密級(jí) : 論文編號(hào) : 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院 碩士 學(xué)位論文 胺降解關(guān)鍵酶基因的功能鑒定和表達(dá)調(diào)節(jié)研究 in in 略 詞 縮略詞 英文名稱 中文名稱 p m D9 胺降解菌 硝基 氨芐青霉素 四環(huán)素 卡那霉素 氯霉素 bp 基對(duì) AO 胺雙加氧酶 ,3苯二酚 2， 3雙加氧酶 代十六烷基三甲胺 氧核糖核苷酸 EB 化乙錠 丙基硫代 kb 堿基對(duì) 鐘 合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) 分鐘轉(zhuǎn)速 二烷基磺酸鈉 4 3 i 摘 要 苯胺是一種難降解、毒性大、可對(duì)生態(tài)環(huán)境和人類健康造成嚴(yán)重危害的典型有機(jī)污染物。苯胺降解菌株 離自印染 廠 活性污泥，其最高耐受苯胺濃度為 4500mg/l。 以起始濃度 1500mg/l 苯胺 為唯一碳源生長(zhǎng)時(shí)， 30 小時(shí)達(dá)到最大生長(zhǎng)量（ 以 300mg/l 鄰苯二酚為唯一碳源 生長(zhǎng)時(shí) 29 小時(shí)達(dá)到最大生長(zhǎng)量（ 。采用 氧化電極測(cè)定 分子氧 吸收率的方法 ，測(cè) 定 苯胺雙 加氧酶 活性為826而內(nèi)源呼吸僅為 306表明 有非常明顯的苯胺雙加氧酶活性。利用測(cè)定積累產(chǎn)物吸光值的方法，測(cè)定 鄰苯二酚 2,3 雙加氧酶酶活為 5.8 u (mg 1，而鄰苯二酚 1,2 雙加氧酶的活性僅為 mg 1，表明 苯胺代謝方式為間位裂解途徑。 在克隆 整的苯胺降解基因簇并完成核甘酸全序列測(cè)定（ 陸號(hào)基礎(chǔ)上，本論文利用 算機(jī)軟件分析和 列比對(duì)，推測(cè)在 調(diào)控蛋白。第一個(gè)啟動(dòng)子位于苯胺降解基因簇前端，受 調(diào)控蛋白 調(diào)控，控制苯胺雙加氧酶基因鄰苯二酚雙加氧酶基因 表達(dá)；第二個(gè)啟動(dòng)子位于基因 能受 調(diào)控，控制基因簇中第二組鄰苯二酚雙加氧酶基因 表達(dá)。分析了兩個(gè)啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)、 和 序列以及調(diào)控蛋白在啟動(dòng)子上的轉(zhuǎn)錄結(jié)合位點(diǎn)序列，預(yù)測(cè)其表達(dá)均為 70 因子 依賴型。預(yù)測(cè)了 三級(jí)結(jié)構(gòu)，進(jìn)行了序列比對(duì)及系統(tǒng)進(jìn)化樹分析。 為驗(yàn)證兩個(gè)預(yù)測(cè)啟動(dòng)子的表達(dá)功能， 采用 載體 別構(gòu)建了兩個(gè)預(yù)測(cè)啟動(dòng)子的 合 性廣宿主表達(dá)載體，分別命名為 過(guò)三親接合方法將 入 ，在不同底物誘導(dǎo)下測(cè)定了結(jié)合子的 結(jié)果表明： 胺降解基因簇中第一個(gè)啟動(dòng)子的表達(dá)受到苯胺和對(duì)甲苯胺的誘導(dǎo)，第二個(gè)啟動(dòng)子的表達(dá)受到苯胺的降解中間產(chǎn)物鄰苯二酚的誘導(dǎo)和對(duì)甲苯胺的降解中間產(chǎn)物4通過(guò) 方法驗(yàn)證了第一個(gè)操縱子和基因 表達(dá)受到苯胺的誘導(dǎo)，第二個(gè)操縱子的表達(dá)受到苯胺和鄰苯二酚的表達(dá)，并且鄰苯二酚的誘導(dǎo)作用要高于苯胺的誘導(dǎo)作用。 基于以上工作和相 關(guān)文獻(xiàn) 推測(cè)了 解基因簇的調(diào)控模式。 有關(guān)苯胺降解基因簇中存在著兩個(gè)誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的研究在苯胺降解菌中屬于首次報(bào)道，為胺代謝調(diào)控分子機(jī)理的進(jìn)一步研究 奠定 了 理論基礎(chǔ) 。 關(guān)鍵詞 ： 苯胺， 胺雙加氧酶，鄰苯二酚雙加氧酶， 啟動(dòng)子， 達(dá)調(diào)節(jié) is to be to be D9 a up 500 mg in D9 500mg 0 D9 9 00mg as a O 2606,323O) by in 75 nm 23O D9 .8 u(mg 1, mg 1in is a we D9 of of We 70 10 35 by is by In to of by D9 by of by of by of we by by it by by D9 on It of in it on of 錄 摘 要 . i . 一章 引 言 . 1 胺代謝途徑的研究進(jìn)展 . 1 生物中芳香族化合物降解基因簇轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究進(jìn)展 . 3 錄調(diào)節(jié)蛋白 . 3 控蛋白 . 5 控蛋白 . 6 控蛋白 . 7 控蛋白 . 8 成分信號(hào)家族調(diào)控蛋白 . 8 胺降解基因簇的代謝調(diào)控研究 . 10 論文的目的意義和技術(shù)路線 . 12 第二章 胺代謝關(guān)鍵酶活性的測(cè)定 13 料和方法 . 13 株和質(zhì)粒 . 13 養(yǎng)基 . 13 要儀器 . 14 極測(cè)定苯胺雙加氧酶酶活 . 14 苯二酚雙加氧酶的測(cè)定 . 14 果 . 15 苯胺和鄰苯二酚為唯一碳源的生長(zhǎng)情況 . 16 胺代謝關(guān)鍵酶基因的功能驗(yàn)證 . 17 第三章 苯胺降解基因簇中雙啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)和功能驗(yàn)證 . 18 驗(yàn)材料 . 18 株和質(zhì)粒 . 18 養(yǎng)基 . 19 物化學(xué)試劑、酶及試劑盒 . 19 驗(yàn)方法 . 19 因組 取 . 19 增 . 21 物的純化 . 22 動(dòng)子序列片段的克隆 . 23 組子的篩選與鑒定 . 24 親接合 . 24 . 25 取 . 25 轉(zhuǎn)錄 . 25 果 . 26 胺降解基因簇中 調(diào)控蛋白的預(yù)測(cè) . 26 胺降解基因簇中 誘導(dǎo)型啟動(dòng)子的驗(yàn)證 . 29 因簇中啟動(dòng)子的表達(dá)活性測(cè)定 . 33 證兩個(gè)啟動(dòng)子誘導(dǎo)表達(dá)的情況 . 36 不同培養(yǎng)條件下的 取 . 36 標(biāo)基因 16S . 36 轉(zhuǎn)錄 增兩個(gè)操縱子中的基因 . 36 論 . 40 第四章 結(jié)論 . 43 參考文獻(xiàn) . 44 致 謝 . 52 個(gè)人簡(jiǎn)歷 . 53 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 1 第一章 引 言 環(huán)境污染是當(dāng)今世界所面臨的重大問(wèn)題之一，目前在世界范圍內(nèi)約有 5 萬(wàn)種工業(yè)用化合物通過(guò)各種途徑進(jìn)入生態(tài)環(huán)境，其中相當(dāng)一部分化合物難以自然降解，長(zhǎng)期殘留在環(huán)境中，直接 對(duì)生態(tài)環(huán)境及人類健康造成極大的危害 （ 李漢卿 1985） 。據(jù) 中國(guó)環(huán)境狀況公告近十來(lái)年統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)， 我國(guó)每年的廢水總排放量 （ 不包括鄉(xiāng)鎮(zhèn)工業(yè) ） 為 350 420 億噸 ，其中 工業(yè)廢水約占了 200 多 億噸。 約 1/2 的工業(yè)廢水處理達(dá)不到國(guó)家排放標(biāo)準(zhǔn)， 1/3 工業(yè)廢水未經(jīng)處理排放 到環(huán)境中 ，嚴(yán)重污染了環(huán)境。 80%以上工業(yè)廢水的含有芳香族化合物，其中含有多環(huán)芳烴和苯胺、苯酚類環(huán)境毒害性物質(zhì)的工業(yè)廢水由于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性而難以被自然降解。苯胺作為化學(xué)合成的芳香族化合物的典型代表，是重要的化工原料和精細(xì)化工中間體，廣泛應(yīng)用于染料、農(nóng)藥、制藥、橡膠等行業(yè)生產(chǎn)中 (981， 1975)；這類污染物毒性大、難降解， 已 被世界各國(guó)列為 嚴(yán)重污染環(huán)境和危害的優(yōu)先控制污染物 (et et et 有機(jī)污染物的 生物 處理具有巨大的潛力， 具有速度快、消耗低、效率高、成本低、反應(yīng)條件溫和以及無(wú)二次污染等顯著優(yōu)點(diǎn)。自然界中， 微生物是種類 繁多 ，分布 廣泛， 具有個(gè)體微小、代謝能力強(qiáng)、繁殖快、易變異和適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)； 在 物質(zhì)循環(huán)和能量轉(zhuǎn)化中起著十分重要的作用，是環(huán)境凈化的主要承擔(dān)者，在污染物的去毒、降解和礦化中起主導(dǎo)作用 （ 981） 。 微生物經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的自 然選擇，具備穩(wěn)定的特殊結(jié)構(gòu)、機(jī)能和遺傳基因，以應(yīng)答相應(yīng)的強(qiáng)烈的環(huán)境限制因子 。 可適應(yīng)性 獲得 一些有機(jī)化合物降解能力或重金屬抗性 （ 987，988， 991， 988， 987） 。 因此，開發(fā)和利用豐富的微生物資源，獲取具有高效降解能力的微生物菌株；研究降解代謝途徑 相關(guān) 基因 及其表達(dá)調(diào)控 ，提高降解微生物的耐受和有效降解污染物的能力 。在理論和實(shí)際應(yīng)用上有著十分重要的意義。 胺代謝途徑的研究進(jìn)展 許多科學(xué)家對(duì)苯胺降解菌的功能特性和遺傳機(jī)理 進(jìn)行了大量而深入的研究，揭示了微生物降解苯胺的生化機(jī)理、苯胺代謝途徑的組成和相關(guān)酶系的功能。 微生物在好氧條件下，降解途徑的第一步是苯胺氧化成鄰苯二酚。催化此步反應(yīng)的酶就是關(guān)鍵酶苯胺雙加氧酶。 1975年證明了在諾卡氏菌通過(guò)加雙氧反應(yīng)形成鄰苯二酚，他第一次提出苯胺降解的鄰位裂解（ 與 在 1990 證明了苯胺降解途徑中鄰苯二酚 1,2 雙加氧酶催化鄰位裂解開環(huán)。 1979 第一次提出苯胺降解的間位裂解（ 等人 1990 證明苯胺降解間位裂解途徑的鄰苯二酚 2,3 雙加氧酶作用。 許多芳香族化合物降解的第一個(gè)中間產(chǎn)物都是鄰苯二酚，微生物在好氧條件下，降解途徑的第一步是苯胺氧化成鄰苯二酚（圖 1而鄰苯二酚降解可以通過(guò)兩種代謝途徑，即鄰位（ 間位（ 謝途徑（圖 1分別由鄰苯二酚 1,2 雙加氧酶或鄰苯二酚 2,3雙加氧酶催化。當(dāng)苯胺通過(guò)鄰位代謝途徑時(shí)，在兩個(gè)羥基之間切割鄰苯二酚，再經(jīng)多步反應(yīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 2 產(chǎn)生三羧酸循環(huán)的中間代謝物琥珀酸和乙酰輔酶。當(dāng)苯胺通過(guò)間位代謝途徑時(shí)，在其中一個(gè)羥基的旁側(cè)切割兒茶酚，最后產(chǎn)生 丙酮酸和乙醛。假單胞菌的某些菌株可以通過(guò)間 O C O O H C O O O O C O O A n t h e a n i l i c a c i dM a n d e l i c a c i dB e n z o i c a c i dT r y t o p h a nN a p h t h a l e n eS a l i c y l i c a c i dA n t h e a c e n eP h e n o lC a t e c h o 1胺降解成鄰苯二酚是苯胺降解途徑中的關(guān)鍵第一步 1he is to C a t e c h o lm e t a p y r o c a t e c h a s e p y r o c a t e c h a s C O h y d r o x y m u c o n i c c i s , c i s - m u c o n a t C O f o r m a t ea c e t a l d e h y d e p y r u v a t u c o n o l a c t o n M e t a c l e a v a g e )( O r t h o c l e a v a g e )4- h y d r o x y k e t o v a l e r a t es e m i a l d e h y d e ( H M S )2- k e t o a d i p a t e e n o l l a c t o n u c c i n a t ea c e t y k e t o a d i p a t 香族化合物降解的共同途徑： 鄰苯二酚降解的鄰位和間位途徑 1he 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 3 位代謝途徑降解苯胺。諾卡氏菌通過(guò)雙加氧酶反應(yīng)將苯胺轉(zhuǎn)化為鄰苯二酚，進(jìn)而既可以通過(guò)鄰位代謝途徑也可以通過(guò)間位代謝途徑降解鄰苯二酚。 人 1992 年還對(duì)苯胺降解酶進(jìn)行了基因定位，發(fā)現(xiàn)假單胞菌的鄰苯二酚 2,3 雙加氧酶的基因可能定位于質(zhì)粒上。 1985 年報(bào)道，在厭氧條件下苯胺脫硫桿菌（ 先使苯胺羧基化形成對(duì)氨基苯 甲酸，然后進(jìn)行還原脫氨作用。 不同微生物降解苯胺的途徑不同，表明苯胺微生物降解代謝的多樣性。另外需要特別指出的是，上述苯胺的降解代謝途徑的研究都是通過(guò)測(cè)定細(xì)胞中所含的酶類來(lái)確定的，建立分子基礎(chǔ)上的苯胺代謝途徑仍鮮有報(bào)道。 生物中芳香族化合物降解基因簇轉(zhuǎn)錄調(diào)控的研究進(jìn)展 僅有完整的芳香族化合物代謝途徑是不夠的，由于微生物生長(zhǎng)在復(fù)雜多變、競(jìng)爭(zhēng)激烈的自然環(huán)境中，微生物必須隨環(huán)境條件的不斷改變而靈活改變自身基因的表達(dá)，從而獲得最大的代謝匯報(bào)和最小的能量損失來(lái)獲得競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)。因此，細(xì)菌的降解基因簇應(yīng)該是可 調(diào)控的，否則處于其它營(yíng)養(yǎng) 狀況時(shí)這一代謝途徑組成型表達(dá)的無(wú)效轉(zhuǎn)運(yùn)將成為競(jìng)爭(zhēng)劣勢(shì)。因此成功的代謝途徑還需要受到正確的調(diào)控，調(diào)控蛋白和啟動(dòng)子是控制代謝基因表達(dá)的關(guān)鍵組成成分。調(diào)節(jié)芳香族化合物降解途徑的調(diào)控蛋白來(lái)自原核轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白的不同家族，但發(fā)現(xiàn)大部分是都是轉(zhuǎn)錄激活蛋白，通過(guò)螺旋轉(zhuǎn)角螺旋（ 合序列與我獨(dú)自結(jié)合并激活轉(zhuǎn)錄，調(diào)控蛋白的特異性通過(guò)其與特異的誘導(dǎo)物，一般為芳香族化合物底物或者代謝中間產(chǎn)物的結(jié)合來(lái)體現(xiàn) 錄調(diào)節(jié)蛋白 錄調(diào)節(jié)蛋白（ 目前發(fā)現(xiàn)的最大的原核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白家族，也參與多種芳烴化合物的代謝調(diào)控。如 調(diào)控鄰苯二酚降解操縱子 990)； 粒 調(diào)控氯代鄰苯二酚降解操縱子 994)； 51 質(zhì)粒 調(diào)控氯代鄰苯二酚降解操縱子 991)； 調(diào)控氯代鄰苯二酚降解 操縱子 999)； 調(diào)控苯酚降解操縱子 999)；調(diào)控 2， 4解操縱子 998)?；虼亟Y(jié)構(gòu)以及代謝途徑如圖 1基因簇 位于 粒上，包括 個(gè)操縱子，受到 調(diào)控， 2， 4 二氯己二烯二酸和 2 功能相似，將 2， 4解為 3過(guò)序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，在該基因簇中存在第三個(gè)調(diào)控蛋白 是該蛋白由于被 入而失活。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 4 另外，在 調(diào)控苯甲酸降解的三個(gè)操縱子受到兩個(gè)調(diào)控蛋白 作用 (995； 998)， 代謝途徑以及 基因簇結(jié)構(gòu)如圖 1 圖1甲酸的降解主要涉及到三個(gè)操縱子的作用， 甲酸首先在 作用下生成鄰苯二酚，鄰苯二酚在 環(huán)的中間物。整個(gè)基因簇的表達(dá)受到 節(jié)蛋白的調(diào)控。 感受信號(hào)分子順，苯甲酸和順己二烯二酸變?yōu)榛罨问?，激?表達(dá)，同時(shí)也可部分激活 表達(dá)。 受信號(hào)分子順，順 康酸）變?yōu)榛罨?形式，激活 縱子的表達(dá)。同時(shí)， 因受到自身的負(fù)調(diào)控。 圖 11 1粒 1 of on 國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 5 圖 11錄調(diào)控蛋白一般以四聚體形式存在，對(duì)其調(diào)控的操縱子起轉(zhuǎn)錄激活作用。一般在操縱子上的結(jié)合位點(diǎn)有兩個(gè)，一個(gè)結(jié)合位點(diǎn) 個(gè)激活位點(diǎn) 體作用方式見(jiàn)圖 9。在無(wú)誘導(dǎo)物存在時(shí)，四聚體的 其中兩個(gè)亞基和 合，結(jié)合位點(diǎn)一般為 外兩個(gè)亞基和 合，結(jié)合位點(diǎn)在 左右，使 彎曲成一定角度。當(dāng)有誘導(dǎo)物出現(xiàn)時(shí)，調(diào)節(jié)蛋白與 結(jié)合發(fā)生滑動(dòng)，從而使 曲的角度發(fā)生變化。雖然發(fā)現(xiàn)單獨(dú)可與調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合，但 于介導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白與 合酶亞基的 結(jié)合是必須的，這一結(jié)合已經(jīng)用酵母雙雜交得到證明，通過(guò)這一結(jié)合可能增加了 控蛋白 控蛋白和 控蛋白在結(jié)構(gòu)上相似，但在氨基酸序列上有很大區(qū)別。錄調(diào)控蛋白通常起阻遏作用，但是目前發(fā)現(xiàn)的參與芳香類化合物降解調(diào)控的都是激活蛋白。例如， 的 998)，具體基因簇結(jié)構(gòu)及代謝途徑見(jiàn)圖 1的 1994）， 的 的 998),這些都間位代謝途徑的激活蛋白。但是在無(wú)誘導(dǎo)物存在的條件下它們可能起阻遏作用，這一點(diǎn)已經(jīng)在 發(fā)現(xiàn)（ 001）。參與間位途徑調(diào)控的如 參與 3-(3丙酸降解途徑的 997）， 參與 41993）等都是激活蛋白。 縱子編碼 6 個(gè)酶，負(fù)責(zé)將 3,4 二羥基苯甲酸轉(zhuǎn)化為 這個(gè) 操縱子下游有兩個(gè)操縱子， 別負(fù)責(zé)將 2 引 言 6 基苯甲酸轉(zhuǎn)化為 3,4 二羥基苯甲酸。 圖 1 3,4 二羥基苯甲酸降解基因簇和代謝途徑 1 控蛋白 目前了解最深的參與芳烴化合物降解的 族調(diào)控蛋白是 于 粒上，負(fù)責(zé) 調(diào)控甲苯間位開環(huán)途徑基因的表達(dá) (981)。 調(diào)控對(duì)羥基苯甲酸羥化酶基因 達(dá)的 2001）， 的 001）， 的 1999）， 節(jié)編碼對(duì)羥基苯甲酸單加氧酶基因 表達(dá)。 在 發(fā)現(xiàn)的 調(diào)控蛋白，調(diào)節(jié)編碼對(duì)羥基苯乙酸單加氧酶 因的表達(dá)（ 996）， 因簇（圖 1及到 44降解，包括兩個(gè)操縱子， 者產(chǎn)生單加氧酶活性使 4成 3， 4受到 正調(diào)控；后者產(chǎn)生間位裂解途徑的酶將 一步降解為參與 環(huán)的中間物。受到 負(fù)調(diào)控。當(dāng) 信號(hào)分子（ 43合成為活化形式，與 動(dòng)子結(jié)合，激活轉(zhuǎn)錄。 信號(hào)分子（ 4合而失去活性，從啟動(dòng)子上脫離 ，從而開啟基因的轉(zhuǎn)錄。 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 7 圖 1 4解基因簇和代謝途徑 1 4 控蛋白 除 了少數(shù)幾個(gè)例外，其他參與芳烴化合物降解調(diào)控的阻遏蛋白均為 族轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，如 可阻遏苯乙酸（ 解操縱子（ 1998），這些操縱子編碼有氧條件下降解芳香 類化合物的代謝基因。 因定位于 因下游，并且轉(zhuǎn)錄方向相同，但并未在同一個(gè)操縱子內(nèi)， 因編碼一個(gè)連接酶，形成苯乙酰輔酶 A，這是苯乙酸代謝的第一步。另外屬于這一家族的調(diào)控蛋白還包括中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 8 調(diào)控香草酸脫甲基酶基因 2000）； 5， 調(diào)控聯(lián)苯降解的 999； 2000； 2001）； 調(diào)控苯酚表達(dá)的 999， 2000） ， 基因簇及代謝途徑見(jiàn)圖 1 降解苯酚的基因主要分布在兩個(gè)操縱子中， 者編碼苯酚單加氧酶（ 鄰苯二酚 2， 3 雙加氧酶（ 后者編碼將鄰苯二酚降解為參與環(huán)的一系列酶。 碼功能未知的蛋白。該基因簇主要受到三個(gè)蛋白的調(diào)控， 苯酚或粘 糠酸半醛（ 誘導(dǎo)下激活 表達(dá)， 表達(dá)。但是在該基因簇中，存在一個(gè) 族轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白 調(diào)控蛋白第一次在降解苯酚的菌中發(fā)現(xiàn)。在苯酚存在時(shí)抑制 轉(zhuǎn)錄。并不抑制 轉(zhuǎn)錄。 圖 1苯酚降解基因簇和代謝途徑 1 控蛋白 目前僅發(fā)現(xiàn) 1 中 一個(gè) 族蛋白參與芳烴化合物降解的調(diào)控并起阻遏的作用， 因簇是降解對(duì)異丙基甲苯生成對(duì)異丙基苯甲酸，進(jìn)一步在 因簇的作用下生成異丁酸、丙酮酸和乙酰輔酶 A（ 1997） ，具體基因簇結(jié)構(gòu)和部分降解途徑見(jiàn)圖 1因簇包括 6 個(gè)基因 別編碼單加氧酶的氧化酶和還原酶， 碼一個(gè)乙醇脫氫酶， 碼一 個(gè)乙醛脫氫酶， 碼一個(gè)推測(cè)的外膜蛋白，在該基因簇中的功能未知。 碼一個(gè)乙酰輔酶 A 合成酶，在該代謝途徑中的功能未知。該基因簇受到 調(diào)控， 為一個(gè)阻遏蛋白抑制 縱子的表達(dá)，受到信號(hào)分子對(duì)異丙基苯甲酸（而不是對(duì)異丙基甲苯）的誘導(dǎo)開啟基因的表達(dá)。 成分信號(hào)家族調(diào)控蛋白 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院碩士學(xué)位論文 引 言 9 雙成分信號(hào)轉(zhuǎn)錄體系包括兩個(gè)成分，一個(gè)起感知作用的組氨酸激酶，一個(gè)是信號(hào)響應(yīng)調(diào)控蛋白，組氨酸激酶 N 末端區(qū)域探測(cè)信號(hào)并催化中部一個(gè)保守組氨酸殘基的 酸基隨后經(jīng)一個(gè)可逆的 酸中繼體系傳遞給相應(yīng)的調(diào)控蛋白的 活的調(diào)控蛋白隨后介導(dǎo)相關(guān)基因表達(dá)（ 1994； 2004）。參與芳烴化合物降解調(diào)控的雙成分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)體系有 1 和 統(tǒng)（ 1997；1999），調(diào)控甲苯降解操縱子 表達(dá)， 因位于該操縱子下游并同向轉(zhuǎn)錄，其它還有在 調(diào)控甲苯 4統(tǒng) （ 2002）（圖 1 調(diào)控聯(lián)苯降解的1997）， 調(diào)控乙烯降解的 O， 2002）等。 在該