1、自身免疫抗體檢測(cè)及臨床意義,電力醫(yī)院：馬林,抗核抗體（ANA） 檢測(cè)與臨床應(yīng)用,ANA的靶抗原分布：,細(xì)胞核,整個(gè)細(xì)胞，包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等。 ENA：抗可提取核抗原，包括RNP/Sm, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70和Jo-1等 六種靶抗原,抗核抗體的定義 傳統(tǒng)定義：針對(duì)細(xì)胞核成分的自身抗體的總稱。 廣義定義：針對(duì)細(xì)胞內(nèi)所有抗原成分的自身抗體的總稱。對(duì)ANA的理 解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗體的總稱, ANA可見(jiàn)于多種疾病，特別是結(jié)締組織疾病，常作為結(jié)締組織病的診斷、,病情判斷和療效觀察的指標(biāo), 高滴度ANA則高度提示自身免疫性疾病, 在

2、非結(jié)締組織病中也可出現(xiàn)陽(yáng)性；正常人中（特別是老年人）也可出現(xiàn)陽(yáng),性，但滴度低,目前，ANA檢測(cè)已成為臨床上的一個(gè)極重要的自身免疫病的篩查實(shí)驗(yàn)。,ANA檢測(cè)的臨床意義,ANA檢測(cè)的臨床意義 系統(tǒng)性紅斑狼瘡,活動(dòng)期 非活動(dòng)期 藥物誘導(dǎo)的紅斑狼瘡 混合性結(jié)締組織病（MCTD、Sharp綜合征） 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥 多發(fā)性肌炎及皮肌炎 干燥綜合征 慢性活動(dòng)性肝炎 潰瘍性結(jié)腸炎 其它風(fēng)濕病 正常人,95100 80100 100 100 2040 2050 8595 3050 7080 3040 26 5-10,美國(guó)風(fēng)濕學(xué)會(huì)(ACR)立場(chǎng)聲明, HEp-2 細(xì)胞包含大約100 至150

3、種自身抗原 其它初篩方法僅具有少量自身抗原,大約 35% SLE患者和IFT-ANA陽(yáng)性患 者在其它初篩實(shí)驗(yàn)中為陰性結(jié)果,建議：, IIFT-ANA仍然為ANA檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn), 醫(yī)院或商業(yè)診斷所應(yīng)用其它ANA檢測(cè)方法時(shí)，必須要求為臨床大夫提供足夠 的數(shù)據(jù)證明其它ANA檢測(cè)方法與IFT比較具有同樣或更高的敏感度和特異性 實(shí)驗(yàn)室在ANA報(bào)告當(dāng)中必須注明ANA檢測(cè)方法,EUROIMMUN,ANA篩查:,間接免疫熒光法(IFT), 抗原譜完整 (細(xì)胞核、細(xì)胞漿), 檢測(cè)ANA的金標(biāo)準(zhǔn)，具有很高的敏感性和特異性 基質(zhì)組合: HEp-2細(xì)胞+靈長(zhǎng)類肝,HEp-2細(xì)胞: 篩查不同的自身抗體,均質(zhì)型 核膜型,核

4、點(diǎn)型 核糖體P蛋白,著絲點(diǎn)型 AMA,核仁型 高爾基體,Scl-70 溶酶體,Sm/RNP 肌動(dòng)蛋白,SS-A/SS-B 波形蛋白,系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE),ANCA 相關(guān)性血管炎,慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD) 干燥綜合征 (SS),Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系統(tǒng)性硬化癥 (SSc) Scl -70 and CenpB,SS-A and SS-B 慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD) 多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile,夏普綜合征 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthrit

5、is (RA) EUROIMMUN,系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE), 紅斑狼瘡的特點(diǎn),臨床醫(yī)生: 容易誤診的一類致死性疾病,免疫學(xué)家: 所有免疫系統(tǒng)的要件均參與致病機(jī)理產(chǎn)生過(guò)程, 臨床發(fā)病特點(diǎn),發(fā)病率: 40/100,000(北歐);200/100,000(黑人);250,000 (美國(guó)),患者壽命:4年/50%(1950); 15/80%(當(dāng)前); 20歲診斷/35歲死亡幾率1:6,以上受累;96%),EUROIMMUN,SLE 各器官的表現(xiàn),關(guān)節(jié)炎 (至少2個(gè)關(guān)節(jié),血液系統(tǒng)受累 (貧血等; 60%),狼瘡腎炎 (51%),漿膜炎 (胸膜炎, 心包炎; 77%),神經(jīng)系統(tǒng)受累 (30%) 皮膚

6、(蝴蝶狀皮疹, 盤狀狼瘡; 74%),系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE) 代表性的抗體,抗 dsDNA 抗體 抗核小體抗體 抗 Sm 抗體 抗核糖體 P 蛋白抗體,30-90% 50-95% 5-10% 5-15% EUROIMMUN,EUROIMMUN,核均質(zhì)型 HEp-2細(xì)胞/猴肝,HEp-2細(xì)胞,猴肝,抗dsDNA 抗體 - 檢測(cè)方法: IIFT, Farr-法 (RIA), ELISA or Blot IIFT dsDNA,HEp-2細(xì)胞,綠蠅短膜蟲(chóng), 高度特異性抗體;, 70%患者陽(yáng)性，0.5%正常人或RA患者陽(yáng)性, 滴度與疾病活動(dòng)性相關(guān)，但不適用于所有患者, 抗體滴度上升但臨床癥狀不明顯的患

7、者，抗體檢測(cè)后5年內(nèi),80%患者進(jìn)入活動(dòng)期,抗dsDNA抗體與SLE,最新版“Autoantibodies” 描述,不同實(shí)驗(yàn)方法的結(jié)果并無(wú)可比性：,1、抗原來(lái)源不同；,2、抗原展現(xiàn)形式不同；,3、實(shí)驗(yàn)體系反應(yīng)條件不同。,核均質(zhì):,抗核小體抗體(ANuA),靶抗原:,dsDNA-組蛋白-復(fù)合物的構(gòu)象決定簇,方法:,IIFA,ELISA, Blot,臨床意義:,SLE, 陽(yáng)性率 50-95% (特異性100%),EUROIMMUN,抗核小體 ELISA: 敏感性、特異性、疾病活動(dòng)度, ANuA 與疾病的活動(dòng)性相關(guān)性強(qiáng) (SLE DAI score),分組 SLE 干燥綜合癥 皮肌炎/多肌炎 系統(tǒng)性

8、硬化癥 類風(fēng)濕/骨關(guān)節(jié)炎 強(qiáng)直性脊柱炎 健康對(duì)照組 特異性,n 233 41 40 33 60 20 31 225,抗核小體陽(yáng)性 144 (61.8%) 1 (2.4%) 1 (2.5%) 1 (3.0%) 1 (1.7%) 0 0 98.2%,Su et al., Clin Immunol 122: 115-120, 2007,LNTP (%),LN (%),CON (%),ANuA Anti-dsDNA,79 43,18 41,9 33,LNTP = lupus nephritis requiring renal transplantation（狼瘡腎炎需要 腎移植） LN = biops

9、y proven lupus nephritis（腎活檢確診為狼瘡腎炎） CON = SLE patients without nephritis（無(wú)腎炎SLE患者）,伴有狼瘡腎炎的嚴(yán)重SLE的生物標(biāo)記物,ANuA 與狼瘡性腎炎 Stinton et al., Lupus 15: 394-400, 2007 狼瘡腎炎是SLE的一種潛在的嚴(yán)重并發(fā)癥 (高達(dá) 50%) 1.2% 需要進(jìn)行腎移植的患者有狼瘡腎炎,EUROIMMUN,抗U1-nRNP與Sm抗體,HEp-2細(xì)胞,猴肝,HEp-2細(xì)胞,抗U1-nRNP與Sm抗體 抗U1-nRNP/Sm抗體 抗Sm抗體 SLE 抗U1-nRNP抗體 SLE

10、 Sharp綜合征,(MCTD) EUROIMMUN,抗U1-nRNP與Sm抗體,SLE: 15-40% MCTD: 95-100% SLE: 5-30% EUROIMMUN,抗U1-RNP抗體 抗Sm抗體 Function: Pre-mRNA splicing,EUROLINE,ANA 譜, 最多18種抗原， 增加了RNP亞單位, 自動(dòng)化 操作, 全自動(dòng)化 結(jié)果判讀,EUROIMMUN,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的解釋（ANA譜）： 抗U1-nRNP/Sm和Sm抗體,抗 nRNP/Sm 抗體,抗 Sm 抗體,結(jié)果,解釋,- ? +,- + + -,- + - +,U1-nRNP: Sm: - U1-nRNP:

11、 Sm: + U1-nRNP: Sm: - 結(jié)果不可靠,陰性 SLE SLE 或 MCTD 無(wú),EUROIMMUN,抗核糖體P蛋白抗體,HEp-2細(xì)胞,猴肝,40 S 亞單位,60 S 亞單位,P0,P2 P2,according to: Mahler et al., J Mol Med, 2003,抗原:,核糖體60S亞單位的3個(gè)蛋白：P0, P1, P2. 在羧基末端有相同的免疫反應(yīng)表位。 核糖體P抗原的五聚體復(fù)合物。 P1 P1,核糖體 P蛋白,核糖體 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特異性 (1),群組 SLE 其他結(jié)締組織病* 健康獻(xiàn)血員,n 360 79 206,抗核糖體 P 蛋白

12、陽(yáng)性數(shù) 34 (9.4%) 0% 0%,*系統(tǒng)性硬化癥, 干燥綜合癥, 皮肌炎/多肌炎 對(duì) SLE 100% 特異 EUROIMMUN,核糖體 P 蛋白 ELISA: 敏感性和特異性(2),群組 SLE MCTD SS SSc RA HD 特異性,n 185 21 55 66 89 100 310,抗核糖體P蛋白陽(yáng)性數(shù) 10 (5.4%) 0 0 0 0 0 100% EUROIMMUN,EUROIMMUN,HEp-2細(xì)胞,增殖型細(xì)胞核抗原 (PCNA) Hep-2細(xì)胞,猴肝,增殖型細(xì)胞核抗原 (PCNA),靶抗原:,表達(dá)為細(xì)胞周期依賴性(S-期),三聚體 (36 kDa)，是 DNA 多聚酶

13、的輔因子并參與 DNA 修復(fù)調(diào)控,檢測(cè):,IIFT, Blot,臨床意義:,SLE高特異性 (陽(yáng)性率 3-7%), 與腎臟和CNS及血小板減少相關(guān),系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE),ANCA 相關(guān)性血管炎,慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD) 干燥綜合癥 (SS),Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系統(tǒng)性硬化癥 (SSc) Scl -70 and CenpB,SS-A and SS-B 慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD) 多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) Myositis Profile,夏普綜合癥 (MCTD) RNP Rheumatoide

14、 Arthritis (RA) EUROIMMUN,干燥綜合征（Sjgrens Syndrome） 外分泌腺受累的自身免疫疾病 癥狀: - 口腔干燥 - 唾液及眼淚減少,- 腮腺腫脹,口腔干燥,- 胰腺外分泌腺分泌不足 腮腺腫脹 EUROIMMUN,干燥綜合征,SS-A (60 kDa) SS-B (47 kDa),40-95% 40-95%,代表性抗體,EUROIMMUN,抗SS-A/SS-B抗體,HEp-2細(xì)胞,猴肝,SS-A 抗原,Boire et al., 1995: - Ro-52抗體不與SS-A 抗原結(jié)合,- 純化的 SS-A 抗原不包含 Ro-52,RNA + SS-A (60

15、kDa) + Ro-52 hY-RNA,RNA + SS-A (60 kDa) hY-RNA,SS-A (Ro-60), Ro-52 and SS-B,干燥綜合癥:,40-95%,SLE:,20-60%,新生兒狼瘡:,抗SS-B抗體,干燥綜合癥: SLE: 新生兒狼瘡:,40-95% 10-20% 78%,抗Ro-52 (52 kDa)抗體 非特異 EUROIMMUN,功能: 調(diào)控RNA翻譯 抗SS-A (60 kDa)抗體,功能:RNA聚合酶III輔助蛋白,96% X,EUROIMMUN,抗Ro-52抗體:,不同組別中均可出現(xiàn),抗Ro-52抗體: 風(fēng)濕性疾病中的陽(yáng)性率,疾病 干燥綜合癥 系統(tǒng)

16、性硬化癥 肌炎 SLE MCTD RA,n 88 81 26 210 21 165,抗Ro-52抗體陽(yáng)性 81 % 28 % 31 % 38 % 19 % 5%, 抗Ro-52抗體 在干燥綜合癥中陽(yáng)性率較高，但沒(méi)有疾病特異性 Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009 EUROIMMUN,Anti-Ro52: 肝臟疾病中的陽(yáng)性率,疾病 PBC AIH HBV HCV 獻(xiàn)血員,n 100 60 50 50 50,抗Ro-52抗體 陽(yáng)性 27 % 35 % 10 % 22

17、 % 0, 抗Ro-52抗體沒(méi)有疾病特異性 Meyer, Schlumberger et al., 4th Asian Congress on Autoimmunity, Singapore, Sept. 2009,系統(tǒng)性紅斑狼瘡 (SLE),ANCA 相關(guān)性血管炎,慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD) 干燥綜合癥 (SS),Systemischer Lupus Erythematodes (SLE) dsDNA 系統(tǒng)性硬化癥 (SSc) Scl -70 and CenpB,SS-A and SS-B 慢性炎癥性結(jié)締組織病 (CICTD) 多肌炎/皮肌炎 (PM/DM) Myositis Pr

18、ofile,夏普綜合癥 (MCTD) RNP Rheumatoide Arthritis (RA) EUROIMMUN,系統(tǒng)性硬化癥 (SSc) 血管與結(jié)締組織受累的自身免疫疾病 癥狀: - 指端硬化 (thin, sclerotic fingers) - 爪型手 - 面具臉 (嘴周邊出現(xiàn)皺紋, 嘴唇變薄) - 毛細(xì)血管擴(kuò)張 (表面血管永久性擴(kuò)張) - 表皮鈣質(zhì)沉著 (血管壁與皮膚鈣化),指端硬化，爪型手,毛細(xì)血管擴(kuò)張,面具臉,EUROIMMUN 質(zhì)沉著,皮膚鈣,EUROIMMUN,系統(tǒng)性硬化癥,實(shí)驗(yàn)室結(jié)果和臨床數(shù)據(jù)的聯(lián)合分析，有助于降低疾病診斷的模糊性， 同時(shí)為未來(lái)研究硬化癥提供基礎(chǔ)。,系統(tǒng)

19、性硬化癥 (SSc) 代表性抗體,抗著絲點(diǎn)抗體 抗Scl-70抗體 抗原纖維蛋白抗體 抗RNA多聚酶抗體 抗PM-Scl抗體,12-43% 18-30% 6-8% 2-23% 1-16% EUROIMMUN,EUROIMMUN,抗著絲點(diǎn)抗體 HEp-2細(xì)胞/猴肝,HEp-2細(xì)胞,猴肝,EUROIMMUN,抗著絲點(diǎn)抗體,靶抗原:,著絲點(diǎn)-DNA 聯(lián)合蛋白: 著絲點(diǎn)蛋白 (A, B, C, D),檢測(cè)方法:,IIFT, ELISA, Blot,臨床意義:,局限性 硬皮病 (CREST綜合癥):,經(jīng)常出現(xiàn)在: 硬皮病-PBC-重疊綜合癥,EUROIMMUN,抗Scl-70抗體 HEp-2細(xì)胞/猴肝,

20、HEp-2細(xì)胞,猴肝,細(xì)胞核仁:,抗Scl-70抗體,靶抗原:,DNA-拓?fù)洚悩?gòu)酶 I (100 kDa) DNA 雙螺旋復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,檢測(cè)方法:,IIFA, ELISA, Blot,臨床意義:,彌散性硬皮病的診斷標(biāo)志 (50-75%).,預(yù)后: 較著絲點(diǎn)陽(yáng)性的患者病情更嚴(yán)重。,抗著絲點(diǎn)B蛋白抗體與 抗Scl-70抗體,系統(tǒng)性硬化癥 n = 295,抗 Scl-70 抗體 陽(yáng)性 陰性,抗著絲點(diǎn) B 蛋白抗體,陽(yáng)性 陰性,1 66,106 122, 59% 系統(tǒng)性硬化癥患者分別出現(xiàn)抗著絲點(diǎn)抗體或抗Scl-70抗體陽(yáng)性 EUROIMMUN,EUROIMMUN,抗RNA聚合酶I抗體 HEp-2細(xì)胞/猴

21、肝,HEp-2細(xì)胞,猴肝,抗原纖維蛋白抗體 HEp-2細(xì)胞/猴肝,HEp-2細(xì)胞,猴肝 EUROIMMUN,EUROIMMUN,抗PM-Scl抗體 HEp-2細(xì)胞/猴肝,HEp-2細(xì)胞,猴肝,抗PM-Scl抗體,靶抗原:,PM-Scl: 11 到 16 個(gè)多肽復(fù)合物,在rRNA 和一些 U-snRNAs剪接中起作用,(PM-Scl-100, PM-Scl-75),檢測(cè)方法:,IIFT, ELISA, Blot,臨床意義:,重疊綜合癥的診斷標(biāo)志，表現(xiàn)為肌炎和硬皮病癥狀 (陽(yáng)性率 50-70%).,EUROLINE,系統(tǒng)性硬化癥譜, 一個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)l包括13 種高特異性純化抗原, 系統(tǒng)性硬化癥(SSc

22、)血清學(xué)診斷, EUROBlotMaster自動(dòng)化操作, EUROLineScan軟件全自動(dòng)結(jié)果判讀,患者血清: 129 份SSc血清和202 份對(duì)照血清 50 PM/DM, 50 SLE, 42 RA, 60,HD ,所有抗原的血清命中率為: 85.3%.,系統(tǒng)性硬化癥相關(guān)抗體,Meyer et al., 7th Congress on Autoimmunity in Ljubljana, May 2010,Arthritis Research ,與組蛋白乙?；D(zhuǎn)移酶和核小體重塑活性有關(guān)的主要抗原 (218kDa),臨床意義:,肌炎 5-15% (主要是皮肌炎),EUROIMMUN,抗Ku抗

23、體 HEp-2細(xì)胞/猴肝,HEp-2細(xì)胞,猴肝,細(xì)胞核顆粒:,抗Ku抗體 (p70/p80),靶抗原:,DNA結(jié)合的非組蛋白和DNA依賴的蛋白酶異源二聚體,分析方法:,IIFA, Blot,臨床意義:,PM/Scl-重疊綜合癥 30-55%,SLE 5-10%,EUROIMMUN,其他與肌炎相關(guān)的抗體,Anti-SRP,Anti-PL-12,HEp-2細(xì)胞,HEp-2細(xì)胞,EUROLINE 肌炎相關(guān)抗原, 一個(gè)膜條上包括7 或 11 種高度純化抗原(新: PM-,Scl, SRP, EJ, OJ), DM 和 PM及原發(fā)性肌炎的血清學(xué)診斷, EUROBlotMaster 自動(dòng)化操作, EURO

24、LineScan全自動(dòng)化判讀結(jié)果,153 份肌炎患者血清 50 DM, 89 PM, 4 juvenile DM, 10 IBM 77 份對(duì)照血清 26 SjS, 26 SLE, 25 SSc ,Anti- Mi-2 Ku PM-Scl100 Jo-1 PL-7 PL-12 SRP,Prevalence 3% 3% 7% 12 % 2% 0% 5%,Specificity 100 % 97 % 100 % 99 % 100 % 100 % 97 %,EUROLINE 肌炎相關(guān)抗原 患者血清:,所有抗原的血清學(xué)命中率: 26%. Rnnelid et al., Autoimmun Rev, 2009 EUROIMMUN,患者血清: 208 份肌炎患者血清,214 份對(duì)照血清 50 HD, 65 SLE, 34 SSc, 21 SjS, 13 非自身免疫性肌病, 23 CTD-相關(guān)性肌炎, 8 關(guān)節(jié)病,Anti-,Prevalence Specificity,Mi-2 Ku PM-Scl100 Jo-1 PL-7 or PL-12,4% 5% 4% 21 % 4%,98 % 95 % 100 % 100 % 100 %,EURO