1、蒸發(fā)光散射檢測器的原理及優(yōu)勢索福達(dá)M300S一、ELSD的工作原理M300S ELSD檢測對像主要是針對無紫外吸收和紫外吸收很弱的 化合物。蒸發(fā)光散射檢測器（Evaporative Light Scattering Detector,ELSD）是一種通用型檢測 器，它由4部分組成，即霧化器，加熱漂移管，光散射池，光源和 檢測器。ELSD的檢測工作原理主要包括霧化、蒸發(fā)和光散射及其檢測3個過 程：（1）霧化過程：霧化器與分析柱出口直接相連，經(jīng)色譜柱分離的組 分隨流動相進(jìn)入霧化器針管，在針管的末端，洗脫液和通入的氣體 （通常為高純氮氣，有時是空氣）混合噴成均勻的微小液滴（包含流動 相和樣品的氣溶膠

2、），可通過調(diào)節(jié)氣體和流動相的流速來調(diào)節(jié)霧化器 產(chǎn)生的液滴的大小。（2）蒸發(fā)過程：氣溶膠進(jìn)入加熱漂移管，其中易揮發(fā)成分（流動 相）被蒸發(fā)，溶質(zhì)形成極細(xì)的霧狀顆粒。（3）光散射及其檢測過程：不揮發(fā)樣品顆粒和蒸氣通過漂移管進(jìn)入 光散射池，在光散射池中，用強(qiáng)光或激光照射氣溶膠，產(chǎn)生光散射，用光電二極管檢測散射光，產(chǎn)生電信號，信號與樣品的質(zhì)量成 比例關(guān)系。二、影響M300S ELSD檢測的因素1、漂移管溫度：漂移管溫度對基線水平和噪音的影響沒有明顯的規(guī) 律性，溫度過低，流動相得不到充分揮發(fā)，使基線水平較高；鹽的 加入會提高這一溫度，溫度升高，流動相蒸發(fā)趨向完全，信噪比上 升。但溫度太高會使流動相沸騰，增

3、加背景噪音，同時可能導(dǎo)致溶 質(zhì)的部分氣化，使信號變小，從而損失了靈敏度，降低信噪比。當(dāng) 溶劑蒸發(fā)需要高熱時，要升高操作溫度，但是溫度低一些更好，這 有助于得到較大顆粒，提高散射光的強(qiáng)度。故最優(yōu)溫度應(yīng)為在流動 相（包括其中所含的鹽）基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上，產(chǎn)生可接受噪音的最低 溫度。不同的流動相有不同的漂移管合適的設(shè)定溫度。2、流動相組成：一般來說，采用ELSD檢測時，流動相的揮發(fā)性越 好，方法的靈敏度越高。中性物質(zhì)的分析，其流動相一般能滿足要 求。但絕大多數(shù)酸堿化合物的檢測都需要緩沖鹽，而緩沖鹽的揮發(fā) 性、純度及濃度將直接影響到ELSD檢測的基線水平、基線漂移程度 及噪音大小。一般來說，緩沖鹽揮發(fā)性

4、差、純度低或濃度高，均會 提高基線水平，增大基線漂移程度，從而降低信噪比。因而，用作 緩沖鹽的鹽既要容易揮發(fā)（一般是熱分解揮發(fā)），又要具有較高的純 度。通常使用的緩沖鹽由醋酸、甲酸、三氟醋酸、硝酸銨、磷酸氫 二銨等組成。流動相流速：在一定范圍內(nèi)，流動相的流速越低，流動相完全揮發(fā) 所需的載氣流速越低，形成的溶質(zhì)顆粒越大，對激光散射能力越 強(qiáng)，相應(yīng)的信號越強(qiáng)。3、載氣流速：載氣流速是影響HPLC-ELSD檢測性能的一個很重要的 因素。一般來說，載氣流速越小，形成的溶質(zhì)顆粒越大，散射光的 強(qiáng)度越大，但當(dāng)載氣流速太小時，流動相揮發(fā)不完全，增加背景噪 音，降低信噪比。最優(yōu)載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上

5、，產(chǎn)生 最大檢測響應(yīng)值時的最低流速。三、M300S ELSD與其它檢測器的比較1、紫外檢測器因其高靈敏度和穩(wěn)定性，在HPLC中應(yīng)用最廣泛。但 它所能檢測的物質(zhì)必須具有吸收紫外光的生色團(tuán)，而相應(yīng)的流動相 在檢測波長下則應(yīng)當(dāng)是無紫外吸收的。這一特性一定程度上限制了 其能檢測的物質(zhì)范圍和一些良好溶劑的使用：不能檢測無紫外吸收 及紫外吸收系數(shù)很小的化合物；檢測紫外末端吸收的化合物靈敏度 較差，并且易受各種干擾；梯度洗脫時經(jīng)常發(fā)生各種原因的基線漂 移。因此，不少種類的藥物就無法或很難直接采用HPLC-UV法分 析。采用衍生化技術(shù)，較好地解決了部分分析難題，但該類方法操 作很繁瑣、費時，而且還會因為反應(yīng)的

6、復(fù)雜性及衍生化產(chǎn)物的穩(wěn)定 性影響測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。2、示差折光檢測器是一種通用的檢測器，它是基于色譜柱流出物光 折射率的變化來連續(xù)測定樣品的濃度。但它不容易平衡，對工作環(huán) 境要求很苛刻，極易受溫度、壓力的變化影響，不適于在梯度洗脫 中應(yīng)用，檢測靈敏度也不夠高。3、蒸發(fā)光散射檢測器ELSD的出現(xiàn)，一定程度上彌補(bǔ)了 HPLC傳統(tǒng)檢 測器的不足，擴(kuò)大了 HPLC的應(yīng)用范圍。優(yōu)點如下：（1）ELSD最大的優(yōu)越性在于能檢測不含發(fā)色團(tuán)的化合物，不同于 紫外和熒光檢測器，ELSD的響應(yīng)不依賴于樣品的光學(xué)特性，只要樣 品的揮發(fā)性低于流動相即可被檢測，對于無紫外或紫外末端吸收的 大分子有機(jī)化合物的檢測，顯示出極大的優(yōu)越性，還適用于流動相 有紫外吸收干擾或梯度洗脫時基線漂移影響的情況，目前ELSD廣泛 應(yīng)用于HPLC。（2）響應(yīng)因子的一致性：在相同的色譜條件下，物理性質(zhì)相似的物 質(zhì)在ELSD中形成的顆粒大小、形狀相近，對激光散射能力相同，因 而顯示一致的響應(yīng)。這一特征較經(jīng)典的紫外檢測有較大的優(yōu)勢，更 能真實地反映樣品的組成情況。能在無標(biāo)準(zhǔn)品和化合物結(jié)構(gòu)參數(shù)的 情況下檢測未知化合物。（3）ELSD的檢測是流動相被蒸發(fā)之后進(jìn)行的，消除了溶劑的干擾 和因溫度變化引起的基線漂移。（4）ELSD還可與梯度洗脫相容，應(yīng)用范圍較一些傳統(tǒng)的檢測方法 要廣。（5）由