1、 第四章第四章 藥物定量分析與藥物定量分析與 分析方法驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證 第一節(jié)第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法 一、概述一、概述 1.1.為什么要對(duì)定量分析的樣品進(jìn)行前處理？為什么要對(duì)定量分析的樣品進(jìn)行前處理？ 含鹵素有機(jī)藥物含鹵素有機(jī)藥物 R-X （F，Cl, Br, I ） 金屬有機(jī)藥物金屬有機(jī)藥物 R-O-Me（有機(jī)酸或酚的（有機(jī)酸或酚的 含金屬有機(jī)藥物含金屬有機(jī)藥物 金屬鹽；結(jié)合不牢固）金屬鹽；結(jié)合不牢固） 有機(jī)金屬藥物有機(jī)金屬藥物 R-Me （結(jié)合牢固）（結(jié)合牢固） 2. 常用的處理方法常用的處理方法 不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 藥物分析中常

2、用的分析方法藥物分析中常用的分析方法 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法含鹵素有機(jī)藥物含鹵素有機(jī)藥物 含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)含鹵素有機(jī)藥物系指藥物分子結(jié)構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相構(gòu)中所含鹵素直接與芳環(huán)或脂肪鏈相連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸連者，而不包括某些有機(jī)藥物的鹵酸鹽或氫鹵酸鹽鹽或氫鹵酸鹽結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：CX（一）鹵原子的活潑性（一）鹵原子的活潑性1. 1. 鹵原子與碳原子直接相連，鹵原鹵原子與碳原子直接相連，鹵原子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)子的活潑性和它直接相連的烴基的結(jié)構(gòu)有很大關(guān)系構(gòu)有很大關(guān)系（1）乙烯型鹵和芳鹵）乙烯型鹵和芳鹵 不活潑不活潑CH2CH X

3、X（2）烯丙型鹵和芐鹵）烯丙型鹵和芐鹵 活潑活潑CH2XCH2CH CH2X（3）鹵代烷型）鹵代烷型 介于兩者之間介于兩者之間CH2CH (CH2)nX n22. 分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù) 分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)越多，分子中所含鹵原子的個(gè)數(shù)越多，活潑性越強(qiáng)，特別是同一碳上含多個(gè)活潑性越強(qiáng)，特別是同一碳上含多個(gè)鹵原子或一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)鹵原子時(shí)，鹵原子或一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)鹵原子時(shí)，活潑性增強(qiáng)更加明顯活潑性增強(qiáng)更加明顯3. 鹵素的種類鹵素的種類IBrClF常見的含鹵素有機(jī)藥物常見的含鹵素有機(jī)藥物CCH3OHCH3CCl3CCl3Cl3C三氯叔丁醇三氯叔丁醇六氯對(duì)二甲苯六氯對(duì)二甲苯C

4、OOHIIINHCOCH3CH3CONH泛影酸泛影酸COOHIIINH C(CH2)4OC NHOCOOHIII膽影酸膽影酸COOHIIICONHCH3CH3CONH碘他拉酸碘他拉酸IH2NIICH2CHCOOHC2H5碘番酸碘番酸碘苯酯碘苯酯CHCH3(CH2)8COOCH2CH3I鹽酸胺碘酮鹽酸胺碘酮OCH2CH2CH2CH3COOCH2CH2N(C2H5)2IIHClHNNFNC2H5OCOOH諾氟沙星諾氟沙星OFFCH3HHOHCH3CCH2OCOCH3OOOCCH3CH3醋酸氟輕松醋酸氟輕松BrBrBrBrCCOOHOSO3NaSO3NaOH磺溴酞鈉磺溴酞鈉含金屬有機(jī)藥物的分析含金屬

5、有機(jī)藥物的分析 含金屬的有機(jī)藥物：含金屬的有機(jī)藥物：金屬原子不與碳金屬原子不與碳原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的原子直接相連，通常為有機(jī)酸及酚的金屬鹽或配位化合物金屬鹽或配位化合物 如如酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、酒石酸銻鉀、葡萄糖酸銻鈉、富馬酸亞鐵富馬酸亞鐵 有機(jī)金屬藥物有機(jī)金屬藥物：金屬原子直接與碳：金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固原子以共價(jià)鍵相連，結(jié)合比較牢固 如如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利CCHOCHOOOCOOSbSbOOCOOOCHOCHC2K+ 3H2O酒石酸銻鉀酒石酸銻鉀CCHCCOOOFeOMg(C17H35COO)2硬脂酸鎂硬脂酸鎂富馬酸亞

6、鐵富馬酸亞鐵CH2OHCHOHCHOCHOCHOCOO-SbOHOSbO-OCHCHCHCCHOOCH2-OOHOHONa39H2O葡萄糖酸銻鈉葡萄糖酸銻鈉NHCONH2AsOOHHO卡巴胂卡巴胂HgOCOCH3醋酸苯汞醋酸苯汞OCH2COONaCONHCH2CHCH2HgOHOCH3汞撒利汞撒利HCCOOCCH OOFe（二）經(jīng)水解后測(cè)定法（二）經(jīng)水解后測(cè)定法 1. 直接回流后測(cè)定法直接回流后測(cè)定法 例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定例如：三氯叔丁醇的含量測(cè)定 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH (CH3)2CO +3NaCl + HCOONa +2H2O NaCl + AgNO3 Ag

7、Cl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCN AgSCN + NH4NO3 2. 用硫酸水解后測(cè)定法用硫酸水解后測(cè)定法 例如：硬脂酸鎂的含量測(cè)定例如：硬脂酸鎂的含量測(cè)定 Mg(C17H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2C17H35COOH H2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2H2O （三）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法（三）經(jīng)氧化還原后測(cè)定法 1. 堿性還原后堿性還原后測(cè)定測(cè)定 例如：泛影酸的含量測(cè)定例如：泛影酸的含量測(cè)定 2. 酸性還原后酸性還原后測(cè)定測(cè)定 例如：碘番酸的含量測(cè)定例如：碘番酸的含量測(cè)定 Zn還原還原 后銀量法后銀量法 COOHIIINHCOCH3CH3C

8、ONHCOOHH2NNH2+ 11NaOH + 3Zn+ 3NaI + 2CH3COONa + 3NaZnO2 + 3H2O NaI + AgNO3 AgI + NaNO3 3. 利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量 （1）含銻藥物）含銻藥物 例如：葡萄糖酸銻的含量測(cè)定例如：葡萄糖酸銻的含量測(cè)定 Sb5+ + 2KI Sb3+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6 （2）含鐵藥物）含鐵藥物 2Fe3+ + 2KI 2Fe2+ + 2K+ + I2 I2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6H

9、+ 三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 濕法破壞濕法破壞 藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有藥物分析中常用的有機(jī)破壞的方法有 干法破壞干法破壞 HNOHNO3 3-HClO-HClO4 4法法 氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法( (一一) )濕法破壞濕法破壞 HNOHNO3 3-H-H2 2SOSO4 4法法 H H2 2SOSO4 4- -硫酸鹽法硫酸鹽法 HNOHNO3 3- H- H2 2SOSO4 4-HClO-HClO4 4法；法； H H2 2SOSO4 4-H-H2 2O O2 2； H H2 2SOSO4 4-KMnO-KMnO4 4( (二二) )干法破壞干法破壞 加加NaN

10、a2 2COCO3 3或或MgOMgO以助灰化；溫度控制在以助灰化；溫度控制在420420 ( (三三) )氧燃瓶燃燒法氧燃瓶燃燒法 (oxygen flask combustion method) 1. 儀器裝置儀器裝置 500ml, 1000ml, 2000ml, 磨口、硬質(zhì)玻璃磨口、硬質(zhì)玻璃 錐形瓶錐形瓶 2. 稱樣稱樣 固體樣；液體樣要求詳見固體樣；液體樣要求詳見P163 3. 燃燒分解操作法燃燒分解操作法 4. 吸收液的選擇吸收液的選擇 用于用于X、S、Se等的鑒別、檢查、含量等的鑒別、檢查、含量 測(cè)定時(shí)多數(shù)是測(cè)定時(shí)多數(shù)是H2O或或H2O-NaOH；少；少 數(shù)為數(shù)為H2O-NaOH-

11、H2O2.7mm50mm30mm尾部尾部7mm13mm20mm25mm35 6mm16 6mm濾紙濾紙濾紙濾紙AGFEDCB氧瓶燃燒裝置氧瓶燃燒裝置應(yīng)用示例：碘苯酯的測(cè)定應(yīng)用示例：碘苯酯的測(cè)定ICHCH3(CH2)8-COOC2H5I2O2(I )_I2 + 2NaOH NaIO + NaI + H2O 3NaIO NaIO3 + 2NaI 3Br2 + I +3H2O IO3 + 6HBrBr2(guo) + HCOOH HBr + CO2 IO3 + 5I + 6H 3I2 + 3H2OI2 + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6CH3COOH-+- 一、容量分析法一、容量分析

12、法 （一）容量分析法的（一）容量分析法的特點(diǎn)特點(diǎn) 操作簡(jiǎn)單、快速；操作簡(jiǎn)單、快速； 比較準(zhǔn)確（比較準(zhǔn)確（RSDRSD0.2%0.2%）；）； 儀器普通易得。儀器普通易得。（二）容量分析法的（二）容量分析法的計(jì)算計(jì)算問題問題 1. 1. 滴定度滴定度（T T）的概念）的概念 每每1mlmol1mlmol溶液相當(dāng)于被測(cè)物質(zhì)的量溶液相當(dāng)于被測(cè)物質(zhì)的量(mg)(mg) 2. 2. 滴定度的計(jì)算滴定度的計(jì)算 a a A A + + b b B B c c C C + + d d D D T T = = M M b b / / a aB B 3. 3. 百分含量的計(jì)算百分含量的計(jì)算 （1 1）直接滴定法）

13、直接滴定法 D% = D% = V V F F T/WT/W 100%100% F F = = 實(shí)際標(biāo)定的濃度實(shí)際標(biāo)定的濃度/ /規(guī)定的濃度規(guī)定的濃度 （2 2）間接滴定法（回滴定法；剩余滴定法）間接滴定法（回滴定法；剩余滴定法） D% = D% = （V VO O V VB B) ) F F T T/ /W W 100%100% 二、光譜分析法二、光譜分析法 （一）紫外（一）紫外- -可見分光光度法（可見分光光度法（200nm200nm760nm)760nm) 靈敏度高，可達(dá)靈敏度高，可達(dá)10-4g/ml 10-7g/ml 1. 特點(diǎn)特點(diǎn) 準(zhǔn)確度高，準(zhǔn)確度高，RSD（%）為）為2% 5%5%

14、 儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，易普及，應(yīng)用儀器價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，易普及，應(yīng)用 范圍廣。范圍廣。 2. 2. 朗伯朗伯- -比耳定律比耳定律 A = ECL EA = ECL E1%1%1 1cmcm = = 10/M10/M 3 3. . 儀器校正和檢定儀器校正和檢定 波長校正用汞燈中較強(qiáng)譜線波長校正用汞燈中較強(qiáng)譜線237.38,253.65,275.28,296.73,237.38,253.65,275.28,296.73, 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm 313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07

15、nm與與576.96nm576.96nm 或用儀器中氘燈的或用儀器中氘燈的486.02nm486.02nm與與656.10nm656.10nm進(jìn)行校正。進(jìn)行校正。 吸收度的檢定：用吸收度的檢定：用K K2 2CrOCrO7 7(60mg)+0.005mol/LH(60mg)+0.005mol/LH2 2SOSO4 4液至液至1000ml1000ml 波長波長(nm) 235(nm) 235(最小最小) 257() 257(最大最大) 313() 313(最小最小) 350() 350(最大最大) ) E E1%1%1 1cmcm 124.5 144.0 48.62 106.6 124.5 14

16、4.0 48.62 106.6 雜散光檢查：雜散光檢查： 試劑試劑 濃度濃度(g/ml) (g/ml) 測(cè)定波長測(cè)定波長 透光率透光率(%)(%) NaINaI 1.00 220nm 1.00 220nm 0.80.8 NaNO NaNO2 2 5.00 340nm 5.00 340nm 0.80.8 4. 4. 對(duì)溶劑的要求對(duì)溶劑的要求: : 220 220240nm 241240nm 241250nm 251250nm 251300nm 300nm 300nm300nm以上以上 溶劑溶劑+吸收池吸收池A 0.41 0.41 0.20 0.20 0.10 0.10 0.050.05 5. 5

17、. 測(cè)定方法測(cè)定方法 要求供試品溶液的要求供試品溶液的A A應(yīng)在應(yīng)在0.3 0.3 0.70.7 對(duì)照品比較法：對(duì)照品比較法：C Cx x=(=(A Ax x/ /A Ar r) )C Cr r; ; 含量含量%=%=C Cx xD/WD/W100 %100 % 常用方法常用方法 吸收系數(shù)法：吸收系數(shù)法： 含量含量%= %= A Ax x /(/(E E1%1%1 1cmcm ) )r r 100 %100 % 計(jì)算分光光度法：計(jì)算分光光度法：V VA A的三點(diǎn)校正法的三點(diǎn)校正法 （二）熒光分光光度法（二）熒光分光光度法 靈敏度高靈敏度高，可達(dá)，可達(dá)10-10g/ml 10-12g/ml 在在

18、低濃度低濃度進(jìn)行測(cè)定，防止進(jìn)行測(cè)定，防止F與與C不成正比及自熄滅作用不成正比及自熄滅作用 1. 特點(diǎn)特點(diǎn) 用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減用基準(zhǔn)物溶液校正儀器靈敏度，防止樣品液熒光衰減 靈敏度高，但靈敏度高，但干擾因素多干擾因素多。 制備熒光制備熒光衍生物衍生物，可提高其靈敏度和選擇性。，可提高其靈敏度和選擇性。 用樣品用樣品量少量少，操作，操作簡(jiǎn)單簡(jiǎn)單，方法，方法快速快速，應(yīng)用，應(yīng)用范圍范圍較較廣廣。 2. 熒光分析儀熒光分析儀 有二個(gè)單色光器有二個(gè)單色光器激發(fā)單色光器與發(fā)射單色光激發(fā)單色光器與發(fā)射單色光 器；且激發(fā)光源、樣品池和檢測(cè)器成直角。器；且激發(fā)光源、樣品池和檢測(cè)器成直

19、角。3. 含量測(cè)定含量測(cè)定 常用的方法對(duì)照品比較法常用的方法對(duì)照品比較法:Ci = (Ri-Rib)/(Rr-Rrb) Cr Ch.P收載收載地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。地高辛片、利血平片、洋地黃毒苷片。 三、色譜分析法三、色譜分析法 按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜按分離原理分為：吸附；分配；離子交換；排阻色譜 方法分類方法分類 按分離方法分為：按分離方法分為：PC；TLC；柱色譜；柱色譜；GC，HPLC。 （一）（一）HPLC法法 1. 對(duì)對(duì)HPLC儀器一般要求儀器一般要求 色譜柱、流動(dòng)相按品種項(xiàng)下要求。色譜柱、流動(dòng)相按品種項(xiàng)下要求。 色譜柱的理論板數(shù)：色譜柱的理論板數(shù)

20、：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系統(tǒng)性試驗(yàn)系統(tǒng)性試驗(yàn) 分離度：分離度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T = W0.05h/2d1 應(yīng)在應(yīng)在0.9 1.05 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量3. 測(cè)定方法測(cè)定方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量 外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法 應(yīng)用示例：應(yīng)用示例： RP-HPLC法測(cè)定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法法測(cè)定鹽酸黃酮哌酯片含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法 如頭孢拉?。活^孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法如頭

21、孢拉?。活^孢羥氨芐；頭孢唑啉鈉用外標(biāo)一點(diǎn)法 （二）（二）GC法法 1. 對(duì)對(duì)GC儀器一般要求儀器一般要求 載氣為載氣為氮?dú)獾獨(dú)猓簧V柱為填充或毛細(xì)管柱；色譜柱為填充或毛細(xì)管柱 色譜柱的理論板數(shù)：色譜柱的理論板數(shù)：n = 5.54(tR /Wh/2)2 2. 系統(tǒng)性試驗(yàn)系統(tǒng)性試驗(yàn) 分離度：分離度：R = 2（tR1 tR2)/(W1 + W2); 要大于要大于1.5 拖尾因子：拖尾因子：T = W0.05h/2d1 應(yīng)在應(yīng)在0.9 1.05 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中主成分含量 3. 測(cè)定方法測(cè)定方法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 外標(biāo)法測(cè)定供試品中主成分含量外標(biāo)

22、法測(cè)定供試品中主成分含量 外標(biāo)一點(diǎn)法外標(biāo)一點(diǎn)法 應(yīng)用示例：應(yīng)用示例： Ch.P(2000)收載的月桂卓酮、維生素收載的月桂卓酮、維生素E及其片劑、注及其片劑、注 射劑、甲酚皂溶液等均采用射劑、甲酚皂溶液等均采用GC法中的內(nèi)標(biāo)法加校正法中的內(nèi)標(biāo)法加校正 因子測(cè)定含量。因子測(cè)定含量。 第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證 一、準(zhǔn)確度一、準(zhǔn)確度 是指用該方法是指用該方法測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值接近的程度，用用回收率回收率表示表示 （一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度（一）含量測(cè)定方法的準(zhǔn)確度 1. 原料藥原料藥 可用已知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確可用已

23、知純度對(duì)照品或樣品進(jìn)行測(cè)定；或與已建準(zhǔn)確 度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。 2. 制劑制劑 要考察要考察輔料對(duì)回收率的影響輔料對(duì)回收率的影響。采用在空白輔料中加入原。采用在空白輔料中加入原 料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算料對(duì)照品的方法作回收率試驗(yàn)，然后計(jì)算RSD。 具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，具體做法：測(cè)定高、中、低三個(gè)濃度，n=3, 共共9個(gè)數(shù)據(jù)來評(píng)價(jià)個(gè)數(shù)據(jù)來評(píng)價(jià) 回收率的回收率的RSD2%；用；用UV和和HPLC發(fā)時(shí)，一般回發(fā)時(shí)，一般回 收率可達(dá)收率可達(dá)98%102%；容量法可達(dá)；容量法可達(dá)99.7%100.3% （二）數(shù)據(jù)要求（二）數(shù)據(jù)要求 回

24、收率回收率% = （測(cè)定平均值（測(cè)定平均值 空白值）空白值）/加入量加入量100% 要求制備要求制備高高、中中、低低三濃度的樣品，各測(cè)定三濃度的樣品，各測(cè)定3次次。應(yīng)。應(yīng)報(bào)告已知加入量的回收率，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值報(bào)告已知加入量的回收率，或測(cè)定結(jié)果平均值與真實(shí)值之差及其可信限。之差及其可信限。 二、精密度二、精密度 是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果是指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測(cè)定結(jié)果 之間的之間的接近程度接近程度。 （一）精密度表示方法（一）精密度表示方法 1. 偏差偏差(deviation , d) d = 測(cè)得值測(cè)得值-平均值平均值=Xi-X 2

25、. 標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差（standard deviation, SD或或S） S =(Xi X)2/(n-1)1/2 3. 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差(relative standard deviation, RSD)也稱變異系數(shù)也稱變異系數(shù) (coefficient of variation, CV) RSD=標(biāo)準(zhǔn)偏差標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值平均值100%=S/X 100%（二）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性（二）重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性 1. 重復(fù)性重復(fù)性 在相同條件下在相同條件下,由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度. 2. 中間精密度中間精密度 在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由

26、不同分析人員用不在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不 同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度。 3. 重現(xiàn)性重現(xiàn)性 在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。（三）數(shù)據(jù)要求（三）數(shù)據(jù)要求 應(yīng)報(bào)告應(yīng)報(bào)告S或或SD、RSD和可信限。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的可和可信限。用統(tǒng)計(jì)學(xué)的可信性分析信性分析(t或或f）。）。 三、專屬性三、專屬性 是指在其他成分是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，可能存在下， 采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢 查、含量

27、測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。查、含量測(cè)定方法，均應(yīng)考察其專屬性。 （一）鑒別反應(yīng)（一）鑒別反應(yīng) 應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分應(yīng)能與其它共存的物質(zhì)或相似化合物區(qū)分，不含被測(cè)組分 的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。的樣品均應(yīng)呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng)。 （二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定（二）含量測(cè)定和雜質(zhì)測(cè)定 色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說明專屬性。色譜法和其他分離法，應(yīng)附代表性的圖譜，以說明專屬性。 圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能圖中應(yīng)注明各組分的位置，色譜法中分離度應(yīng)符合要求。在能 獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察對(duì)結(jié)果的干擾。在雜獲得雜質(zhì)的情況下，可加到試樣中，考察

28、對(duì)結(jié)果的干擾。在雜 質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn)質(zhì)和降解物不能獲得的情況下，可用以驗(yàn)證方法和藥典方法進(jìn) 行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。行對(duì)照；也可用對(duì)試樣加速破壞的方法，比較兩種方法。 四、檢測(cè)限（四、檢測(cè)限（limit of detection, LOD) 是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的是指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量最低濃度或量，是限度檢驗(yàn)，是限度檢驗(yàn) 指標(biāo)。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。指標(biāo)。它無需測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。 （一）（一）常用的方法常用的方法 1.1.非儀器分析目視法非儀器分析目

29、視法 用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地用已知濃度被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠地 檢測(cè)出的最低濃度或量。檢測(cè)出的最低濃度或量。 2.2.儀器分析方法儀器分析方法 UVUV法：法：LODLOD = = f f.3.3S S空空 = = C C樣樣/ /A A樣樣 3 3S S空空 FluFlu法：法：LODLOD = = f f.3.3S S空空 = = C C樣樣/(/(F F樣樣- -F F空空) ) 3 3S S空空 GCGC和和HPLCHPLC法：法： LODLOD = = S S/ /N N = 2 = 2或或3 3 （二）數(shù)據(jù)要求（二）數(shù)據(jù)要求 應(yīng)附測(cè)試圖，說明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果。應(yīng)附測(cè)

30、試圖，說明測(cè)試過程和檢測(cè)限結(jié)果。 五、定量限（五、定量限（limit of quantitation, LOQ) 是指樣品中是指樣品中被測(cè)物能被被測(cè)物能被定量測(cè)定定量測(cè)定的最低量的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)，其測(cè)定結(jié)果應(yīng) 具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求具一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)和降解產(chǎn)物進(jìn)行定量測(cè)定時(shí)，要求 LOQLOQ. .常用信噪比法確定定量限，一般以常用信噪比法確定定量限，一般以S/N=10S/N=10時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行時(shí)相應(yīng)的濃度進(jìn)行 測(cè)定。測(cè)定。 六、線性六、線性 是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果與試樣中被測(cè)物濃度直接

31、呈呈正比正比關(guān)系的關(guān)系的程度程度。 UVUV法：首先制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)法：首先制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n =5; A = 0.3n =5; A = 0.3.0.7.0.7 建立回歸方程建立回歸方程C = C = aAaA + b ; + b ;r r 0.99990.9999。 HPLCHPLC法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)法：制備一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)系列，濃度點(diǎn)n =5 n =5 7; 7; 以以C C對(duì)對(duì)h h或或A A或與或與 內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，建立回歸方程內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比，建立回歸方程r r 0.99990.9999。 七、范圍七、范圍 是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性、測(cè)試方法適用的高低限度或量的區(qū)間適用的高低限度或量的區(qū)間。 原料藥和制劑含量測(cè)定原料藥和制劑含量測(cè)定：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的80%- 120%。 制劑含量均勻度檢查制劑含量均勻度檢查：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的：范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的7