1、水果和蔬菜中101種農(nóng)藥多殘留測定方法氣相色譜-質(zhì)譜法,前 言,由于色譜儀僅靠物質(zhì)的保留時間進(jìn)行定性分析，并不能得到分子結(jié)構(gòu)的信息；當(dāng)樣品復(fù)雜時，許多組份之間的保留時間只差數(shù)秒，甚至重合，就很難判定目標(biāo)化合物了。 即使分析者用兩根色譜柱進(jìn)一步確認(rèn)分析對象，“其分析結(jié)果對于確認(rèn)目標(biāo)化合物的確認(rèn)能力也是有限”。,GC/MS聯(lián)用技術(shù)可以在色譜峰不完全分離的情況下，用質(zhì)量色譜法和選擇離子檢測，對其中的化合物分別定量； GC/MS聯(lián)用技術(shù)定量分析的特點是先定性，后定量，因而避免假陽性檢出。 目前，國際上要求檢測的多種農(nóng)藥，其中很大部分可用氣質(zhì)聯(lián)機(jī)檢測。,我中心在查閱國外大量相關(guān)文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，引進(jìn)國外GC

2、-MS農(nóng)藥多殘留快速檢測技術(shù)，根據(jù)我國國情做了相應(yīng)改進(jìn)，建立了一套適合我國國情的蔬菜和水果中GC-MS農(nóng)藥多殘留快速檢測技術(shù)。 該技術(shù)建立了一種使用GC-MS，通過一次提取、兩次進(jìn)樣完成蔬菜和水果中101種農(nóng)藥的定性和定量的快速檢測方法。,1 適用范圍,本方法適用于常見蔬菜和水果中（蘋果，西紅柿，白菜，油菜，胡蘿卜，卷心菜，茄子，菠菜，尖椒和韭菜）101種農(nóng)藥殘留量的測定。 本方法的最低檢出限為0.0010mg/kg-0.3488mg/kg（參見附錄A）。,2 原理,試樣用丙酮和二氯甲烷（4：3）的混合溶液勻漿提取，無水硫酸鈉干燥后，經(jīng)凝膠色譜和固相萃取柱凈化，用丙酮+乙酸乙酯（1：1）洗脫農(nóng)

3、藥，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測。,3 試劑與材料,3.1 環(huán)己烷，色譜純； 3.2 丙酮； 3.3 二氯甲烷； 3.4 石油醚； 3.5 乙酸乙酯，色譜純； 3.6 無水NaSO4 ：450烘4h ； 3.7 NaCl：140烘4h ； 3.8 內(nèi)標(biāo)化合物：Chrysene； 3.9 固相萃取柱：Enxi-Carb 活性炭柱， 6mL, 0.5g或相當(dāng)柱； 3.11 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品共101種，純度96% 。,除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)的分析純試劑和GB/T 6682中規(guī)定的至少三級的水。,3.12 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液配制,單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取一定量農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用溶劑(丙酮、正己烷和甲醇）稀

4、釋，逐一配制成1000 mg/L或2500mg/L的單一農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲備液，貯存在-18以下冰箱中。 農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：逐一吸取一定體積的單個農(nóng)藥儲備液分別注入同一容量瓶中，用溶劑(正己烷）稀釋至刻度配置成同一濃度（10 mg/L)的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)儲備液。使用前用溶劑(環(huán)己烷)稀釋成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液（1 mg/L) 。,4 儀器,4.1 氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電子轟擊源（EI）； HP 6890N/5973 GC-MS，配有四極桿質(zhì)量分析器 和自動進(jìn)樣器，載氣流量或壓力控制，工作站及數(shù)據(jù)處理軟件。 4.2 凝膠色譜儀：色譜柱，17250mm；填料，SX-3， 15g；流動相，環(huán)己烷/乙酸乙酯（

5、1:1，V/V）；定量環(huán)，2mL。 4.3 天 平：Sartorius分析天平（精確度0.0001g）； 4.3 勻漿機(jī)：IKA-WERKE； 4.4 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。,5 試樣的制備與保存,5.1 試樣的制備 取不少于1 000g蔬菜水果樣品，取可食部分，用干凈紗布輕輕擦去樣品表面的附著物，采用對角線分割法取對角部分，將其切碎，充分混勻后放入食品加工器粉碎，制成待測試樣，密封，標(biāo)明標(biāo)記。 5.2 試樣的保存 將試樣冷凍保存。,6 測 定 步 驟,6.1 提 取 6.2 凈 化 6.3 濃 縮 6.4 測 定 6.5 平 行 試 驗 6.6 空 白 試 驗,7 結(jié)果計算,（1）由工作站按內(nèi)標(biāo)法自動

6、計算 ； （2）試樣中被測農(nóng)藥殘留量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)計，數(shù)值以毫克每千克（mg/kg）表示，按以下公式計算：,V1 A V3 = S V2 AS m,S標(biāo)準(zhǔn)溶液中農(nóng)藥的含量，mg/L； A 試樣中被測農(nóng)藥的峰面積； AS農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測農(nóng)藥的峰面積； V1提取溶劑總體積； V2吸取出用于檢測的提取溶液的體積； V3試樣定容體積； m試樣的質(zhì)量。,8 精密度,在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不應(yīng)超過算術(shù)平均值的15 %。,9 準(zhǔn)確度,在添加濃度在0.05mg/kg-0.5mg/kg范圍內(nèi)，大多數(shù)化合物的平均回收率70%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差20%，完全滿足多殘留快速檢測的要求。,大白菜中10種

7、農(nóng)藥的添加回收率,A組,B組,技術(shù)路線,稱樣,6g氯化鈉+140mL丙酮:二氯甲烷,勻漿提取,取70mL上清夜,無水硫酸鈉干燥,濃 縮,活性炭凈化,GC-MS,濃 縮,GPC凈化,濃 縮,謝 謝！,6.1 提 取,稱取20克試樣+氯化鈉6克+4：3的丙酮和二氯甲烷140毫升,勻漿提取一分鐘,靜置后，將上清液傾倒在裝有20克無水硫酸納的錐型瓶中，干燥30分鐘（每隔5分鐘搖晃一次）,準(zhǔn)確量取提取液70，過裝有無水硫酸鈉的玻璃漏斗,用二氯甲烷淋洗無水硫酸鈉近無色，合并淋洗液于圓底燒瓶,將提取液濃縮近干（水浴溫度38）,6.2 凈 化,由于各種蔬菜的性質(zhì)不同，干擾因素有很大的差別，因此不同的蔬菜要采取

8、不同的凈化方法。 （1）對于色素含量較低的蔬菜（蘋果、西紅柿、大白菜等），經(jīng)活性炭固相萃取柱凈化。 （2）對于色素含量較高的蔬菜（菠菜、韭菜等），先過凝膠色譜，再用活性炭固相萃取柱凈化;,6.2.1 凝膠過濾,將提取液濃縮后用環(huán)己烷定容到2.0 mL,上樣,用1：1的環(huán)己烷和乙酸乙酯淋洗,進(jìn)樣6min后開始接收流出液，20min后（接收60 mL）停止接收,將流出液濃縮近干，準(zhǔn)備過活性炭小柱,流速3.0 mL/min,6.2.2 固相萃取,固定相活化 Conditioning 先用5mL的乙酸乙酯，5mL丙酮和乙酸乙酯混合液（：）分別預(yù)淋洗小柱，淋洗液棄去 ； 上樣 Load sample 用

9、3 mL石油醚溶解提取液上樣,流出液接收到KD瓶中； 洗脫 Analyte elution 用1：1的丙酮和乙酸乙酯淋洗液35mL洗脫樣品，洗脫液接收到KD瓶中。,6.3 濃 縮,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將洗脫液濃縮至0.5 mL，添加內(nèi)標(biāo)（進(jìn)樣濃度1g/）并用環(huán)己烷定容到0.5mL（在瓶中），混勻，用于GC-MS測定。,6.4 測 定,6.4.1 儀 器 條 件 6.4.2 定 性 測 定 6.4.3 定 量 測 定,6.5 平 行 試 驗,除不稱取試樣外，均 按以上步驟進(jìn)行。,6.6 空 白 試 驗,按以上步驟對同一試樣進(jìn)行平行試驗測定。,6.4.1 儀 器 條 件,a) 色譜柱: HP-5MS柱，3

10、0 m0.25 mm0.25m； b) 色譜柱溫度程序: 60（保持2 min）15/ min 150 6/ min 280（15.33min）； c) 載氣：氦氣，純度99.999%，流速為1 mL/ min 。,d) 進(jìn)樣口溫度： 260 ； e) 進(jìn)樣方式 ：不分流進(jìn)樣，由自動進(jìn)樣器進(jìn)樣； f) 進(jìn)樣量： 1L ；,6.4.1 儀 器 條 件,g) 離子源溫度: 230 ； h) 分析器溫度: 150； i) GC-MS接口溫度: 280； j) 電子轟擊源: 70eV ;,6.4.1 儀 器 條 件,k) 掃描方式：選擇離子（SIM） 。,6.4.1 儀 器 條 件,每種化合物分別選擇

11、1個定量離子，2個- 3個定性離子。 根據(jù)保留時間將 101種農(nóng)藥分成兩組，每組所需檢測的離子按照出峰順序，分時段分別檢測。 溶劑延遲5min。 每組化合物的保留時間、定性離子、定量離子參見附錄B；,6.4.2 定 性 測 定,保留時間 保留時間誤差小于0.02min ； 選擇特征離子 所選特征離子的相對豐度變化在規(guī)定范圍內(nèi)； 質(zhì)譜定性 質(zhì)譜圖庫檢索匹配應(yīng)在70%以上。,101種標(biāo)樣選擇離子色譜圖,蘋果中101種農(nóng)藥選擇離子色譜圖,西紅柿中101種農(nóng)藥選擇離子色譜圖,大白菜中101種農(nóng)藥選擇離子色譜圖,6.4.3 定 量 測 定,本方法采用內(nèi)標(biāo)法單離子定量測定，利用選擇特征離子進(jìn)行定量分析 ； 內(nèi)標(biāo)物為 Chrysene ；