1、導 師： 姚運紅 副 教授時 間： 2019年10月8日研討生：余健華 浸潤和轉(zhuǎn)移浸潤和轉(zhuǎn)移 是惡性腫瘤最重要的生物學特性是惡性腫瘤最重要的生物學特性腫瘤轉(zhuǎn)移的根本過程腫瘤轉(zhuǎn)移的根本過程腫瘤細胞零落并侵人基質(zhì)腫瘤細胞零落并侵人基質(zhì)進入脈管系統(tǒng)進入脈管系統(tǒng)癌栓構(gòu)成癌栓構(gòu)成在繼發(fā)的組織器官生長在繼發(fā)的組織器官生長血管生成與腫瘤的關(guān)系血管生成與腫瘤的關(guān)系原發(fā)腫瘤和繼發(fā)轉(zhuǎn)移瘤在生長分散原發(fā)腫瘤和繼發(fā)轉(zhuǎn)移瘤在生長分散 都依賴血管生成都依賴血管生成新生的毛細血管為腫瘤的生長提供新生的毛細血管為腫瘤的生長提供原料原料新生的毛細血管包括毛細淋巴管新生的毛細血管包括毛細淋巴管 也是腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的必需條件也是腫瘤

2、侵襲轉(zhuǎn)移的必需條件血管生成在腫瘤中的作用血管生成在腫瘤中的作用血管生成整個過程包括：內(nèi)皮移行血管生成整個過程包括：內(nèi)皮移行 基質(zhì)降解和內(nèi)皮增殖基質(zhì)降解和內(nèi)皮增殖這一過程的詳細調(diào)控機制尚不清楚這一過程的詳細調(diào)控機制尚不清楚血管生成的過程及調(diào)控血管生成的過程及調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子與血管生成血管內(nèi)皮生長因子與血管生成 血管內(nèi)皮生長因子及受體的分類血管內(nèi)皮生長因子及受體的分類血管內(nèi)皮生長因子血管內(nèi)皮生長因子VEGF家族成家族成員有員有VEGFA(即以往發(fā)現(xiàn)的即以往發(fā)現(xiàn)的 VEGF B C D E F 及及 PIGF高親和力受體高親和力受體VEGFRs有三種，有三種，VEGFR2(Flk-1/KDR)

3、VEGFR1 (Flt-1) 及及VEGFR3 (Flt-4)VEGF受體與配體的結(jié)合受體與配體的結(jié)合VEGF-B PIGF VEGF-A VEGF-E VEGF-C VEGF-DVEGFR-1VEGFR-2VEGFR-3主要在血管內(nèi)主要在血管內(nèi)皮表達皮表達主要在血管內(nèi)皮表達主要在血管內(nèi)皮表達也可在淋巴管內(nèi)皮也可在淋巴管內(nèi)皮成人主要在淋成人主要在淋巴管內(nèi)皮表達巴管內(nèi)皮表達研討闡明在許多實體瘤腫瘤細胞中也有研討闡明在許多實體瘤腫瘤細胞中也有VEGFR表達表達VEGF構(gòu)造和分布構(gòu)造和分布vVEGF相對分子量為相對分子量為34-45KD，為二硫鍵，為二硫鍵銜接的糖蛋白二聚體，基因定位于染色銜接的糖蛋

4、白二聚體，基因定位于染色體體6p12，有六種異構(gòu)體，有六種異構(gòu)體v人正常組織人正常組織VEGF mRNA及蛋白表達量及蛋白表達量甚微甚微v在一些代謝旺盛血供豐富的組織表達稍在一些代謝旺盛血供豐富的組織表達稍高高v在外傷愈合，胚胎發(fā)育和增殖期子宮內(nèi)在外傷愈合，胚胎發(fā)育和增殖期子宮內(nèi)膜等中呈較高程度膜等中呈較高程度v在腫瘤細胞有過量表達在腫瘤細胞有過量表達q 添加血管通透性添加血管通透性q 促進血管構(gòu)成促進血管構(gòu)成q 使血管內(nèi)皮細胞的倍增次數(shù)添加使血管內(nèi)皮細胞的倍增次數(shù)添加q 使血管內(nèi)皮細胞的某些周期相關(guān)基因使血管內(nèi)皮細胞的某些周期相關(guān)基因 表達減少表達減少q 影響樹突細胞的成熟，使腫瘤細胞逃影響

5、樹突細胞的成熟，使腫瘤細胞逃防止疫監(jiān)視等防止疫監(jiān)視等VEGF及受體的主要功能及受體的主要功能 已有研討闡明已有研討闡明VEGF高表達與許多腫瘤的轉(zhuǎn)高表達與許多腫瘤的轉(zhuǎn)移和預后不良呈正相關(guān)，但其在鼻咽癌中的移和預后不良呈正相關(guān)，但其在鼻咽癌中的作用還有待進展系統(tǒng)的研討作用還有待進展系統(tǒng)的研討 VEGFC與腫瘤的關(guān)系與腫瘤的關(guān)系VEGFC的構(gòu)造與分布的構(gòu)造與分布vVEGF-C mRNA基因定位于染色體基因定位于染色體4q34，有，有7個含編碼序列的外顯子個含編碼序列的外顯子v在成人，在成人，VEGF-C mRNA主要表達在主要表達在心臟，胎盤等心臟，胎盤等v在腫瘤細胞中也有表達在腫瘤細胞中也有表達

6、VEGFC及受體的主要功能及受體的主要功能q 與VEGFR3結(jié)合促進淋巴管增生q與VEGFR2結(jié)合，促進血管生成 q 主要作用于淋巴管上已有報道，已有報道，VEGFC在許多惡性腫瘤在許多惡性腫瘤組織中有較高的表達，而且其表達強度組織中有較高的表達，而且其表達強度與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。VEGFR3在淋巴系統(tǒng)研討中的作用在淋巴系統(tǒng)研討中的作用q 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤基質(zhì)中常有淋巴管的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤基質(zhì)中常有淋巴管的增生和擴張，但其分子機制至今未充分增生和擴張，但其分子機制至今未充分闡明闡明q 目前對淋巴道轉(zhuǎn)移的研討進展緩慢目前對淋巴道轉(zhuǎn)移的研討進展緩慢q Flt-4是淋巴管內(nèi)皮細胞的特

7、異性標志是淋巴管內(nèi)皮細胞的特異性標志VEGFC與鼻咽癌的關(guān)系與鼻咽癌的關(guān)系 VEGFC可以促進一些惡性腫瘤的淋巴道可以促進一些惡性腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)移 淋巴道也是鼻咽癌最主要的轉(zhuǎn)移途徑淋巴道也是鼻咽癌最主要的轉(zhuǎn)移途徑 部分復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移是目前治療失敗的主要部分復發(fā)和遠處轉(zhuǎn)移是目前治療失敗的主要緣由緣由 早期檢測和控制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移曾經(jīng)成為鼻咽癌早期檢測和控制淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移曾經(jīng)成為鼻咽癌防治的一個重要環(huán)節(jié)防治的一個重要環(huán)節(jié)關(guān)于關(guān)于VEGFC在鼻咽癌中的表達及其在鼻咽癌中的表達及其在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用的研討國在鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的作用的研討國內(nèi)還未見報道。內(nèi)還未見報道。腫瘤轉(zhuǎn)移涉及一系列基因腫瘤轉(zhuǎn)移

8、涉及一系列基因變化及調(diào)控變化及調(diào)控c-myc 作為作為myc原癌基因家族中的一員，原癌基因家族中的一員，定位于人染色體定位于人染色體8q24，編碼含，編碼含439個氨個氨基酸的蛋白質(zhì)基酸的蛋白質(zhì)對正常細胞的生長和分化起重要調(diào)理作對正常細胞的生長和分化起重要調(diào)理作用，其蛋白的過量表達與腫瘤發(fā)生有關(guān)。用，其蛋白的過量表達與腫瘤發(fā)生有關(guān)。c-myc的構(gòu)造和功能的構(gòu)造和功能 目前，已有報道目前，已有報道VEGF和和c-myc的表達的表達在膽囊癌構(gòu)成、開展和轉(zhuǎn)移中有協(xié)同在膽囊癌構(gòu)成、開展和轉(zhuǎn)移中有協(xié)同作用，提示作用，提示VEGF 的表達能夠受的表達能夠受c-myc的調(diào)控。的調(diào)控。 C-myc能否可以作為

9、一種腫瘤轉(zhuǎn)移能否可以作為一種腫瘤轉(zhuǎn)移 相關(guān)基因經(jīng)過促血管生成來促進鼻相關(guān)基因經(jīng)過促血管生成來促進鼻咽癌的轉(zhuǎn)移還有待研討咽癌的轉(zhuǎn)移還有待研討1研討人鼻咽癌組織及裸鼠移植瘤組織中 ，VEGF-AVEGFC及相關(guān)受體的表達分布及癌組織內(nèi)血管淋巴管的分布，初步討論其與鼻咽癌的微血管微淋巴管構(gòu)成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系及機制;討論VEGF家族主要成員在鼻咽癌轉(zhuǎn)移中的作用及相互之間的聯(lián)絡(luò)。v2裸鼠體內(nèi)注射抗裸鼠體內(nèi)注射抗VEGFA VEGFC抗體，察看癌組織內(nèi)血管淋抗體，察看癌組織內(nèi)血管淋巴管構(gòu)成及癌細胞的轉(zhuǎn)移情況，為臨床巴管構(gòu)成及癌細胞的轉(zhuǎn)移情況，為臨床運用抗血管生成藥物治療鼻咽癌提供一運用抗血管生成藥物治

10、療鼻咽癌提供一定的實際根據(jù)。定的實際根據(jù)。v3討論討論c-myc能否可以作為一種腫瘤轉(zhuǎn)能否可以作為一種腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因經(jīng)過促血管生成來促進鼻咽移相關(guān)基因經(jīng)過促血管生成來促進鼻咽癌的轉(zhuǎn)移癌的轉(zhuǎn)移CNE-1 CNE-2Z-H5 CNE-2Z-H5-9 ISH IHC Western blot ELISA 基因及蛋白表達基因及蛋白表達接接 種種 裸裸 鼠鼠VEGF-A VEGF-C Flk-1 Flt-4 c-myc 抗抗VEGF-A VEGF-C 抗體抗體鼻鼻 咽咽 癌癌裸鼠移植瘤裸鼠移植瘤常規(guī)組織切片染色常規(guī)組織切片染色ISH IHC血管淋巴管的顯示計數(shù)血管淋巴管的顯示計數(shù)基因及蛋白表達基因及蛋

11、白表達VEGF-A VEGF-C Flk-1 Flt-4 c-myc 抗抗VEGF-A VEGF-C 抗體抗體CNE-1CNE-2Z-H5CNE-2Z-H5-9免疫組化免疫組化鼻鼻 咽咽 炎炎空載質(zhì)?？蛰d質(zhì)粒帶有帶有VEGF-C基因基因的重組質(zhì)粒的重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染分別轉(zhuǎn)染CNE-1裸裸 鼠鼠 接接 種種腫瘤的轉(zhuǎn)移情況腫瘤的轉(zhuǎn)移情況CNE-1CNE-1GCNE-1GV主要實驗方法ISHIHC - 檢測人鼻咽炎及鼻咽癌組織及裸鼠移植瘤組織中VEGF-AVEGFC及相關(guān)受體及c-myc的蛋白表達及mRNA的分布主要實驗方法ISHIHC - 檢測鼻咽癌細胞中VEGF-AVEGFC及相關(guān)受體及c-myc

12、的蛋白表達及mRNA的分布主要實驗方法v ELISA Western blotv -對人鼻咽癌細胞培育液內(nèi)中VEGF-AVEGFC及相關(guān)受體及c-myc 表達產(chǎn)物進展定量分析主要實驗方法v Flk-1 Flt-4作為內(nèi)皮細胞作為內(nèi)皮細胞標志物的免疫組化標志物的免疫組化 v -裸鼠移植瘤組織內(nèi)血管裸鼠移植瘤組織內(nèi)血管淋巴管的顯示及計數(shù)淋巴管的顯示及計數(shù)1VEGF-AVEGF-C及相關(guān)受體的及相關(guān)受體的表達程度與鼻咽癌的微血管微淋巴表達程度與鼻咽癌的微血管微淋巴管構(gòu)成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；在管構(gòu)成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；在VEGF中，中，VEGFC對鼻咽癌的淋巴對鼻咽癌的淋巴道轉(zhuǎn)移起著主要作用，而道轉(zhuǎn)移

13、起著主要作用，而VEGF-A有有一定的協(xié)同作用。一定的協(xié)同作用。2運用抗運用抗VEGF-AVEGFC的抗體可的抗體可以抑制癌組織內(nèi)血管淋巴管構(gòu)成及癌以抑制癌組織內(nèi)血管淋巴管構(gòu)成及癌細胞的轉(zhuǎn)移，有望成為治療鼻咽癌的一細胞的轉(zhuǎn)移，有望成為治療鼻咽癌的一個比較好的靶點。個比較好的靶點。3 c-myc 的表達與的表達與VEGF呈正相關(guān)，呈正相關(guān)，從而促進鼻咽癌的轉(zhuǎn)移，是鼻咽癌從而促進鼻咽癌的轉(zhuǎn)移，是鼻咽癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因。轉(zhuǎn)移的相關(guān)基因。編編號號 項目項目 經(jīng)費經(jīng)費(元元) 1細胞培養(yǎng)基本材料及裸鼠細胞培養(yǎng)基本材料及裸鼠4000.00 2ISH試劑盒試劑盒5000.003ELISA試劑盒試劑盒3000.004免疫組化免疫組化 Western blot4000.00合計：合計： 16000.00時間安排2019-12至至2019-02完成人鼻咽癌細胞完成人鼻咽癌細胞VEGF-AVEGFC及相關(guān)受體及及相關(guān)受體及c-myc的蛋白表達及的蛋白表達及mRN