1、鼠疫病原學檢驗的實驗室質量控制,寧夏疾病預防控制中心 人畜共患病實驗室 2014年4月1日,鼠疫病原學檢驗的實驗室質量控制,質量控制的定義 鼠疫病原學檢驗的質量控制方法 鼠疫病原學檢驗方法 動物間鼠疫疫情的實驗室復判,實驗室質量控制的定義,實驗室質量控制的定義,質量控制(QualityContro,l Q.C)是監(jiān)視全過程,排除誤差,防止變化,維持標準化現狀的一個管理過程。 鑒于鼠疫細菌學檢驗的重要性,有必要對其進行規(guī)范化管理。 鼠疫細菌學檢驗質控(Quality Control of testYersinia Pestis)是鼠疫微生物學實驗室為了保證檢驗結果實事求是地反映客觀存在而建立的操

2、作程序體系。,鼠疫病原學檢驗的質量控制方法,室內質控(Internal Quality Control IQC) 是指一個實驗室內部對所有影響質量的各個環(huán)節(jié)進行系統(tǒng)控制，是由實驗室內部制定并實施的，是質量保證的核心和基礎。目的是控制本實驗室常規(guī)工作的精密度，提高常規(guī)工作前后的一致性。 室間質控(External Quality Assessment簡稱EQA)簡稱室間質評。室間質控由上級業(yè)務單位采用一系列的辦法連續(xù)地、客觀地評價各實驗室的試驗結果，并發(fā)現室內質控不易發(fā)現的不準確性，了解各實驗室之間結果的差異，并幫助校正，使具有可比性，這種評價是一種回顧性評價。 室內質控主要監(jiān)測試驗結果的精密度

3、，而室間質控主要控制實驗結果的準確度，不互相替代，參與室間質控的試驗室應先做好室內質控。,鼠疫病原學檢驗的質量控制方法,鼠疫病原學檢驗的質量控制方法,人員與組織管理,儀器設備的質控,疑似鼠疫材料的采取、保存和運輸,培養(yǎng)基、染色液、試劑盒等的質量控制,鼠疫細菌檢驗程序及結果判定,報告卡的書寫、疫情上報及交換,室內質控,室內質控,室內質控,性能試驗,正確貯存,無菌試驗,診斷試劑盒(噬菌體等),培養(yǎng)基量,pH值,試劑的質量控制,室內質控,生物安全柜,顯微鏡,高壓鍋,離心機,培養(yǎng)箱,冰箱,儀器設備,鼠疫病原學檢驗的質量控制方法,室間質控的一般檢查項目,實驗室的布局 SOP制訂及執(zhí)行情況 實驗室安全防護

4、和污染物處理 室內質控執(zhí)行情況及各種紀錄 發(fā)放模擬標本(菌種)，規(guī)定時間內反饋至上級業(yè)務單位 以pH值、軟硬度、鼠疫菌生長數量(活菌數)等為綜合指標對培養(yǎng)基進行質控和用已知菌對噬菌體進行質控 盲點試驗，模擬標本混入監(jiān)測標本常規(guī)測定 對結果進行評價，分析錯誤原因,鼠疫病原學檢驗方法,鼠疫病原學檢驗方法,染色鏡檢 培養(yǎng)特性 噬菌體裂解 動物實驗 基因檢測,鼠疫病原學檢驗方法,鼠疫病原體 發(fā)現：1894年，在香港，日本學者北里柴三郎和法國學者亞力山大耶爾森二氏。 分類位置：腸桿菌科耶爾森菌屬。 生物學特性 分子生物學特性：6MD、45MD、65MD三種質粒；目前已知IS100、IS285、IS154

5、1、IS1661四種插入序列，分布于鼠疫菌質粒的染色體基因組中。 毒力決定因子:F1抗原，VWa抗原， Pstl， Pgm 分型:古典、中世紀、東方、田鼠變種四個生物變種； 5個群（A、B、C、D、E群），21個生態(tài)型。,染色鏡檢,革蘭氏染色 美蘭染色,典型的鼠疫菌是短而粗、兩端鈍圓、兩極濃染的橢圓形小桿菌，革蘭氏染色陰性。,細菌培養(yǎng),病原學,在普通培養(yǎng)基上2830經24h，肉眼可見形成薄薄一層淡灰色小菌落,圓形，有光澤，中心稍突起。透過光線呈灰白色或淡青色，菌落較干燥，鏡下：中央隆起中心發(fā)暗，有粗糙顆粒（黃褐色）周圍有薄而透明的花邊，呈鋸齒狀。,培養(yǎng)特性,噬菌體裂解實驗,2830 24h噬菌

6、帶明顯,觀察1-9天，可以從感染動物體內檢出鼠疫菌為陽性。,動物實驗,鼠疫菌的基因檢測,病 原 學 的 檢 測,DNA提取 水煮法提取可疑鼠疫菌DNA 對于臟器標本，在強毒實驗室以無菌手續(xù)取動物的各種臟器(心、肝、脾、肺)約1g，加入到等量生理鹽水中，研碎，100水浴中煮沸10min，離心，取上清直接用作PCR模板 對于培養(yǎng)可疑鼠疫菌，在平板上刮取可疑鼠疫菌于裝有500ul蒸餾水（生理鹽水）的1.5ml離心管中，于沸水浴中煮10min，離心上清液中含有可疑鼠疫菌DNA作為PCR模板。 細菌基因組DNA提取試劑盒提取鼠疫菌基因組DNA 操作方法可根據試劑盒說明書進行操作。,鼠疫菌的基因檢測,鼠疫菌的基因檢測,鼠疫菌的基因檢測,瓊脂糖凝膠,鼠疫菌的基因檢測,拍照,鼠疫菌的基因檢測,臟器懸液基因檢測：FI特異性片249bp，Pla特異性片456bp,菌懸液基因檢測：FI特異性片249bp，Pla特異性片456bp,PCR操作,鼠疫菌株的復蘇