密級： 論文編號： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 學(xué)位論文 北京鴨蛋氨酸需要量、生物學(xué)效價(jià) 及毒性的研究 I 摘 要 本論文通過三個(gè)試驗(yàn)在研究確定生長后期北京鴨蛋氨酸需要量的基礎(chǔ)上從非毒性添加水平和毒性添加水平兩角度研究了北京鴨蛋氨酸羥基類似物相對于蛋氨酸的生物學(xué)效價(jià)。同時(shí)，從氧化損傷 、采食量調(diào)控及 基化的角度探討了蛋氨酸及其羥基類似物毒性的中毒機(jī)理，最終為肉鴨養(yǎng)殖生產(chǎn)中安全高效利用蛋氨酸源提供試驗(yàn)依據(jù)。 試驗(yàn)一研究了蛋氨酸對生長后期北京鴨生產(chǎn)性能和胴體品質(zhì)的影響。結(jié)果表明，飼料中添加適量蛋氨酸可顯著提高生長后期北京鴨日增重和胸肉率，顯著降低腹脂率（ 采用非線性模型斜率比法，以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)，以日增重為評價(jià)指標(biāo)， 7 21 日齡和 7 42 日齡 對于 8%和 67%；以料肉比為評價(jià)指標(biāo)， 7 21 日齡和 7 42 日齡 對于 6%和 44%。 試驗(yàn)三比較研究了過量 北京鴨毒性及其中毒機(jī)理。結(jié)果表明，過量 可顯著降低北京鴨日增重、采食量和胸肉率，且 鴨生長抑制程度低于等摩爾水平 蛋氨酸源攝入量為評價(jià)指標(biāo)， 3 6 周齡北京鴨對蛋氨酸的最大耐受量為： 天只 （ 千克體重 天） ，而北京鴨對 等摩爾水平 有更高的耐受量。同時(shí)，采用線性模型斜率比法，以采食量為評價(jià)指標(biāo)，在毒性 添加水平 下，對于 生物學(xué)效價(jià)為 50%。在采食量激素調(diào)控方面，飼料中添加過量 6 周齡鴨血漿瘦素、胰島素水平均未產(chǎn)生顯著影響 (P而在飼料中添加2%顯著提高 6 周齡鴨血漿神經(jīng)肽 Y 水平（ to on LM 8% 7%, as 6% 4%, as to LM In LM % in 而對 3 7周齡北京鴨平均日增重產(chǎn)生顯著影響（ 隨日糧蛋氨酸水平升高，胸肉率表現(xiàn)出 先升高后降低的顯著二次曲線相關(guān)（圖 2。同時(shí)，與對照組 (相比， 氨酸顯著降低了北京鴨腹脂率 (而對天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶影響顯著 (。這與 （ 1986）和羅清堯和高振川（ 2000）在北京鴨方面的研究結(jié)果相一致。 另一方面，在醫(yī)學(xué)臨床診斷中，血漿總蛋白、白蛋白是反映肝臟蛋白質(zhì)合成的指標(biāo)。長期肝損 傷 可導(dǎo)致血漿總蛋白、白蛋白降低（宋國培， 2003）。而血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶是反映肝功能的敏感指標(biāo)，其 活性 與 肝臟受損程度成正相關(guān)（ 麻曉林等，2003）。這三種酶主要存在于肝、腎、心肌等組織器官的細(xì)胞中。當(dāng)肝臟存在損害時(shí)，細(xì)胞膜受損，細(xì) 胞內(nèi)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶將釋放到血液中，進(jìn)而導(dǎo)致血漿或血清中這三種酶活性的升高。為此，考慮到本試驗(yàn)中北京鴨日增重隨蛋氨酸水平表現(xiàn)出先升高后降低的變化規(guī)律（圖 2,本試驗(yàn)通過測定血漿總蛋白、白蛋白、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶反映鴨的健康狀況。本試驗(yàn)結(jié)果表明，隨蛋氨酸水平升高， 7 周齡北京鴨血漿丙氨酸轉(zhuǎn)移酶活性表現(xiàn)出升高的趨勢，而天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性在 平時(shí)顯著提高（ 同時(shí)，飼料中添加 提高北京鴨采食量的趨勢，但無明顯規(guī)律。其中，相對于對照組， 顯著提高 7 21 日齡北京鴨采食量， 顯著提高 7 42 日齡北京鴨采食量（ 而在 效蛋氨酸添加水平下， 采食量的影響優(yōu)于 而，二因子方差分析表明，以等摩爾濃度為基礎(chǔ)， 間在7 21 日齡及 7 42 日齡北京鴨平均日增重、平均日采食量和料肉比上不存在顯著差異（ P 氨酸及蛋氨酸羥基類似物對北京鴨胴體品質(zhì)的影響 如表 3因子方差分析表明， 2日齡北京鴨胸肉率、腿肉率、皮脂率和腹脂率均未產(chǎn)生顯著影響 （ P同時(shí)， 單因子 和雙因子 方差分析 均 表明， 以等摩爾濃度為基礎(chǔ)， 2日齡北京鴨胸肉率、腿肉率、皮脂率和腹脂率上不存在 顯著 差異（ P 3. 氨酸及蛋氨酸羥基類似物對北京鴨血液生化指標(biāo)的影響 如表 3示，單因子方差分析表明， 42 日齡北京鴨 血漿尿酸、總蛋白、白蛋白、丙氨酸氨基酸轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶 均未產(chǎn)生顯著影響（ P同時(shí)， 單因子 和雙因子 方差分析 均 表明， 以等摩爾濃度為基礎(chǔ)， 間在 42 日齡北京鴨 血漿尿酸、總蛋白、白蛋白、丙氨酸氨基酸轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶上均不存在 顯著 差異（ P 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 北京鴨蛋氨酸 及其 羥 基類似物相對生物學(xué)效價(jià)的研究 32 表 3氨酸及蛋氨酸羥基類似物對 7 21 日齡北京鴨生產(chǎn)性能的影響 on 1 of 氨酸源 加水平 %) 日增重 g/只天） 采食量 g/只天） 料肉比 照 0 值 同時(shí)， 單因子 和雙因子 方差分析 均 表明， 以等摩爾濃度為基礎(chǔ)， 間在 6 周齡北京鴨血漿丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶 上均不存在 顯著 差異（ P 表 3明， 6 周齡北京鴨 肝臟 超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶 產(chǎn)生顯著影響（ 其中，與對照組相比， 著提高了鴨肝臟中超氧 化物歧化酶活性（ 表 3氨酸 及蛋氨酸羥基類似物 對 6 周齡北京鴨肝臟丙二醛、超氧化物歧化酶 及 谷胱甘肽過氧化物酶的影響 on 氨酸源 加水平 %) 丙二醛 mg 超氧化物歧化酶 U/ mg 谷胱甘肽過氧化物酶 U/ mg 對照 0 值 氨酸源的比較 值 肩號上 不同小寫字母表示差異顯著（ 但 北京鴨胸肉率、腿肉率、腹脂率、批脂率等胴體品質(zhì)均未產(chǎn)生顯著影響，且在等摩爾添加水平上 存在顯著差異（表 3這與上述關(guān)于蛋氨酸及蛋氨酸羥基類似物顯著影響 肉禽胴體品質(zhì)的研究報(bào)道不一致。同時(shí)，該結(jié)果與第二章試驗(yàn)結(jié)果不一致，其差異可能與兩種試驗(yàn)設(shè)計(jì)中試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧蛋氨酸缺乏程度不同有關(guān)。 此外， 在以 玉米 實(shí)際日糧中存在的天然蛋氨酸水平往往在肉禽蛋氨酸需要量中占有相當(dāng)高的比例，進(jìn)而 可能 影響 添加效應(yīng) 。 為減少或排除 試驗(yàn)基礎(chǔ) 日糧蛋氨酸 水平 對試驗(yàn)結(jié)果的影響， 1982） 與 984)在蛋氨酸水平低于玉米豆粕型日糧的半純合日糧 中 按 相同 摩爾濃度添加 察到 提高肉仔雞體增重和降低料肉比方面顯著優(yōu)于 之同時(shí)，在以 為唯一日糧蛋氨酸源且按等摩爾添加的純合日糧中， （ 1982）和 （ 1984）均發(fā)現(xiàn) 提高肉仔雞或來航雞日增重和降低料肉比方面顯著優(yōu)于 1980） 在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 北京鴨蛋氨酸 及其 羥基類似物相對生物學(xué)效價(jià)的研究 40 含 半純合試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧中分別等摩爾濃度添加 L、 相應(yīng)構(gòu)型 提高肉 仔雞 8 14 日齡肉仔雞增重方面 間不存在顯著差異，但其在含 無 純合試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧中分別等摩爾濃度添加 L、 相應(yīng)構(gòu)型現(xiàn)，在提高肉仔雞 8 16 日齡肉仔雞增重方面 在顯著差異。由此可見，基礎(chǔ)日糧蛋氨酸水平過高可能是導(dǎo)致本試驗(yàn)和大多數(shù)采用實(shí)際日糧的試驗(yàn)報(bào)道得出 提高肉禽生產(chǎn)性能和胴體品質(zhì)方面不存在顯著差異這一結(jié)論的重要原因。 氨酸 及蛋氨酸羥基類似物 對北京鴨血液生化指標(biāo)的影響 在醫(yī)學(xué)上，血漿 中總蛋白、白蛋白、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、和乳酸脫氫酶目前被廣泛應(yīng)用于肝功能的臨床診斷。當(dāng)肝臟損傷時(shí)，血漿總蛋白、白蛋白降低，血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶和乳酸脫氫酶活性升高（ 麻曉林等， 2003） 。因此，以上血液生化指標(biāo)被用于評價(jià)本試驗(yàn)中鴨生理狀況。本試驗(yàn)中，飼料中添加 北京鴨血漿總蛋白、白蛋白、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、和乳酸脫氫酶未產(chǎn)生顯著影響（ P 這也可能是由于本試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧蛋氨酸水平略高于第二章而蛋氨酸最大添加量低于第二章。 同時(shí)，這也 表明本試驗(yàn) 最大添加量未超出鴨能承受的正常生理范圍。 另一方面，高半胱氨酸是蛋氨酸代謝的中間產(chǎn)物。蛋氨酸的攝入往往會導(dǎo)致動物血漿高半胱氨酸水平的升高。無論是靜脈注射 ,還是自由采食，斷奶仔豬血漿高半胱氨酸水平均隨蛋氨酸攝入量的升高而呈顯著線性升高（ ， 2004）。 （ 2004）在含 礎(chǔ)日糧中添加 顯著提高 21 日齡北京鴨血漿高半胱氨酸水平。然而，本試驗(yàn)尚未觀察到 7 周齡北京鴨血漿高半胱氨酸水平產(chǎn) 生顯著影響，且無明顯規(guī)律。 2006）發(fā)現(xiàn)，血漿高半胱氨酸是反映蛋氨酸對鼠毒性的的敏感指標(biāo)，當(dāng)日糧蛋氨酸水平達(dá)到中毒劑量時(shí)才引起鼠血漿高半胱氨酸水平顯著升高。因此，血漿高半胱氨酸水平的不顯著變化與本試驗(yàn)中兩種蛋氨酸源的添加 水平較低 有關(guān)。 氨酸 及蛋氨酸羥基類似物 對北京鴨抗氧化機(jī)能的影響 丙二醛是體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的穩(wěn)定終產(chǎn)物，其含量高低反映體內(nèi)自由基水平及脂質(zhì)過氧化程度，而谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶作為清除體內(nèi)氧自由基的酶，其活性高低間接反映了機(jī)體清除自由基的能力。目前 ,蛋氨酸對動 物氧化機(jī)能的影響僅有少量報(bào)道。 (1999)通過飲水方式給鼠補(bǔ)充蛋氨酸表明 ,在短時(shí)間內(nèi) (48 小時(shí) )，蛋氨酸可顯著提高鼠心臟中谷胱甘肽過氧化物酶、超氧化物歧化酶、及過氧化氫酶活性顯著升高。其中，谷胱甘肽過氧化物酶平隨其活性升高而升高，表現(xiàn)出蛋氨酸對其轉(zhuǎn)錄水平上的調(diào)控。聶偉（ 2006）研究表明，與采食蛋氨酸充足飼料肉仔雞及蛋雞中血清脂質(zhì)過氧化物水平顯著低于采食蛋氨酸缺乏飼料的肉仔雞或蛋雞。但對血清總抗氧化力未產(chǎn)生顯著影響。在本試驗(yàn)中，與對照組相比，著提高了北京鴨 肝臟中谷胱甘肽過氧化物酶和超氧化物歧化酶活性，而 與之 等摩爾對應(yīng)的 顯著提高了超氧化物歧化酶活性。因此，結(jié)合本試驗(yàn)結(jié)果與先前試驗(yàn)報(bào)道報(bào)道，在飼料中添加適量水平蛋氨酸 可能 對家禽抗氧化機(jī)能有一定的改善作用。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 北京鴨蛋氨酸 及其 羥基類似物相對生物學(xué)效價(jià)的研究 41 氨酸羥基類似物相對于蛋氨酸 的 生物學(xué)效價(jià) 在本試驗(yàn)中，經(jīng)單因子和二因子方差分析及平均數(shù)多重比較表明， 以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)， 體品質(zhì)、血液生化指標(biāo)、抗氧化機(jī)能方面均不存在顯著差異（ P 然而， 方差分析僅能得出定 性的結(jié)論，而 兩種 蛋氨酸源對肉禽生長效應(yīng)的影響，還應(yīng)體現(xiàn)在不同水平下 兩種 蛋氨酸源 對 肉禽生長 效應(yīng)的影響 幅度上。 目前，斜率比法是評定 物學(xué)效價(jià)主要定量方法，其通過斜率的變化反映出兩種蛋氨酸源對家禽生長效應(yīng)的影響幅度。論文第一章總結(jié)了大量關(guān)于斜率比法在估測肉禽蛋氨酸羥基類似物相對于蛋氨酸生物學(xué)效價(jià)方面應(yīng)用的實(shí)驗(yàn)報(bào)道 (表 1 目前 ，利用葡萄糖作為稀釋劑將 99 5%而將其與 99 品 質(zhì)量濃度添加至肉禽日糧中用于 評價(jià) 斜率比法在評定蛋氨酸羥基類物生物學(xué)效價(jià)中的有效性 (2002； 2005a,b)。 第一章對相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析表明， 以日增重和料肉比為評價(jià)指標(biāo)， ,65%9%3和56，且兩者與 65之間不存在顯著差異 （表 11，這證實(shí)了斜率比法在評定蛋氨酸源相對生物學(xué)效價(jià)的有效性。 然而，斜率 比法對蛋氨酸源生物學(xué)效價(jià)的估測 可能 會受到 2006）通過對相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析認(rèn)為，隨添加水平的升高， 2006）為此提供了試驗(yàn)依據(jù)。在 2006）的試驗(yàn)中，肉仔雞體增重隨 體增重隨 而，家禽對兩種蛋氨酸源不同的生長反應(yīng)效 應(yīng)與試驗(yàn)中設(shè)定的蛋氨酸源添加范圍密切相關(guān)。 2007）在火雞方面的研究表明，以等摩爾濃度為基礎(chǔ)，當(dāng)有效蛋氨酸添加范圍為 0 ，體增重隨 體增重隨 是，當(dāng)有效蛋氨酸添加范圍為 0，體增重隨 體增重隨 此， 在本試驗(yàn)中， 考慮到家禽生產(chǎn)性能隨日糧蛋氨酸水平升高表現(xiàn)出先升高后降低的變化規(guī)律，結(jié)合 第二章研究結(jié)果，設(shè)定蛋氨酸添加量在 0 保證 本章采用線性和非線性模型斜率比法進(jìn)行回歸分析均達(dá)到顯著水平，進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)。 本試驗(yàn)采用線性模型和非線性模型斜率比法以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)研究了 對于 生物學(xué)效價(jià)。盡管線性模型獲得的生物學(xué)效價(jià)高于非線性模型所獲得的值，但非線性模型所達(dá)到的顯著性水平優(yōu)于線性模型，這表明非線性模型更適合本試驗(yàn)中 對于 物學(xué)效價(jià)的估測（表 33依據(jù)非線 性模型斜率比法，以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)，以日增重和料肉比為評定指標(biāo)， 7 21 日齡 對于 物學(xué)效價(jià)分別為78%和 66%， 7 42 日齡 對于 物學(xué)效價(jià)分別為 67%和 44%。且以日增重為評定指標(biāo)獲得的 對生物學(xué)效價(jià)高于以料肉比為評定指標(biāo)獲得的 對生物學(xué)效價(jià)。在第一章表 1肉仔雞 對于 物學(xué)效價(jià)方面相關(guān)文獻(xiàn)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析表明，以日增重和料肉比為評定指標(biāo)，肉仔雞 對于中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第三章 北京鴨蛋氨酸 及其 羥基類似物相對生物學(xué)效價(jià)的研究 42 物 學(xué)效價(jià)分 別為 。由此可見，北京鴨 對于物學(xué)效價(jià)與肉仔雞的相當(dāng)。 另一方面，考慮到 北京鴨產(chǎn)生相對獨(dú)立的生長效應(yīng)，本試驗(yàn)采用折線法對獲得最佳生產(chǎn)性能所需蛋氨酸源添加 水平 進(jìn)行估測。其研究結(jié)果表明，以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)，獲得最佳日增重和料肉比所需 加量低于 加量（表 3（ 2006）綜合分析近 50 年內(nèi)已發(fā)表的 100 余個(gè)蛋氨酸 與 蛋氨酸羥基類似物比較研究相關(guān)的肉仔雞 試驗(yàn)并對其試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析表明，達(dá)到肉仔雞最大體增重所 需 添加量分別為 而達(dá)到最佳飼料轉(zhuǎn)化效率所需 添加量分別為 本試驗(yàn)結(jié)果與其研究結(jié)果相一致。這也從另一角度表明，采食 糧家禽比采食 禽能更快達(dá)到最佳生產(chǎn)性能。 結(jié) 用方差分析和平均數(shù)多重比較表明，以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)，以生產(chǎn)性能、胴體品質(zhì)、血液生化及抗氧化機(jī)能為評定指標(biāo)， 間不存在顯 著差異。 用非線性模型斜率比法，以等摩爾添加水平為基礎(chǔ)，以日增重和料肉比為評 價(jià) 指標(biāo)， 7 21 日齡 對于 物學(xué)效價(jià)分別為 78%和 66%， 7 42 日齡 對于 物學(xué)效價(jià)分別為 67%和 44%。且以日增重為評 價(jià) 指標(biāo)獲得的 對生物學(xué)效價(jià)高于以料肉比為評 價(jià) 指標(biāo)獲得的 對生物學(xué)效價(jià)。 日增重為評價(jià)指標(biāo) 采用折線模型估測 量添加量表明， 達(dá)到最佳增重所需 加量低于 糧中添加適量 能 對北京鴨抗氧化機(jī)能有一定改善作用。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第 四 章 蛋氨酸及其羥基類似物對北京鴨毒性及中毒機(jī)理的研究 43 第四章 蛋氨酸 及其 羥基類似物對北京鴨毒性 及 中毒機(jī)理 的研究 過量蛋氨酸及其羥基類似物對家禽生長均可抑制家禽生長。 在飼料中添加高于 1%水平蛋氨酸及 其 羥基類似物均可顯著降低肉仔雞日增重和采食量（ 1975b; 1980; 1982; , 2004）。 然而 ，蛋氨酸與蛋 氨酸羥基類似物毒性方面的研究主要集中在肉仔雞和火雞方面，而肉鴨蛋氨酸及 其 羥基類似物毒性方面的研究至今未見報(bào)道 。同時(shí)，蛋氨酸及其羥基類似物毒性的中毒機(jī)理方面的研究僅有少量報(bào)道。 綜合相關(guān)文獻(xiàn)，氧化損傷可能是蛋氨酸毒性的中毒機(jī)理。醫(yī)學(xué)研究表明， 攝入過量蛋氨酸往往會導(dǎo)致鼠血漿及肝臟中脂質(zhì)過氧化物水平升高，而超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性降低（ ， 2006；唐漾波和歐陽佩珍， 1994；馬春桃和黎明等， 2006；李亮等， 2006）。 而這在家禽中未見相關(guān)報(bào)道。此外， 度甲基化可能是蛋氨酸毒性的分子作用 機(jī)理。在植物方面， 徐寶華（ 2005）研究 基化對小麥初生根生長發(fā)育的影響表明，隨培養(yǎng)液中 生根生長受到抑制。在動物方面，白堅(jiān)石等（ 2001）通過細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)表明，高水平 胞（早幼粒白細(xì)胞病細(xì)胞）基因組 基化水平升高。 （ 1993）認(rèn)為蛋氨酸毒性與組織中 其研究中，與采食正常對照日糧 (相比，采食 糧鼠采食量和體增重顯著降低的同時(shí)，其肝臟、腎臟、小 腸、骨骼肌中 然而，高蛋氨酸是否通過提高機(jī)體內(nèi) 平進(jìn)而提高 基化水平至今尚未見報(bào)道。另外，采食量降低是過量蛋氨酸抑制動物生長的重要原因。而激素在家禽采食量調(diào)控中起非常重要作用 （ 003） 。過量蛋氨酸是否通過影響采食量調(diào)控相關(guān)激素而抑制動物采食還有待研究。因此，本章試驗(yàn)通過研究蛋氨酸及其羥基類似物對北京鴨生產(chǎn)性能、胴體品質(zhì)、血液生化、抗氧化機(jī)能及基化的影響，一方面比較研究蛋氨酸及其羥基類似物毒性，另一方面從采食量調(diào)控、氧化損傷及 基化的角度探討蛋氨酸及其羥基類似物毒性的中毒機(jī)理，最終 為肉鴨養(yǎng)殖生產(chǎn)中合理安全使用蛋氨酸 源 提供 試驗(yàn) 依據(jù)。 料與方法 驗(yàn)設(shè)計(jì) 單因子完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。 5 個(gè)日糧處理。 1 個(gè)基礎(chǔ)日糧對照組， 2 個(gè)蛋氨酸添加組 （ 1%, 2%） ， 2 個(gè)蛋氨酸羥基類似物添加組 (。 400 只 1 日齡健康雄性北京鴨采用常規(guī)飼料飼養(yǎng)至 21 日齡，稱所有鴨只個(gè)體重，剔除部分體重最大和最小鴨只。依據(jù)每處理每重復(fù) 試驗(yàn) 鴨初始體重基本一致的原則，將 320 只 21 日齡雄性北京鴨隨機(jī)分為 5 個(gè)處理，每處理 8 個(gè)重復(fù)，每重復(fù) 8只 鴨，每處理組鴨隨機(jī)飼喂不同的試驗(yàn)日糧。 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第 四 章 蛋氨酸及其羥基類似物對北京鴨毒性及中毒機(jī)理的研究 44 驗(yàn)動物 400 只 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院北京畜牧獸醫(yī)研究所選育的 體重基本一致、健康的 1 日齡同一品系雄性北京鴨 。 驗(yàn)日糧 生長前期（ 0 3 周齡）常規(guī)日糧和生長后期（ 3 6 周齡）試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧均參考 1994）肉鴨營養(yǎng)需要，其原料組成及營養(yǎng)水平見表 4驗(yàn)設(shè) 5個(gè)日糧處 理。其中， 1種日 表 4長前期常規(guī)日糧和生長后期試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧組成 (%) of 糧組成 3 周齡常規(guī)日糧 0 6 周齡試驗(yàn)基礎(chǔ)日糧 3-6 米 粕 4 鹽 酸氫鈣 粉 混料 養(yǎng)水平 代謝能 MJ/蛋白 氨酸 氨酸 +胱氨酸 氨酸 植酸磷 預(yù)混料為每千克飼料提供 : 銅 , 10鐵 , 60 鋅 , 60 錳 , 80 硒 , 碘 , 0.2 鉻 , 化膽堿 , 1000維生素 A, 10000維生素 3000維生素 E, 20維生素 2硫胺素 , 2核黃素 , 8維生素 4維生素 泛酸 , 20煙酸 , 50葉 酸 , 1生物素 , 2預(yù)混料為每千克飼料提供 : 銅 , 10鐵 , 60 鋅 , 60 錳 , 80 硒 , 碘 , 0.2 鉻 , 化膽堿 , 750維生素 A, 8000維生素 3000維生素 E, 20維生素 2硫胺素 ,核黃素 , 8維生素 3維生素 泛酸 , 10煙酸 , 50葉酸 , 1生物素 , 3依據(jù)雞飼料原料表觀代謝能值進(jìn)行計(jì)算 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第 四 章 蛋氨酸及其羥基類似物對北京鴨毒性及中毒機(jī)理的研究 45 糧為基礎(chǔ)日糧對照組， 2 種日糧為基礎(chǔ)日糧分別添加 1、 2 氨酸（ 制而成。 2種日糧為基礎(chǔ)日糧分別等摩爾添加 氨酸羥基類似物游離酸（ A）。 加量均以等摩爾濃度為基礎(chǔ)。有效蛋氨酸添加水平設(shè)定為 0、 1%、2%。所有日糧均為顆粒飼料。 養(yǎng)管理 試驗(yàn)鴨 網(wǎng)上平養(yǎng)，自由采食與飲水， 24 小時(shí)光照， 0 3 周齡采用常規(guī)飼料飼養(yǎng)， 3 6 周齡采用試驗(yàn)日糧分組飼養(yǎng)。其 他按常規(guī)飼養(yǎng)管理進(jìn)行。 品采集及試驗(yàn)指標(biāo)測定 分別 于 21 和 42 日齡，分別稱取各處理組各重復(fù)鴨只空腹體重和剩余飼料重，計(jì)算 21 42日齡鴨平均日增重，平均日采食量，料 肉比。 于 42 日齡， 分別 從 每處理 每 重復(fù) 中 取與該處理該重復(fù)平均體重相當(dāng)?shù)镍?2 只，稱個(gè)體重，心臟采血 10入 4 凝的玻璃試管 ， 3000 轉(zhuǎn)分鐘 離心制備血漿 ， 料離心管分裝、 冷凍保存以備分析。將采血后鴨只放血處死 ，褪毛，開膛，取 一定量肝臟樣品 ，5料離心管分裝、液氮速凍， 冷凍保存以備分析。 同時(shí)， 剝離鴨只皮脂、腹脂、胸肌、腿肌并稱其鮮重 。胸肉率、腿肉率、腹脂率、皮脂率 均按其鮮重占屠宰前活重的百分比進(jìn)行計(jì)算 。 同時(shí)， 于 42 日齡 ,從每處理組另外隨機(jī)抽取鴨 5 只 ,采用含 1凝劑的注射器心臟采血5分混勻 后， 血液注入 料離心管 中， 分裝， 冷凍保存 以備 取。 凝劑配制參考分子克隆實(shí)驗(yàn)指南（第二版）（ 1992）。 血漿總蛋白、白蛋白、尿酸、乳酸脫氫酶、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶采用中生北控生物科技股份有限公司生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒在 自動生化分析儀上進(jìn)行測定。 血漿和肝臟中 丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒進(jìn)行在 u530 分光光度計(jì)上進(jìn)行測定。 血漿高半胱氨酸參考謝明（ 2003）方法，采用柱前熒光衍生高效液相色譜法在 效液相色譜系統(tǒng)中進(jìn)行測定。 血漿瘦素、胰島素、黑色素細(xì)胞刺激素、神經(jīng) 肽 Y 水平采用人源性放射免疫法試劑盒進(jìn)行測定，相應(yīng)的試劑盒購自北京華英生物技術(shù)研究所。用于測定放射性計(jì)數(shù)的 。 血液基因組 考 分子克隆實(shí)驗(yàn)指南（第二版）（ 1992）所介紹方法進(jìn)行提取，血液基因組 取后， 1 瓊脂糖 凝膠電泳檢測其完整性，隨后，將每處理組 品合并制備混和樣品用于 將每處理組 血液基因組 和樣品 在 260檢測其濃度后，取相同濃度 用寶生生物工程（大連）有限公司生產(chǎn)的 種限制性內(nèi)切酶按以下反應(yīng)體系 （表 4在 上酶切 6 小時(shí)后， 1%瓊脂糖凝膠電泳，于凝膠成像系中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第 四 章 蛋氨酸及其羥基類似物對北京鴨毒性及中毒機(jī)理的研究 46 統(tǒng)下觀察酶切圖 譜并攝像。 表 4應(yīng)體系 -2 l 10 L l 1 g 滅菌水 補(bǔ)充至 20 l 表 4應(yīng)體系 -2 l 10 L l l 1 g 滅菌水 補(bǔ)充至 20 l 計(jì)分析 各處理組 試驗(yàn)數(shù)據(jù)表示成平均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)差。試 驗(yàn)數(shù)據(jù)采用國際通用 計(jì)軟件進(jìn)行方差分析 。 一方面試驗(yàn)數(shù)據(jù)按完全隨機(jī)設(shè)計(jì)進(jìn)行單因子方差分析，一方面剔除對照組 數(shù)據(jù) 后 對試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行 2 2（ 2 個(gè)蛋氨酸源： 2 個(gè)有效蛋氨酸添加水平： 1%, 2%） 二因子方差分析 以比較兩種蛋氨酸源之間差異 。以 。同時(shí)，加組北京鴨 入量顯著高于 加組中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文 第 四 章 蛋氨酸及其羥基類似物對北京鴨毒性及中毒機(jī)理的研究 47 （ 與對照組相比， 飼料中添加 2%高 了 6周齡北京鴨 血漿丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶 活性 和高半胱氨酸 水平 ；飼料中添加2%周齡北京鴨 血漿白蛋白水平。同時(shí)， 2%著高于 等摩爾添加水平 ， 2%著 低 于 等摩