1、.,動物細(xì)胞工程,.,動物細(xì)胞培養(yǎng),動物細(xì)胞融合,單克隆抗體技術(shù),核移植,動物細(xì)胞工程常用技術(shù),胚胎移植技術(shù),.,動物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。,傳代培養(yǎng),動物胚胎或幼齡動物的組織、器官,胰蛋白酶,（分解彈性纖維）,10代細(xì)胞,無限傳代,遺傳物質(zhì)未改變,遺傳物質(zhì)改變,一、動物細(xì)胞培養(yǎng),討論:細(xì)胞株與細(xì)胞系的特點 有何不同?,.,1、動物細(xì)胞的培養(yǎng)過程,幼齡動物,取動物器官 和組織,剪碎組織,胰蛋白酶處理,細(xì)胞培養(yǎng),單個細(xì)胞,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是其他動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ),(1)請據(jù)圖簡述動物細(xì)胞的培養(yǎng)過程,(2)思考:動物細(xì)胞培養(yǎng)有哪些方

2、面 的應(yīng)用?,.,2、有關(guān)概念,原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng)：將原代細(xì)胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細(xì)胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。,.,2、有關(guān)概念,細(xì)胞株：原代細(xì)胞一般傳至10代左右細(xì)胞生長停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡，少數(shù)細(xì)胞存活到4050代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞株。 細(xì)胞系：細(xì)胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細(xì)胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細(xì)胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細(xì)胞為細(xì)胞系。 細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別： 細(xì)胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細(xì)胞的特點，失去接觸抑制，

3、容易傳代培養(yǎng)。,.,3、動物細(xì)胞培養(yǎng) 的條件,(1)無菌無毒的環(huán)境 (2)營養(yǎng) (3)溫度和pH (4)氣體環(huán)境,比較：植物的組織培養(yǎng)的條件,.,4. 動物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用,()大規(guī)模生產(chǎn)有重要價值的蛋白質(zhì)生物制品。,()解決為大面積燒傷病人移植皮膚問題。 （利用貼壁生長和接觸抑制原理）,()檢測有關(guān)物質(zhì)毒性。,()培養(yǎng)正?；虿∽兗?xì)胞，用于科研。,如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體,.,植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)的比較,.,思考：,2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？,1、動物細(xì)胞培養(yǎng)液的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？,3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單

4、個細(xì)胞？,4、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？,主要成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動物血清等,因為這些組織或器官上的細(xì)胞生命力旺盛，分裂能力強(qiáng),成塊組織不利培養(yǎng)，分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng),不能，動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多，不能發(fā)育成新的動物個體,.,多莉羊的培育過程,.,.,.,動物細(xì)胞融合與單克隆抗體,.,一、動物細(xì)胞融合,2、過程：,1、概念： “2個或多個動物細(xì)胞”“1”、“雜交單核細(xì)胞”,.,用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合過程,思考討論： 為什么細(xì)胞融合過程 中使用的病毒需要 滅活？,.,二、單克

5、隆抗體,1、什么是抗體？其本質(zhì)是什么？,2、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么？ 抗體是從何來的？,B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體。,3、B淋巴細(xì)胞有什么特點？,抗體是機(jī)體受抗原刺激后產(chǎn)生的、 并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的 具有免疫功能的球蛋白。,.,B淋巴細(xì)胞與抗體,B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。 動物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬種以上的抗體，每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。 每一個淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。,.,單克隆抗體,由單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)過無性繁殖（克?。?，形成基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體。 特點： 特異性強(qiáng)、靈敏度高,.,如何大量生

6、產(chǎn)單克隆抗體？,利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細(xì)胞無限增殖的特性 利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞 利用動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞,.,單克隆抗體制備過程,細(xì)胞融合、篩選,足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群,單克隆抗體,.,思考：,1、本過程利用了哪些原理？,免疫原理，細(xì)胞融合原理和動物細(xì)胞培養(yǎng)原理,2、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？,這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體,.,（1）為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合?,（小鼠骨髓瘤

7、細(xì)胞可以在體外培養(yǎng)條件下大量增殖，B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，細(xì)胞的同源性越近，融合形成的雜種細(xì)胞越易成活。）,（2）骨髓瘤細(xì)胞是癌細(xì)胞嗎?,（有無限增殖能力（失去凋亡機(jī)制，失去接觸抑制等）的細(xì)胞是腫瘤細(xì)胞，而具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細(xì)胞，稱為癌細(xì)胞，所以說，瘤細(xì)胞不能等于癌細(xì)胞。）,.,（3）整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?,（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），第二次需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個雜交瘤細(xì)胞的情況下開始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。由于該細(xì)胞群是單個雜交瘤細(xì)胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細(xì)胞克隆的含義，只不

8、過克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。）,.,單克隆抗體的應(yīng)用,與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強(qiáng)，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。,應(yīng)用主要有：,1、臨床診斷,2、作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”治療腫瘤,資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，借以鑒別和定位體內(nèi)“病灶”也引起人們的注意，目前，主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。,生物導(dǎo)彈：單克隆抗體作為載體分子，同抗癌藥物相結(jié)合，將他們運載到腫瘤部位，殺死癌細(xì)胞，這種抗體藥物結(jié)合

9、物稱之為生物導(dǎo)彈。它能定向殺滅癌細(xì)胞，避免或減少對正常細(xì)胞的傷害，大大減輕了抗癌藥物的副作用。,.,.,.,.,.,1.動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)是：（） A動物細(xì)胞融合 B胚胎移植 C動物細(xì)胞培養(yǎng) D核移植,教學(xué)目標(biāo)鞏固,.,在動物細(xì)胞融合和植物體細(xì)胞雜交的 比較中，正確的是（） A結(jié)果是相同的 B雜種細(xì)胞的形成過程基本相同 C操作過程中酶的作用相同 D誘導(dǎo)融合的手段相同,教學(xué)目標(biāo)鞏固,.,. 單克隆抗體制備過程中，骨髓瘤細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞 誘導(dǎo)融合后，要用特定培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞， 在這種培養(yǎng)基上不能存活增殖的細(xì)胞是（ ） 淋巴細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞 B淋巴細(xì)胞自身融合細(xì)胞 小鼠骨髓瘤細(xì)胞自身融合細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞 A B C D,C,教學(xué)目標(biāo)鞏固,.,.,小結(jié),一種誘導(dǎo)