1、藥品重金屬檢查法一 目的：制定重金屬檢查法，規(guī)范重金屬檢查法測(cè)定的操作。二 適用范圍：適用于重金屬檢查法的測(cè)定。三 責(zé)任者：品控部。四 正文1 簡(jiǎn)述1.1 重金屬是指在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與顯色劑作用的金屬鹽類(lèi)雜質(zhì)。中國(guó)獸藥典2005年版一部附錄（66頁(yè)）采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛（Pb）的限量表示。1.2 由于實(shí)驗(yàn)條件不同，分為4種檢查方法：第一種適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查；第二法適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，?jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查；第三法用來(lái)檢查能溶于堿而不溶于稀酸（或在稀酸中即生成沉淀）的藥品中的重金屬；

2、第四法用微孔濾膜過(guò)濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金屬限量較低的品種。1.3 四種方法顯示的結(jié)果均為微量重金屬的硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色；采用濾膜法可獲得“色斑”；如果重金屬離子濃度大。加入顯色劑后放置時(shí)間長(zhǎng)，就會(huì)有硫化物聚集下沉。1.4重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.03.5，選用醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml調(diào)節(jié)pH較好，顯色劑硫代乙酰胺試液用量經(jīng)實(shí)驗(yàn)也以2.0ml為佳，顯色時(shí)間一般為2分鐘。以1020ug的Pb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最佳日視比色范圍。在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產(chǎn)生的硫化氫呈色的金屬離子有銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻

3、、錫、砷、鋅、鈷與鎳等。1.5由于在藥品生產(chǎn)過(guò)程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛易積蓄中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。2 儀器與用具2.1 納氏比色管應(yīng)選玻璃質(zhì)量較好、無(wú)色（尤其管底）、配對(duì)、刻度標(biāo)線(xiàn)高度一致的納氏比色管，洗滌時(shí)避免劃傷內(nèi)壁。2.2 濾器見(jiàn)中國(guó)獸藥典2005年版一部附錄（66頁(yè)）重金屬檢查法第四法附圖，由具有螺紋絲扣并能密封的上、下兩部分以及墊圈、濾膜和輔助濾板組成。2.2.1濾器上蓋部分A的入口處應(yīng)能與50ml注射器緊密聯(lián)接，濾器下部F的出口處能套上一臺(tái)適橡皮管。A與F能通過(guò)螺紋絲扣密封。2.2.2 墊圈應(yīng)內(nèi)徑光滑、大小相同，以使斑點(diǎn)邊緣圓整、清楚、大小一致。在

4、濾器上加上橡皮墊圈，既可使濾膜與濾板緊密結(jié)合，又可避免在旋緊濾器接頭時(shí)扭曲或損壞濾膜。2.2.3濾膜的直徑為10mm，孔徑為3.0um，使用前在水中浸泡24小時(shí)以上，可使色斑均勻。2.2.4 50ml注射器，應(yīng)能與濾器上蓋入口處緊密聯(lián)接。3 試藥和試液3.1標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液精密稱(chēng)取在105°C干燥至恒重的硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10ug的Pb）。3.2硫代乙酰胺試液、硫化鈉試液、醋酸鹽緩沖液（pH3.5）與抗壞血酸

5、等均按藥典附錄XV的規(guī)定。3.3稀焦糖溶液取蔗糖或葡萄糖約5g,置磁坩堝中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml，濾過(guò)，貯于滴瓶中備用。臨用時(shí)，根據(jù)供試液色澤深淺，取適當(dāng)量調(diào)節(jié)使用。4 操作方法4.1 第一法4.1.1取25ml納氏比色管兩支，編號(hào)為甲、乙。4.1.2甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，加水或該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml。4.1.3乙管中加入按該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定的方法制成的供試液25ml。4.1.4 如供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量稀焦糖溶液或其它無(wú)干擾的有色溶液，使其色澤與乙管一致。4.1.5在甲、乙兩管中分別加

6、硫代乙酰胺試液各2.0ml，搖勻，放置2分鐘，同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。4.1.6如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定的2倍量的供試品和試液，加水或該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙2等份，乙管中加水或該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2.0ml，搖勻，放置2分鐘，經(jīng)濾膜（孔徑3um）濾過(guò)，然后甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成25ml，再在乙管中加入硫代乙酰胺試液2.0ml，甲管中加水2.0ml,照上述方法比較，即得。4.1.7供試品中如含高鐵鹽而影響重

7、金屬檢查時(shí)，可取該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，加抗壞血酸0.51.0g,并在對(duì)照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。4.1.8配制供試品溶液時(shí)，如使用的鹽酸超過(guò)1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸）,氨試液超過(guò)2.0ml，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml與水15ml溶解后，移置甲管中，加標(biāo)鉛溶液一定量，再加水稀釋成25ml。4.2 第二法4.2.1除另有規(guī)定外，取在500600°C灼燒的熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，加硝?.5ml蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，加鹽酸2.0ml，置

8、水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml，微熱溶解后，移置乙管中，加水稀釋成25ml。4.2.2 如不取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，則可取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0ml，使恰濕潤(rùn)，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后，放冷，在500600C熾灼使完全灰化，再按4.2.1自“放冷，加鹽酸2,0ml”起，依法操作至“加水稀釋成25ml”。4.2.3取配制供試溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml與水15ml，微熱溶解后，移置甲管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水

9、稀釋成25ml。4.2.4 按4.1.5方法檢查。4.3 第三法4.3.1 取25ml納氏比色管兩支，編號(hào)為甲、乙。4.3.2除另有規(guī)定外，取供試品適量，加水20ml與氫氧化鈉試液5ml溶解后，置乙比色管中。4.3.3 取一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液，與4.3.2同樣處理，置甲管中。4.3.4 于甲、乙兩管中各加硫化鈉試液5滴，搖勻。4.3.5 甲、乙兩管同置白色襯板上，自上向下透視，乙管中所顯的顏色與甲管比較，不得更深。4.4 第四法4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，置小燒杯中，加水或該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml與硫代乙酰胺試液1.

10、0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至過(guò)濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上干燥，即得。4.4.2 檢查法照該藥品正文項(xiàng)下規(guī)定制成的供試液10ml，照4.4.1標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml”起，依法操作，將生成的色斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。4.4.3 若供試溶液有顏色或渾濁，應(yīng)用濾膜進(jìn)行預(yù)濾，如濾膜上有污染，應(yīng)換濾膜再濾，直至濾膜不再染色；然后取濾液10ml，照4.4.1標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2.0ml”起，依法操作。所得供試液的鉛斑與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。5 注意事項(xiàng)5.1 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)

11、在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制，以防止硝酸鉛水解而造成誤差；配制與貯存標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃容器，均不得含有鉛。5.2硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，故配制醋酸鹽緩沖液（pH3.5）時(shí)，要用pH計(jì)調(diào)節(jié)，硫代乙酰胺試液加入量以2.0ml時(shí)呈色最深;第四法中的檢測(cè)范圍為25口g的Pb，且因體積小，所以硫代乙酰胺試液的用量為1.0ml。硫代乙酰胺試液顯色劑的最佳顯色時(shí)間為2分鐘，除第四法由于檢測(cè)限量低，且為了方便過(guò)濾，顯色時(shí)間為10分鐘外，第一、二法均為放置2分鐘。5.3為了便于目視比較，第一、二和三法中的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用量以2.0ml（相當(dāng)于20ug的Pb）為宜，小于1，0ml

12、或大于3.0ml,呈色太淺或太深，均不利于目視比較。5.4 如需將熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)髦亟饘贆z查時(shí)，則熾約溫度必須控制在500600°C。實(shí)驗(yàn)證明，熾灼溫度在700°C以上時(shí)，多數(shù)重金屬鹽都有不同程序的損失；以鉛為例，在700C經(jīng)6小時(shí)熾灼，損失達(dá)68%。某些供試品（如安乃近，諾氟沙星等）在熾灼時(shí)能腐蝕瓷坩堝而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英坩堝或鉑坩堝操作。5.5 熾灼殘?jiān)酉跛崽幚?，必須蒸干，將亞硝酸除盡，否則亞硝酸會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響檢查。蒸干后殘?jiān)欲}酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干以趕除多余的鹽酸，加水溶解，加入酚酞指示液

13、1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯淺紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5），使供試液的pH調(diào)節(jié)至3.5。5.6 供試品中如含有高鐵鹽，在弱酸性溶液中會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進(jìn)一步氧化析出乳硫，影響檢查，可加入抗壞血酸將高鐵離子還原為亞鐵離子而消除干擾。5.7 如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這些藥品中的其他重金屬時(shí)，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進(jìn)行檢查。如枸櫞酸鐵銨中檢查鉛鹽時(shí)，利用Fe3+在一定濃度的鹽酸中形成HfeC1，用乙醚提取除去，再調(diào)節(jié)供試液至堿性，用氰化鉀試液掩蔽微量的鐵后6進(jìn)行檢查;右旋醣酐鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提

14、取除去鐵鹽后進(jìn)行檢查。5.8 藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸銻鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氰化鉀試液，或在中性溶液中加入酒石酸，使鋅離子或銻離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再依法檢查。5.9 為了消除鹽酸或其他試液或其他試劑可能夾雜重金屬，故在配制供試品溶液時(shí)，如使用鹽酸超過(guò)1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸）或使用氨試液超過(guò)2.0ml,以及用硫酸或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后,依法檢查。5.10 當(dāng)采用第四法時(shí),將注射器套于濾器上后,讓注射器內(nèi)管自然下降,產(chǎn)生的壓力比較均勻，而

15、且對(duì)于大多數(shù)樣品溶液過(guò)濾速度達(dá)到每分鐘1ml左右；對(duì)于較粘稠的樣品溶液，可施加一均勻壓力使達(dá)到該速度,以保證色斑上色調(diào)的均勻性。濾過(guò)時(shí)如濾器中存在氣泡則會(huì)影響色斑質(zhì)量，故在裝置輔助濾板（尼龍墊網(wǎng)）、濾膜和墊圈時(shí)應(yīng)以水排除氣泡。濾器上端與注射器聯(lián)接處的尺寸大小應(yīng)以?xún)烧吣車(chē)?yán)密嵌合為宜，以免濾過(guò)時(shí)溶液溢漏；必要時(shí)可改用乳膠管聯(lián)接。6 記錄與計(jì)算6.1 記錄必須記錄所采用的方法，樣品取樣量，標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取用量，操作過(guò)程中使用的特殊試劑，試液名稱(chēng)和用量或?qū)z查結(jié)果有影響的試劑用量，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中出現(xiàn)的現(xiàn)象及實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。6.2 計(jì)算6.2.1標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度計(jì)算1mol硝酸鉛Pb（NO）的質(zhì)量為331.2g，含鉛

16、（Pb）為207.2g；稱(chēng)取硝酸鉛0.1598g配32成1000ml貯備液，含Pb量為：=0.1000mg/ml207.2 x0.1598x1000331.2 x1000貯備液依法稀釋十倍后所得標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度為每1ml含10口g的Pb。6.2.2重金屬限量計(jì)算進(jìn)行檢查時(shí)，如取供試品1.0g，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2.0ml制成的對(duì)照液比較，計(jì)算重金屬限量.2.0x0.00001010重金屬%二標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液體積（ml）x標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液濃度（g/ml）x100%'供試品（g）x100%=0.0020%二百萬(wàn)分之二十=20ppm6.2.3 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液取樣量計(jì)算根據(jù)取供試品量及限量計(jì)算，如供試品2.0g，依法檢查，規(guī)定含量金屬不得過(guò)百分之五，應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液（10口gPb/ml）多少亳升?V=重金屬限量X供試品重（g）