密級(jí)： 論文編號(hào)： 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士學(xué)位論文 土壤消毒及土傳病原真菌的分子生物學(xué)鑒定 of on of I 摘 要 本 研究 旨 在篩選 溴甲烷 土壤消毒的 有效替代品， 并 探討 快速有效的分子生物學(xué)方法 定性定量研究 土傳病原 真 菌 ， 綜合評(píng)價(jià)土壤消毒的藥效， 為土壤消毒防治土傳病害 提供更為科學(xué)的依據(jù)。 通過(guò)常規(guī)的病原菌分離培養(yǎng)方法 分離 重要的土傳病原真菌 ，采用 改進(jìn)的冷凍研磨 提取 基因組 對(duì)真 菌 核糖體基因的內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) (行 克隆測(cè)序 ， 設(shè)計(jì)特異性引物，并進(jìn)行引物特異性及靈敏性檢驗(yàn)。 根據(jù)所設(shè)計(jì)的 特異性引物 ， 采 用實(shí)時(shí) 熒 光定量 法對(duì)硫酰氟處理 后 土樣中病原 真 菌進(jìn)行定性定量研究， 并結(jié)合病原菌傳統(tǒng)培養(yǎng)計(jì)數(shù)的 方法 ，綜合評(píng)價(jià)硫酰氟土壤 消毒 對(duì)土傳病原 真 菌的控制效果。 通過(guò)本研究 ， 得到如下結(jié)果： （ 1） 采用不同劑量的硫酰氟室內(nèi)土壤熏蒸，結(jié)果表明硫酰氟用量在 1010 對(duì)土壤中尖鐮刀菌有很好的防效， 與本室 所做 的 硫 酰氟 田間藥效試驗(yàn) 結(jié)果相一致，說(shuō)明硫酰氟是很有潛力的土壤熏蒸劑。 （ 2） 從采集的保護(hù)地病土與典型病組織中成功 分離 到 辣椒疫霉，番茄晚疫病菌，尖鐮 刀菌 ，瓜果腐霉，鏈格孢 。 并 收集培養(yǎng)了寄生疫霉，苧麻疫霉，棉尖鐮孢，燕麥鐮 孢 ，串珠鐮孢 ，禾谷鐮 孢 ，腐皮鐮 孢 ，大麗輪枝菌，番茄灰霉等菌株。 （ 3） 對(duì) 冷凍研磨 進(jìn)行 改進(jìn) 后 ，成功提取多種 真菌 的 基因組 對(duì) 腐皮鐮孢 ， 分離的 鐮刀菌 ， 辣椒疫霉，番茄晚疫病菌， 大麗輪枝菌 ， 瓜果腐霉 的 進(jìn)行克隆測(cè)序， 結(jié)果顯示其長(zhǎng)度分別為 544544793884541866序列比對(duì)，結(jié)果顯示 腐皮鐮刀菌 和分離的鐮刀菌均與尖鐮刀菌的一個(gè)?；?f. 源性高達(dá) 99%以上 ，推測(cè)它們的分類地位可能都應(yīng)歸屬于 f. 其余 菌株序列比對(duì)， 結(jié)果顯示其種屬名均與 報(bào)道的一致。 （ 4）對(duì)分離的 鐮刀菌 ， 辣椒疫霉， 大麗輪枝菌 三種 重要土傳病原 真 菌 設(shè)計(jì)了特異性引物，進(jìn)行引物的特異性及靈 敏性檢驗(yàn) ，結(jié)果表明退火溫度均 為 65 時(shí)，三對(duì)引物均具有良好的特異性 和靈敏性。 （ 5） 以 不同劑量 硫酰氟 處理 后的 土樣為樣本， 根據(jù)所設(shè)計(jì)的特異性引物 ， 采 用 熒光定量法 對(duì)土樣中 病原真菌 進(jìn)行定性定量研究。結(jié)果 表明 ， 可準(zhǔn)確定量 不同處理 土樣中尖 鐮刀菌 的 貝 數(shù) ， 顯示 硫酰氟 對(duì)該菌 有很好的 控制效果 ， 并明確了 尖鐮刀 菌是滿城草莓病害一個(gè)重要致病菌 ， 初步形成了 土傳病原 真 菌 快速有效的分子檢測(cè)技術(shù) 。 實(shí)時(shí)熒光定量 術(shù)可以對(duì) 板準(zhǔn)確定量，靈敏度高、特異性和 可靠性 強(qiáng) ， 將其應(yīng)用到農(nóng)藥藥效研究領(lǐng)域，通過(guò)對(duì) 土傳病原 真 菌 進(jìn)行定性定量研究 ，從 新的角度來(lái)評(píng)價(jià)土壤消毒的藥效，為農(nóng)藥藥效研究提供了新的研究途徑。 關(guān)鍵詞 土壤消毒 ； 土傳病原 真 菌； 克隆測(cè)序 ； 特異性引物 ；熒光定量 he of is to a to by TS of TS we CR to in of (1) of of at 1010,f. in by is a (2) (3) s by TS of 44544793884541866bp of to f. s (4) TS 5 . (5) CR to in of an on a to of CR NA CR to of a of 目 錄 第一章 緒論 . 1 甲烷土壤消毒防治土傳病害 . 1 傳病害的危害 . 1 甲烷的應(yīng)用 . 1 甲烷土壤消毒替代技術(shù)研究 . 3 代原因 . 3 代技術(shù)情況 . 3 酰氟作為溴甲烷潛在替代品的研究 . 5 傳病原菌的鑒定方法 . 6 統(tǒng)鑒定方法 . 6 子生物學(xué)鑒定方法及其應(yīng)用 . 7 傳病原菌的定量方法 . 12 統(tǒng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)計(jì)數(shù) . 12 時(shí)熒光定量 術(shù) . 12 研究的目的和意義 . 17 的 . 17 義 . 17 第二章 幾種病原真菌的分離及致病性鑒定 . 18 種病原真菌的分離培養(yǎng) . 18 料與方法 . 18 果與分析 . 19 論 . 21 赫氏法則致病性鑒定 . 22 料與方法 . 22 果與分析 . 22 論 . 23 第三章 病原真菌基因組 提取 . 24 料與方法 . 24 驗(yàn)材料 . 24 驗(yàn)方法 . 25 果與分析 . 26 論 . 27 第四章 病原真菌 克隆測(cè)序 . 28 料與方法 . 28 驗(yàn)材料 . 28 驗(yàn)方法 . 29 果與分析 . 32 原真菌 增 . 32 標(biāo)菌 重組質(zhì)粒的酶切鑒定結(jié)果 . 32 標(biāo)菌 測(cè)序結(jié)果 . 33 標(biāo)菌 序列比對(duì)結(jié)果 . 36 論 . 38 第五章 病原真菌特異性引物的設(shè)計(jì) . 40 料與方法 . 40 驗(yàn)材料 . 40 驗(yàn)方法 . 40 果與分析 . 42 離的鐮刀菌特異性引物 . 42 椒疫霉特異性引物 . 42 麗輪枝菌特異性引物 . 42 論 . 43 第六章 引物的特異性及靈敏性檢 驗(yàn) . 44 料和方法 . 44 驗(yàn)材料 . 44 驗(yàn)方法 . 44 果與分析 . 45 物特異性檢驗(yàn)結(jié)果 . 45 物靈敏性檢驗(yàn)結(jié)果 . 48 論 . 49 第七章 熒光定量 測(cè)土傳病原菌 . 51 料與方法 . 51 驗(yàn)材料 . 51 驗(yàn)方法 . 52 果與分析 . 54 驗(yàn)結(jié)果 . 54 果分析 . 57 論 . 58 第八章 全文結(jié)論 . 60 參考文獻(xiàn) . 61 附錄 . 69 致 謝 . 71 作 者 簡(jiǎn) 歷 . 72 英文縮略表 英文縮寫(xiě) 英文全稱 中文名稱 MB 甲烷 酰氟 甲烷 技術(shù)選擇委員會(huì) 氧消耗物質(zhì) 重蒸餾水 腸埃希氏菌 丙基 堿基 養(yǎng)基 密度 合酶鏈反應(yīng) 種高效克隆 用載體 六烷基三甲基溴化銨 E 緩沖液 43中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 1 第一章 緒論 甲烷 土壤消毒防治土傳病害 傳病害 的危害 傳病害的特點(diǎn) 及主要 致病 菌 土傳病害其病原物主要 在土壤里越冬 (夏 )，且在土壤里存活時(shí)間較長(zhǎng)，如瓜類枯萎病菌可在土壤里存活 5年之久，故稱之土壤習(xí)居菌 。土傳病害的病原菌，一般是通過(guò)土壤、肥料、灌溉水等 進(jìn)行傳播，以侵染危害植株地下部位的根莖為主，且能侵染 植物的維管束，病原物在維管束里繁殖，阻塞其輸送營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在短期內(nèi)致使整株植物枯萎而死亡 （ 陸家云 ， 1997） 。 引致重要土傳病害的主要病原菌，其分類地位分別是屬于鞭毛菌亞門(mén)卵菌綱的疫霉屬、腐霉屬，半知菌亞門(mén)絲孢綱的絲核菌屬、鐮孢霉屬、輪枝孢屬 等（ 曹坳程， 2000） 。 （ 1）鐮孢霉屬（ 病原菌：為害瓜類、茄科類（番茄、辣椒）及豆科蔬菜。 主要引起根腐、莖腐、果腐 等 ，有的侵染植物維管束組織引起萎蔫癥。病原菌以菌絲體、厚垣孢子在土壤中越冬，且在土壤 中可以腐生。厚垣孢子在土壤中能生存 5 10年。 （ 2）疫霉屬（ 病原菌：寄主范圍很廣 ，可以侵染植物地上和地下部分。引起茄科、瓜類疫病 。疫霉菌以厚垣孢子或卵孢子在土壤中存活 。 （ 3）腐霉屬（ 病原菌：引起茄子、番茄、辣椒和黃瓜等作物的猝倒病。病菌以腐生的方式在土壤中長(zhǎng)期存活。其菌絲體和卵孢子可在病組織和土壤中越冬。 （ 4）絲核菌屬（ 病原菌：侵染 作物 引起幼苗猝倒或立枯，也引起禾谷類作物的紋枯病。病菌以菌絲體或菌核在土壤中越冬，腐生性強(qiáng) 。 （ 5）輪枝孢 霉屬（ 病原菌：主要引起作物黃萎病 。病原菌的菌絲體、厚垣孢子和微菌核，隨病殘?bào)w在土中越冬。該菌適生性強(qiáng)，寄主廣，防治難度大。 保護(hù)地 的危害 隨著保護(hù)地農(nóng)作物種植栽培面積的迅速擴(kuò)大，保護(hù)地在為農(nóng)作物提供適宜的環(huán)境和更長(zhǎng)的生長(zhǎng)季節(jié)的同時(shí)，也為土傳病原菌提供了適宜的生長(zhǎng)環(huán)境，土傳病害在保護(hù)地中的發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重。因其發(fā)生具有隱蔽性，大多在結(jié)果期才達(dá)到發(fā)病的高峰期，因此損失巨大 。 由于土傳病蟲(chóng)害的危害而造成的農(nóng)作物產(chǎn)量損失通常會(huì)達(dá)到 20% 40%，嚴(yán)重地塊可能高達(dá) 60%，或者甚至絕收。所以， 土傳病害已嚴(yán)重制約了保護(hù)地的發(fā)展 （ 曹坳程， 2000） 。 甲烷 的應(yīng)用 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 2 目前使用最廣泛、控制土傳病蟲(chóng)害最有效的土壤熏蒸劑是 溴甲烷 ?？捎糜谕寥老尽z疫熏蒸、耐腐和易腐材料的處理。用作土壤消毒可以防治真菌、細(xì)菌、土傳病毒、昆蟲(chóng)、螨類、土壤線蟲(chóng)、嚙齒動(dòng)物、寄生性種子植物及雜草。 但 據(jù)聯(lián)合國(guó)環(huán)境規(guī)劃署的報(bào)告 ， 用于土壤消毒的 溴甲烷 30% 85%的總量到達(dá)大氣 ，是一種顯著的臭氧層消耗物質(zhì) ( 在 1992年哥本哈根第四次會(huì)議上 ， 溴甲烷 被列為受控制物質(zhì) （ 1998） 。 根 據(jù)蒙特利爾議定書(shū)哥本哈根修正案， 溴甲烷 將于 2015年在全球 淘汰 （ 2002） 。 甲烷 的理化特性 溴甲烷 ，化學(xué)結(jié)構(gòu)式 品在常溫下為無(wú)色氣體。工業(yè)品 (含量 99%)經(jīng)液化裝入鋼瓶中，為無(wú)色或帶有淡黃色的液體，沸點(diǎn) ，熔點(diǎn) （ 1998） 。按我國(guó)農(nóng)藥毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)， 溴甲烷 屬高毒殺蟲(chóng)劑，大鼠急性經(jīng)口 00mg/性吸 入 120 mg/試驗(yàn)條件下，未見(jiàn)致癌作用。由于 溴甲烷 屬高毒農(nóng)藥，且本身無(wú)味，為安全起見(jiàn)，溴甲烷 中均加入 2%氯化苦作為警戒劑，商品名為溴滅泰 （ 曹坳程， 2000） 。 甲烷 的作用特點(diǎn) 溴甲烷 是一種鹵代物類熏蒸劑，在常溫下蒸發(fā)成比空氣密度大的氣體，同時(shí)具有強(qiáng)大的擴(kuò)散性和滲透性，可以在薄膜覆蓋下的空間和土壤中向各個(gè)方向無(wú)孔不入的擴(kuò)散和滲透，從而達(dá)到滅蟲(chóng)、殺菌和除草的目的。 溴甲烷 作為熏蒸劑具有顯著優(yōu)點(diǎn) (曹坳程 ， 2003)： （ 1）生物活性高，對(duì)害蟲(chóng)、有害真菌和雜草種子等都具有高的生物活性； （ 2）沸點(diǎn)低，低溫下即可氣化，使用不受環(huán)境溫度限制； （ 3）化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定及水溶性小，應(yīng)用范圍廣，可熏蒸含水量較 高的物品； （ 4）穿透能力強(qiáng)，能穿透土壤，殺滅土壤深處的有害生物； （ 5）使用多年，有害生物的抗性上升很慢； （ 6）用于土壤消毒，可減少地上部病蟲(chóng)害的發(fā)生，并可減少氮肥的用量，能顯著提高農(nóng)產(chǎn)品的產(chǎn)量及品質(zhì)。 甲烷 使用情況 溴甲烷 是 一種高效、廣譜熏蒸劑，用于土壤 消毒 可有效防治真菌、細(xì)菌、病毒、昆蟲(chóng)、螨類、線蟲(chóng)、嚙齒動(dòng)物和雜草。從而使作物保持高產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，以及良好的品質(zhì)，并能減少氮肥用量。另外也廣泛用于耐久儲(chǔ)存品、易腐爛商品及建筑物的熏蒸，在裝運(yùn)前的熏蒸也發(fā)揮重要的作用。全球每年消耗 溴甲烷 約 用途來(lái)看，其中 85%用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的土壤熏蒸消毒， 10%用于植物檢疫貨物熏蒸， 5%用于倉(cāng)儲(chǔ)熏蒸消毒。我國(guó)自 20世紀(jì) 80年代以來(lái)，隨著經(jīng)濟(jì)改革的進(jìn)行，經(jīng)濟(jì)植物種植，保護(hù)地迅速發(fā)展，土傳病害發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重， 溴甲烷 土壤消毒技術(shù)在我國(guó)得到迅速推廣 （ 曹坳程， 2000） 。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 3 甲烷 土壤消毒替代技術(shù)研究 代原因 溴甲烷 雖然是一種優(yōu)良的多用途的熏蒸劑，但 同時(shí)也是一種顯著的消耗臭氧層物質(zhì)。 眾所周知，臭氧層對(duì)地球上的生命有非常重要的意義。 溴甲烷 散逸到大氣中，能在強(qiáng)烈的太陽(yáng)紫外線作用下，釋放出溴原子，溴原子可從臭氧分子中奪取 1 個(gè)氧原子，使其變成普通的氧分子，而生成很不穩(wěn)定的一氧化溴，它又與另一個(gè)氧原子結(jié)合，使溴原子再次游離出來(lái)，又重復(fù)上述反應(yīng)活動(dòng)，這個(gè)過(guò)程可重復(fù)上千次，從而， 1 個(gè)溴原子可使許多臭氧分子遭到破壞（ 1998） 。大氣中 溴甲烷 的來(lái)源，一是自然界中海洋生物海藻所散發(fā)的 溴甲烷 ，二是人工熏蒸消毒使用過(guò)程中散發(fā)到大氣中的 溴甲烷 。熏蒸消毒過(guò)程中散發(fā) 溴甲烷 為排放至大氣總量中的 15% 35%，因此， 溴甲烷 作為一種 質(zhì)已經(jīng)受到人們的重視 （ 1998） 。 代技術(shù)情況 由于 溴甲烷 對(duì)臭氧層的巨大破壞作用， 1992 年 11 月在哥本哈根召開(kāi)的蒙特利爾條約第 4次締約國(guó)大會(huì)上，溴甲烷被正式列為蒙特利爾議定書(shū)中又一受控物質(zhì)。在 1997 年 9 月蒙特利爾召開(kāi)的議定書(shū)第 9 次大會(huì)上決定：發(fā)達(dá)國(guó)家 于 2005 年全面淘汰 溴甲烷 ， 發(fā)展中國(guó)家 淘汰日期為 2015 年。 我國(guó)政府已在 1991 年 6 月成為按議定書(shū)第 5 條第 1 款行事的締約國(guó)。 由于淘汰溴甲烷的艱巨性，國(guó)際社 會(huì)成立了溴甲烷技術(shù)選擇委員會(huì)（ （ 998）。 聯(lián)合國(guó)環(huán)境規(guī)劃署（ 轄的由蒙特利爾多邊基金資助設(shè)立的一個(gè)技術(shù)咨詢組織。每年 化學(xué)和非化學(xué)的替代技術(shù) /替代品進(jìn)行科學(xué)、技術(shù)及經(jīng)濟(jì)評(píng)估，并發(fā)布評(píng)估報(bào)告。 溴甲烷 的替代技術(shù)定義為 ： 非化學(xué)或化學(xué)的處理程序在防治病蟲(chóng)害的技術(shù)上可行，因而可避免或者代替 溴甲烷 的使用 （ 1998） 。以下將國(guó)內(nèi)外關(guān)于 溴甲烷 替代的有關(guān)技術(shù)方法作一簡(jiǎn)單概述。 學(xué)替代品 /替代技術(shù) 主要有棉隆，威百畝，異硫氰酸甲酯，氯化苦， 1,3硫酰氟， 甲基碘， 炔丙基溴 ， 甲醛，農(nóng)藥混用 等。 目前 國(guó)內(nèi)有待進(jìn)一步 研究的化學(xué)替代品 主要有： 氯化苦：據(jù)報(bào)道，氯化苦能有效控制導(dǎo)致草莓根病或枯萎的喙擔(dān)子菌屬、刺盤(pán)孢屬、柱果霉屬、鐮刀菌屬、疫霉屬、須殼孢屬、腐霉屬、絲核菌屬、輪枝菌屬真菌，對(duì)土壤桿菌屬細(xì)菌也有效，對(duì)地下害蟲(chóng)和土壤線蟲(chóng)也有很好的效果。據(jù) 998 年報(bào)道，在防治土壤真菌上，氯化苦的效果要高于 溴甲烷 近 20 倍。因?yàn)槁然喾乐胃Y(jié)線蟲(chóng)和雜草的效果較差，通常將氯化苦與 1,3與 除草劑混用提高除草效果 （ 1998） 。 1,3土壤熏蒸殺線蟲(chóng)劑，用于柑橘、草莓、葡萄、甘薯、瓜類、煙草、胡蘿卜、番茄、花椰菜、甜菜、花生、花卉等多種作物種植前土壤處理，對(duì)真菌和地下害蟲(chóng)也中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 4 有一定的效果。由于防治土壤線蟲(chóng)主要是靠 1,3其注入土壤中后，很快蒸發(fā)為氣體， 并 通過(guò)土壤空隙擴(kuò)散。 1,3甲烷 的主要替代物逐漸被接受。尤其是將其應(yīng)用在一定作物上，如草莓。在澳大利亞、西班牙， 1,35%氯化苦混合注射到苗床， 被作為有效的替代物應(yīng)用在草莓種植上 （ 2003； 2003） 。 甲基碘：甲基碘作為土壤熏蒸劑，國(guó)內(nèi)研究的很少。但作為 溴甲烷 的潛在替代品在國(guó)外有研究和報(bào)道。在加利福尼亞進(jìn)行的草莓上的甲基碘和氯化苦的處理顯著提高了產(chǎn)量，并且甲基碘和 溴甲烷 相比差異不顯著 （ 2000） 。 了實(shí)驗(yàn)室生測(cè)及田間試驗(yàn)來(lái)鑒定雜草對(duì) 溴甲烷 和甲基碘土壤熏蒸的劑量反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明甲基碘可能是 溴甲烷 的合適的替代物，因?yàn)樗氖褂脳l件與 溴甲烷 相似，在廣泛的殺草譜內(nèi)具有比 溴甲烷 更好的效 果，并且對(duì)地球臭氧層的破壞很?。?1997）。在檢疫方面的實(shí)驗(yàn)也證明甲基碘在防治害蟲(chóng)上效果相當(dāng)于或高于 溴甲烷 ，但甲基碘的價(jià)格昂貴、毒性很高，原料來(lái)源也受到限制 （ 000） 。 氰氨化鈣：氰氨化鈣又叫石灰氮，過(guò)去曾作為氮肥施用。它在土壤中與水分反應(yīng)，先生成氫氧化鈣和氰氨，氰氨水解形成尿素，最后分解成氨，供植物吸收。在堿性土壤中，形成的氰氨可進(jìn)一步聚合而形成雙氰氨。氰氨和雙氰氨都具有消毒、滅蟲(chóng)、防病的作用 （ 李林，2004） 。 究發(fā)現(xiàn)，氰氨化鈣用量為 100g/結(jié)合施用 切碎的干燥的作物秸稈， 覆蓋聚乙烯膜，再結(jié)合 太陽(yáng)能消毒 36 周，對(duì) 土壤中的鐮刀 菌有很好的控制效果 （ 997） 。 試驗(yàn)表明，種 植前施用氰氨化鈣能成功地減少花椰菜上根瘤病害的發(fā)生，并提高產(chǎn)量 （ 2005） 。 化學(xué)替代品 /替代技術(shù) 主要有人工基質(zhì)，輪作，漫灌，深耕，改變種植時(shí)間，種植抗病品 種，嫁接，蒸汽消毒法，生物防治技術(shù)，太陽(yáng)能消毒，生物熏蒸等方法，大多取得了良好的防治效果。 生物防治技術(shù)：是用非致病的細(xì)菌、真菌和其他有機(jī)體，以與有害生物競(jìng) 爭(zhēng)空間和營(yíng)養(yǎng)或拮抗等方式而控制土壤中病蟲(chóng)害的方法。因其環(huán)境友好的特點(diǎn)，近年來(lái)研究較多，主要是利用一些拮抗菌如木霉等來(lái)控制病原菌的危害。這種方法也常常和太陽(yáng)能消毒結(jié)合使用，如應(yīng)用熒光假單孢桿菌防治番茄病害，發(fā)現(xiàn)與太陽(yáng)能結(jié)合時(shí)比單獨(dú)生防顯著增進(jìn)產(chǎn)量 (993)。在加利福尼亞，生防菌綠粘帚霉與太陽(yáng)能消毒結(jié)合防治番茄枯萎病也收到很好的效果(1991)。 太陽(yáng)能消毒：是用塑料薄膜覆蓋在潮濕的土壤上 4 周以上，利用太陽(yáng)輻射對(duì)土壤的增溫作用，使土壤長(zhǎng)期保持一定溫度，利用熱能殺死土壤中的有害生 物，包括細(xì)菌、真菌、線蟲(chóng)和雜草 (1991)。太陽(yáng)能消毒的效果取決于熱量的多少、溫度的高低、曝曬時(shí)間的長(zhǎng)短、生物的熱敏感性以及土壤的理化性質(zhì)和生物特性（ 1986） 。高溫土壤太陽(yáng)能消毒已作為一種控制地下害蟲(chóng)、病原菌、雜草的有效方法被廣泛應(yīng)用。在加利福尼亞的試驗(yàn)表明，土壤溫度達(dá)到最低 70 ，持續(xù)至少 30 分鐘，或土壤溫度達(dá)到最低 60 ，持續(xù)至少 60 分鐘均可達(dá)到很好的效果（ 1999）。 國(guó)內(nèi)曹坳程等在河北滿城草莓溫室的試驗(yàn)表明，采中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章 緒論 5 用太陽(yáng)能消毒結(jié)合生物熏蒸的方法，能使 草莓產(chǎn)量明顯提高 （ 曹坳程， 2000） 。 生物熏蒸：是利用植物殘?jiān)?、家畜糞便等一些有機(jī)物質(zhì)覆蓋土壤，利用這些有機(jī)物釋放出的有毒氣體如異硫氰酸甲酯等殺死土壤中的有害生物的一種方法（ 1996）。如施用新鮮雞糞可有效防除馬鈴薯黃萎病和寄生線蟲(chóng)（ 1999） 。生物熏蒸法常與太陽(yáng)能消毒法結(jié)合使用，效果更好，可有效防治一些病原菌和雜草（ 1993； 2005） 。 學(xué)與非化學(xué)替代品 /替代技術(shù)相結(jié)合 如威百畝、棉隆、氯化苦等化學(xué)替代品結(jié)合太陽(yáng)能消毒技 術(shù)得到了迅速地發(fā)展，顯著降低了化學(xué)替代品的用藥量和使用成本，提高了防效，表現(xiàn)出良好的發(fā)展前景。據(jù)報(bào)道，利用氰氨化鈣產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，結(jié)合太陽(yáng)能高溫消毒，可有效防治土壤根結(jié)線蟲(chóng)病（ 李林， 2004）。 酰氟作為 溴甲烷 潛在替代品的研究 硫酰氟（ 名熏滅凈，是一種廣譜性熏蒸劑。美國(guó)商品名叫 肯 )，由道化學(xué)公司在 上世紀(jì) 五十年代后期開(kāi)發(fā)作為建筑熏蒸劑。具有消除在建筑物里蔓延的害蟲(chóng)的特性，它不燃，無(wú)腐蝕，不會(huì)產(chǎn)生異味。自 1961 年在美國(guó)上市以來(lái)， 廣泛應(yīng)用于 倉(cāng)庫(kù)、貨船、集裝箱等的消毒治蟲(chóng)、建筑物、水庫(kù)堤壩白蟻的防治以及園林越冬害蟲(chóng)、活樹(shù)蛀干性害蟲(chóng)的防治。對(duì)木材、棉花、煙草、中藥材、竹木器、工藝品、各種衣料、圖 畫(huà) 書(shū)資料、文物檔案等害蟲(chóng)均有良好的防治效果。 硫酰氟作為一種優(yōu)質(zhì)的廣譜熏蒸劑，不破壞臭氧層，不僅具有良好的擴(kuò)散力 和穿透力，而且不與室內(nèi)的絕大多數(shù)物質(zhì)起反應(yīng)，表現(xiàn)出相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定性（ 2000； 1990） 。 硫酰氟作為一種殺蟲(chóng)劑已在世界范圍內(nèi)逐漸被推廣應(yīng)用，目前至少已有美國(guó)、中國(guó)、日本、德國(guó)、瑞典、澳大利亞、英國(guó)和加勒比海諸國(guó)正在使用硫酰 氟 （ 1998）。 硫酰氟熏蒸大多是針對(duì)木材內(nèi)易傳播的危險(xiǎn)性昆蟲(chóng)或線蟲(chóng)，而不是病原菌（ 鄭文華， 1994；盧家川， 1991；胡善敏， 1993；樂(lè)海洋等， 1997） 。近年來(lái)，人們才注意到硫酰氟對(duì)病原真菌有控制作用，硫酰氟對(duì)橡樹(shù)木料熏蒸，能夠鏟除萎蔫病原及其他幾種真菌 (995)。 但硫酰氟用于土壤消毒防治土傳病蟲(chóng)害目前國(guó)內(nèi)外研究甚少。 酰氟理化性質(zhì) 硫酰氟是一種非可燃性、無(wú)色、無(wú)臭的氣體，相對(duì)分子量為 點(diǎn)很低，為 ，熔點(diǎn)為 。其液態(tài)的商品熏滅凈的自然蒸汽壓很大， 時(shí)其蒸汽壓約為 400 時(shí)溴甲烷蒸汽壓的 3 倍，因此易于擴(kuò)散和滲透，其滲透擴(kuò)散能力比溴甲烷高 5。硫酰氟易于解吸，無(wú)腐蝕，不燃不爆，毒性中等，其毒性約為溴甲烷的 1/3，屬神經(jīng)毒劑 。對(duì)高等動(dòng)物的毒性比其他熏蒸劑低 （何鴿萍， 1999； 曹坳程， 2002） 。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 第一章