1、第九章 溶血性貧血溶血性貧血(2)課件1第九章 溶血性貧血溶血性貧血(2)課件1第九章 溶血性貧血1溶血性貧血的定義和臨床表現(xiàn)2溶血性貧血的分類、發(fā)病機制、實驗室檢查和過篩試驗3紅細胞膜缺陷疾病的實驗室檢查及應用4紅細胞酶缺陷的實驗室檢查及應用5血紅蛋白的實驗室檢查及應用編輯制作楊曉斌溶血性貧血(2)課件2第九章 溶血性貧血1溶血性貧血的定義和臨床表現(xiàn)2溶血性貧血第一節(jié)概述由于某種原因使紅細胞壽命縮短、破壞增加，超過骨髓造血代償能力所致的一類貧血。溶血性貧血若紅細胞壽命縮短、破壞增加，但尚未超過骨髓造血的代償能力時，臨床上不表現(xiàn)貧血。代償性溶血性疾病溶血性貧血(2)課件3第一節(jié)概述由于某種原因

2、使紅細胞壽命縮短、破壞增加，超過骨髓 溶血性貧血的血象溶血性貧血(2)課件4 溶血性貧血的血象溶血性貧血(2)課件4網織紅細胞增多溶血性貧血(2)課件5網織紅細胞增多溶血性貧血(2)課件5溶血性貧血的骨髓象溶血性貧血(2)課件6溶血性貧血的骨髓象溶血性貧血(2)課件6一、溶血性貧血的類型溶血性貧血(2)課件7一、溶血性貧血的類型溶血性貧血(2)課件7二、溶血性貧血的發(fā)病機制 紅細胞過早地被破壞可以發(fā)生在血管外或血管內。 血管外溶血即紅細胞被脾、肝的單核-巨 噬細胞系統(tǒng)吞噬后破壞。 血管內溶血是紅細胞直接在血循環(huán)中破裂， 紅細胞的內容物血紅蛋白直接被釋放入血漿。溶血性貧血(2)課件8二、溶血性貧

3、血的發(fā)病機制 紅細胞過早地被破壞可以發(fā)生在血二、溶血性貧血的發(fā)病機制紅細胞在單核-巨噬細胞中破環(huán)在血管內破環(huán)血管外溶血血管內溶血溶血性貧血(2)課件9二、溶血性貧血的發(fā)病機制紅細胞在單核-巨噬細胞中破環(huán)在血管內三、溶血性貧血的診斷方法溶血性貧血(2)課件10三、溶血性貧血的診斷方法溶血性貧血(2)課件10血管內溶血和血管外溶血的鑒別特征血管內溶血血管外溶血病因獲得性多見遺傳性多見紅細胞主要破壞場所血管內單核-吞噬細胞系統(tǒng)病程多為急性常為慢性，急性加重貧血、黃疸常見常見肝、脾大少見常見紅細胞形態(tài)異常正?；蜉p微異常明顯異常紅細胞脆性改變變化小多有改變血漿游離血紅蛋白增加正常或輕度增高高鐵血紅素白蛋

4、白增加正常血紅蛋白尿常見無或輕度尿含鐵血黃素慢性可見一般陰性骨髓再障危象少見急性溶血加重時可見LDH增高輕度增高溶血性貧血(2)課件11血管內溶血和血管外溶血的鑒別特征血管內溶血血管外溶血病因獲得部位溶血性貧血疾病名稱篩選/排除試驗確診試驗血管外溶血 遺傳性球形紅細胞增多癥紅細胞形態(tài)檢查高滲冷溶血試驗遺傳性橢圓形紅細胞增多癥滲透脆性試驗、酸化甘油溶血試驗膜蛋白電泳分析、膜脂質分析遺傳性口形紅細胞增多癥自身溶血試驗、紅細胞腺苷三磷酸活性、Coombs試驗膜蛋白基因分析、家系調查G-6-PD-CNSHA高鐵血紅蛋白還原試驗、G-6-PD熒光斑點試驗、硝基四氮唑藍試驗、Heinz小體生成試驗紅細胞G

5、-6-PD活性測定基因分析丙酮酸激酶缺乏癥紅細胞形態(tài)檢查、PK熒光斑點試驗PK活性定量測定嘧啶-核苷酶缺乏癥紅細胞形態(tài)檢查、Ret、嘧啶核苷酸比率中間代謝產物測定、嘧啶-核苷酶活性測定珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白病紅細胞形態(tài)檢查、紅細胞包涵體試驗、異丙醇沉淀試驗、熱變性試驗、Heinz小體生成試驗紅細胞鐮變試驗、血紅蛋白電泳、珠蛋白肽鏈分析、基因分析、吸收光譜測定溫抗體型自身免疫性溶貧紅細胞形態(tài)檢查Coombs試驗冷凝集素綜合征紅細胞形態(tài)檢查、Coombs試驗冷凝集素試驗藥物致免疫性溶血性貧血紅細胞形態(tài)檢查、Coombs試驗加藥后IAGT新生兒同種免疫性溶血癥紅細胞形態(tài)檢查、Ret、膽紅素代

6、謝檢查、血型鑒定Coombs試驗、孕婦產前免疫性抗體檢查遲發(fā)性溶血性輸血反應紅細胞形態(tài)檢查、Ret、血型鑒定Coombs試驗、凝聚胺試驗血管內溶血PNHRous試驗、尿隱血試驗、蔗糖溶血試驗Ham試驗、蛇毒溶血因子試驗、補體敏感性試驗蠶豆病高鐵血紅蛋白還原試驗、G-6-PD熒光斑點試驗、硝基四氮唑藍試驗、Heinz小體生成試驗紅細胞G-6-PD活性測定、基因分析陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥Rous試驗、Coombs試驗冷熱溶血試驗藥物致免疫性溶血性貧血Coombs試驗IAGT及加藥后的IAGT急發(fā)性溶血性輸血反應Coombs試驗血型鑒定及不同方法的交叉配血試驗微血管病性溶血性貧血紅細胞形態(tài)檢查、Re

7、t、血小板計數、血漿游離血紅蛋白測定等止血與血栓實驗室檢查及其他相關檢查不同類型溶血性貧血試驗選擇溶血性貧血(2)課件12部位溶血性貧血疾病名稱篩選/排除試驗確診試驗血管外溶血 遺傳四、溶血性貧血的過篩試驗以鑒別溶血的部位是血管內溶血還是血管外溶血？溶血性貧血(2)課件13四、溶血性貧血的過篩試驗以鑒別溶血的部位是血管內溶血還是血管（一）血漿游離血紅蛋白測定常用鄰-甲苯胺法檢測，血紅蛋白結構中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的作用，催化過氧化氫釋放新生態(tài)氧，使無色的鄰-聯(lián)甲苯胺氧化為藍色。根據顯色深淺，即可測出血漿游離血紅蛋白的量。血紅蛋白結構中的亞鐵血紅素有類似過氧化物酶的作用H2O2新生態(tài)O無

8、色的鄰-聯(lián)甲苯胺氧化為藍色【參考區(qū)間】 040mg/L溶血性貧血(2)課件14（一）血漿游離血紅蛋白測定常用鄰-甲苯胺法檢測，血紅蛋白結構【應用評價】正常情況，血漿中血紅蛋白大部分與結合珠蛋白結合，僅有微量游離血紅蛋白。測定血漿游離血紅蛋白可判斷紅細胞的破壞程度。增高是判斷血管內溶血的指征。蠶豆病、PNH、陣發(fā)性寒冷性血紅蛋白尿、冷凝集素綜合征、溶血性輸血反應等明顯增高；自身免疫性溶血性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血可輕到中度增高。不增高血管外溶血、紅細胞膜缺陷不增高。（一）血漿游離血紅蛋白測定溶血性貧血(2)課件15【應用評價】正常情況，血漿中血紅蛋白大部分與結合珠蛋白結合，（二）血清結合珠蛋白

9、測定結合珠蛋白（Hp）是由肝臟合成的一種2糖蛋白，合成速度較慢； Hp具有結合游離血紅蛋白的能力，在血紅蛋白降解為膽紅素的代謝過程中具有重要的作用，在此過程中Hp本身也被分解，溶血性貧血時Hp因消耗而降低。用醋酸纖維薄膜電泳法檢測，由于Hp具有結合游離血紅蛋白的能力，故在測定血清Hp時，于待測血清中加入一定量的血紅蛋白液，使之與待測血清中的Hp形成Hp-Hb復合物；再通過電泳法將結合的Hp-Hb復合物與未結合的Hb分開，測定Hp-Hb復合物的量，可測得血清中Hp的含量?！緟⒖紖^(qū)間】 0.51.5gHb/L溶血性貧血(2)課件16（二）血清結合珠蛋白測定結合珠蛋白（Hp）是由肝臟合成的一種【應用

10、評價】正常情況下，血漿中的血紅蛋白與結合珠蛋白結合形成復合物，在單核-巨噬細胞系統(tǒng)和肝內清除。溶血時血漿中的血紅蛋白與Hp結合增多，使血清中結合珠蛋白減少，測定血清中結合珠蛋白的含量可反映溶血的情況。減低常見于各種溶血，尤其是血管內溶血。但嚴重肝病、先天性無珠蛋白血癥、傳染性單核細胞增多癥等Hp也明顯減低，故注意鑒別。增高常見于感染、創(chuàng)傷、SLE、惡性腫瘤、類固醇治療、妊娠、膽道阻塞等（Hp為急性時相反應蛋白）。此時如Hp正常，不能排除合并溶血的可能。 （二）血清結合珠蛋白測定溶血性貧血(2)課件17【應用評價】正常情況下，血漿中的血紅蛋白與結合珠蛋白結合形成（三）尿含鐵血黃素試驗當游離血紅蛋

11、白在血液中增多時，血紅蛋白通過腎臟濾過形成血紅蛋白尿；在此過程中，血紅蛋白被腎小管上皮細胞部分或全部吸收，部分鐵離子以含鐵血黃素的形式沉積于上皮細胞，并隨尿液排出?！緟⒖紖^(qū)間】 正常人為陰性含鐵血黃素是不穩(wěn)定的鐵蛋白聚合體，為含鐵質的棕色色素，其中的高鐵離子與亞鐵氰化鉀作用，在酸性環(huán)境下產生藍色的亞鐵氰化鐵沉淀，此反應稱為普魯士藍反應。用顯微鏡檢查尿沉渣，細胞內外可見直徑13的藍色顆粒。溶血性貧血(2)課件18（三）尿含鐵血黃素試驗當游離血紅蛋白在血液中增多時，血紅蛋白【應用評價】尿含鐵血黃素試驗陽性提示 慢性血管內溶血。 無論有無血紅蛋白尿，只要存在慢性血管內 溶血如PNH，本試驗即呈陽性，

12、并可持續(xù)數周。 但在溶血初期，雖然有血紅蛋白尿，上皮細胞 內尚未形成可檢出的含鐵血黃素，此時本試驗 可呈陰性反應。（三）尿含鐵血黃素試驗溶血性貧血(2)課件19【應用評價】尿含鐵血黃素試驗陽性提示（三）尿含鐵血黃素試驗溶【參考區(qū)間】正常人呈陰性（四）高鐵血紅素白蛋白試驗溶血性貧血(2)課件20【參考區(qū)間】正常人呈陰性（四）高鐵血紅素白蛋白試驗溶血性貧血【應用評價】血管內溶血時，血漿中游離血紅蛋白大量增加，血漿中可檢測出高鐵血紅素白蛋白。只有在嚴重溶血時，Hp與Hx均被耗盡，高鐵血紅素方與白蛋白結合成高鐵血紅素白蛋白；故血清中出現(xiàn)高鐵血紅素白蛋白是溶血嚴重的指標。（四）高鐵血紅素白蛋白試驗溶血性

13、貧血(2)課件21【應用評價】血管內溶血時，血漿中游離血紅蛋白大量增加，血漿中第二節(jié) 紅細胞膜缺陷檢查及其應用紅細胞直徑為69m，呈雙層凹面的圓盤狀溶血性貧血(2)課件22第二節(jié) 紅細胞膜缺陷檢查及其應用紅細胞直徑為69m，呈雙一、概述低滲溶液中，血紅蛋白逸出，紅細胞殘留的完整的紅細胞膜，稱為影細胞紅細胞膜蛋白質占49.3、脂質42、糖類8蛋白質與脂質的比例約為1:1；比值變化與膜的功能相關，兩者在很大程度上決定著膜的理化特征任何原因引起的溶血都必然有紅細胞膜的缺陷或損傷溶血性貧血(2)課件23一、概述低滲溶液中，血紅蛋白逸出，紅細胞殘留的完整的紅細胞膜紅細胞膜膜蛋白膜脂質膜糖類與膜脂質形成糖

14、脂與膜蛋白形成糖蛋白糖鏈裸露膜外，有受體、抗原性、信息傳遞功能，稱之細胞天線磷脂糖脂膽固醇甘油磷脂鞘磷脂膽固醇脂游離膽固醇鞘糖脂與膜脂質形成脂蛋白與糖類形成糖蛋白外周蛋白內在蛋白膽固醇/磷脂（C/P）比值約為0.81.0一、概述溶血性貧血(2)課件24紅細胞膜膜蛋白膜脂質膜糖類與膜脂質形成糖脂與膜蛋白形成糖蛋白紅細胞膜為脂質雙層結構，蛋白質鑲嵌在脂質雙層內又相互連續(xù)形成膜的骨架。電鏡下觀察紅細胞膜呈三層暗-亮-暗區(qū)帶，外層含糖脂、糖蛋白和蛋白質，具親和水性；中間層含磷脂、膽固醇、蛋白質為疏水性；內層主要包含蛋白質，呈親水性。紅細胞膜結構液態(tài)鑲嵌模型帶3帶4.2錨蛋白膜收縮蛋白膜收縮蛋白肌動蛋白

15、帶4.1血型蛋白C膜脂質雙層溶血性貧血(2)課件25紅細胞膜為脂質雙層結構，蛋白質鑲嵌在脂質雙層內又相互連續(xù)形成紅細胞膜結構的兩個基本的特征膜的不對稱性膜的流動性膜的內外兩層的組分和功能有明顯的差異稱為膜的不對稱性。紅細胞膜結構溶血性貧血(2)課件26紅細胞膜結構的兩個基本的特征膜的不對稱性膜的流動性膜的內外兩紅細胞膜的功能運輸物質變形性免疫功能抗原性血型抗原老化抗原影響變形性因素：膜骨架蛋白組分和功能狀態(tài)膜脂質流動性大有利于變形細胞表面積與體積比值血紅蛋白的質和量膜的離子通透性溶血性貧血(2)課件27紅細胞膜的功能運輸物質變形性免疫功能抗原性血型抗原影響變形性二、實驗室檢查紅細胞滲透脆性試驗

16、紅細胞膜蛋白電泳分析血細胞表型分析紅細胞孵育滲透脆性試驗酸化血清溶血試驗蔗糖溶血試驗紅細胞自身溶血試驗及其糾正試驗常見實驗室檢查酸化甘油溶血試驗溶血性貧血(2)課件28二、實驗室檢查紅細胞滲透脆性試驗紅細胞膜蛋白電泳分析血細胞表（一）紅細胞滲透脆性試驗紅細胞在不同濃度的低滲鹽溶液中，水分通過紅細胞膜進入細胞內，當水滲透達一定程度時，紅細胞發(fā)生膨脹破裂。根據不同濃度的低滲鹽溶液中紅細胞溶血的情況，反映紅細胞對低滲鹽溶液的抵抗能力。低滲鹽低滲鹽紅細胞對低滲的抵抗能力與其表面積與容積的比值有關，比值小，說明紅細胞容積已脹大，對低滲抵抗力小，滲透脆性增加；反之抵抗力增大，滲透脆性降低。溶血性貧血(2)

17、課件29（一）紅細胞滲透脆性試驗紅細胞在不同濃度的低滲鹽溶液中，水分【參考區(qū)間】 簡易半定量法： 開始溶血：3.84.6g/L 完全溶血：2.83.2g/L增加主要見遺傳性球形紅細胞增多癥、橢圓形紅細胞增多癥和部分自身免疫性溶血性貧血。降低主要見于珠蛋白生成障礙性貧血、血紅蛋白C、D、E病，低色素性貧血、阻塞性黃膽、脾切除術后等。（一）紅細胞滲透脆性試驗溶血性貧血(2)課件30【參考區(qū)間】增加主要見遺傳性球形紅細胞增多癥、橢圓形紅細胞增（二）紅細胞孵育滲透脆性試驗血液置于37溫箱孵育24h葡萄糖的消耗，貯備的ATP減少膜對陽離子的主動傳遞受阻，Na在紅細胞內聚集紅細胞膨脹，孵育滲透脆性增加正常

18、人的紅細胞經孵育處理后，其滲透脆性變化不明顯，而有細胞膜缺陷或某些酶缺陷的紅細胞，由于其內的葡萄糖和ATP很快被消耗，孵育后脆性明顯增加。溶血性貧血(2)課件31（二）紅細胞孵育滲透脆性試驗血液置于37溫箱孵育24h葡萄【參考區(qū)間】 未孵育50%溶血：4.004.45g NaCL/L； 37孵育24h 50%溶血：4.655.90g NaCL/L增加 見于輕型遺傳性紅細胞增多癥， 遺傳性非球形紅細胞溶血性貧血。降低 見于珠蛋白生成障礙性貧血、缺鐵性貧血、 鐮狀細胞性貧血、脾切除手術后。 本試驗用于輕型遺傳性紅細胞增多癥，遺傳性 非球形紅細胞溶血性貧血的診斷和鑒別診斷。（二）紅細胞孵育滲透脆性試

19、驗溶血性貧血(2)課件32【參考區(qū)間】增加 見于輕型遺傳性紅細胞增多癥，降低 （三）紅細胞自身溶血試驗及其糾正試驗血液置于37溫箱孵育24h葡萄糖的消耗，貯備的ATP減少膜對陽離子的主動傳遞受阻，Na在紅細胞內聚集紅細胞膨脹，孵育滲透脆性增加在孵育時，加入葡萄糖和ATP作為糾正物，觀察溶血可否有一定的糾正，稱為糾正試驗?！緟⒖紖^(qū)間】 正常人紅細胞孵育48小時，不加糾正物的 溶血率4.0%，加葡萄糖的溶血率1.0%， 加ATP糾正物的溶血率290s【應用評價】遺傳性球形紅細胞增多癥AGLT50明顯縮 短（1525s）。自身免疫性溶血性貧血、 腎功能衰竭、妊娠等AGLT50也可縮短。溶血性貧血(2

20、)課件35（四）酸化甘油溶血試驗遺傳性球形紅細胞增多癥的紅細胞膜脂質減（五）酸化血清溶血試驗正常人的血清，在pH6.46.6條件下酸化，補體被激活PNH患者體內存在對補體敏感的紅細胞，在此條件下發(fā)生溶血。而正常人的紅細胞不被溶解。將血清加熱5630min滅活補體后，血清失去溶血作用。 本實驗是PNH的確證實驗；其假陽性和假陰性較少見， 但如患者多次輸血而使其補體敏感紅細胞相對減少時，可 呈弱陽性或陰性。某些自身免疫性溶血性貧血患者溶血發(fā) 作嚴重時也偶呈陽性，此時，如果血清加熱破壞補體后， 試驗結果由陽性轉變?yōu)殛幮裕敲锤С諴NH的診斷。溶血性貧血(2)課件36（五）酸化血清溶血試驗正常人的血

21、清，在pH6.46.6條件酸化血清溶血試驗溶血性貧血(2)課件37酸化血清溶血試驗溶血性貧血(2)課件37（六）蔗糖溶血試驗PNH患者因紅細胞膜有缺陷而對補體敏感在離低子強度的蔗糖溶液中，補體與細胞膜的結合加強使對補體敏感的紅細胞膜造成缺損，紅細胞溶解破損【參考區(qū)間】 正常人為陰性【應用評價】本試驗比酸溶血試驗敏感，但特異性 較差，是PNH簡易過篩試驗。再生障礙 性貧血、巨幼紅細胞性貧血和自身免疫 性溶血性貧血患者也可出現(xiàn)陽性，故必 要時需做酸化血清溶血試驗加以鑒別。溶血性貧血(2)課件38（六）蔗糖溶血試驗PNH患者因紅細胞膜有缺陷而對補體敏感在離（七）血細胞表型分析血細胞表型分析PNH是一

22、種獲得性基因突變導致的克隆性疾病，其異常的血細胞膜糖化肌醇磷脂錨（GPI-anchor）連接蛋白如CD59,CD55等表達明顯減低或缺乏，細胞膜對補體的敏感性增強而引起溶血性貧血。用GPI連接蛋白如CD59的單克隆抗體作分子探針，流式細胞術分析紅細胞和白細胞膜CD59等分子的表達量和計數其缺乏表達（陰性）細胞的數量?！緟⒖挤秶縋NH診斷的臨界值：CD59陰性的紅細胞大于5%和CD59陰性的中性粒細胞大于10%，非PNH者均小于5%；PNH患者CD59陰性的紅細胞大于9%，多數患者大于20%；CD59陰性的中性粒細胞均大于16%?！緫迷u價】 該實驗的靈敏度和特異性可達100，而Ham實驗的靈

23、敏度為50左右，但實驗需要的流式細胞儀其價格比較貴，實驗價格也較高。溶血性貧血(2)課件39（七）血細胞表型分析血細胞表型分析PNH是一種獲得性基因突變（八）紅細胞膜蛋白電泳分析將制備的紅細胞膜樣品進行SDS電泳，根據樣品中各種蛋白相對分子質量的不同，分離得到紅細胞膜蛋白的電泳圖譜，從而可見各膜蛋白組分百分率。紅細胞各種膜蛋白組分百分率變化較大，與正常紅細胞膜蛋白電泳圖譜作比較?；蛞詭?蛋白為基準，各膜蛋白含量與帶3蛋白的比例表示。許多先天性和后天性溶血性貧血都伴有紅細胞膜蛋白異常，各種膜缺陷疾病如遺傳球形紅細胞增多癥有收縮蛋白等含量減低或結構異常。某些血紅蛋白病骨架蛋白等可明顯異常。溶血性貧

24、血(2)課件40（八）紅細胞膜蛋白電泳分析將制備的紅細胞膜樣品進行SDS-P三、紅細胞膜缺陷檢查的應用溶血性貧血(2)課件41三、紅細胞膜缺陷檢查的應用溶血性貧血(2)課件41 紅細胞滲透脆性試驗可作為遺傳性溶血性貧血病因診斷的篩選試驗溶血性貧血(2)課件42 紅細胞滲透脆性試驗可作為遺傳性溶血性貧血病（一）遺傳性球形紅細胞增多癥遺傳性球形紅細胞增多癥是一種紅細胞膜蛋白結構異常所致的遺傳性溶血 病，其特點是外周血中出現(xiàn)較多小球形紅細胞。多呈常染色體顯性遺傳，少數呈常染色體隱性遺 傳的HS常合并新的基因突變而發(fā)病，研究顯示 HS有第8號染色體短臂缺失。貧血、黃疸和脾腫大，是最常見的臨床表現(xiàn)紅細胞

25、膜收縮蛋白自身聚合位點及其結構的區(qū)域異常膜結構與功能的異常鈉泵功能亢進，鈉、水進入細胞增多紅細胞呈球形紅細胞內的ATP相對缺乏鈣-ATP酶受抑制，鈣沉積膜上，膜的柔韌性降低該紅細胞通過脾臟被截留，于巨噬細胞內破壞破壞不能被機體代償時出現(xiàn)溶血性貧血溶血性貧血(2)課件43（一）遺傳性球形紅細胞增多癥遺傳性球形紅細胞增多癥是一種紅細實驗室檢查遺傳性球形紅細胞增多癥1血象 血紅蛋白和紅細胞量多為正常或輕度降低，血片中出現(xiàn) 小球形紅細胞為本病的血液形態(tài)學特征；網織紅細胞增 加，一般為5%10%，急性溶血發(fā)作時可高60%70%。 嗜多色性紅細胞增多，外周血中可出現(xiàn)少數幼稚紅細胞。2骨髓象 紅細胞增生旺盛

26、，粒紅比值降低，紅細胞系以中、晚 幼紅細胞為主，可占有核細胞的25%60%；當發(fā)生再 障危象時，骨髓中紅細胞系再生低下，有核紅細胞減少。3滲透脆性試驗 HS紅細胞滲透脆性增高4紅細胞膜電泳分析 SDS電泳可得到紅細胞膜蛋白各組 分的百分率，80%的患者可發(fā)現(xiàn)異常。5紅細胞膜蛋白定量測定 絕大多數HS有一種或多種膜蛋白缺乏6分子生物學技術應用球形紅細胞較正常紅細胞小、厚，且深染，大小比較均一，直徑變?。?.27.0m），厚度增加（2.23.4m），染色后細胞中央淡染區(qū)消失，小球形紅細胞所占的比例在不同的患者中差別較大，多數患者在10%以上（正常人多5%）。溶血性貧血(2)課件44實驗室檢查遺傳性

27、球形紅細胞增多癥1血象 血紅蛋白和紅細胞量遺傳性球形紅細胞增多癥溶血性貧血(2)課件45遺傳性球形紅細胞增多癥溶血性貧血(2)課件45診斷和鑒別診斷 HS無特異的臨床表現(xiàn)和實驗室檢查，診斷時 應結合病史、臨床表現(xiàn)和實驗室檢查綜合分析。 血涂片中小球形細胞大于10%，紅細胞滲脆性增加， 有陽性的家族史，本病的診斷可成立。 注意與自身免疫性溶血性貧血所致繼發(fā)性球形 紅細胞增多癥相鑒別，后者Coombs（+）。 對Coombs試驗多次陰性者，應作紅細胞膜蛋白分析 和組分定量，必要時采用基因序列分析的方法，尋找 診斷依據和進行家系調查以鑒別診斷。溶血性貧血(2)課件46診斷和鑒別診斷 HS無特異的臨床

28、表現(xiàn)和實驗室檢查（二）遺傳性橢圓形紅細胞增多癥是一組由于紅細胞膜蛋白異常引起的異質性家族遺傳性溶血病，其共同特點是外周血中存在大量的橢圓形成熟紅細胞。HE大多為常染色體顯性遺傳，極少數為常染色體隱性遺傳。定義本病的原發(fā)病變是膜骨架蛋白異常，其膜收縮蛋白結構有缺陷，膜骨架穩(wěn)定性降低。HE的紅細胞在骨髓釋放入血液循環(huán)后由于膜骨架蛋白的缺陷，在通過微循環(huán)時由于切變力的作用變成橢圓形后不能恢復正常，同時，紅細胞由于膜骨架穩(wěn)定性的降低容易破壞，大多數橢圓形紅細胞在脾臟被破壞。溶血性貧血(2)課件47（二）遺傳性橢圓形紅細胞增多癥是一組由于紅細胞膜蛋白異常引起診斷和鑒別診斷遺傳性橢圓形紅細胞增多癥1血象

29、有輕重不等的貧血，隱匿型可表現(xiàn)正常。血片中橢圓形 紅細胞的比例大于25%。其形狀呈橢圓形、卵圓形、棒狀或 臘腸形，橢圓形紅細胞橫徑與縱徑之比小于0.78，硬度增 加，中心淡染區(qū)消失。2骨髓象 骨髓紅細胞系統(tǒng)增生活躍為增生性貧血骨髓象。3紅細胞滲透脆性試驗 紅細胞滲透脆性試驗和 自身溶血試驗多增高。4紅細胞膜蛋白電泳分析及低離子強度非變性凝膠電泳膜 收縮蛋白分析 其異常結果有助于膜分子病變的確定。5分子生物學方法 檢測某些膜蛋白基因突變。 依據臨床表現(xiàn)、家族調查和相關實驗室檢查多數病例可確診，無陽性家族史時若橢圓形紅細胞大于50%也可明確診斷。本病應與缺鐵性貧血、巨幼細胞貧血、骨髓纖維化、骨髓病

30、性貧血、骨髓增生異常綜合征、珠蛋白生成障礙性貧血等鑒別。溶血性貧血(2)課件48診斷和鑒別診斷遺傳性橢圓形紅細胞增多癥1血象 有輕重不等的 遺傳性橢圓形紅細胞增多癥溶血性貧血(2)課件49 遺傳性橢圓形紅細胞增多癥溶血性貧血(2)課（三）遺傳性口形紅細胞增多癥是一種罕見的常染色體顯性遺傳性慢性溶血性貧血。本病的特征是血片中出現(xiàn)較多的口形紅細胞，有輕重不一的溶血陽性家族史。HST不是單一的疾病，而是發(fā)病機制、紅細胞形態(tài)和臨床表現(xiàn)都不同的一組綜合征。定義在口形細胞中，鈉離子濃度增高，鉀離子濃度減低，從而使離子泵的負荷增至610倍，但仍不足以代償鈉鉀的失衡狀態(tài)，導致細胞水腫、腫脹，體積增大，紅細胞脆

31、性增高。根據口形紅細胞內鈉、鉀離子和陽離子總量的多少水腫細胞型又稱水腫細胞增多癥，其細胞內鈉、鉀離子和陽離子總量明顯增多，致水分進入細胞內，使紅細胞腫脹表現(xiàn)為口形；此型細胞滲透脆性增加，變形能力減弱，在脾扣留被巨噬細胞吞噬破壞。干細胞型又稱干細胞增多癥或脫水型細胞增多癥，由于細胞脫水致紅細胞邊緣皺褶或不規(guī)則，有時可呈靶形；此種細胞變形能力降低，紅細胞滲透脆性降低，主要在單核-巨噬細胞系統(tǒng)內破壞。其他細胞型溶血性貧血(2)課件50（三）遺傳性口形紅細胞增多癥是一種罕見的常染色體顯性遺傳性慢診斷和鑒別診斷遺傳性口形紅細胞增多癥血片中口形紅細胞增多，可達10%50%?？谛渭t細胞中心蒼白區(qū)呈狹窄的裂縫

32、，裂縫的中央較兩端更為狹窄，縫的邊緣清楚，類似微張的魚口；而在濕血片中，紅細胞雙凹面消失而呈單面凹，形似碗狀。正常人外周血中也可見到少量口形細胞，一般為小于4%。 貧血一般輕微，血紅蛋白很少低于80g/L，多數患者網織紅細胞增多，約1020；紅細胞滲透脆性試驗增高，也可正常或降低；自身溶血可呈陽性，可被葡萄糖或ATP部分糾正。依據臨床表現(xiàn)、外周血口形紅細胞增多和家族史一般可作出診斷。但需要與繼發(fā)性口形紅細胞增多癥相鑒別，繼發(fā)性口形紅細胞增多癥除口形紅細胞增多外，一般無溶血，缺乏家族史，并具有相應疾病的特征。溶血性貧血(2)課件51診斷和鑒別診斷遺傳性口形紅細胞增多癥血片中口形紅細胞增多，可 遺

33、傳性口形紅細胞增多癥溶血性貧血(2)課件52 遺傳性口形紅細胞增多癥溶血性貧血(2)課件（四）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥是一種獲得性造血干細胞基因突變引起紅細胞膜缺陷所致的溶血病。出現(xiàn)細胞膜對自身補體（C3）敏感性增高的異常紅細胞，引起慢性血管內溶血。睡眠時加重，可伴發(fā)作性血紅蛋白尿和全血細胞減少癥。定義骨髓造血組織受到損傷，而引起多能造血干細胞的基因突變，產生膜異常的干細胞克隆，異常造血干細胞不斷增生、分化，形成具有PNH缺陷的細胞群；這種缺陷不僅累及紅細胞，也累及患者的粒細胞、淋巴細胞和血小板?；颊唧w內紅細胞分三型型對補體的敏感性正常；型對補體中度敏感；型對補體高度敏感。與睡眠有關的間歇溶血

34、發(fā)作，以血紅蛋白尿為主要特征，多為慢性血管內溶血，伴有全血細胞減少和反復血栓形成。臨床表現(xiàn)發(fā)病機制溶血性貧血(2)課件53（四）陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥是一種獲得性造血干細胞基因突變實驗室檢查陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥1血象 貧血，呈正色素性或低色素性貧血，網織紅細胞 常增高，可見有核紅細胞及紅細胞碎片。白細胞 和血小板多減少，半數患者呈全血細胞減少。2骨髓象 半數以上的患者三系增生活躍，尤以紅系造血 旺盛。隨病情變化表現(xiàn)不一，不同穿刺部位增 生程度可明顯差異。3特殊溶血試驗（1）溶血存在的依據：尿隱血試驗或尿含鐵血黃素試驗陽性。（2）補體敏感的紅細胞存在的依據：蔗糖溶血試驗、 熱溶血試驗、酸化

35、血清溶血試驗。4流式細胞術檢測發(fā)現(xiàn)GPI錨連接蛋白（CD55或CD59） 低表達的異常細胞群，支持PNH診斷。本試驗是目前 診斷PNH特異性和敏感性最高且可定量的檢測方法。溶血性貧血(2)課件54實驗室檢查陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥1血象 貧血，呈正色素性診斷和鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥1診斷標準 臨床表現(xiàn)符合PNH或上述必須考慮為PNH的表現(xiàn)情況； 有肯定的血紅蛋白尿發(fā)作或血管內溶血的直接、間接證據； 實驗室檢查證明有補體敏感的紅細胞群存在和檢測CD55及CD59 這兩種常見的血細胞表面錨蛋白相關抗原的表達情況是確診試驗。2鑒別診斷 排除其他溶血病，全血細胞減少還應與再障鑒別。3再障-P

36、NH綜合癥的診斷 凡再障轉化為PNH，或PNH轉化為再障， 或兼有兩病特征者，均屬再障PNH綜合征。再障-PNH綜合癥再分為四種情況：（1）再障-PNH：指原有肯定的再障（而非未能診斷的PNH早期表 現(xiàn)），轉為可確定的PNH，再障的表現(xiàn)已不明顯。（2）PNH-再障： 指原有肯定的PNH（而非下述的第4類）， 轉為明確的再障，PNH的表現(xiàn)已不明顯。（3）PNH伴有再障特征：指臨床及實驗室檢查所見均說明病情仍以 PNH為主，但伴有一個或一個以上部位骨髓增生低下、 巨核細胞減少、網織紅細胞不增高等再障表現(xiàn)者。（4）再障伴有PNH特征：指臨床及實驗室檢查所見均說明病情仍以再 障為主，但伴有PNH的實驗

37、診斷結果陽性者。溶血性貧血(2)課件55診斷和鑒別診斷陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥1診斷標準再障-PNPNH與再障的鑒別臨床癥狀與實驗室檢查 PNH再生障礙性貧血出血較少，且程度較輕常有，程度較重感染較少較多鞏膜黃染部分病例有無肝脾腫大部分病例有偶見全血細胞減少約半數病例有所有病例有血小板波動約半數病例有，可達正常少有波動感染時白細胞升高反應無少有網織紅細胞常增高常減少骨髓增生活躍或明顯活躍約90.5%約40.7%中性粒細胞堿性磷酸酶積分明顯降低增高血清膽紅素明顯增高可輕度增高蔗糖溶血試驗陽性陰性尿含鐵血黃素試驗均有罕見酸化血清溶血試驗陽性陰性溶血性貧血(2)課件56PNH與再障的鑒別臨床癥狀與實

38、驗室檢查 P最常見的為葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥、丙酮酸激酶缺陷癥。第三節(jié) 紅細胞酶缺陷檢查定義紅細胞酶缺陷是指參與紅細胞代謝（主要是糖代謝）的酶由于基因突變導致的酶活性或性質改變所引起的溶血及（或）其他表現(xiàn)的疾病。溶血性貧血(2)課件57最常見的為葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥、丙酮酸激酶缺陷癥。第三一、紅細胞的糖代謝乳酸脫氫酶葡萄糖6-磷酸葡萄糖磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸乳酸5-磷酸核酮糖6-磷酸葡萄糖酸ADPATPNADHNAD-丙酮酸激酶NADPH+H+NADP+NADP+G-6-PD6PGD谷胱甘肽還原酶NADPH+H+氧化型谷胱甘肽谷胱甘肽還原型谷胱甘肽谷胱甘肽過氧化酶H2OH2O2參與核

39、苷酸代謝或轉變?yōu)?-磷酸甘油醛后參與糖酵解糖酵解途徑戊糖磷酸旁路途徑溶血性貧血(2)課件58一、紅細胞的糖代謝乳酸脫氫酶葡萄糖6-磷酸葡萄糖磷酸烯醇式丙二、實驗室檢查（一）高鐵血紅蛋白還原試驗G6PG-6-PDNADP還原型美藍高鐵血紅蛋白（Fe3+）高鐵血紅蛋白還原酶6-磷酸葡萄糖酸NADPH氧化型美藍血紅蛋白（Fe2+）1. 加入亞硝酸鹽使紅細胞中的亞鐵血紅蛋白氧化成高鐵血 紅蛋白，正常紅細胞的G-6-PD催化戊糖旁路使NADP成 NADPH，其脫下的氫通過亞甲藍試劑的遞氫作用而使高鐵血 紅蛋白（Fe3+）還原成亞鐵血紅蛋白（Fe2+），比色測定。2.當G-6-PD缺乏癥時，由于NADPH

40、生成減少或缺乏， 高鐵血紅蛋白不被還原或還原速度減慢，高鐵血紅 蛋白還原率下降。3. 正常人高鐵血紅蛋白還原率75%（臍帶血77%）。4. G-6-PD缺乏時，高鐵血紅蛋白還原率下降。中間缺乏 （雜合子） 為31%74%，嚴重缺乏（半合子或純合子）30%。溶血性貧血(2)課件59二、實驗室檢查（一）G6PG-6-PDNADP還原型美藍高鐵（二）變性珠蛋白小體生成試驗 G-6-PD缺乏的病人血樣加入乙酰苯肼于37孵育24小時，使血紅蛋白變性，用煌焦油藍等堿性染料染色觀察紅細胞珠蛋白小體的生成情況，計算含5個及以上珠蛋白小體的紅細胞的百分率。正常人含5個及以上珠蛋白小體的紅細胞一般30%。二、實驗

41、室檢查溶血性貧血(2)課件60（二） G-6-PD缺乏的病人血樣加入乙酰苯肼于37孵應用評價1G-6-PD缺乏癥常高于45%，可作G-6-PD缺乏的篩檢試驗。 但還原型谷胱甘肽缺乏癥也增高；不穩(wěn)定血紅蛋白病含小體 的細胞百分率為75%84%，HbH病和化學物質中毒時也增高。2變性珠蛋白小體，主要是、珠蛋白鏈的病變而引起的 溶解度和穩(wěn)定性降低所致；是一種變性血紅蛋白顆粒，一 般附著在細胞膜上，故又稱血紅蛋白包涵體，變性珠蛋白 小體可被堿性染料著色。該實驗與異丙醇試驗和熱不穩(wěn)定 實驗一樣可作為不穩(wěn)定血紅蛋白存在的一種證據。3G-6-PD活性正常時，紅細胞通過磷酸戊糖旁路形成NADPH 使MHb還原

42、成亞鐵血紅蛋白，因而含變性珠蛋白小體的紅細 胞減少，而G-6-PD活性減低時，NADPH減少，MHb增多， 導致含變性珠蛋白小體的紅細胞增多，不穩(wěn)定血紅蛋白由于 血紅蛋白分子結構發(fā)生改變，穩(wěn)定性減低易被氧化，含變性 珠蛋白小體的紅細胞可增多，伯氨喹啉型溶血性貧血，含變 性珠蛋白小體的紅細胞也可增多。（二）變性珠蛋白小體生成試驗溶血性貧血(2)課件61應用評價1G-6-PD缺乏癥常高于45%，可作G-6-PD在G-6-PD和NADP+存在下，G-6-PD能使NADP+還原成NADPH，后者在紫外線照射下會發(fā)出熒光。NADPH的吸收峰在波長340nm處，可通過單位時間生成的NADPH的量來測定G-

43、6-PD活性。（三）G-6-PD熒光斑點試驗和活性測定G-6-PD缺陷見于蠶豆病、伯氨喹啉型藥物性溶血性貧血。利用此實驗可對高發(fā)區(qū)域人群或疑診的新生兒進行篩查。正常人有很強熒光。正常人酶活性為： （8.341.59）U/gHb（37） （ICSH推薦的Glock與McLean法）（12.12.09）U/gHb（37）（WHO推薦的Zinkham法） G-6-PD缺陷者的熒光很弱或無熒光；雜合子或某些 G-6-PD變異者則可能有輕到中度熒光。二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件62在G-6-PD和NADP+存在下，G-6-PD能使NADP+（四）丙酮酸激酶熒光斑點試驗和活性測定在ADP存在的條件下

44、催化PEP轉化成丙酮酸，在NADH的作用下，丙酮酸被LDH轉化為乳酸，熒光標記NADH上，此時有熒光的NADH變?yōu)闊o熒光的NAD，檢測以上過程熒光消失的時間反應PK的活性。熒光斑點不消失或時間延長說明丙酮酸激酶活性缺乏，中間缺乏（雜合子）時，熒光2560分鐘消失，嚴重缺乏（純合子）時， 熒光60分鐘不消失。正常人丙酮酸激酶活性斑點在25分鐘內消失。 酶活性（15.01.99）U/gHb。PEPADPLDH乳酸丙酮酸PKATP熒光標記NADHNAD+二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件63（四）在ADP存在的條件下催化PEP轉化成丙酮酸，在NADH紅細胞G-6-PD基因突變致活性降低和/或酶性質改

45、變，是一種X性連鎖隱性或不完全顯性遺傳性疾病。G-6-PD缺乏時，紅細胞膜脂質和膜蛋白巰基的氧化，引起紅細胞僵硬，易被脾臟和肝臟中的巨噬細胞破壞導致溶血。 三、紅細胞酶缺陷檢查的應用（一）紅細胞葡萄糖6-磷酸脫氫酶缺陷癥溶血性貧血(2)課件64紅細胞G-6-PD基因突變致活性降低和/或酶性質改變，是一種實驗室檢查1溶血的檢查 非遺傳性有誘因，急性溶血，血 管內溶血；而遺傳性非球形細胞溶血性 貧血具有慢性血管外溶血的實驗室特征2G-6-PD缺乏的篩檢試驗 高鐵血紅蛋白還原試 驗、熒光斑點試驗、硝基四氮唑藍紙片 法。熒光斑點試驗的特異性最高，高鐵 血紅蛋白還原試驗的敏感性最強。3G-6-PD確診試

46、驗 G-6-PD活性定量檢測能準 確反映酶的活性。溶血性貧血(2)課件65實驗室檢查1溶血的檢查 非遺傳性有誘因，急性溶血，血溶血診斷依據是紅細胞G-6-PD活性的實驗室檢查， 臨床表現(xiàn)及陽性家族史。如篩選試驗中兩項中度異常；或一項篩選試驗中、 度異常加上Heinz小體生成試驗陽性（有40% 紅細胞含Heinz小體，每個紅細胞有5個以上 Heinz小體）并排除其他溶血病因；或一項篩 選試驗中度異常，伴有明確的家族史；或一項 篩檢試驗嚴重異常；或定量測定G-6-PD活性 較正常平均值降低40%以上，均可確診。診斷和鑒別診斷溶血性貧血(2)課件66診斷依據是紅細胞G-6-PD活性的實驗室檢查，診斷

47、和鑒別診斷（二）丙酮酸激酶缺陷癥1.PK基因缺陷，常染色體隱性遺傳，僅次于G-6-PD缺陷癥2.PK缺陷時，ATP產生減少，引起血管外溶血，表現(xiàn)為 慢性溶血性貧血。檢驗1篩檢試驗 紅細胞自溶血試驗、 PK熒光斑點試驗2酶活性定量試驗 PK活性檢測3ATP測定4中間代謝產物測定 2，3-二磷酸甘油酸（2，3-DPG） 磷酸烯醇式丙酮酸（PEP） 2-磷酸甘油酸（2-PG）診斷和鑒別診斷1紅細胞PK缺乏的實驗室診斷標準2遺傳性紅細胞丙酮酸激酶缺乏癥主要通過 紅細胞PK活性的測定進行診斷。 三、紅細胞酶缺陷檢查的應用溶血性貧血(2)課件671.PK基因缺陷，常染色體隱性遺傳，僅次于G-6-PD缺陷癥

48、第四節(jié) 血紅蛋白病檢查成熟紅細胞內的主要蛋白質是血紅蛋白（Hb），占細胞干重的96%，占細胞容積的35%。正常血紅蛋白由兩對珠蛋白肽鏈和4個亞鐵血紅素構成的4個亞基組成的四聚體，形狀近似球形的結合蛋白。血紅蛋白的合成受鐵的供應、原卟啉和珠蛋白合成的影響。分子結構：由血紅素和珠蛋白構成，其分子由四個亞基構成，即兩個亞基和兩個亞基，可組裝成22結構血紅蛋白合成：65%合成于有核紅細胞期，35%合成 于網織紅細胞期。血紅蛋白是一種結 合蛋白，分子量約為64458每個亞基由：一條珠蛋白肽鏈和一個血紅素分子構成血紅素是鐵原子和原卟啉的復合物。為含鐵卟啉衍生物，鐵原子位于原卟啉的卟啉環(huán)中心珠蛋白肽鏈有6種

49、：、。出生后白主要有、四種珠蛋白肽鏈。溶血性貧血(2)課件68第四節(jié) 血紅蛋白病檢查成熟紅細胞內的主要蛋白質是血紅蛋白（H（一）血紅蛋白的結構正常血紅蛋白由兩對珠蛋白肽鏈和4個亞鐵血紅素構成的4個亞基組成的四聚體，形狀近似球形的結合蛋白。血紅蛋白的合成受鐵的供應、原卟啉和珠蛋白合成的影響。血紅蛋白由四條非共價結合的球蛋白鏈組成，每條鏈結合一血紅素基團，亦即血紅蛋白分子的氧結合位點。溶血性貧血(2)課件69（一）血紅蛋白的結構正常血紅蛋白由兩對珠蛋白肽鏈和4個亞鐵血紅素是鐵原子和原卟啉的復合物，是含鐵卟啉衍生物，鐵原子位于原卟啉的卟啉環(huán)中心。血紅素是血紅蛋白的組成成分，是Hb、Mb、多種酶和多種

50、細胞色素的輔基，其合成于有核紅細胞和肝細胞的線粒體內。血紅素合成后，離開線粒體，在胞質內與珠蛋白肽鏈結合為血紅蛋白；血紅素由脾臟、骨髓、肝臟中的巨噬細胞吞噬降解。在血紅素合成過程中酶的缺陷引起卟啉或其前體在體內蓄積可導致卟啉病。珠蛋白按四級結構與血紅素形成血紅蛋白，血紅蛋白的每個亞基由一條珠蛋白肽鏈和一個血紅素分子構成，肽鏈在生理條件下成球形，把血紅素分子包在里面，這條肽鏈盤繞成的球形結構又被稱為珠蛋白。胚胎期：Hb Gower1（22）Hb Gower2（22）Hb Porthland（22）3周出現(xiàn)，12周完全消失出生后：HbA(22)：占總量的96%98%；HbA2(22)：占總量的1.

51、2%3.5%；HbF(22)：出生后迅速下降，2歲時接近成人，占總量的2%以下。胎兒后2/3期和新生兒期：HbF(22)：胎兒血紅蛋白（一）血紅蛋白的結構溶血性貧血(2)課件70血紅素是鐵原子和原卟啉的復合物，是含鐵卟啉衍生物，鐵原子位（二）影響血紅蛋白結構和功能的因素溶血性貧血(2)課件71（二）影響血紅蛋白結構和功能的因素溶血性貧血(2)課件71二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件72二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件72（一）血紅蛋白電泳根據不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點不同，在一定的pH緩沖液中，緩沖液的pH大于Hb的等電點時其帶負電荷，電泳時在電場中向陽極泳動；反之，Hb帶正電荷

52、向陰極泳動，不同的血紅蛋白所帶電荷和相對分子量不同，可分離出各自的區(qū)帶。1通過與正常人的血紅蛋白電泳圖譜進行比較，可發(fā)現(xiàn) 異常血紅蛋白區(qū)帶。如HbH、HbE、Hb Barts、HbS、 HbD和HbC等異常血紅蛋白。2HbA2增多，見于珠蛋白生成障礙性貧血，為雜合子的重要 實驗室診斷指標。HbE病時也在HbA2區(qū)帶位置處增加，但含 量很大。HbA2輕度增加亦可見于肝病、腫瘤和某些血液病。1pH8.6TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳 ，適合于檢出HbA、 HbA2、HbS、HbC，但HbF不易與HbA分開，HbH與 Hb Barts不能分開和顯示。2pH6.5TEB緩沖液醋酸纖維膜電泳 主要用于HbH

53、和 Hb Barts的檢出。二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件73（一）根據不同的血紅蛋白帶有不同的電荷，等電點不同，在一定的（二）抗堿血紅蛋白檢測 胎兒血紅蛋白（HbF）具有比HbA更強的抗堿作用，將待檢的溶血液與一定量的NaOH溶液混合，作用1分鐘后加入半飽和硫酸銨中止堿變性反應。HbF抗堿變性作用強，沒有變性存在于上清中，而HbA變性沉淀，取上清液于540nm處測定吸光度，檢測出HbF的濃度?！緫迷u價】1HbF絕對增多 珠蛋白生成性貧血時HbF增加，重型者 達30%90%，中間型常為5%30%，輕型小于5%。遺傳 性胎兒血紅蛋白持續(xù)綜合征患者，HbF可高達100% 。2HbF相對增多

54、某些血液疾病3HbF生理性增多 多見于孕婦及新生兒?！緟⒖紖^(qū)間】 成人2%，新生兒40%二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件74（二） 胎兒血紅蛋白（HbF）具有比HbA更強的（三）血紅蛋白F酸洗脫試驗HbF具有抗堿和抗酸作用，其抗酸能力比HbA強。將血涂片于酸性緩沖液中孵育，含HbF的紅細胞不被酸洗脫，可被伊紅染成紅色，而含HbA的紅細胞均被酸洗脫，不能被伊紅著色?！緫迷u價】 珠蛋白生成障礙性貧血著色細胞增加，重型患者大多數 紅細胞染成紅色，輕型患者可見少數染成紅色的細胞。 遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)綜合征全部紅細胞均染為紅色。【參考區(qū)間】 正常血片含HbF的著色紅細胞 0.02（2%）；孕婦可

55、有輕度增加。二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件75（三）HbF具有抗堿和抗酸作用，其抗酸能力比HbA強?！緟⒖迹ㄋ模┊惐汲恋碓囼?在異丙醇這種能降低血紅蛋白分子內部氫鍵 的非極性溶劑中，不穩(wěn)定血紅蛋白更快地裂 解沉淀。通過觀察血紅蛋白液在異丙醇中的 沉淀現(xiàn)象對不穩(wěn)定血紅蛋白進行篩檢?！緫迷u價】 不穩(wěn)定血紅蛋白存在時，常于5分鐘時出現(xiàn)沉淀， 20分鐘開始出現(xiàn)絨毛狀沉淀。血液中含有較多 HbF、HbH、HbE時也可出現(xiàn)陽性結果。 【參考區(qū)間】 正常人血紅蛋白液為陰性 （30分鐘內不沉淀）二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件76（四） 在異丙醇這種能降低血紅蛋白分子內部氫鍵【參考區(qū)間（五）熱變性試

56、驗 是根據不穩(wěn)定血紅蛋白比正常血紅蛋白更容 易遇熱變性，觀察血紅蛋白液在50時是否 出現(xiàn)沉淀，對不穩(wěn)定血紅蛋白進行篩檢?！緫迷u價】 血紅蛋白沉淀率增加，說明不穩(wěn)定血紅蛋白的存在。【參考區(qū)間】正常人熱沉淀的血紅蛋白1%二、實驗室檢查溶血性貧血(2)課件77（五） 是根據不穩(wěn)定血紅蛋白比正常血紅蛋白更容【應用評價】【（六）紅細胞包涵體試驗 將煌焦油藍液與新鮮血液一起孵育，不穩(wěn)定血紅蛋白易變性沉淀形成 包涵體。觀察溫育2h含包涵體的紅細胞是否比溫浴10min的陽性細胞 多，可了解是否有HbH等不穩(wěn)定血紅蛋白的存在?！緟⒖紖^(qū)間】 正常人0.01（1：1 000）。支原體肺炎、 傳染性單核細胞增多癥、

57、肝硬化、淋巴瘤及多發(fā)性骨髓瘤者亦可增高，但不超過l1 000。 溶血性貧血(2)課件111【 CAggT 臨床意義】 正常人血清抗紅細（四）冷熱溶血試驗（D-LT）【原理】 冷熱溶血試驗，是模擬病人發(fā)病的體外試驗。將病人的血液置于O4冰箱中，此環(huán)境能使DL型冷反應性抗體與紅細胞牢固結合，并同時結合補體，但無溶血，之后再將溫度升至37使補體激活，并發(fā)生溶血，以此與PNH鑒別。溶血性貧血(2)課件112（四）冷熱溶血試驗（D-LT）【原理】溶血性貧血(2)課件1【 D-LT方法】1血清制備 用物理的方法制備血清備用。2紅細胞懸液制備 被檢者和正常人的紅細胞洗 滌3次配成50%的紅細胞懸液備用。3操

58、作步驟 取試管9支，做好標記按下表 加反應物。 溶血性貧血(2)課件113【 D-LT方法】1血清制備 用物理的方法制備血清備用。溶試管號 123456789血清（ml） 被檢0.5 被檢0.5 被檢0.5 被檢0.5 滅活被檢血清0.5 滅活被檢血清0.5 正常0.5 正常0.5正常0.5紅細胞懸液（ml） 被檢0.25 被檢0.25 正常0.25 正常0.25被檢 0.25被檢 0.25被檢 0.25被檢 0.25正常0.25補體（ml） 0.05 0.05 0.050.05 0.05 生理鹽水（ml） 0.05 0.05 0.050.05冷熱溶血試驗操作步驟4.將上述試管放置冰箱冷藏30

59、分鐘后，再放置37水浴30分，低速離心，觀察各管上層有無溶血。溶血性貧血(2)課件114試管號 123456789血清（ml） 被檢0.5 被檢0【 臨床意義】1.陽性反應主要見于陣發(fā)性冷性血紅蛋白尿癥（PCH） 。2.某些病毒感染可陽性，但此時的PCH一般是短暫的。3.PCH是有明確誘因的一種罕見疾病，排除其他疾病后， 再考慮PCH。 【結果】 1.如第1管和第3管發(fā)生溶血，而其余各管無溶 血發(fā)生，為陽性結果。 2.正常人各管均為陰性，無溶血。溶血性貧血(2)課件115【 臨床意義】【結果】溶血性貧血(2)課件115三、免疫性溶血性貧血檢查的應用（一）溫抗體型自身免疫性溶血性貧血（溫抗體型A

60、IHA） 溫抗體型自身免疫性溶血性貧血，根據病因可分為原 發(fā)性和繼發(fā)性兩種，20%30%病例原因未明稱原發(fā)性，其余為繼發(fā)性。IgG是引起該貧血的主抗體，與紅細胞的最適反應溫度為3540的自身抗體稱為溫抗體。溶血性貧血(2)課件116三、免疫性溶血性貧血檢查的應用（一）溫抗體型自身免疫性溶血性【溫抗體型AIHA實驗室檢查分析】正常色素性貧血，血片上可見紅細胞大小不一?？梢娛榷嗌约t細胞；點彩紅細胞；數量不等的球形紅細胞及幼紅細胞。網織紅細胞增高，極個別可達50% 。其溶血主要發(fā)生在血管外。 骨髓有核細胞增生，以幼紅細胞增生為主，粒/紅比例倒置，幼紅細胞可呈巨幼樣變，但血清葉酸及維生素B12測定都