1、昆蟲幾丁質(zhì)酶的分類、功能分析及酶學(xué)性質(zhì)的研究進(jìn)展摘 要： 昆蟲幾丁質(zhì)酶及其類似蛋白在昆蟲生長和發(fā)育階段起到重要調(diào)節(jié)作用。最近幾年，運(yùn)用新的生物技術(shù)對(duì)昆蟲幾丁質(zhì)酶的結(jié)構(gòu)，時(shí)空表達(dá)，和組織特異性表達(dá)以及生物學(xué)功能進(jìn)行了深入研究，取得了許多新的成果。本文就昆蟲幾丁質(zhì)酶基因的結(jié)構(gòu)特征，幾丁質(zhì)酶生理功能、重組表達(dá)特點(diǎn)、酶活測(cè)定方法及影響酶活性因素等方面進(jìn)行討論與綜述。關(guān)鍵詞：昆蟲幾丁質(zhì)酶，結(jié)構(gòu)分類，功能分析，重組表達(dá)，酶學(xué)性質(zhì)Abstract: In the insect growth and development stages, insect chitinase and chitinase-like

2、 proteins play an important regulatory role. In recent years, new technologies were applied for the structure of insect chitinase, time and space expression, tissue specific expression and biological function of insect chitinase, and got many new research achievements. In this paper, the structure o

3、f insect chitinases classification, physiological function, recombinant expression, methods of detection of enzyme activity and influencing factors of enzyme activity and other aspects are discussed and reviewed.Keywords: Insect chitinase; Classification structure; Physiological function; Enzyme pro

4、perty幾丁質(zhì)是由-1，4-糖苷鍵連接而成的(GluNAc) 2-乙酰氨基-2-脫氧-D-葡萄吡喃糖苷的線性多聚物，是繼纖維素之后的第二大豐富的生物聚合物1，它廣泛分布于真菌、線蟲和節(jié)肢動(dòng)物中。在節(jié)肢動(dòng)物中，幾丁質(zhì)是表皮和外骨骼生長發(fā)育的關(guān)鍵，許多昆蟲和其他節(jié)肢動(dòng)物的內(nèi)部結(jié)構(gòu)中也發(fā)現(xiàn)了幾丁質(zhì)，包括表皮內(nèi)部的氣管、圍食膜和中腸上皮2。幾丁質(zhì)酶(EC.3.2.1.14)是一類能把幾丁質(zhì)降解為低分子量、可溶或不可溶的N-乙酰-D-氨基葡萄糖或寡聚N-乙酰胺基葡萄糖的水解酶，廣泛分布于細(xì)菌、真菌、植物、線蟲、節(jié)肢動(dòng)物以及脊椎動(dòng)物(如人類、小鼠、雞等)中3。昆蟲幾丁質(zhì)酶屬于18家族幾丁質(zhì)糖基水解酶，主

5、要作用于昆蟲蛻皮過程中，參與其新舊表皮的更替和圍食膜的降解 4,5。昆蟲幾丁質(zhì)酶在昆蟲生長發(fā)育階段中不正常的組織特異性和時(shí)空特異性表達(dá)，都會(huì)影響昆蟲的正常生長。新的研究表明，昆蟲體內(nèi)存在多個(gè)編碼幾丁質(zhì)酶的基因7，因此昆蟲幾丁質(zhì)酶基因分類研究也深入開展。特別是最近幾年運(yùn)用生物信息學(xué)、系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析、RT-PCR、Real-timequantitative PCR、RNAi 等技術(shù)手段對(duì)昆蟲幾丁質(zhì)酶的結(jié)構(gòu)、時(shí)空表達(dá)和組織特異性表達(dá)以及生物學(xué)功能進(jìn)行了深入的研究，取得了許多新的研究成果。鑒于昆蟲幾丁質(zhì)酶的結(jié)構(gòu)分類、重組表達(dá)以及酶學(xué)性質(zhì)在酶學(xué)研究中的基礎(chǔ)作用，本文就以上內(nèi)容做出綜述。1 昆蟲幾丁質(zhì)酶

6、1.1 昆蟲幾丁質(zhì)酶的多樣性昆蟲幾丁質(zhì)酶的多樣性主要體現(xiàn)在兩個(gè)方面：一方面是由昆蟲幾丁質(zhì)酶催化作用性質(zhì)所決定；另一方面是由昆蟲幾丁質(zhì)酶基因結(jié)構(gòu)與功能所決定。目前對(duì)于第一方面的研究已經(jīng)相當(dāng)深入，目前發(fā)現(xiàn)的幾丁質(zhì)酶基本包含3種形式，主要為內(nèi)切酶、外切酶和N-乙酰-B-D-氨基葡萄糖苷酶等。幾丁質(zhì)內(nèi)切酶的裂解產(chǎn)物為GlcNAc寡聚糖，在幾丁質(zhì)內(nèi)部發(fā)生作用；外切酶是以二乙?；鶜ざ?diacetylchitobiose)為單位順次裂解，發(fā)生于多糖鏈的非還原端；可以使雙糖水解為單糖的是N-乙酰- D- 氨 基 葡 萄 糖 苷 酶 (- N- acetyl- D-glucosaminidase, NAGa

7、se)，并且可以以多糖鏈的非還原端為開端進(jìn)行外切，進(jìn)而具有水解單糖的酶活力。內(nèi)切幾丁質(zhì)酶和- N-乙酰葡萄糖胺酶是昆蟲主要的催化水解幾丁質(zhì)的酶。1.2 昆蟲幾丁質(zhì)酶的類型和功能分析近年來，昆蟲幾丁質(zhì)酶及類似蛋白結(jié)構(gòu)與功能的研究愈加顯著。隨著越來越多的昆蟲基因組序列的測(cè)定完成，更多的昆蟲幾丁質(zhì)酶基因得到認(rèn)可，如雙翅目：岡比亞按蚊(Anopheles gambiae)、長須羅蛉(Lutzomyia longipalpis)、黑腹果蠅(Drosophilamelanogaster) 鱗翅目 ：云 杉 卷 葉 蛾 (Spruce budworm)、番 茄 夜 蛾(Lacanobia oleracea)

8、、煙 草 天 蛾 ，鞘翅目：赤擬谷盜(Tribolium castaneum)、黃粉蟲(Tenebrio molitor)，膜 翅 目 ：切 葉 蟻，半翅目：豌豆長管蚜。近年來，人們對(duì)昆蟲幾丁質(zhì)酶及類似蛋白的分類進(jìn)行了更加深入的研究，Zhu等(2008b)和Arakane 等(2010)先后利用生物信息學(xué)和系統(tǒng)進(jìn)化樹等分析方法將昆蟲幾丁質(zhì)酶及其類似蛋白的結(jié)構(gòu)分為5類和8類，隨后在2011年Zhang等(2011b)對(duì)岡比亞暗蚊(Anopheles gambiae)進(jìn)行了生物信息學(xué)與轉(zhuǎn)錄特征分析，進(jìn)一步證明了8種類型的昆蟲幾丁質(zhì)酶及其類似蛋白在昆蟲不同生長發(fā)育階段和不同組織中的作用具有很大的差異

9、性，并且發(fā)現(xiàn)這個(gè)差異性在果蠅、赤擬谷盜和其他的一些昆蟲物種中也是普遍存在的。根據(jù)新的分類12，型昆蟲幾丁質(zhì)酶8種類型的昆蟲幾丁質(zhì)酶基因中是最具特征的，它包含一個(gè)信號(hào)肽區(qū)(signal peptide)、一 個(gè) 酶 活 性 位 點(diǎn) 區(qū) (catalyticdomain)、一個(gè)糖基化和磷酸化位點(diǎn)的連接區(qū)(linker)和一個(gè)富含半胱氨酸、絲氨酸、蘇氨酸的幾丁質(zhì)結(jié)合區(qū)(chitin-binding domain, CBD)，RNA干擾實(shí)驗(yàn)表明，它的主要作用是水解消化昆蟲化蛹后舊的表皮。型昆蟲幾丁質(zhì)酶氨基酸序列較大，它包含45個(gè)催化區(qū)和47個(gè)CBD區(qū)，Zhu等(2008c)通過 RNA 干擾使 TcC

10、HT10 基因沉默后，發(fā)現(xiàn)TcCHT10在幼蟲-幼蟲階段、幼蟲-蛹階段、蛹-成蟲蛻皮階段和卵孵化階段具有重要的作用。型昆蟲幾丁質(zhì)酶的N端包含一個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，兩個(gè)催化區(qū)和一個(gè)CBD區(qū)，它可能與昆蟲化蛹后腹部收縮和翼/翅鞘立即伸展有關(guān)，但對(duì)幼蟲-幼蟲的蛻皮、化蛹時(shí)期和成蟲羽化是可有可無的。型昆蟲幾丁質(zhì)酶大多數(shù)缺少CBD區(qū)，它包含單一的信號(hào)肽和催化區(qū)，研究結(jié)果表明，型昆蟲幾丁質(zhì)酶主要在幼蟲和成蟲階段表達(dá)，而在預(yù)蛹期、蛹期和胚胎階段均沒有進(jìn)行表達(dá)，更重要的是型昆蟲幾丁質(zhì)酶主要在幼蟲腸道組織中表達(dá)，由此推測(cè)對(duì)于圍食膜幾丁質(zhì)含量的調(diào)控型昆蟲幾丁質(zhì)酶的作用是不可忽視的。型昆蟲幾丁質(zhì)酶沒有CBD區(qū)只包含有一個(gè)信

11、號(hào)肽和高度保守的催化區(qū)，型幾丁質(zhì)酶類似蛋白的成蟲盤生長因子(IDGFs)主要在卵黃細(xì)胞和脂肪體細(xì)胞中表達(dá)，可能與調(diào)控細(xì)胞增殖和昆蟲細(xì)胞的重構(gòu)有關(guān)；在研究TcIDGF4時(shí)發(fā)現(xiàn)，其基本沒有幾丁質(zhì)酶活性，但是在成蟲羽化過程中起到不可或缺的作用。型昆蟲幾丁質(zhì)酶和型具有類似結(jié)構(gòu)，但型C-端連有一個(gè)含20%30%絲氨酸/蘇氨酸殘基的卷曲蛋白，預(yù)測(cè)該蛋白可能是高度糖基化并且可能具有抗蛋白酶功能。型昆蟲幾丁質(zhì)酶(CHT2s)與型結(jié)構(gòu)域相似，系統(tǒng)發(fā)育分析表明型幾丁質(zhì)酶在型幾丁質(zhì)酶的離群值近。型昆蟲幾丁質(zhì)酶(CHT11s)有一個(gè)催化結(jié)構(gòu)域但沒有CBD，N-端有一個(gè)跨膜區(qū)，其可能是膜相關(guān)蛋白。1.3 昆蟲幾丁質(zhì)酶生

12、化特性與生理功能綜合多種昆蟲幾丁質(zhì)酶的物理、化學(xué)及動(dòng)力學(xué)特性分析8,9得到：昆蟲幾丁質(zhì)酶的分子量約為4085 kD，酶的活性區(qū)間為pH 4.08.0，等電點(diǎn)pI為57，最適溫度比甲殼類動(dòng)物相對(duì)低1015 。昆蟲幾丁質(zhì)酶是一種糖蛋白，存在于昆蟲生長發(fā)育各個(gè)階段和各個(gè)組織中，包括蛻皮液、毒腺和中腸，其作用是水解昆蟲體壁和中腸中的幾丁質(zhì)。昆蟲生長發(fā)育期間蛻皮液中的幾丁質(zhì)酶，可以準(zhǔn)確調(diào)節(jié)昆蟲周期性脫去舊表皮并且合成新表皮的過程。在昆蟲蛻皮過程中，幾丁質(zhì)和幾丁質(zhì)酶之間是一種動(dòng)態(tài)作用過程，包括經(jīng)過CBD區(qū)的吸附過程、水解過程、解吸附過程及活性催化區(qū)對(duì)于底物表面作用的配置過程。毒腺中的幾丁質(zhì)酶對(duì)于毒腺物質(zhì)在

13、獵食對(duì)象中的組織滲透具有促進(jìn)作用。中腸中的幾丁質(zhì)酶可以降解中腸壁和圍食膜中的幾丁質(zhì)，還具有消化功能。2 昆蟲幾丁質(zhì)酶的表達(dá)2.1 昆蟲幾丁質(zhì)酶的體內(nèi)表達(dá)自 Kramer 等 (1993) 年 首 次 從 煙 草 天 蛾(Manduca sexta)中克隆得到編碼昆蟲幾丁質(zhì)酶的cDNA序列以來，越來越多的昆蟲幾丁質(zhì)酶基因被克隆，如：黃粉蟲，赤擬谷盜，亞洲玉米螟等。昆蟲幾丁質(zhì)酶在不同生長發(fā)育階段的表達(dá)是不同的。在研究煙草天蛾表皮和腸道幾丁質(zhì)酶表達(dá)時(shí)，Kramer 等(1993)使用Slot Blot方法發(fā)現(xiàn)，幾丁質(zhì)酶只在幼蟲蛻皮、化蛹或者蛹羽化成成蟲之前的短暫的時(shí)間內(nèi)開始表達(dá)，并且從幼蟲到蛹的階段

14、幾丁質(zhì)酶的表達(dá)量比較高，而幼蟲取食期間幾丁質(zhì)酶基因是不表達(dá)的。最近Zhang等(2011c)研究表明，岡比亞按蚊的幾丁質(zhì)酶基因AgCht8主要在化蛹和成蟲階段表達(dá)，而在幼蟲階段是不表達(dá)的。昆蟲生長發(fā)育過程中，幾丁質(zhì)酶的表達(dá)具有組織特異性。對(duì)煙草天蛾幾丁質(zhì)酶組織特異性表達(dá)研究表明，幾丁質(zhì)酶mRNA的濃度由低到高依次是脂肪體肌肉體壁中腸，其中中腸中的濃度最高，脂肪體檢測(cè)不到mRNA濃度。RT-PCR分析得到岡比亞按蚊中AgCht2 和AgCht12主要在前腸中表達(dá)，而AgCht13主要在中腸中表達(dá)(Zhang et al.,2011c)。由此可知，昆蟲幾丁質(zhì)酶在昆蟲體內(nèi)具有時(shí)空特異性表達(dá)的特點(diǎn)。昆

15、蟲在不同的生長發(fā)育階段，不同類型的昆蟲幾丁質(zhì)酶在同一組織中的表達(dá)是不同的，并且在同一生長時(shí)期的不同組織中的昆蟲幾丁質(zhì)酶表達(dá)也有較大差異。然而，昆蟲在幼蟲的蛻皮階段、化蛹階段的幾丁質(zhì)酶表達(dá)量都會(huì)較高，有些昆蟲在蛹期的特定階段和羽化階段的幾丁質(zhì)酶表達(dá)量也會(huì)較高。2.2 昆蟲幾丁質(zhì)酶的體外表達(dá)研究目前對(duì)于昆蟲幾丁質(zhì)酶的體外表達(dá)有兩種方法，一種是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)，可以選用 pET、pRSET、pMAL、pGEX 等原核表達(dá)載體，但是大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的酶活性相對(duì)較低，有些甚至出現(xiàn)無酶活性的包涵體；另一種是昆蟲細(xì)胞系表達(dá)系統(tǒng)，研究發(fā)現(xiàn)昆蟲細(xì)胞系表達(dá)的昆蟲幾丁質(zhì)酶是經(jīng)過糖基化修飾的，與昆蟲體內(nèi)的幾丁質(zhì)酶

16、的糖基化修飾相似，所以其表達(dá)的酶活性顯著高于大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng) 表 達(dá) 的 酶 活 性 14。筆者在使用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)對(duì)舞毒蛾和金紋細(xì)蛾幾丁質(zhì)酶進(jìn)行表達(dá)時(shí)，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的兩種外源蛋白的存在形式是無活性包涵體，雖然之后我們使用pMAL載體表達(dá)的外源蛋白可以形成可溶性蛋白，但對(duì)幾丁質(zhì)酶活性進(jìn)行檢測(cè)時(shí)發(fā)現(xiàn)活性很低，之后我們采用SF9昆蟲細(xì)胞系表達(dá)系統(tǒng)，蛋白酶活性明顯增強(qiáng)7。Kramer 等(1993)將煙草天蛾幾丁質(zhì)酶基因與苜蓿銀紋夜蛾核型多角體病毒(AcMNPV)基因組進(jìn)行重組，將重組病毒轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，并且進(jìn)行Western blot分析，研究表明，重組病毒在細(xì)胞504中表達(dá)分泌

17、的蛋白是一種糖蛋白；隨后比較了其在SF9、SF21 和 Hi-5 3 種昆蟲細(xì)胞中的表達(dá)水平及活性，3種細(xì)胞的表達(dá)水平依次為Hi-5SF21 SF9；同時(shí)，將蛻皮液中分離得到的野生型幾丁質(zhì)酶與Hi-5 細(xì)胞表達(dá)的重組幾丁質(zhì)酶進(jìn)行氣相色譜分析發(fā)現(xiàn)，在Hi-5細(xì)胞內(nèi)表達(dá)的幾丁質(zhì)酶蛋白的碳水化合物組成與野生型煙草天蛾蛻皮液中得到的幾丁質(zhì)酶蛋白的相似，都包含葡萄糖、甘露糖、N-乙酰半乳糖胺、N-乙酰氨基葡萄糖、半乳糖，約占酶質(zhì)量的25%，表明昆蟲幾丁質(zhì)酶體外真核表達(dá)效率要高于自身體內(nèi)表達(dá)，并且有利于其酶學(xué)性質(zhì)的研究。3 昆蟲幾丁質(zhì)酶的酶活測(cè)定方法及其影響因素3.1 昆蟲幾丁質(zhì)酶的酶活測(cè)定方法由于幾丁質(zhì)

18、在自然狀態(tài)下具有不可溶性，并且?guī)锥≠|(zhì)的物理狀態(tài)對(duì)幾丁質(zhì)酶的活性影響較大，因此在幾丁質(zhì)酶活性的測(cè)定方法上受到很大局限。目前根據(jù)作用底物的不同，酶活測(cè)定方法可以分為三類：利用膠體幾丁質(zhì)作為幾丁質(zhì)酶的測(cè)定底物，膠體幾丁質(zhì)(colloidal chitin)的特點(diǎn)是：顆粒小、溶液均一、懸浮狀態(tài)。使用膠體幾丁質(zhì)為底物又可分為兩種方法，一種定性分析方法是借助聚丙烯酰胺凝膠電泳或凝膠擴(kuò)散分析技術(shù)，使用卡爾科弗盧爾熒光增白劑，在紫外光下觀察幾丁質(zhì)酶分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生的條帶明暗程度；另一種方法是定量分析，這個(gè)方法有多種方案，如使用Folin-酚法其原理是在OD400處測(cè)定幾丁質(zhì)酶分解幾丁質(zhì)產(chǎn)生的N-乙酰氨基葡萄糖量

19、。此外還有DNS法(OD530)、改良的 Schales 法(OD420)、Lane-Eynon 法等17，其原理與 Folin-酚法相似。利用聚合物羧甲基-甲殼素-雷馬素亮紫(CM-chitin-RBV)作為底物，檢測(cè) OD550處幾丁質(zhì)酶分解幾丁質(zhì)底物的量18；某些化合物自身沒有熒光效應(yīng)，但如果使用幾丁質(zhì)酶后可形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)，例如通過幾丁質(zhì)酶催化降解4-甲基傘酮-D-N，N，N-triacetylchitotriose三乙酰氨基葡萄糖(Mu-(GlcNAc)3)后釋放具有熒光物質(zhì)，激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長為450 nm。3類方法各有其適用范圍，使用膠體幾丁質(zhì)作為底物測(cè)定酶活，一

20、般用在一些微生物降解幾丁質(zhì)的研究中，有些研究者也將其用于昆蟲幾丁質(zhì)酶的酶活測(cè)定，但對(duì)于一些活性較低的昆蟲幾丁質(zhì)酶并不適用；目前，利用CM-chitin-RBV 和MU-(GlcNAc)n 作為底物測(cè)定昆蟲幾丁質(zhì)酶活性的方法運(yùn)用廣泛，由于熒光分析的靈敏度達(dá)到10-10g數(shù)量級(jí)，比分光光度法高23個(gè)數(shù)量級(jí)，因此選用熒光分析方法進(jìn)行酶活測(cè)定更加靈敏。3.2 昆蟲幾丁質(zhì)酶活性影響因素昆蟲幾丁質(zhì)酶活性影響因素主要有pH、溫度、金屬離子等。昆蟲幾丁質(zhì)酶的適宜pH范圍較寬，可以作用于微酸和微堿環(huán)境中。同一種昆蟲幾丁質(zhì)酶作用于不同底物以及在最適pH值情況下不同幾丁質(zhì)酶作用于同一底物時(shí)，其酶活性都存在差異。多區(qū)

21、結(jié)構(gòu)及氨基酸序列的不同，可能是造成昆蟲幾丁質(zhì)酶最適pH不同的原因。昆蟲幾丁質(zhì)酶在3060 之間的生物學(xué)活性持久且高，超過 60 活性迅速降低。另外，筆者在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)一些金屬離子也影響昆蟲幾丁質(zhì)酶的活性。例如：10 mmol/L MgCl2促進(jìn)金紋細(xì)蛾65 kD幾丁質(zhì)酶活性達(dá)120.7%，但2 mmol/L MgCl2微弱抑制65 kD 幾丁質(zhì)酶活性的 96.2%。除以上影響昆蟲幾丁質(zhì)酶活性的主要因素外，不同也組織中酶的活性也存在差異，例如：果蠅體壁中的幾丁質(zhì)酶活性最高，中腸中的酶活性次之，脂肪體中酶活性較微弱。4 結(jié)論與展望昆蟲幾丁質(zhì)酶屬于一個(gè)多樣化且龐大的18家族幾丁質(zhì)糖基水解酶，它們?cè)趲锥?/p>

22、質(zhì)的生化代謝上有著重要的功能，近年來受到研究者關(guān)注。目前通過生物信息學(xué)手段、系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析、RT-PCR和RNA 干擾等技術(shù)，對(duì) 8 種類型昆蟲幾丁質(zhì)酶的結(jié)構(gòu)域和功能進(jìn)行了較深入的研究，使人們對(duì)于昆蟲幾丁質(zhì)酶的深入認(rèn)識(shí)和有效利用成為可能。昆蟲幾丁質(zhì)酶對(duì)于某些真菌具有抑制作用，并且是分解昆蟲體壁和中腸圍食膜幾丁質(zhì)的重要酶類。幾丁質(zhì)是昆蟲特有的結(jié)構(gòu)組分，而高等動(dòng)物和植物中無幾丁質(zhì)的存在，幾丁質(zhì)代謝系統(tǒng)中的關(guān)鍵酶可成為農(nóng)藥設(shè)計(jì)的潛在靶標(biāo)。因此，通過使用昆蟲幾丁質(zhì)酶破壞昆蟲正常的生長發(fā)育過程可以起到防治害蟲的作用，這一途徑在生物防治策略中具有極大的發(fā)展?jié)摿?6。此外，最近有研究者提出了一個(gè)新的角質(zhì)層

23、保護(hù)機(jī)制19，其否定了物理屏障阻止幾丁質(zhì)酶結(jié)合新表皮的說法，并且表明幾丁質(zhì)結(jié)合蛋白 Knickkopf(Knk)和 Retroactive(Rtv)可以保護(hù)新的角質(zhì)層退化，這也為我們深入了解昆蟲幾丁質(zhì)代謝系統(tǒng)提出了一個(gè)新思路。目前雖然對(duì)昆蟲幾丁質(zhì)酶基因的研究報(bào)道較多，但由于昆蟲幾丁質(zhì)酶的多樣性和調(diào)控機(jī)理的復(fù)雜性，并且從自然界中分離到的酶活性不是太高，因此離工業(yè)應(yīng)用的要求尚有距離。通過生物技術(shù)手段增加昆蟲體內(nèi)幾丁質(zhì)酶的產(chǎn)量，利用基因克隆技術(shù)將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)移到高效表達(dá)載體上進(jìn)行高效表達(dá)，使用突變技術(shù)確定酶的催化與結(jié)合等活性部位以及酶的誘導(dǎo)與阻遏作用機(jī)制，都將是今后一段時(shí)期內(nèi)該領(lǐng)域的研究重點(diǎn)。參考

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