1、 乳中大腸菌群檢驗(yàn)乳中大腸菌群檢驗(yàn) 大腸菌群主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中是否有污染腸道致病菌的可能。 大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。這群細(xì)菌主要包括埃希氏菌、檸檬酸細(xì)菌、腸桿菌、克雷伯氏菌等，均屬于腸桿菌科。大腸菌群以大腸埃希氏菌為主，大腸埃希氏菌是革蘭氏陰性、兩端鈍圓的桿菌，無芽胞，以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)或不運(yùn)動(dòng)。大腸菌群生化反應(yīng)活潑，大多數(shù)能發(fā)酵乳糖、氧化酶陰性、好氧或兼性厭氧，在EMB瓊脂培養(yǎng)基上菌落呈現(xiàn)深紫黑色、圓形、邊緣整齊、表面光滑濕潤，常具有金屬光澤I也有呈現(xiàn)紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或呈現(xiàn)粉紫

2、色、中心的顏色較深。大腸埃希氏菌是腸道的正常菌，每克糞便中含有10個(gè)大腸埃希氏菌。正常情況下，大腸埃希氏菌能合成維生索B和K，能產(chǎn)生大腸菌素，對(duì)機(jī)體是有利的，可是當(dāng)機(jī)體抵抗力下降或大腸埃希氏菌侵入腸外組織或器官時(shí)，則大腸埃希氏菌就成為條件致病菌，可以引起腸外感染。由于大腸埃希氏菌是腸道正常寄生菌，一旦出現(xiàn)即意味著直接或間接地被糞便污染。食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示。一、設(shè)備和材料一、設(shè)備和材料(1)溫箱：(36士1)。(2)冰箱：04。(3)恒溫水?。?44。54-0。5)。(4)天平。(5)顯微鏡。(6)均質(zhì)器或乳缽。(7)平皿l直徑為90mm。(

3、8)試管。(9)吸管。(10)廣口瓶或三角燒瓶：容量為500mL。(11)玻璃珠：直徑約5mm。(12)載玻片。(13)酒精燈(14)試管架 二、培養(yǎng)基及試劑二、培養(yǎng)基及試劑 (1)乳糖膽鹽發(fā)酵管。 (2)伊紅美藍(lán)瓊脂。 (3)乳糖發(fā)酵管。 (4)革蘭氏染色液。 (5)生理鹽水。三、操作步驟三、操作步驟(1)檢樣稀釋以無菌操作將檢樣25mL(或25g)，放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠)，經(jīng)充分振搖作成l+10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8 00010 000r/min的轉(zhuǎn)速處理lmin作成1+10的均勻稀釋液。用lmL滅菌吸管吸取1

4、:10稀釋液lmL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，作成1:100稀釋液。另取lmL滅菌吸管，按上硬操作依次作10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支lmL滅菌吸管。根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3管。 (2)乳糖發(fā)酵試驗(yàn) 將待檢樣品接種于乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在lmL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管；lmL及l(fā)mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置(36土1)溫箱內(nèi)，培養(yǎng)(24士2)h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。 (3)分離培養(yǎng) 將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置(36土1)溫箱內(nèi)，培養(yǎng)1824h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并作革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。 (4)證實(shí)試驗(yàn) 在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落12個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置(36土1)溫箱內(nèi)培養(yǎng)(24土2)h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的