1、大鼠小腸移植模型中移植腸的選擇【摘要】目的：比擬大鼠異位小腸移植模型中不同節(jié)段移植腸的病理學(xué)變化及移植腸存活率.方法:將近交系istar大鼠320只隨機(jī)配對分為a，b，d4組.a組為對照組n=80，行虛擬手術(shù)；b組n=80行異位全小腸移植；組n=80行異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取中、遠(yuǎn)段小腸，長度1550不等；d組n=80亦行異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取近段小腸，長度1550不等；各組術(shù)后常規(guī)補(bǔ)液，給予抗生素.每日觀察移植腸造瘺口顏色及分泌物.并于術(shù)后1，7，14，30d于移植腸近端造口內(nèi)注入麥芽糖溶液，各組隨機(jī)抽取20只受體于術(shù)后7，14，30d統(tǒng)一自頸外靜脈置管處采血1l，測量注入

2、麥芽糖前后血糖值并換算出血糖吸收值.移植鼠瀕臨死亡時取材，行組織病理學(xué)檢測.結(jié)果：b組受體的病理學(xué)變化程度較，d組明顯，大鼠的存活率亦較低.b，d各組血糖吸收值變化無統(tǒng)計學(xué)差異.結(jié)論：在大鼠小腸移植模型的移植腸的選擇中，節(jié)段性較全小腸移植效果好；節(jié)段性移植腸的選擇以取距屈氏韌帶5、長度約1520移植腸為宜.【關(guān)鍵詞】小腸/移植；大鼠；移植腸0引言大鼠小腸移植模型的建立至今已有30年的歷史1，在此期間已有不少的創(chuàng)新和開展，但是由于技術(shù)復(fù)雜和死亡率高，仍然嚴(yán)重阻礙了這種模型的廣泛應(yīng)用.我們在長期的小腸移植模型建立的實驗中發(fā)現(xiàn)，不同節(jié)段移植腸的選擇是影響模型存活率的重要因素.我們采用不受移植免疫因素

3、影響的近交品系istar大鼠分別作為供體和受體施行異位小腸移植，以期進(jìn)步存活率.1材料和方法1.1材料成年安康雄性近交系istar大鼠320只，體質(zhì)量280320g(第四軍醫(yī)大學(xué)實驗動物中心)，移植配對時體質(zhì)量相近.戊巴比妥鈉生理鹽水，活力碘，福爾馬林，乳酸林格液第四軍醫(yī)大學(xué)試劑中心；麥芽糖溶液上海南翔試劑，光學(xué)顯微鏡上海光學(xué)儀器廠，l3142206型.1.2方法1.2.1移植模型制作1.2.1.1動物分組及麻醉將近交系istar大鼠320只隨機(jī)配對分為a，b，d4組.a組為對照組n=80行虛擬手術(shù)；b組n=80行異位全小腸移植；組n=80行異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取中、遠(yuǎn)段小腸，長度1

4、550不等；d組n=80亦行異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取近段小腸，長度1550不等.供、受體均在代謝籠內(nèi)禁食1012h，自由飲用16萬u/l慶大霉素+50g/l葡萄糖氯化鈉溶液.動物麻醉按10l/g腹腔內(nèi)注射10g/l氯胺酮，可維持12h，假設(shè)術(shù)中動物清醒，可追加原始劑量的1/4.1.2.1.2供體手術(shù)沿腹部中線縱形切口入腹后,首先行全結(jié)腸切除術(shù).b組：分別在距treitz韌帶1和距回盲部2處切斷空腸及回腸；組：取中、遠(yuǎn)段小腸，長度1550不等；d組：于距屈氏韌帶5為近端，取小腸約20.兩端均切斷、結(jié)扎,游離腸系膜上靜脈、門靜脈至肝門處，盡量剝凈周圍胰腺組織，游離帶腸系膜動脈的一段腹主動脈

5、,阻斷已別離的腹主動脈近心端,經(jīng)腎下腹主動脈行小腸原位灌洗，灌洗液為4肝素化乳酸林格液約510l,于40高度灌洗移植腸段至腸管顏色蒼白，同時腹腔內(nèi)充滿冰鹽水降溫.灌洗的同時于肝門處離斷門靜脈,將5f內(nèi)徑uff管套入門靜脈，翻轉(zhuǎn)門靜脈使其內(nèi)膜向外翻于套管上，0/6號絲線結(jié)扎固定將移植腸取下放入4乳酸林格液中保存.1.2.1.3受體手術(shù)首先行上腔靜脈置管，參照allander等2的方法.取左頸前外側(cè)鎖骨上縱行皮膚切口約1，顯露頸外靜脈，向心插入11.5達(dá)上腔靜脈固定.在插管過程中持續(xù)以1l/h輸注生理鹽水，防止導(dǎo)管內(nèi)凝血堵塞及氣體進(jìn)入血管.麻醉同供體，開腹后游離左腎靜脈，切除左腎.顯露左腎動脈下方

6、腹主動脈約1.5,在其上、下方阻斷血流，移植腸以冰鹽水紗布保護(hù)，用0/9號無損傷縫合針行腸系膜上動脈、腹主動脈端側(cè)吻合；移植腸門靜脈與左腎靜脈利用5f內(nèi)徑uff管行袖套式吻合，結(jié)扎固定.去除阻斷動、靜脈的顯微外科止血夾，即見移植腸腸系膜上動脈搏動明顯,移植腸腸管紅潤，腹腔內(nèi)倒入37溫鹽水復(fù)溫.移植腸近端于左上腹造口、末端于左下腹造口.受體于開腹前、血管吻合后及關(guān)腹后各補(bǔ)含4g/l頭孢唑啉鈉的平衡鹽液23l,共68l.1.2.1.4術(shù)后觀察術(shù)后每日稱體質(zhì)量；觀察移植腸造口粘膜顏色及分泌物；術(shù)后1，7，14，30d于移植腸近端造口內(nèi)注入50g/l麥芽糖溶液1l，分別于注入前及注入后30in自頸外靜

7、脈置管處采血1l，測量注入麥芽糖前后血糖值并換算出血糖吸收值3.移植組在大鼠體質(zhì)量降至130150g，極度消瘦，毛發(fā)臟亂而無力梳理瀕臨死亡時，取移植腸管進(jìn)展病理學(xué)檢查.生存時間超過30d被認(rèn)為可以長期存活4.統(tǒng)計學(xué)處理：數(shù)據(jù)采用xs表示，以完全隨機(jī)設(shè)計資料的方差分析方法利用統(tǒng)計軟件spss10.0進(jìn)展統(tǒng)計分析，p0.05認(rèn)為差異有顯著性.2結(jié)果2.1移植大鼠存活時間a組存活時間不受限制；b組受體平均存活時間為(18.02.1)d，術(shù)后精神狀況逐日下降，消瘦明顯，產(chǎn)生大量腹水；組受體平均存活時間為(35.32.3)d，大鼠術(shù)后清醒較快,清醒后即正常活動；d組受體平均存活時間為(38.05.0)d

8、，術(shù)后精神好，對刺激反響靈敏.其中b組與d，組相比存活時間明顯縮短(p0.05)，而d，組存活時間無明顯差異.2.2移植大鼠體質(zhì)量、移植腸造口粘膜顏色及分泌物變化a組體質(zhì)量無變化，b組術(shù)后的體質(zhì)量下降明顯，d組體質(zhì)量亦下降，但其下降幅度較b組明顯緩慢.b組大部分受體移植腸造口粘膜水腫明顯、伴青紫淤血，分泌的腸液較粘稠，不斷有血性液體溢出；，d組大部分受體移植腸造口粘膜紅潤，分泌的腸液稀薄，無血性液體溢出.2.3麥芽糖吸收實驗術(shù)后b組血糖吸收值迅速升高，2k時約為術(shù)前的3倍.，d組術(shù)后血糖吸收值逐漸升高，2k時約為術(shù)前的2倍.移植各組在術(shù)后1d時血糖吸收值僅為0.40.6l/l，此后持續(xù)升高，1

9、k時已超過術(shù)前；2k后移植，d組的血糖吸收值根本穩(wěn)定，約為術(shù)前的2倍圖1.b組：異位全小腸移植；組：異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取中、遠(yuǎn)段小腸；d：異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取近段小腸.圖1各組術(shù)后麥芽糖吸收值的比擬2.4病理組織學(xué)檢查肉眼觀察：a組小腸形態(tài)正常，無病理學(xué)改變；b組移植腸顏色灰白，腸腔擴(kuò)大并廣泛粘連，伴腹腔大量膿性滲出液；組移植腸粘連少，有少量炎性滲出液，腸系膜血管搏動明顯；d組移植腸紅潤，腸系膜血管搏動明顯.鏡下觀察圖2：a組小腸粘膜構(gòu)造正常；b組移植腸粘膜增厚、上皮腫脹；組移植腸絨毛輕度增生，部分腸壁缺血伴壞死；d組移植腸粘膜稍增厚，移植腸管構(gòu)造正常，未見代償性改變；

10、其他大鼠無急性排擠反響表現(xiàn).各組因其他原因死亡腸梗阻、腹膜炎大鼠不計入檢查范圍.a:對照;b：異位全小腸移植；：異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取中、遠(yuǎn)段小腸；d：異位節(jié)段性小腸移植，移植腸部位取近段小腸.圖2各組小腸標(biāo)本鏡下觀察he2003討論大鼠小腸移植是一種較難掌握的顯微外科技術(shù).我們根據(jù)臨床小腸移植理論需要，采用不受移植免疫因素影響的近交品系istar大鼠分別作為供體和受體施行異位小腸移植，參照zhang等6的方法并加以改良.3.1不同長度移植腸的比擬全小腸移植可致血容量缺乏：由于移植腸體積龐大，當(dāng)血管吻合成功開放時會造成一過性受體回心血量驟減；同時，受體腹腔容積有限，移植物體積過大，受

11、體腹壓增高，同樣造成回心血量驟減.而低血容量休克是小腸移植大鼠的主要死亡原因7.大鼠每100g體質(zhì)量的血容量約為5.56.5l，術(shù)中假設(shè)失血量超過3l，可直接導(dǎo)致死亡受體.本實驗中，b組平均存活時間明顯低于其他各組，部分受體出現(xiàn)術(shù)后即刻死亡，我們認(rèn)為與上述原因親密相關(guān).移植腸梗阻：移植腸長度過長，腸粘連的可能性較大；手術(shù)后早期腸蠕動即可出現(xiàn)，但無規(guī)律性，難以將腸腔內(nèi)分泌物完全排出；加上移植術(shù)后供體分泌物較平時增多，這些分泌物相當(dāng)稠厚；上述因素導(dǎo)致全小腸移植發(fā)生腸梗阻的幾率明顯增加.本實驗中，b組移植腸顏色灰白，腸腔擴(kuò)大并廣泛粘連，與此親密相關(guān).而節(jié)段性小腸移植除能克制上述不利因素外，還具有手術(shù)

12、時間短、受體存活率高、術(shù)后取材方便、標(biāo)本質(zhì)量較好等優(yōu)點.同時，各組麥芽糖吸收實驗無顯著性差異，說明不同長度移植腸對吸收功能影響不大.3.2供體移植腸不同部位的選取供腸質(zhì)量好壞直接影響小腸移植結(jié)果8.本實驗中，d組各項指標(biāo)均無顯著性差異，但組部分移植腸部分腸壁缺血伴壞死.我們認(rèn)為當(dāng)供體手術(shù)時，選取中、遠(yuǎn)段小腸較近段小腸需多結(jié)扎34支腸系膜血管，所致的移植腸部分腸壁缺血常被無視.同時，需多游離0.5主動脈，多結(jié)扎一支腰動脈，也增加了吻合口血栓形成和漏血的時機(jī).3.3改良受體術(shù)式供體手術(shù)中盡量采勸無創(chuàng)技術(shù)，即不用手持或鉗夾供腸，而改用棉簽代手和器械輕撥，防止反復(fù)翻動.過早結(jié)扎幽門和脾靜脈常引起內(nèi)臟靜

13、脈瘀血，有效循環(huán)血容量銳減可能導(dǎo)致休克6.因此，這兩支靜脈的結(jié)扎推延至灌注前在結(jié)扎腹腔動脈后進(jìn)展.手術(shù)早期即結(jié)扎遠(yuǎn)端腹主動脈，增加供腸的灌注.本實驗供腸的熱缺血時間大都控制在40in之內(nèi).時間過長那么導(dǎo)致不可逆腸功能障礙，表現(xiàn)為供腸水腫，節(jié)段性青紫瘀血，嚴(yán)重影響移植結(jié)果.受體術(shù)前行上腔靜脈置管，術(shù)中靜脈輸注復(fù)方乳酸鈉溶液68l.在zhang等6術(shù)式根底上加以改良，術(shù)中不阻斷下腔靜脈回流，對循環(huán)無干擾.采用套管吻合技術(shù)，將pv套入左腎靜脈，整個過程約5in即可完成.不采用全身性肝素化，吻合口用不含肝素的低分子右旋糖酐沖洗，術(shù)后不易漏血，對血管內(nèi)皮損傷輕5，吻合口狹窄及血栓形成的時機(jī)減少，供腸有充

14、足血供，動物存活明顯增加.總之，改良技術(shù)的大鼠小腸移植減少了多數(shù)并發(fā)癥的發(fā)生，特別是選擇適宜的節(jié)段性移植小腸，明顯進(jìn)步了手術(shù)成功率.可以滿足臨床小腸移植各種相關(guān)研究的需要.【參考文獻(xiàn)】1nhikgj,russelps.transplantatinfsallbelintherat:tehnialandiunlgialnsideratinsj.surgery,1971,70:693-702.3鄒小明，李曉林，袁友萍，等.維持大鼠生理需要最短移植腸管長度的討論j.中華胃腸外科雜志,2022,7(3):229-230.4韓志強(qiáng)，汪昱，王志剛，等.大鼠小腸移植模型的改良j.中國中西醫(yī)結(jié)合外科雜志,2022,13(4):382-383.5季剛，林艷，王為忠，等.x34預(yù)防大鼠小腸移植急性排擠反響j.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2022，272：117-119.6zhangxq,sunjl,ar,etal.siplifiedtehniquesinrathetertpisallbeltransplant