型不合新生兒溶血病檢測(cè)、coombs試驗(yàn)、血小板抗體檢測(cè)等。,2020/8/24,5,ABO血型常規(guī)定型方法,玻片法、紙片法 試管法 微量板法 微柱凝集法,2020/8/24,6,疑難血型鑒定常用的輔助實(shí)驗(yàn),吸收試驗(yàn) 放散試驗(yàn)（常用熱放散） DTT（二硫蘇糖醇）處理自身凝集紅細(xì)胞 唾液血型物質(zhì)測(cè)定（中和試驗(yàn)） 分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行基因型檢測(cè),2020/8/24,7,血型血清學(xué)的工作特點(diǎn),鑒定技術(shù)因不同情況而異，沒有一個(gè)固定的格式，因此在試驗(yàn)過程中隨時(shí)分析試驗(yàn)結(jié)果，選擇最有效的方案(程序)是必要的。 血型參比實(shí)驗(yàn)室必須全面分析病

3、歷情況，有選擇的運(yùn)用相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)手段來解決問題，另外在接受檢測(cè)申請(qǐng)時(shí)，還應(yīng)詳細(xì)了解患者的既往史-性別、年齡、民族、臨床診斷及臨床癥狀和患者的輸血史和用藥史，如女性已婚患者還應(yīng)詢問其妊娠史。這些都對(duì)解決問題至關(guān)重要。,2020/8/24,8,血型血清學(xué)的工作特點(diǎn),例如：對(duì)于白血病患者，應(yīng)考慮到由于疾病原因而引起血型抗原減弱的可能性；對(duì)消化系統(tǒng)的疾病的患者應(yīng)考慮到由于產(chǎn)生“類B物質(zhì)”而導(dǎo)致血型鑒定錯(cuò)誤的可能性；對(duì)于多次輸血的患者應(yīng)考慮其體內(nèi)產(chǎn)生免疫性抗體的可能性，等等。,2020/8/24,9,疑難血型鑒定,共同特點(diǎn):正反定型不。,2020/8/24,10,ABO血型正反定型不符及其原因,1.技術(shù)和

4、管理錯(cuò)誤 2.正定型-紅細(xì)胞自身相關(guān)問題 3.反定型-血清自身相關(guān)問題,2020/8/24,11,一、技術(shù)和管理錯(cuò)誤,（1）標(biāo)本或試劑搞錯(cuò)，造成假陽性或假陰性結(jié)果。 （2）器材不潔產(chǎn)生假陽性結(jié)果。 （3）試劑污染或失效產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。 （4）離心過度或不足，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。,2020/8/24,12,一、技術(shù)和管理錯(cuò)誤,（5）陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象未能識(shí)別，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。 （6）漏加試劑，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。 （7）結(jié)果記錄或判斷錯(cuò)誤，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。 （8）細(xì)胞與血清比例不適當(dāng)，產(chǎn)生假陽性或假陰性結(jié)果。,2020/8/24,13,二、正定型-紅細(xì)胞自身相關(guān)問題,1.紅細(xì)胞

5、致敏 直接抗球蛋白試驗(yàn)陽性的紅細(xì)胞（如自身免疫性溶血性貧血患者的紅細(xì)胞）在含高蛋白介質(zhì)的試劑中可發(fā)生凝集，產(chǎn)生假陽性結(jié)果。 2.異?；蛐?ABO亞型的弱抗原常規(guī)方法難以檢出，產(chǎn)生假陰性結(jié)果。 3.Cis-AB型（順式AB型） 指從父母的一方同時(shí)得到A和B基因在一條染色體上，而另一條染色體上是從父母中另一方來的O基因。順式AB細(xì)胞的B抗原較弱，類似B3亞型。,2020/8/24,14,二、正定型-紅細(xì)胞自身相關(guān)問題,4.嵌合體血型 體內(nèi)有兩群紅細(xì)胞，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。也可見于ABO不同型的骨髓移植術(shù)后。真正的嵌合體非常少見，可出現(xiàn)于雙胞胎，在胚胎期由于血管的吻合使得2個(gè)胎兒的血液

6、發(fā)生混合，2種血液都被機(jī)體認(rèn)做自我，不產(chǎn)生抗體。人工嵌合狀態(tài)可出現(xiàn)于輸血后（如O型紅細(xì)胞輸給A或B型人），骨髓移植術(shù)后，交換輸血及母體、胎兒出血。,2020/8/24,15,二、正定型-紅細(xì)胞自身相關(guān)問題,5.疾病因素導(dǎo)致抗原減弱 常見的如白血病、何杰金病、10號(hào)染色體轉(zhuǎn)位、紅細(xì)胞系統(tǒng)極度增生如海洋性貧血等病人ABO血型抗原可受到暫時(shí)抑制，抗原減弱檢出困難。紅細(xì)胞ABO抗原減弱與病程有關(guān)，病情緩解時(shí)抗原性會(huì)恢復(fù)。 6.紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象 當(dāng)病人感染細(xì)菌或病毒后，病毒或細(xì)菌產(chǎn)生的酶使紅細(xì)胞上掩蔽的T抗原暴露激活，由于正常人血清中都含有抗-T抗體，因此可與正常人血清產(chǎn)生凝集反應(yīng)，正定型試驗(yàn)假陽性。,

7、2020/8/24,16,二、正定型-紅細(xì)胞自身相關(guān)問題,7.獲得性類B 由于革蘭氏陰性桿菌的作用，紅細(xì)胞可獲得“類B”的活性。(腸梗阻、結(jié)腸、直腸癌或其他下消化道疾病時(shí)腸壁通透性增加，細(xì)菌多糖入血，使A型患者出現(xiàn)獲得性類B現(xiàn)象) 8.可溶性血型物質(zhì)增多 胃或胰腺惡性腫瘤患者血清中可能含有過多的可溶性血型物質(zhì)，這些物質(zhì)中和抗A（B）血清從而影響正定型結(jié)果。,2020/8/24,17,二、正定型-紅細(xì)胞自身相關(guān)問題,9.紅細(xì)胞發(fā)生自凝現(xiàn)象 患者血清中的高效價(jià)自身冷凝集素使紅細(xì)胞發(fā)生凝集。 10. 近期輸血 曾異型輸血，使病人血液標(biāo)本成為不同型別的紅細(xì)胞混合物，定型時(shí)顯示“混合外觀凝集”現(xiàn)象。,2

8、020/8/24,18,三、反定型-血清自身相關(guān)問題,1.血漿置換治療后 近期內(nèi)進(jìn)行大量的血漿置換治療，影響抗體效價(jià)，造成反定型困難。 2.異常的血漿蛋白 病人血漿中異常的白蛋白、球蛋白比例和高濃度的纖維蛋白原等能導(dǎo)致緡錢狀形成，造成假凝集現(xiàn)象，多見于如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、何杰金淋巴瘤、嚴(yán)重的肝病等患者 。 3.高分子聚合物的影響 血漿增容劑（葡聚糖、PVP等）也會(huì)引起緡錢狀凝集導(dǎo)致假陽性結(jié)果。,2020/8/24,19,三、反定型-血清自身相關(guān)問題,4.不規(guī)則抗體或自身冷凝集素的存在 受檢者血漿中含有ABO血型抗體以外的IgM類不規(guī)則抗體與試劑A、B、O細(xì)胞上的相應(yīng)抗原起反應(yīng)。 5.

9、低丙種球蛋白血癥 低丙種球蛋白血癥病例(如白血病、淋巴瘤及使用免疫抑制劑的患者、先天丙種球蛋白缺乏的患者、免疫缺陷的患者) 可能會(huì)因免疫球蛋白水平全面下降使血清定型時(shí)不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)。,2020/8/24,20,三、反定型-血清自身相關(guān)問題,6.年齡因素 在未產(chǎn)生自己抗體的嬰兒、由母親被動(dòng)獲得抗體的嬰兒，或抗體水平下降的老人，試驗(yàn)時(shí)可出現(xiàn)不見凝集或僅見弱凝集反應(yīng)等異常結(jié)果。 7.骨髓移植術(shù)后 ABO不同型骨髓移植患者術(shù)后。 8.纖維蛋白原的影響 使用血漿或凝固不完全的血清會(huì)形成很小的纖維蛋白凝集包裹的紅細(xì)胞凝塊。,2020/8/24,21,小 結(jié)（一）,一、紅細(xì)胞抗原增多（額外的反應(yīng)）

10、的原因 紅細(xì)胞致敏：直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性。 紅細(xì)胞多凝集現(xiàn)象 紅細(xì)胞發(fā)生自凝現(xiàn)象 獲得性類B 其它：近期異型輸血、嵌合體血型 二、紅細(xì)胞抗原減弱的原因 異常基因型（ABO亞型等） Cis-AB型（順式AB型） 疾病因素導(dǎo)致抗原減弱（常見于白血型等血液病患者） 可溶性血型物質(zhì)增多（常見于胃或胰腺惡性腫瘤患者）,2020/8/24,22,小 結(jié)（二）,三、血型抗體增多（額外的反應(yīng)）的原因 異常的血漿蛋白（串錢狀假凝集）：多見于如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥、何杰金淋巴瘤、嚴(yán)重的肝病等患者 。 高分子聚合物的影響：血漿增容劑（葡聚糖、PVP等）也會(huì)引起緡錢狀凝集導(dǎo)致假陽性結(jié)果。 不規(guī)則抗體或自身冷凝

11、集素的存在 纖維蛋白原的影響,2020/8/24,23,小 結(jié)（三）,四、血型抗體減弱的原因 血漿置換治療后 低丙種球蛋白血癥 年齡因素：嬰兒、老年人抗體水平低。 骨髓移植術(shù)后,2020/8/24,24,正反定型不符一般處理程序,一、 詢問、查閱病史 患者的年齡 患者的病史 患者的近期輸血史 患者的近期用藥史 患者是否進(jìn)行了骨髓移植 患者以前的血型 患者是否進(jìn)行過血漿置換術(shù),2020/8/24,25,正反定型不符一般處理程序,二、 使用試管法重做試驗(yàn)并判斷可能的原因試管法定型的優(yōu)點(diǎn)1.可以反復(fù)離心看結(jié)果。2.可以隨意延長(zhǎng)抗原抗體反應(yīng)時(shí)間，可以改 變反應(yīng)溫度（4、37孵育），有利于弱抗原、抗體的

12、檢出或排除冷凝集素的干擾。3.可以觀察紅細(xì)胞混合外觀現(xiàn)象。4.可以觀察紅細(xì)胞溶血現(xiàn)象。,2020/8/24,26,ABO定型常見問題的解決方法,ABO亞型 * 正定：抗-A、抗-B、抗-AB、抗-A1、抗-H * 反定：A1c、A2c、Bc、Oc、自身對(duì)照 *正反定型在不同溫度下反應(yīng)并比較凝集強(qiáng)度的變化 * 吸收放散試驗(yàn) * 唾液血型物質(zhì)檢測(cè) * 有條件者可作家系調(diào)查或PCR檢測(cè)血型基因,2020/8/24,27,2020/8/24,28,ABO定型常見問題的解決方法,A、B抗原減弱* 延長(zhǎng)孵育時(shí)間、4孵育* 酶處理紅細(xì)胞* 吸收放散試驗(yàn)* 唾液血型物質(zhì)檢測(cè)* 既往血型調(diào)查,2020/8/24

13、,29,ABO定型常見問題的解決方法,抗體減弱* 延長(zhǎng)孵育時(shí)間、4孵育* 酶處理試劑紅細(xì)胞* 既往血型調(diào)查 * 免疫球蛋白水平測(cè)定,2020/8/24,30,ABO定型常見問題的解決方法,冷自身抗體* 將血清和紅細(xì)胞分別在37孵育后再混合* 用37溫鹽水洗滌紅細(xì)胞、45熱放散3分鐘* 巰基試劑(DTT)處理紅細(xì)胞* 自身吸收去除血清中的自身冷抗體,2020/8/24,31,ABO定型常見問題的解決方法,室溫反應(yīng)的同種抗體* 用譜細(xì)胞做抗體鑒定* 選擇沒有相應(yīng)抗原的A、B細(xì)胞做反定型,2020/8/24,32,ABO定型常見問題的解決方法,獲得性B紅細(xì)胞* 詢問病史* 酸化抗-B血清（pH6.0

14、)* 唾液型物質(zhì)檢測(cè) * 家系調(diào)查證明沒有遺傳基礎(chǔ),2020/8/24,33,ABO定型常見問題的解決方法,混合視野凝集* ABO亞型：A3、B3亞型等* ABO不同型輸血（非O型人近期輸入O型血)：詢問近期輸血史、毛細(xì)管離心分離自身紅細(xì)胞等* ABO不同型骨髓移植術(shù)后* 單合子的相嵌紅細(xì)胞、雙合子交移體紅細(xì)胞,2020/8/24,34,ABO定型常見問題的解決方法,致敏紅細(xì)胞造成的假陽性 洗滌后的壓積受檢紅細(xì)胞于56水浴放散10分鐘，直至直抗試驗(yàn)陽性結(jié)果明顯減弱或消失，再次洗滌放散后的細(xì)胞用于正定型試驗(yàn)。,2020/8/24,35,ABO定型常見問題的解決方法,*緡錢狀凝集：洗滌紅細(xì)胞、鹽水

15、替代試驗(yàn) * 前帶現(xiàn)象：稀釋血清后再做試驗(yàn),2020/8/24,36,疑難血型舉例,2020/8/24,37,2020/8/24,38,2020/8/24,39,2020/8/24,40,2020/8/24,41,2020/8/24,42,2020/8/24,43,2020/8/24,44,2020/8/24,45,2020/8/24,46,2020/8/24,47,2020/8/24,48,ABO血型結(jié)果解釋與應(yīng)用,指導(dǎo)選擇血液。 正常表達(dá)可分為：A、B、AB、O。原則上同型輸血，特殊情況采用配合型輸血（以洗滌細(xì)胞為佳)。 患者輸血血型的選擇,2020/8/24,49,ABO血型結(jié)果解釋與應(yīng)用,ABO血型系統(tǒng)特殊表達(dá)的血型 ABO血型亞型：亞型是指屬同一血型抗原，但抗原結(jié)構(gòu)和性能或抗原位點(diǎn)數(shù)有一定差異。 如A1、A2、A3/B3、Ax/Bx、Am/Bm、Ael /Bel,以及相應(yīng)的AB亞型如A3B、AxB、ABx、ABel等。 輸血時(shí)血型的選擇：除非患者血清中存在37下有反應(yīng)活性的抗-A1/-B1抗體，否則無必要同亞型輸血。一般采用同類抗原血型或O型洗滌細(xì)胞輸注則可。如A亞型輸A型血、B亞型輸B型血、AB亞型輸AB型血。,2020/8/24,50,ABO血型結(jié)果解釋與應(yīng)用,ABO血型系統(tǒng)其它特殊表達(dá)的血型 孟買型：以O(shè)h表示。此型特點(diǎn)是紅細(xì)胞上