1、名校名 推薦第 3 講植物的組織培養(yǎng)技術(shù)考點(diǎn)一菊花的組織培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識(shí)1、植物組織培養(yǎng)的理論基礎(chǔ)：植物細(xì)胞的全能性，基本 過(guò)程： 脫分化 、 再分化 。脫分化愈傷組織再分化移栽外植體 試管苗 完整植株( 去分化 )2、愈傷組織：細(xì)胞排列疏松 而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化 的呈 無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。二、影響植物組織培養(yǎng)的條件1、材料因素：植物的種類、 材料的年齡和 保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如：菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料 。一般容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物，也容易進(jìn)行組織培養(yǎng)，如：蘆薈 、豆瓣綠 、秋海棠 、月季 等。2、常用的培養(yǎng)基是MS 培養(yǎng)基。含 大量元素

2、、微量元素、有機(jī)物（如蔗糖等）3、植物激素的影響：主要是生長(zhǎng)素和 細(xì)胞分裂素。使用順序?qū)嶒?yàn)結(jié)果生長(zhǎng)素細(xì)胞分裂素比值發(fā)育方向使先生長(zhǎng)素，有利于分裂用利于根分化，用量比值高時(shí)后細(xì)胞分裂素但不分化抑制芽形成順比先細(xì)胞分裂素，細(xì)胞既分裂利于芽分化，序例比值低時(shí)后生長(zhǎng)素也分化抑制根形成不不促進(jìn)愈傷同同時(shí)使用分化頻率提高同比值適中組織生長(zhǎng)4、其它條件：菊花組織培養(yǎng)，將pH 在 5.8左右，溫度 18 22 ，并且每日用日光燈照射12h。三、實(shí)驗(yàn)操作1、制備 MS固體培養(yǎng)基：（一般使用 4 保存配制好的培養(yǎng)基母液 來(lái)制備）（ 1）配制各種母液：按配方比例配制成的濃縮液，使用時(shí)根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)加蒸餾水稀釋。

3、（ 2）配制培養(yǎng)基： （由于菊花莖段的組織培養(yǎng)比較容易，因此不必添加植物激素。）（ 3）滅菌方法： 高壓蒸汽滅菌。2、外植體的消毒：進(jìn)行表面消毒時(shí)，既要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮 植物的 耐受能力 。3、接種培養(yǎng)移栽和栽培：移栽試管苗之前，讓在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日 ，再清洗掉根部的培養(yǎng)基，將幼苗移 植到消過(guò)毒的蛭石 或 珍珠巖生活一段時(shí)間，再栽培到土壤中。四、教材思考題及答案1、在選取菊花莖段時(shí)，為什么要選取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝？答：因?yàn)樯L(zhǎng)旺盛 的嫩枝生理狀況好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。2、 MS培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與微生物培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些特點(diǎn)？答：（ 1）大量元素和微量元素提

4、供植物細(xì)胞所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源 ，同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后1名校名 推薦所產(chǎn)生的特殊營(yíng)養(yǎng)需求。（ 2）微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng) 為主， MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng) ?？键c(diǎn)二月季的花藥培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識(shí)1、花粉是單倍體的生殖細(xì)胞，其發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、 單核期和 雙核期。2、產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑：注意： 兩種途徑之間并沒(méi)有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。3、影響花藥培養(yǎng)的因素：材料的選擇 （選單核期的花粉）與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素。其它因素：親本植株的生長(zhǎng)條件、 材料的低溫預(yù)

5、處理以及 接種密度等。二、實(shí)驗(yàn)操作：1、材料的選?。和ㄟ^(guò)鏡檢來(lái)確定花粉是否處于單核期，此時(shí)需對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行染色。（ 1）醋酸洋紅法：能將花粉細(xì)胞核染成紅色，為最常用的方法。（ 2）焙花青 - 鉻礬法：能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色，主要針對(duì)不易著色的細(xì)胞核。2、材料的消毒：消毒用到的藥劑有70%的酒精和 0.1% 的氯化汞溶液。3、接種和培養(yǎng)：（ 1）在剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥（否則接種后容易從受傷部位長(zhǎng)生愈傷組織） 。（ 2）還要徹底去除花絲（因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成）。（ 3）每瓶接種花藥7 10 個(gè)，培養(yǎng)溫度25 左右，幼小植株形成前不需要光照。單元檢測(cè)1、月季因花色

6、艷麗、芬芳迷人而被稱為花中皇后，可用植物組織培養(yǎng)技術(shù)快速繁殖而用于生產(chǎn)。請(qǐng)回答下列問(wèn)題:（ 1）植物組織培養(yǎng)的理論依據(jù)是，其實(shí)驗(yàn)操作流程包括：制備MS固體培養(yǎng)基、接種、培養(yǎng)、移栽、栽培。（ 2）在配置培養(yǎng)基時(shí)，需要根據(jù)各種母液的，計(jì)算用量。將分裝好的培養(yǎng)基進(jìn)行_滅菌。2名校名 推薦（ 3）下圖為培養(yǎng)基中蔗糖濃度對(duì)月季葉愈傷組織誘導(dǎo)率的影響。蔗糖濃度為，最有利于愈傷組織的形成，原因是。外植體形成愈傷組織的過(guò)程稱為，將愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)， 為了使愈傷組織既分裂又分化，生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的使用順序是：。蔗糖濃度為90g/L 時(shí)，無(wú)愈傷組織形成的原因最可能是。2、回答與“植物的組織培養(yǎng)”有關(guān)的問(wèn)題：

7、（ 1）植物組織培養(yǎng)常用的MS培養(yǎng)基是（液體半固體固體）培養(yǎng)基，菊花莖段的組織培養(yǎng)（必須不必）添加植物激素。（ 2）無(wú)菌技術(shù)是影響植物組織培養(yǎng)能否成功的重要因素。用體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精和質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0l%的氯化汞對(duì)外植體，接種時(shí)每次使用器械后都需要滅菌；接種3-4d 后，觀察外植體的生長(zhǎng)情況，若發(fā)現(xiàn)外檀體被污染，分析其原因可能是、。（ 3）愈傷組織在誘導(dǎo)生根的培養(yǎng)基中未形成根，但分化出了芽，其原因可能是。組織培養(yǎng)過(guò)程中，適宜濃度的生長(zhǎng)素單獨(dú)使用可誘導(dǎo)試管苗，而與配比適宜時(shí)可促進(jìn)芽的增殖。若要抑制試管苗的生長(zhǎng)，促使愈傷組織產(chǎn)生和生長(zhǎng)，需要使用的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是（脫落酸、 2， 4 D）。3、下圖表

8、示被子植物花粉的發(fā)育過(guò)程，據(jù)圖完成下列各題。（ 1）利用月季的花藥離體培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體時(shí), 選材非常重要。一般來(lái)說(shuō)，在期花藥培養(yǎng)的成功率最高，為了選擇該時(shí)期的花藥，通常選擇的花蕾。確定花粉發(fā)育時(shí)期最常用的方法有法，但是對(duì)于花粉細(xì)胞核不易著色的植物，需采用法，該法能將花粉細(xì)胞核染成色（ 2）的植物的基因型為AaBb（兩對(duì)基因遵循自由組合定律遺傳），則的基因型為，的基因型可能為。（ 3）圖示中、所指的結(jié)構(gòu)依次是、，兩者的基因型。3名校名 推薦【答案】（ 1）單核完全未開(kāi)放醋酸洋紅焙華青 - 鉻礬法藍(lán)黑色（ 2） AaBb Ab 或 aB 或 AB或 ab（ 3）花粉管細(xì)胞核生殖細(xì)胞核相同1、（ 1）植物細(xì)胞的全能性外植體消毒（ 2）濃縮倍數(shù)高壓蒸汽（ 3） 30g/L該濃度的蔗糖既較好的調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的滲透壓，又為細(xì)胞提供充足的碳源（和