1、脫毒苗培育,1,行業(yè)學(xué)習(xí),一、病毒病對(duì)作物的危害 無(wú)性繁殖作物一旦感染病毒，代代相傳，體內(nèi)不斷積累，嚴(yán)重影響植株生育。病毒病不能采用殺菌劑和抗生素防治，生產(chǎn)上尚無(wú)法根治。,蕙蘭嵌紋病毒病 Cymbidium Mosaic Virus,一串紅病毒病,蘋果花葉病毒 Apple mosaic virus,2,行業(yè)學(xué)習(xí),脫毒苗指通過(guò)物理、化學(xué)、生物技術(shù)等方法去除已知某些特定病毒的苗木。 （1）脫毒苗只是相對(duì)而言，許多植株含有多種已知病毒及尚未鑒定的未知病毒，通過(guò)莖尖培養(yǎng)的幼苗，經(jīng)過(guò)鑒定只能說(shuō)出去了已知的主要病毒，因此稱之為“無(wú)特定病毒苗”更為合理。 （2）脫毒苗并不具有病毒病抗性，在今后種苗繁育過(guò)程中

2、有可能重新感染病毒病。,馬鈴薯脫毒苗,3,行業(yè)學(xué)習(xí),二、脫毒苗培育方法 （一）熱處理脫毒 1. 原理：病毒受熱以后不穩(wěn)定性，使病毒鈍化，失去活性，高溫可以延緩病毒擴(kuò)散速度和抑制其增殖。 2. 方法：熱水浸泡-接穗在50熱水中浸泡數(shù)分鐘或數(shù)小時(shí)。 高溫空氣處理-旺盛生長(zhǎng)植物在3340條件下生長(zhǎng)發(fā)育，熱處理之后立即把莖尖切下來(lái)嫁接到無(wú)病砧木上。 3. 局限性：只對(duì)球狀、線狀病毒有效，對(duì)桿狀病毒不起作用。,4,行業(yè)學(xué)習(xí),（二）莖尖培養(yǎng)脫毒 1. 原理 病毒在植物體內(nèi)的分布是不均勻的。老葉片及成熟的組織和器官病毒含量較高，而幼嫩的及未成熟的組織或器官病毒含量較低，生長(zhǎng)點(diǎn)（0.11.0 mm區(qū)域）則幾乎

3、不含或含病毒很少。 在植物體內(nèi)，病毒易于通過(guò)維管系統(tǒng)而移動(dòng)，但在分生組織中不存在維管系統(tǒng)，病毒在細(xì)胞間移動(dòng)的另一途徑是通過(guò)胞間連絲，但是速度很慢，難以追趕上活躍生長(zhǎng)的莖尖。 在旺盛分裂的分生細(xì)胞中，代謝活性很高，使病毒無(wú)法進(jìn)行復(fù)制。 在分生組織中病毒鈍化系統(tǒng)比其它區(qū)域都具有更高的活性，因而分生組織不受侵染。 在莖尖中存在高水平的內(nèi)源生長(zhǎng)素，可以抑制病毒的增殖。,5,行業(yè)學(xué)習(xí),2. 方法 （1）材料的準(zhǔn)備 一般說(shuō)來(lái)，帶有葉原基的莖尖易于培養(yǎng)，成苗快，培養(yǎng)時(shí)間短，要獲得無(wú)病毒植株，理論上莖尖越小越好，實(shí)際應(yīng)用時(shí)，根據(jù)病毒種類不同切取0.11mm大小的生長(zhǎng)點(diǎn)，即可獲得無(wú)病毒植株，外植體越小，培養(yǎng)難度

4、越大，或者時(shí)間越長(zhǎng)。,6,行業(yè)學(xué)習(xí),（2）材料消毒 流水沖洗5 min-洗滌劑-流水沖洗30min-70%酒精35min-升汞810min-無(wú)菌水沖洗34次 （3）莖尖分生組織分離 如果進(jìn)行普通莖尖培養(yǎng)，外植體形大些為好，一般切取0.51cm長(zhǎng)的莖尖或整個(gè)芽；若進(jìn)行莖尖分生組織脫毒培養(yǎng)，外植體應(yīng)該盡量小些，通常在解剖鏡下剝掉細(xì)葉及葉原基，將生長(zhǎng)點(diǎn)暴露，然后切取0.11mm長(zhǎng)的部分作為培養(yǎng)材料。,7,行業(yè)學(xué)習(xí),3. 接種與培養(yǎng) 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，White、B5、Morel等培養(yǎng)基也常用于莖尖培養(yǎng)，蔗糖濃度一般為3%，過(guò)高或過(guò)低會(huì)抑制生長(zhǎng)，應(yīng)提高K+與NH4+含量，促進(jìn)莖尖生長(zhǎng)。 細(xì)胞分

5、裂素可促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化，誘導(dǎo)不定芽形成，有助于解除頂端優(yōu)勢(shì)，促進(jìn)腋芽萌發(fā)。常用的有BA、KT，前者用于油菜、豌豆、菜心等蔬菜快繁，后者多用于萵苣。,8,行業(yè)學(xué)習(xí),生長(zhǎng)素類物質(zhì)如IAA、IBA、NAA、2，4-D等具有促進(jìn)新梢生長(zhǎng)的顯著作用，并可誘導(dǎo)外植體產(chǎn)生愈傷組織和生根。往往低濃度的生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素配合可以達(dá)到促進(jìn)芽增殖，提高繁殖效果的作用。 百合 MS+BA 0.51.0mg/L+NAA 0.5mg/L 蘋果 MS+BA 0.51.0mg/L+GA3 0.10.5mg/L +IBA 0.20.5mg/L,9,行業(yè)學(xué)習(xí),（三）熱處理結(jié)合莖尖培養(yǎng)脫毒 （四）微體嫁接脫毒 微體嫁接是組織培養(yǎng)

6、與嫁接方法相結(jié)合來(lái)獲得無(wú)病毒苗木的一種技術(shù)。它是將0.10.2mm的莖尖作為接穗，嫁接到由試管中培養(yǎng)出來(lái)的無(wú)菌室生砧木上，繼續(xù)進(jìn)行試管培養(yǎng)，愈合成為完整的植株。 （五）愈傷組織培養(yǎng)脫毒 （六）抗病毒藥劑脫毒-抗病毒醚,10,行業(yè)學(xué)習(xí),三、脫毒苗鑒定方法 （一）指示植物法 利用病毒在其他植物上出現(xiàn)的癥狀特征，作為鑒定病毒種類的標(biāo)準(zhǔn)，這種專用于產(chǎn)生癥狀的寄主植物稱為指示植物。 指示植物分類：（1）接種后產(chǎn)生系統(tǒng)癥狀，并擴(kuò)展到非接種部位；（2）只在接種部位產(chǎn)生局部病斑、壞死或褪綠環(huán)狀病斑。 指示植物要求：常年栽培，較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持對(duì)病毒敏感性，易于接種。 常見(jiàn)的指示植物有莧色藜、千日紅和多種煙草。,千

7、日紅 Gomphrena globosa,煙草 Nicotiana tabacum,11,行業(yè)學(xué)習(xí),方法：從待測(cè)植株上取13g幼葉，加入少量pH7.0的0.1mol/L磷酸緩沖液，研成勻漿，吸取少量涂抹在500600目金剛砂擦傷表皮的指示植物葉片上，5min后用清水沖洗葉面，將接種植物放在防蟲(chóng)罩內(nèi)，2025條件下培養(yǎng)數(shù)天至數(shù)周后觀察癥狀。,12,行業(yè)學(xué)習(xí),（二）電鏡顯微檢測(cè)法 直接觀察病毒微粒的存在與否，以及病毒的大小、形態(tài)結(jié)構(gòu)和種類，可以顯示細(xì)胞與組織中病毒的精確定位。,TMV桿狀病毒,13,行業(yè)學(xué)習(xí),（三）抗血清鑒定法 植物病毒也是一種抗原，能引起動(dòng)物產(chǎn)生抗體，由于不同病毒產(chǎn)生的抗血清（含有抗體的血清）都具有特異性，用特定病毒的抗血清拉鑒定病毒具有高度的專一性，但是制備抗原和免疫過(guò)程比較復(fù)雜。,14,行業(yè)學(xué)習(xí),（四）酶聯(lián)免疫測(cè)定法（E