1、 微生物限度(xind)檢查方法的驗(yàn)證共五十七頁(yè)微生物限度檢查(jinch)方法的驗(yàn)證細(xì)菌(xjn)、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 準(zhǔn)確性（回收率）控制菌檢查法的驗(yàn)證專(zhuān)屬性共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證驗(yàn)證的目的： 確認(rèn)所采用的方法適合(shh)該藥品的細(xì)菌、霉菌、酵母菌數(shù)的測(cè)定。照此檢查法和檢驗(yàn)條件進(jìn)行供試品細(xì)菌、霉菌、酵母菌數(shù)檢查能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。共五十七頁(yè)細(xì)菌(xjn)、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證驗(yàn)證的步驟：根據(jù)樣品特性，制定檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)條件。保證驗(yàn)證試驗(yàn)所用的儀器、培養(yǎng)基和試劑等均符合試驗(yàn)要求。按制定的方法進(jìn)行試驗(yàn)。根據(jù)驗(yàn)證結(jié)果，判斷是否(sh fu)

2、符合驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)。若符合,按驗(yàn)證的方法和條件進(jìn)行藥品的微生物限度檢查；若不符合，應(yīng)重新設(shè)立驗(yàn)證方案，再進(jìn)行驗(yàn)證，直至驗(yàn)證結(jié)果符合設(shè)立的驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 驗(yàn)證時(shí)，按供試液的制備和細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù)所規(guī)定的方法及要求進(jìn)行。對(duì)各試驗(yàn)菌的回收率應(yīng)逐一進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)，并分別(fnbi)計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證細(xì)菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證用菌株：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌。霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)驗(yàn)證用菌株：白色念珠菌、黑曲霉。菌株選擇的原則:代表性,普遍性,低或非致病性,標(biāo)準(zhǔn)(

3、biozhn)菌株(或該藥品中常見(jiàn)的污染菌)。菌種的要求：不得超過(guò)5代。采用適宜的方法保存。加菌量:50100cfu。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證驗(yàn)證方法選擇：平皿法（包括(boku)稀釋法）、薄膜過(guò)濾法、中和法、離心沉淀法、聯(lián)合方法。樣品稀釋級(jí)的選擇：最低稀釋級(jí)，1g或1ml。培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂、改良馬丁培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證菌液制備 (1)接種金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草(k co)芽孢桿菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營(yíng)養(yǎng)肉湯中，3537培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9

4、無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，使菌數(shù)約為50100cfu/ml。共五十七頁(yè)細(xì)菌(xjn)、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證菌液制備 (2)接種白色念珠菌的新鮮(xn xin)培養(yǎng)物至10ml改良馬丁培養(yǎng)基中，2328培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至10-510-7，使菌數(shù)約為50100cfu/ml。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證菌液制備 (3)接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至改良馬丁瓊脂斜面培養(yǎng)基上， 2328培養(yǎng)57天，加35ml0.9無(wú)菌氯化鈉溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，取 1ml菌

5、液加0.9無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增(dzng)稀釋法，稀釋至10-410-6，使菌數(shù)約為50100cfu/ml。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證供試品的處理： 固體：10g 供試品+稀釋劑至100ml 液體：10ml供試品+稀釋劑至100ml 抑菌性供試品可采用(ciyng)加中和劑、自然沉降、離心或薄膜過(guò)濾。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 菌液組 供試品對(duì)照組 試驗(yàn)(shyn)組 稀釋劑對(duì)照組 每一驗(yàn)證菌株均應(yīng)進(jìn)行上述試驗(yàn)（順序）。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證菌液組：測(cè)定所加的試驗(yàn)菌數(shù)。平皿法：取試驗(yàn)用的1ml菌

6、液（約50100cfu），分別注入平皿中，立即傾注瓊脂(qingzh)培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌落數(shù)。共五十七頁(yè)細(xì)菌(xjn)、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 供試品對(duì)照組：取規(guī)定量供試液，按菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定供試品本底(bn d)菌數(shù)。（和試驗(yàn)組采用同法）共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證試驗(yàn)組：平皿法：取試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液1ml和50100cfu試驗(yàn)菌，分別(fnbi)注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行制備2個(gè)平皿，按平皿法測(cè)定其菌落數(shù)。 共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)組：培養(yǎng)基稀釋法（平皿法）：取試驗(yàn)

7、可能用的最低稀釋級(jí)供試液1ml分別注入n個(gè)平皿，每個(gè)平皿再注入50100cfu試驗(yàn)菌，分別注入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗(yàn)菌平行(pngxng)制備2份，按平皿法測(cè)定其菌落數(shù)。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證試驗(yàn)組：薄膜過(guò)濾法：取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液，過(guò)濾，沖洗，應(yīng)在最后(zuhu)一次的沖洗液中加入50100cfu試驗(yàn)菌，過(guò)濾，按薄膜過(guò)濾法測(cè)定其菌數(shù)。至少要一張膜。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證試驗(yàn)組：離心沉淀法：取規(guī)定量試驗(yàn)可能用的最低稀釋級(jí)供試液，如供試液含許多藥渣，先以低速500r/min離心35min，取上清液，再以

8、3000 r/min離心1030min，取下面1ml液體（A)，并用適當(dāng)?shù)南♂寗┫礈旃艿?，將洗滌液與液體（A)一起(yq)采用平皿法或薄膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)。共五十七頁(yè)細(xì)菌(xjn)、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證稀釋劑對(duì)照組：若供試液制備需要分散、乳化，中和、離心或薄膜過(guò)濾等特殊處理時(shí)，應(yīng)增加稀釋劑對(duì)照組，以考察供試液制備過(guò)程中微生物受影響的程度。試驗(yàn)時(shí)，可用相應(yīng)的稀釋劑替代供試品，加入(jir)試驗(yàn)菌，使最終菌濃度為每1ml 供試液含50100cfu，按試驗(yàn)組的供試液制備方法和菌落計(jì)數(shù)方法測(cè)定其菌數(shù)。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證結(jié)果(ji gu)判斷指標(biāo)試驗(yàn)組的

9、菌回收率（70%）稀釋劑對(duì)照組的菌回收率（70%）共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)組的菌回收率計(jì)算： （試驗(yàn)組菌落計(jì)數(shù)-供試品對(duì)照組菌落計(jì)數(shù)）菌液組%稀釋劑對(duì)照組的菌回收率計(jì)算： 稀釋劑對(duì)照組菌落計(jì)數(shù)菌液組% 每一驗(yàn)證菌株均應(yīng)進(jìn)行上述試驗(yàn)。 驗(yàn)證試驗(yàn)至少應(yīng)進(jìn)行3次獨(dú)立(dl)的平行試驗(yàn)，并分別計(jì)算各試驗(yàn)菌每次試驗(yàn)的回收率。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 驗(yàn)證(ynzhng)細(xì)菌各平皿傾入營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。 驗(yàn)證霉菌、酵母菌各平皿傾入玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基。 置規(guī)定溫度培養(yǎng)48或72h,菌落計(jì)數(shù)。計(jì)算回收率。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)

10、的驗(yàn)證回收率測(cè)定舉例供試液不用(byng)特殊制備方法常規(guī)法菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：C)供試品對(duì)照組：最低稀釋級(jí)供試液1ml/平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算供試液平均菌數(shù)：B）試驗(yàn)組：最低稀釋級(jí)供試液1ml+ 1ml菌液/平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算供試液平均菌數(shù)：A）回收率=(AB)C%共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證回收率測(cè)定舉例供試液不用特殊制備方法培養(yǎng)基稀釋法（5個(gè)平皿）菌液組：1ml菌液/平皿，每株菌平行2個(gè)平皿（計(jì)算(j sun)平均菌數(shù)：C)供試品對(duì)照組：最低稀釋級(jí)供試液1ml分別注5個(gè)平皿，0.2ml /平皿，平行2份，共10

11、個(gè)平皿（計(jì)算0.2ml供試液平均菌數(shù)：B）試驗(yàn)組：最低稀釋級(jí)供試液0.2ml+1ml菌液/平皿，注5個(gè)平皿，平行2份（計(jì)算平均菌數(shù)：A)回收率=(AB)C%共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌(mjn)、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證 培養(yǎng)基稀釋法可以是1ml供試液注2個(gè)、5個(gè)或更多個(gè)平皿。但是更多的平皿由于操作繁瑣(fn su)易污染一般不做。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證回收率測(cè)定舉例供試液需用特殊制備方法（如加中和劑或乳化劑等)常規(guī)法菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：C)供試品對(duì)照組：最低稀釋(xsh)級(jí)供試液1ml /平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算供試液平均菌數(shù)：

12、B）共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證試驗(yàn)組：最低稀釋級(jí)供試液(sh y)1ml+ 1ml菌液/平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算供試液平均菌數(shù)：A）稀釋劑對(duì)照組：稀釋劑+加中和劑或乳化劑 + 1ml菌液， 平行2個(gè)平皿（計(jì)算供試液平均菌數(shù)：D）試驗(yàn)組回收率=(AB)C%稀釋劑對(duì)照組回收率=DC%共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證回收率測(cè)定舉例供試液需用特殊制備方法（如加中和劑或乳化劑等)培養(yǎng)基稀釋法（5個(gè)平皿）菌液組：1ml菌液/平皿，每株菌平行(pngxng)2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：C)供試品對(duì)照組：最低稀釋級(jí)供試液1ml分別注5個(gè)平皿， 0.2ml /平皿，

13、平行2份，共10個(gè)平皿（計(jì)算0.2ml供試液平均菌數(shù)：B）共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證試驗(yàn)組：最低稀釋級(jí)供試液(sh y)0.2ml+ +加中和劑或乳化劑1ml菌液/平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：A)試驗(yàn)組回收率=(AB)C%稀釋劑對(duì)照組：稀釋劑+加中和劑或乳化劑+ 1ml菌液，平行2個(gè)平皿（稀釋劑對(duì)照組與試驗(yàn)組同法操作）（計(jì)算平均菌數(shù)：D)稀釋劑對(duì)照組回收率=DC%共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證回收率測(cè)定舉例供試液需用特殊制備方法（離心沉淀法）菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：C)供試品對(duì)照組：最低稀釋級(jí)供試

14、液10ml +離心，500rpm離心取上清，加稀釋劑至10ml ，取1ml 注平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算平均(pngjn)菌數(shù)：B)或3000rpm離心取沉淀，加稀釋劑至10ml ，取1ml 注平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：B)共五十七頁(yè)細(xì)菌(xjn)、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證試驗(yàn)組：最低稀釋級(jí)供試液10ml+離心，500rpm離心取上清，加稀釋劑至10ml，取1ml+1ml菌液/平皿，平行(pngxng)2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：A)或3000rpm離心取沉淀，加稀釋劑至10ml，取1ml+1ml菌液/平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：A)試驗(yàn)組回收率=(AB)C%稀釋劑對(duì)照組：取與菌液組

15、細(xì)菌濃度相同的稀釋劑10ml， 3000rpm離心取沉淀，加稀釋劑至10ml，取1ml注平皿，平行2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：D)（稀釋劑對(duì)照組與試驗(yàn)組同法操作）稀釋劑對(duì)照組回收率=DC%共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法(fngf)的驗(yàn)證回收率測(cè)定舉例試液需用特殊制備方法（薄膜過(guò)濾法）菌液組：1ml菌液 /平皿，每株菌平行 2個(gè)平皿（計(jì)算平均菌數(shù)：C)供試品對(duì)照組：含1g或1ml的供試液，過(guò)濾沖洗，至少1張膜（菌落(jnlu)計(jì)數(shù)：B)試驗(yàn)組：含1g或1ml的供試液，過(guò)濾沖洗，+1ml菌液，過(guò)濾，至少1張膜（菌落計(jì)數(shù)：A)稀釋劑對(duì)照組：稀釋劑+菌液，過(guò)濾沖洗，至少1張膜（菌落計(jì)數(shù)：D)共五十七

16、頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證 過(guò)濾(gul)細(xì)菌的膜貼在預(yù)先倒好并預(yù)培養(yǎng)過(guò)的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，菌面朝上。 過(guò)濾霉菌酵母菌的膜貼在預(yù)先倒好并預(yù)培養(yǎng)過(guò)的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基平平板上，菌面朝上。試驗(yàn)組回收率=(AB)C%稀釋基對(duì)照組回收率=DC%共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證計(jì)數(shù)方法的確定(qudng) 細(xì)菌計(jì)數(shù)方法與霉菌和酵母菌計(jì)數(shù)方法可以不一致。 細(xì)菌以各試驗(yàn)菌（大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）的回收率均能達(dá)到70%以上的檢測(cè)方法為準(zhǔn)。 霉菌和酵母菌以各試驗(yàn)菌（白色念珠菌、黑曲霉）的回收率均能達(dá)到70%以上的檢測(cè)方法為準(zhǔn)。共五十七頁(yè)細(xì)菌、霉菌、

17、酵母菌計(jì)數(shù)(j sh)方法的驗(yàn)證計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證結(jié)果判斷 在3次獨(dú)立的平行試驗(yàn)中，稀釋劑對(duì)照組的菌回收率應(yīng)均不低于70%。 若試驗(yàn)組的菌回收率均不低于70%，則按此供試液制備方法和計(jì)數(shù)法測(cè)定供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌數(shù)能保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。 若任一次試驗(yàn)中試驗(yàn)組的菌回收率低于70%，應(yīng)采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合(linh)使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新驗(yàn)證。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證試驗(yàn)菌株：按規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株。陰性對(duì)照菌株:選擇原則(yunz)，口服選用金黃色葡萄球菌，外用選用大腸埃希菌 。菌種的要求：不得

18、超過(guò)5代。采用適宜的方法保存。加菌量:10100cfu共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證 驗(yàn)證試驗(yàn)按供試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進(jìn)行。 驗(yàn)證試驗(yàn)可與供試品的控制菌檢查同時(shí)進(jìn)行。 試驗(yàn)組：取規(guī)定量供試液及10100cfu試驗(yàn)菌加入增菌培養(yǎng)基中，依相應(yīng)控制菌檢查法進(jìn)行檢查. 陰性菌對(duì)照組：設(shè)立陰性菌對(duì)照組是為了(wi le)驗(yàn)證該控制菌檢查方法的特異性，方法同試驗(yàn)組。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證 控制菌檢查驗(yàn)證用菌株：大腸埃希菌、沙門(mén)(shmn)菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌 。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證 口服制劑驗(yàn)證用菌株：大腸埃希

19、菌 大腸菌群 沙門(mén)(shmn)菌 陰性對(duì)照菌菌株：金黃色葡萄球菌 檢查方法：大腸埃希菌按大腸埃希菌項(xiàng)下檢查 大腸菌群按大腸菌群項(xiàng)下檢查 沙門(mén)菌按沙門(mén)菌項(xiàng)下檢查共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證外用制劑(zhj)驗(yàn)證用菌株：銅綠假單胞菌 金黃色葡萄球菌 生孢梭菌 陰性對(duì)照菌菌株：大腸埃希菌檢查方法：銅綠假單胞菌按銅綠假單胞菌項(xiàng)下檢查 金黃色葡萄球菌按金黃色葡萄球菌項(xiàng)下檢查 生孢梭菌按生孢梭菌項(xiàng)下檢查共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證驗(yàn)證方法選擇：常規(guī)法、稀釋(xsh)法、薄膜過(guò)濾法、中和法、離心沉淀法、聯(lián)合方法。供試品量：1g或1ml，沙門(mén)菌檢查為10g。培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基、

20、膽鹽乳糖增菌液、MUG培養(yǎng)基、膽鹽乳糖發(fā)酵管、四硫磺酸鹽增菌液、膽鹽硫乳瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、溴代十六烷三甲胺平板、甘露醇氯化鈉平板、0.1%皰肉培養(yǎng)基、含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂平板。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證菌液制備 接種大腸埃希菌、沙門(mén)菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌的新鮮培養(yǎng)物至10ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，3537培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)液1ml加0.9無(wú)菌氯化鈉溶液9ml，采用10倍遞增(dzng)稀釋法，稀釋至10-510-7，使菌數(shù)約為10100cfu/ml。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證常規(guī)法：大腸埃希菌：取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試

21、液至100ml膽鹽乳糖增菌液，陽(yáng)性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10100cfu，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌10100cfu，3537培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)物0.2ml接種至含5ml MUG培養(yǎng)基的試管內(nèi)培養(yǎng)，觀察熒光(ynggung)及靛基質(zhì)試驗(yàn)。陽(yáng)性菌MUG陽(yáng)性，靛基質(zhì)陽(yáng)性，則表明該樣品對(duì)大腸埃希菌沒(méi)有抑菌作用。陰性菌未檢出表明該控制菌檢查方法的專(zhuān)屬性好。若陽(yáng)性菌未檢出則表明該樣品對(duì)大腸埃希菌有抑菌作用，需對(duì)供試液進(jìn)行處理。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證常規(guī)法大腸菌群：取含適量（不少于10ml）的膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管3支，分別加入含供試品0.1g或0.1ml 、0.01g或0.01

22、ml、0.001g或0.001ml的供試液，陽(yáng)性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10100cfu，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌(p to qi jn)10100cfu， 3537培養(yǎng)1824小時(shí)觀察結(jié)果。若陽(yáng)性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對(duì)大腸菌群無(wú)抑菌作用且專(zhuān)屬性好。若陽(yáng)性菌未檢出則表明該樣品對(duì)大腸菌群有抑菌作用，需對(duì)供試液進(jìn)行處理。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證常規(guī)(chnggu)法沙門(mén)菌：取供試品10g或10ml,直接或處理后接種至適量（不少于200ml）營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，混勻，陽(yáng)性菌對(duì)照加入沙門(mén)菌10100cfu，陰性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌10100cfu ，3537培養(yǎng)1824

23、小時(shí)，取此培養(yǎng)物1ml接種于10ml四硫磺酸鹽增菌液，培養(yǎng)1824小時(shí)后劃線于膽鹽硫乳瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板觀察結(jié)果。若陽(yáng)性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對(duì)沙門(mén)菌無(wú)抑菌作用且專(zhuān)屬性好。若陽(yáng)性菌未檢出則表明該樣品對(duì)沙門(mén)菌有抑菌作用，需對(duì)供試液進(jìn)行處理。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證常規(guī)法銅綠假單胞菌：取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液至100ml膽鹽乳糖增菌液,陽(yáng)性菌對(duì)照加入銅綠假單胞菌10100cfu，陰性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10100cfu， 3537培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)物劃線接種于溴代十六烷三甲銨平板觀察結(jié)果(ji gu)。若陽(yáng)性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對(duì)銅綠

24、假單胞菌無(wú)抑菌作用且專(zhuān)屬性好。若陽(yáng)性菌未檢出則表明該樣品對(duì)銅綠假單胞菌有抑菌作用，需對(duì)供試液進(jìn)行處理。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證常規(guī)法金黃色葡萄球菌：取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液至100ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,陽(yáng)性菌對(duì)照加入金黃色葡萄球菌10100cfu，陰性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10100cfu，3537培養(yǎng)1824小時(shí)，取此培養(yǎng)物劃線接種(jizhng)于甘露醇氯化鈉平板觀察結(jié)果。若陽(yáng)性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對(duì)金黃色葡萄球菌無(wú)抑菌作用且專(zhuān)屬性好。若陽(yáng)性菌未檢出則表明該樣品對(duì)金黃色葡萄球菌有抑菌作用，需對(duì)供試液進(jìn)行處理。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證常規(guī)

25、法生孢梭菌：取相當(dāng)于1g或1ml供試品的供試液至100ml 0.1%皰肉培養(yǎng)基,陽(yáng)性菌對(duì)照加入生孢梭菌10100cfu陰性菌對(duì)照加入大腸埃希菌10100cfu， 3537厭氧培養(yǎng)7296小時(shí)，取0.2ml涂抹于含慶大霉素的哥倫比亞瓊脂平板 3537 厭氧4872h觀察結(jié)果。若陽(yáng)性菌檢出而陰性菌未檢出則表明該樣品對(duì)生孢梭菌無(wú)抑菌作用且專(zhuān)屬性好。若陽(yáng)性菌未檢出則表明該樣品對(duì)生孢梭菌有抑菌作用(zuyng)，需對(duì)供試液進(jìn)行處理。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證結(jié)果判斷： 陰性菌對(duì)照組未檢出陰性對(duì)照菌，試驗(yàn)組檢出試驗(yàn)菌，表明該法專(zhuān)屬性強(qiáng)，可按此供試液制備(zhbi)法和控制菌檢查法進(jìn)行供試品的該控制菌檢查。 若試驗(yàn)組未檢出試驗(yàn)菌，表明該供試品有抑菌作用，應(yīng)采用稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過(guò)濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性，并重新驗(yàn)證。共五十七頁(yè)控制(kngzh)菌檢查法的驗(yàn)證 培養(yǎng)基稀釋法： 供試品有抑菌作用，放大培養(yǎng)基量，由1：100放大為1：300、1：500或1：1000。由于盛放培養(yǎng)基容器體積有限，一般放大到500ml或1000ml。本法適用于抑菌作用不強(qiáng)(b qin)的中西藥制劑，操作簡(jiǎn)便易行，應(yīng)用范圍廣泛。共五十七頁(yè)控制(kn