1、紅曲菌株的別離純化和鑒定【摘要】目的對(duì)紅腐乳中的紅曲菌進(jìn)展別離純化和鑒定。方法根據(jù)紅曲菌嗜酸、耐乙醇的生長(zhǎng)特性，用含乙醇的麥芽汁、含乳酸的大米培養(yǎng)基別離紅腐乳汁中的紅曲菌，并用對(duì)數(shù)稀釋平板法進(jìn)展純化。純化后的紅曲菌顯微觀察確定其屬別。按照其在EA培養(yǎng)基上25培養(yǎng)的菌落形態(tài)特征鑒定到種。結(jié)果從紅腐乳中別離的兩個(gè)菌株經(jīng)鑒定-1屬叢毛紅曲菌.pilsus，-3屬紅曲紅曲菌.anka。結(jié)論紅腐乳中別離的純培養(yǎng)為紅曲屬真菌?！娟P(guān)鍵詞】紅曲菌；別離；純化；鑒定Abstrat：bjetiveTislate，purifyandidentifynasusstrainsfrredfuru.ethdBasednes

2、inphiliandethanltlerantharateristisfnasus，stainsereislatedfrredfurubyulturingnaltjuieediuntainingalhlandrieediuntaininglatiaid.Strainserepurifiedusinglgarithiplatedilutinethd，andthendeterinedgeneraardingtthEirir-rphlgialharateristis.Byulturingnaltextratagarediuithteperaturef25degreeselsius，strainser

3、eidentifiedtspeiesbasedntherphlgialharateristisflnies.Result-1strainislatedfrredfuruasidentifiedasnasuspilsusand-2nasusanka.nlusinStrainsislatedfrredfurnarenasusfungi.Keyrds：nasus；islatin；purifiatin；identifiatin紅曲菌隸屬真菌界Euyphyta子囊菌門Asyta真子囊菌綱Euasyetes散子囊菌目Eurtiales紅曲菌科nasaeae紅曲屬nasus1，具有防腐，解毒；消食活血、健脾

4、燥胃之成效2。我們根據(jù)紅曲菌嗜酸、耐乙醇的生長(zhǎng)特性1，對(duì)市售紅腐乳中的紅曲菌進(jìn)展別離純化，并對(duì)它們進(jìn)展了形態(tài)學(xué)鑒定，為進(jìn)一步開掘紅曲菌生物資源做了有益探究。1材料和方法1.1實(shí)驗(yàn)材料(1)原料：市售紅腐乳、大米、瓊脂粉、乙醇、乳酸，麥芽浸出粉altextrat。(2)麥芽汁：麥芽浸出粉3g，蒸餾水100l，PH3.54.0，分裝5l/管，每管加95%乙醇2滴。(3)大米培養(yǎng)基大米10g，蒸餾水15l，1%乳酸40ul。(4)麥芽汁培養(yǎng)基麥芽浸出粉6g，瓊脂粉4g，蒸餾水200l，PH5.06.0。(5)麥芽提取物瓊脂altextratagar，EA培養(yǎng)基麥芽浸出粉2g，蛋白胨0.1g，葡萄糖2

5、g，瓊脂粉1.5g，蒸餾水100l，PH6.0。1.2方法1.2.1別離無菌條件下，紅腐乳汁經(jīng)2層紗布過濾，取0.1l濾液于5l麥芽汁，一式3管，空白對(duì)照1管。32培養(yǎng)，觀察。挑取麥芽汁上長(zhǎng)出的紅色菌體少許，置于大米培養(yǎng)基中，一式3皿，空白對(duì)照1皿。32培養(yǎng)，觀察。1.2.2純化從大米培養(yǎng)基上挑取紅色菌體少許于1l無菌生理鹽水NS中，用對(duì)數(shù)稀釋平板法3，4獲得純培養(yǎng)。1.2.3鑒定取純化后的紅曲菌種，點(diǎn)種到EA培養(yǎng)基32培養(yǎng)成熟。在載玻片上滴加一滴蒸餾水，用解剖針挑取少許菌絲，用50乙醇浸潤(rùn)，再用蒸餾水清洗一下，然后放入載玻片上的液滴中，仔細(xì)地用解剖針將菌絲分散開來，蓋上蓋玻片(勿使產(chǎn)生氣泡，

6、且不要再挪動(dòng)蓋玻片)，制成水浸標(biāo)本片，用顯微鏡觀察。取純化后的紅曲菌種，點(diǎn)種到EA培養(yǎng)基25培養(yǎng)，觀察紅曲菌落大孝形態(tài)、色澤，氣生菌絲的產(chǎn)生情況。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1別離接種紅腐乳汁的麥芽汁在34d后可見白色團(tuán)狀菌絲，7d后菌絲轉(zhuǎn)為紅色，培養(yǎng)液亦呈紅色，而K管中始終無菌體生長(zhǎng)。3d后，接種別離菌的大米培養(yǎng)基上有微量無色菌體生長(zhǎng)，6d后菌落明顯，呈白色，7d后菌落長(zhǎng)大，粉紅色，8d后菌落更大，紅色。2.2純化將來自大米培養(yǎng)基的真菌稀釋液涂布于麥芽汁平板培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)菌體生長(zhǎng)良好、無雜菌，并出現(xiàn)明顯的單菌落，編號(hào)為-1-3。2.3形態(tài)學(xué)鑒定顯微鏡觀察所別離的菌絲具不規(guī)那么分枝，多核，有橫

7、隔，含油滴，透亮或有深淺不一的紅、褐色色素，分生孢子著生在菌絲及其分枝的頂端，孢子單生或鏈狀，閉囊殼球形，有柄圖1。純化后的-1菌株點(diǎn)種到EA培養(yǎng)基，25培養(yǎng)，初期為圓形白色小菌落，7d后菌落圓形，直徑28，米色，氣生菌絲叢毛狀，菌落反面紅色，有放射狀條紋圖2。純化后的-3菌株接種到EA培養(yǎng)基，25培養(yǎng)，菌落初期為圓形，白色，7d后菌落直徑8，鐵銹色，中間裂開，邊緣較整齊，質(zhì)地致密；25d后，菌落直徑22，深銹色，中間隆起，裂開，邊緣有缺刻，無氣生菌絲，菌落反面深赭色，有放射狀條紋圖2。3結(jié)論紅腐乳汁接種到含乙醇的麥芽汁中長(zhǎng)出的菌產(chǎn)紅色色素、菌絲致密、成團(tuán)生長(zhǎng)，初步判斷為紅曲菌，再用含乳酸的大米培養(yǎng)基挑選祛除雜菌。這與紅曲菌的生態(tài)習(xí)性有關(guān)，同時(shí)也證實(shí)了在PH2.5和高達(dá)10%乙醇的培養(yǎng)條件下一般只有紅曲菌才能生長(zhǎng)。將別離菌株的顯微形態(tài)特征與紅曲菌(nasus)的屬征1相比照，兩者根本吻合，進(jìn)一步證實(shí)我們所別離的純培養(yǎng)-1、-3確為紅曲屬真菌。將純化后的別離菌株點(diǎn)種到EA培養(yǎng)基，25培養(yǎng)，觀察其菌落生長(zhǎng)形態(tài)特征，對(duì)照李鐘慶等的紅曲菌屬分類檢索表1，將-1菌株鑒定為叢毛紅曲菌nasus.pilsus，-3菌株鑒定為紅曲紅曲菌nasus.anka。這不僅豐富了紅曲菌種庫，而且為進(jìn)一步開掘紅曲菌生物資源奠定基矗【參考文獻(xiàn)】1李鐘慶，郭芳.紅曲菌的形態(tài)與分類學(xué).北京：中國(guó)輕工業(yè)出