1、關(guān)于微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)公開課第一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月一.微生物的類群微生物原核類:真核類非細(xì)胞類：細(xì)菌、支原體、放線菌、藍(lán)藻個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生動(dòng)物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒微生物的共同特點(diǎn)：第二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.細(xì)菌的形態(tài)第三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.細(xì)菌的菌落.定義：單個(gè)或者少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。.功能：每種細(xì)菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種

2、鑒定的重要依據(jù)。第四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月幾種菌落及其形態(tài)第五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.概念：人們按照微生物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)。二.培養(yǎng)基思考：微生物要生存繁殖，需要“吃”什么？第六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.培養(yǎng)基的營養(yǎng)物質(zhì)1.水2.碳源（提供碳元素的物質(zhì)）3.氮源（提供氮元素的物質(zhì)）4.無機(jī)物（無機(jī)鹽）第七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3.培養(yǎng)基的類型（1）按物理狀態(tài)分：固體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基 液體培養(yǎng)基區(qū)別：加入瓊脂的量決定培養(yǎng)基的物理狀態(tài)。注意：一般細(xì)菌不能利用瓊脂。第八張，PPT共

3、四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月 單個(gè)或者少數(shù)微生物在固體培養(yǎng)基表面生長繁殖,可以形成肉眼可見子細(xì)胞的群體菌落固體培養(yǎng)基用途：用于微生物純化、計(jì)數(shù)、鑒定第九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)表面生長均勻混濁生長沉淀生長第十張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月半固體培養(yǎng)基：觀察運(yùn)動(dòng)第十一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基化學(xué)成分不恒定的天然有機(jī)物如：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯培養(yǎng)基化學(xué)成分完全了解的物質(zhì)配制而成的培養(yǎng)基（2）按化學(xué)成分劃分：第十二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月鑒別培養(yǎng)基將某種類微生物從混雜的微生物群體中分離出

4、來用于鑒別不同類型微生物的培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基（3）按用途劃分：第十三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較種類用途例子選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基從眾多微生物中分離所需的微生物鑒別不同種類的微生物不加含碳有機(jī)物的無碳培養(yǎng)基，伊紅美籃培養(yǎng)基使大腸桿菌的菌落呈黑色，可以鑒別大腸桿菌分離自養(yǎng)型微生物第十四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.無菌范圍：實(shí)驗(yàn)操作空間消毒操作者的手、衣著消毒實(shí)驗(yàn)用具滅菌實(shí)驗(yàn)操作過程3.無菌的方法：酒精燈旁操作三.無菌技術(shù)防止外來雜菌的污染1.無菌的意義：消毒與滅菌第十五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）消毒（2）滅菌概念較為溫

5、和理化方法殺死部分有害微生物強(qiáng)烈的理化因素殺死所有的微生物2.無菌的方法第十六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月接種室內(nèi)空氣、接種箱、超凈工作臺(tái)紫外線消毒實(shí)驗(yàn)者的手臂、實(shí)驗(yàn)臺(tái)等化學(xué)藥劑消毒牛奶等不宜高溫消毒滅菌的巴氏消毒日常食物、罐裝食品煮沸消毒法適用范圍方法（1）消毒第十七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器材高壓蒸汽滅菌耐高溫需干燥的物品（玻璃器皿等）干熱滅菌接種的工具、試管口、瓶口灼燒滅菌適用對(duì)象滅菌方法灼燒滅菌干熱滅菌箱高壓蒸汽滅菌鍋（2）滅菌第十八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法

6、。（1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2） 玻璃棒、試管、燒瓶（3） 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手思考答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。第十九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月我們已經(jīng)對(duì)培養(yǎng)基和無菌技術(shù)有了一定的了解，你能不能用培養(yǎng)基進(jìn)行大腸桿菌的純化培養(yǎng)？思考第二十張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月大腸桿菌的純化培養(yǎng)：（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基四. 實(shí)驗(yàn)操作（二）純化大腸桿菌第二十一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1000ml牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方H2O 定容至1000mlNacl 5g蛋白胨 10g牛肉膏 5g瓊脂20.0g1.計(jì)算：依配方計(jì)算各成分的用量2

7、.稱量：3.溶化：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加蓋牛肉膏、稱量紙 、少量水加熱溶解取紙蛋白胨、NaCl瓊脂、攪拌補(bǔ)水定容4.滅菌：5.倒平板：（一）制備培養(yǎng)基培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)皿干熱滅菌第二十二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月計(jì)算稱量溶化滅菌倒平板（一）制備培養(yǎng)基1.將培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手撥出棉塞。12342.右手拿錐形瓶，使瓶口迅速通過火焰。3.用左手將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mL)倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上皿蓋。4.等待平板冷卻凝固（約需5 10min）。然后，將平板倒過來放置，使皿蓋在下，皿底在上

8、。第二十三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50左右時(shí)，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？問題討論答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手即可。2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。第二十四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基造成污染 避免培養(yǎng)基中水分過快蒸發(fā)。答：最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 防止空氣中

9、的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生。第二十五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月單個(gè)細(xì)胞單個(gè)菌落（二）純化大腸桿菌如何純化？接種常見方法平板劃線法如何分散成單個(gè)細(xì)胞？稀釋涂布平板法微生物群分散第二十六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.平板劃線法：分區(qū)劃線法連續(xù)劃線法（1）概念與原理：聚集的菌群連續(xù)劃線稀釋分散單個(gè)細(xì)胞菌落生長繁殖第二十七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月(2)“平板劃線”實(shí)驗(yàn)操作第二十八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？問題討論殺死

10、接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者接種結(jié)束后殺死上次劃線時(shí)殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時(shí)菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個(gè)細(xì)胞每次劃線前殺死接種環(huán)上原有微生物取菌種前目的灼燒時(shí)期第二十九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（2）在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？ 答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。（3）在作第二次以及其后的劃線操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終得到單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。第三十張，PP

11、T共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3個(gè)劃線平板1個(gè)不劃線平板（重復(fù)實(shí)驗(yàn)）（空白對(duì)照）（3）培養(yǎng)放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h第三十一張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2.稀釋涂布平板法菌液的梯度稀釋：涂布平板操作：(1)概念與原理：聚集的微生物單個(gè)細(xì)胞菌液梯度稀釋菌落涂布平板(2)操作：生長繁殖第三十二張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月系列梯度稀釋操作9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水9mL無菌水注意：移液管需要經(jīng)過滅菌；試管口和移液管離火焰12cm處。第三十三張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月涂布平板操作：第三十四張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作

12、于2022年6月各梯度分別涂布3個(gè)平板1個(gè)不涂布作空白對(duì)照稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍放入37恒溫箱中培養(yǎng)12h24h（3）培養(yǎng)第三十五張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月1.臨時(shí)保藏：試管固體斜面培養(yǎng)基上42.長期保存：菌種易被污染、變異甘油管藏1ml甘油1ml菌液20三 菌種的保存36個(gè)月，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)第三十六張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月2分析下面培養(yǎng)基的配方：KH2PO4、Na2HPO4、MgSO47H2O、葡萄糖、尿素、瓊脂。請回答：(1)在該培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是_和_。(2)想一想這種培養(yǎng)基對(duì)微生物是否具有選擇作用？如果具有，又

13、是如何進(jìn)行選擇的？_。有選擇作用。因?yàn)榇伺浞街心蛩厥俏ㄒ坏?，因此，只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長葡萄糖尿素第三十七張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月3.培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、實(shí)驗(yàn)操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌、消毒方法依次是() 化學(xué)消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線滅菌高壓蒸汽滅菌巴氏消毒法ABC DA第三十八張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月四 成果評(píng)價(jià)如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫12d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。（二）接種操作是否符合無菌要求如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求。（一）培養(yǎng)基的制作是否合格第三十九張，PPT共四十三頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與