1、TORCH項目學習資料鄭州安圖綠科生物工程有限公司2009年3月TORCH 項目介紹TORCH 診斷意義TORCH 診斷方法TORCH國內(nèi)外產(chǎn)品介紹風疹病毒Rublla Virus (RV)Cytomegalovirus (CMV)巨細胞病毒Herpes Simplex Virus 2 (HSV-2)單純皰疹病毒2型Toxoplasma gondii (Toxo)弓形蟲Herpes Simplex Virus 1 (HSV-1)單純皰疹病毒1型TORCH 簡介 TORCH一詞是Nahmia于1971年撰造的，是由許多引起宮內(nèi)感染的微生物英文名稱的第一個字母組成的。To指弓形蟲（toxoplas

2、ma），R指風疹病毒（rubella virus），C指巨細胞病毒（cytomegalovirus），H指皰疹病毒（herpes virus）。TORCH的英文含義是“火炬”，以此提起人們對母嬰傳播疾病的重視。這五種病原體感染的范圍廣、危害大，孕婦由于內(nèi)分泌系統(tǒng)的改變導致機體免疫力下降，容易發(fā)生原發(fā)性感染，以前感染過的孕婦體內(nèi)潛伏的病毒也容易被激活而發(fā)生復發(fā)感染。妊娠期感染不僅危害母體，往往還對胎兒和新生兒產(chǎn)生嚴重不良后果，可以導致流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或胎兒生長遲緩和發(fā)育畸形，通過產(chǎn)道和母乳可以引起新生兒感染，如果累及神經(jīng)系統(tǒng)，可造成不同程度的智力障礙以及各種癱瘓、失聰、失明等嚴重后遺癥，從而影響

3、人口素質(zhì)。 TORCH感染在圍產(chǎn)醫(yī)學中稱之為“TORCH綜合征”，已經(jīng)受到全世界醫(yī)學界尤其是婦產(chǎn)科和兒科醫(yī)生的高度重視。歐美等發(fā)達國家早在七十年代就將風疹、弓形體、巨細胞病毒等檢測列為孕期篩查項目，目前我國的醫(yī)療及計劃生育部門也逐步開展了孕早期TORCH檢測工作，隨著國家優(yōu)生優(yōu)育工作的深入進行，人們將更加重視對TORCH感染的檢測及預防。衛(wèi)生部于“七五”、“八五”、“九五”連續(xù)將此列為攻關(guān)課題，其中“八五”、“九五”為全國重點課題。 巨細胞病毒是一種雙鏈DNA病毒，屬于皰疹病毒亞科，是人類皰疹病毒組中最大的一種病毒。 其感染的特征是出現(xiàn)有典型的胞漿及核內(nèi)包涵體的巨大細胞，故名巨細胞病毒。其形態(tài)

4、最大由162個殼粒（capsomer），正20面體構(gòu)成。有典型的皰疹病毒結(jié)構(gòu)，形態(tài)與單純皰疹病毒及水痘-帶狀皰疹病毒非常相似，不易區(qū)別。 巨細胞病毒結(jié)構(gòu)貓頭鷹眼細胞一、病原體巨細胞病毒（CMV） CMV遍布世界各地，人是CMV的唯一宿主且對其有廣泛的易感性。血清學調(diào)查表明：40%-100%成人有CMV抗體，其流行無季節(jié)性傾向。 CMV感染在人群中隨著年齡、社會環(huán)境以及經(jīng)濟條件不同而不同。在亞洲和非洲90%的人口受感染，其中大多數(shù)人在青少年時期即有抗體，說明感染年齡較早，而西方國家其感染發(fā)生較晚。調(diào)查還表明，低經(jīng)濟收入人群較高經(jīng)濟收入人群感染率高。70歲左右人群比20歲左右人群抗體陽性率高，男女

5、之間抗體陽性率基本相同。 二、流行病學通過對鄭州地區(qū)約1200份臨床樣本的血清學檢測，人群感染率在95%以上。多數(shù)人一生中都感染過CMV，但主要為無癥狀的亞臨床感染。成人CMV感染和免疫功能有密切關(guān)系，病毒往往以潛伏感染的形式持續(xù)終生，只有當宿主免疫狀態(tài)失去平衡，如器官和骨髓移植、癌癥、妊娠以及應用免疫抑制劑等時，潛伏的病毒才復活。潛伏病毒的復活和無癥狀的攜帶者都能引起病毒的傳播。 三、臨床感染孕婦感染：孕婦的原發(fā)或新的復發(fā)感染均可引起新生兒宮內(nèi)或圍產(chǎn)期感染，當孕婦患有巨細胞活動感染時，病毒可通過胎盤進入胎兒體內(nèi)引起先天性感染。孕婦的原發(fā)感染對胎兒的危害比復發(fā)感染嚴重，它不僅可引起先天性感染，

6、而且后遺癥較多且嚴重，原發(fā)性孕期感染CMV的胎兒50%可出現(xiàn)智力低下，視力受損，聽力喪失等癥狀，特別是引起嬰兒的巨細胞包涵體病（CID，CID的特點是網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)受），患兒可多個系統(tǒng)、多個器官受損，其病死率達1020。青少年和成年人感染：表現(xiàn)為單核細胞增多癥，由原發(fā)感染引起，癥狀表現(xiàn)為無力、肌痛、長期發(fā)燒、肝功異常、淋巴細胞增多、出現(xiàn)大量非典型淋巴細胞。輸血后感染：輸血后引起單核細胞增多癥，突然發(fā)燒，典型發(fā)生于輸血后3-4周，以后出現(xiàn)淋巴細胞增多，脾大。免疫抑制者的感染：在免疫抑制者中，原發(fā)CMV感染發(fā)病率和死亡率都明顯增高，器官移植者和患惡性腫瘤接受化療者，CMV感染與發(fā)病危險

7、性增加，移植后1-4個月易發(fā)生潛伏病毒的復發(fā)，有肝脾腫大，淋巴細胞增多等癥狀。艾滋病人的感染：幾乎所有的艾滋病人都有CMV感染，病人尿內(nèi)排毒并有病毒血癥。艾滋病人CMV感染有細胞免疫功能的損害，病人常因視神經(jīng)炎引起視力衰退，有嚴重結(jié)腸炎及消耗癥，常合并CMV肺炎，死亡率較高。先天性感染對胎兒威脅最大，故預防的重點應當是預防先天性感染。先天性感染主要是母親原發(fā)性感染時母親血中的病毒通過胎盤而感染胎兒。先天性感染對胎兒的損害與胎兒的月齡有關(guān)，胎齡越早受損越嚴重。從優(yōu)生學考慮，凡妊娠期間診為CMV原發(fā)性感染者，特別是妊娠早期，應視為高度危險性。對妊娠期間診為CMV復發(fā)或再感染者，對胎兒影響較小，可繼

8、續(xù)考慮妊娠。對宮頸分離到CMV者一般不需特別處理，因分娩時感染新生兒多不引起明顯癥狀。有人認為宮頸局部的CMV會逆行造成先天性CMV感染，這個問題尚未得到證實。受CMV感染的小兒在一、二年內(nèi)常常傳播病毒，故對CMV無免疫力的孕婦（抗CMV抗體陰性者）應避免與之接觸。 四、巨細胞病毒感染的預防1、臨床標本直接檢查：包括脫落細胞及組織病理檢查（1）尿脫落細胞檢查：用患者新鮮尿10-20ml，經(jīng)離心沉淀、涂片、固定、染色后，在顯微鏡下可見特征性的巨細胞及核內(nèi)包涵體。此細胞病理學方法簡單，但靈敏度差。（2）組織病理學檢查：常規(guī)組織病理學方法檢查外科活檢組織或尸檢病理切片中上述典型的巨細胞和核內(nèi)包涵體。

9、（3）電鏡檢查：標本固定后包埋，超薄切片，鉛染色后電鏡下觀察。雖然能看到病毒顆粒，但不能從形態(tài)上區(qū)分CMV和單純皰疹病毒顆粒，故很少用。五、巨細胞病毒感染的診斷風疹病毒（RV） 風疹病毒是披膜病毒科風疹病毒屬的唯一成員，為有包膜的單股正鏈RNA病毒，外形呈球形，直徑為5070nm，核衣殼為二十面體，其直徑為30nm，疏松的包膜環(huán)繞，包膜表面有微小刺突，直徑56nm，分子量為3.8106，具有血凝和溶血活性。風疹病毒有三種結(jié)構(gòu)蛋白即E1、E2和C蛋白，分子量分別為58kD、4247kD、33kD。E1和E2為包膜蛋白，以二聚物的形式分布在包膜上，核衣殼由病毒的RNA和C蛋白組成。 風疹病毒只有一

10、個血清型，但有多種基因型?？稍赩ero細胞或 VeroSLAM 細胞中培養(yǎng)。風疹病毒不耐熱，易被高溫或干燥滅活。一、病原體風疹病毒結(jié)構(gòu)三、臨床表現(xiàn) 風疹的臨床表現(xiàn)類似麻疹但較麻疹感染癥狀輕，合并癥少，感染風疹病毒后，一般有 1021天的潛伏期，之后進入前驅(qū)期，通常這一期比較短，病情也多不重。 常見癥狀有咳嗽、打噴嚏、流鼻涕、頭痛、咽痛、食欲不振以及發(fā)熱等感冒樣癥狀。一般發(fā)熱12天開始出疹。皮疹為淡紅色的斑丘疹，分散或融合成片，一般由面部延及軀干和四肢，于24小時內(nèi)布滿全身，手掌及足底無皮疹，面部及四肢皮疹稀疏，軀干尤其背部皮疹密集，融合成片，35天皮疹逐漸消退，全身癥狀也同時消失，亦有人稱之為

11、“三日麻疹”。皮疹消退后，通常無色素沉著及脫屑。 一般情況下，風疹全身癥狀比較輕微，與顯著的皮疹顯得很不相稱。出疹前后有耳后、枕部及頸后淋巴結(jié)腫大，腫大淋巴結(jié)輕度壓痛，不融合、不化膿，此點對風疹的早期診斷有幫助。實驗室檢查示血白細胞總數(shù)偏低、淋巴細胞增多，可出現(xiàn)異型淋巴細胞；患病3天后?？稍谘袡z測到風疹病毒特異性抗體。無皮疹性風疹患者可只有發(fā)熱、上呼吸道炎癥、淋巴結(jié)腫痛，血清學檢查風疹病毒特異性抗體為陽性。 三、臨床表現(xiàn) 風疹感染分為先天和后天兩種。一般后天感染即通常說的風疹，先天感染指 CRS。調(diào)查表明，感染風疹病毒與未感染風疹病毒的妊娠婦女相比，其死產(chǎn)和自然流產(chǎn)要高2-4倍。 風疹病毒對

12、血管內(nèi)皮細胞的損傷作用是嚴重先天性器官缺損的重要原因。孕婦病毒血癥可引起胎盤絨毛膜上皮發(fā)炎或毛細血管內(nèi)皮受損，破壞了胎盤的屏障，使病毒進入胎兒體內(nèi)，引起胎兒先天性感染，臨床癥狀可于出生后發(fā)生，也可延長至幾年后出現(xiàn)。先天性感染除引起流產(chǎn)、死產(chǎn)外，活產(chǎn)者大約29%表現(xiàn)為“先天性風疹綜合征”（congenital rubella syndrome, CRS），即出生時體重低于2.5公斤，發(fā)育遲緩，出生后全身性器官受損，先天性心臟病，畸形，耳聾、失明等。CRS患兒最常見的是白內(nèi)障等眼疾患，其次是耳聾，60%有心血管系統(tǒng)缺損。 孕婦妊娠1個月內(nèi)感染風疹病毒，嬰兒先天性畸形的發(fā)生率為11%-58%，2個月

13、內(nèi)為11%-36%，3個月內(nèi)為7%-15%，4個月內(nèi)為7%以下，5個月內(nèi)仍舊有先天性耳聾胎兒出生，妊娠6個月以外感染風疹病毒基本沒有胎兒畸形的危險。 四、臨床感染 接種疫苗：目前對風疹預防的主要方法是接種凍干風疹減毒活疫苗。接種對象為年齡為 8個月以上的風疹易感者和育齡期婦女。在發(fā)達國家，風疹已幾乎被實施疫苗計劃免疫所消滅，只是在未免疫人群中仍有少數(shù)發(fā)生，但在免疫項目開展不好的國家，風疹仍有流行。 防止疫苗病毒對胎兒的損害：盡管疫苗病毒對胎兒危害較小，但已有報道從妊娠前后誤種疫苗者人工流產(chǎn)的胎兒組織中分離到疫苗病毒。因此必須明確規(guī)定，接種疫苗前后2個月內(nèi)禁止懷孕。 由于CRS患兒能長期排毒，所

14、以對CRS患兒應予適當管理，醫(yī)院中懷孕的風疹抗體陰性的醫(yī)護人員應避免與CRS患兒接觸。 應把工作重點放在預防CRS患兒的出生上，有條件的醫(yī)院應逐步開展早孕 TORCH感染檢查工作，其中包括風疹病毒的血清學監(jiān)測。五、風疹病毒的預防 病毒分離培養(yǎng) 病毒分離常用的臨床標本有咽拭子、外周血單核細胞、胚胎、新生兒血漿和尿 液 ，將標本接種于Vero細胞中對RV進行檢測：(1)用免疫熒光標記的RV特異 性單克隆抗體直接檢測；(2)將病毒感染的細胞進行離心，收集細胞，用戊二醛 將細胞團塊固定2h，經(jīng)飽和醋酸鈾和檸檬酸鉛染色，觀察病毒顆粒。盡管RV 能感染多種培養(yǎng)細胞系，但其感染程度和排毒水平往往較低，給病毒

15、體的檢測 帶來一定困難。 核酸檢測 此技術(shù)所常用的標本有咽拭子、臍血、外周血單核細胞、絨毛膜、羊水等。 PCR是一種具有敏感性高、特異性強的靶DNA快速檢測方法。 抗體血清學診斷 RV蛋白包括非結(jié)構(gòu)蛋白(nonstructural protein，NSP)和結(jié)構(gòu)蛋白 (structural protein，SP)兩部分，前者由P150和P90組成，后者由核蛋白C 和2個外膜糖蛋白E1、E2組成。目前的血清學抗體診斷技術(shù)都是基于RV結(jié)構(gòu) 蛋白的酶聯(lián)免疫檢測技術(shù)，主要有間接ELISA法檢測RV-IgG和IgM，捕獲法 檢測RV-IgM。六、風疹病毒感染的診斷風疹病毒感染后抗體出現(xiàn)及存在時間弓形蟲弓

16、形蟲（Toxoplasma gondii）屬于球蟲寄生蟲，是寄生于人和哺乳動物組織細胞內(nèi)廣泛性分布的機會性致病原蟲，因其滋養(yǎng)體如弓形而得名，它引起的弓形體病toxoplasmpsis）是一種人畜共患病，廣泛流行于世界各地。國際公認的強毒株代表為RH株，弱毒代表為Beverley株。 弓形蟲生活史中出現(xiàn)5種形態(tài)，即滋養(yǎng)體（速殖子 tachyzoite）；包囊（可長期存活于組織內(nèi)）；裂殖體；配子體和卵囊（oocyst）。前3期為無性生殖，后2期為有性生殖，弓蟲生活史的完成需雙宿主。在終宿主（貓與貓科動物）體內(nèi)，上述5種形態(tài)俱存；在中間宿主（包括禽類、哺乳類動物和人）體內(nèi)則僅有無性生殖。無性生殖常可

17、造成全身感染，有性生殖僅在終宿主腸粘膜上皮細胞內(nèi)發(fā)育造成局部感染。 弓形蟲（Tox）一、病原體弓形蟲的傳播方式有兩種： 貓犬糞便中的弓形蟲卵囊污染了水或食物而使人感染。 人接觸或進食含有傳染性包囊的生肉或不熟肉類。病原體通過粘膜侵入機體后即在局部增殖并侵入局部淋巴結(jié)，以后再通過血液或淋巴循環(huán)進一步擴散到全身器官，引起病變。弓形蟲主要侵犯單核吞噬細胞和各種臟器的實質(zhì)細胞。病原體在細胞內(nèi)增殖，直至細胞破裂釋放出弓形蟲再侵入其他細胞。如此反復，形成壞死灶和周圍組織的急性炎癥。病變主要由滋養(yǎng)體引起，包囊一般不引起炎癥，但如弓形蟲毒力強，數(shù)量多，特別當機體免疫力下降，可發(fā)生急性感染，嚴重者可發(fā)生死亡。感

18、染晚期，機體內(nèi)弓形蟲逐漸趨于靜止，但在腦與眼部因抗體不易到達，病情可繼續(xù)發(fā)展。陰性感染或病情已靜止的病人，由于腫瘤、接受免疫抑制劑等引起免疫力低下時，也能導致復發(fā)，甚至急性傳播。 二、流行病學世界各國人群弓形蟲感染率不等，從0.6到94，許多國家感染率在2550左右，在西方國家中以法國感染率最高，達80。我國各地人群弓形蟲感染率不同，不同作者在不同地方采用不同方法調(diào)查的感染率人0.30到47.3不等。鄭州地區(qū)人群的平均感染率在2-5%之間。速殖子期是弓形蟲的主要致病階段，以其對宿主細胞的侵襲力和在有核細胞內(nèi)獨特的內(nèi)二芽殖法增殖破壞宿主細胞。蟲體逸出后又重新侵入新的細胞，刺激淋巴細胞、巨噬細胞的

19、浸潤，導致組織的急性炎癥和壞死。包囊內(nèi)緩殖子是引起慢性感染的主要形式，包囊因緩殖子增殖而體積增大，擠壓器官，使功能受到障礙。包囊增大到一定程度，可因多種因素而破裂。游離的蟲體可刺激機體產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應，并形成肉芽腫病變，后期的纖維鈣化灶多見于腦、眼部等。宿主感染弓形蟲后，在正常情況下，可產(chǎn)生有效的保護性免疫，多數(shù)無明顯癥狀，當宿主有免疫缺陷或免疫功能低下時才引起弓形蟲病，即使在隱性感染，也可導致復發(fā)或致死的播散性感染；近幾年有報導艾滋病患者因患弓形蟲腦炎而致死。弓形蟲的感染分為先天性感染和獲得性感染二類。先天性感染發(fā)生于初孕婦女，蟲體經(jīng)胎盤血流傳播，受染胎兒或嬰兒多數(shù)表現(xiàn)為隱性感染，有的出生

20、后數(shù)月甚至數(shù)年才出現(xiàn)癥狀；也可造成孕婦流產(chǎn)、早產(chǎn)、畸胎或死產(chǎn)，尤以早孕期感染，畸胎發(fā)生率高。據(jù)研究表明，嬰兒出生時出現(xiàn)癥狀或發(fā)生畸形者病死率為12，而存活中80有精神發(fā)育障礙，50有視力障礙。以腦積水、大腦鈣化灶、視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎和精神、運動的障礙為先天性弓形蟲病典型癥狀。此外，可伴有全身性表現(xiàn)，在新生兒期即有發(fā)熱、皮疹、嘔吐、腹瀉、黃疸、肝脾腫大、貧血、心肌炎、癲癇等。四、臨床感染獲得性弓形蟲病可因蟲體侵襲部位和機體反應性而呈現(xiàn)不同的臨床表現(xiàn)。因而無特異癥狀，須與有關(guān)疾病鑒別?；颊叨鄶?shù)與職業(yè)、生活方式、飲食習慣有一定關(guān)系。淋巴結(jié)腫大是獲得性弓形蟲病最常見的臨床類型，多見于頜下和頸后淋巴結(jié)。其次

21、弓形蟲常累及腦、眼部，引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)異常表現(xiàn)，在免疫功能低下者，常表現(xiàn)為腦炎、腦膜腦炎、癲癇和精神異常。弓形蟲眼病的主要特征以視網(wǎng)膜脈絡(luò)膜炎為多見，成人表現(xiàn)為視力突然下降，嬰幼兒可見手抓眼癥，對外界事物反應遲鈍，也有出現(xiàn)斜視、虹膜睫狀體炎，色素膜炎等，多見雙側(cè)性病變，視力障礙外常伴全身反應或多器官病損。多數(shù)隱性感染者，當患有惡性腫瘤，施行器官移植，長期接受免疫抑制劑、放射治療、細胞毒劑等醫(yī)源性免疫受損情況下或先天性、后天性免疫缺陷者，如艾滋病患者、孕期婦女等都可使隱性感染狀態(tài)轉(zhuǎn)為急性重癥，使原有病癥惡化。 1、病原學檢查（具確診意義） 涂片染色法：取急性期患者的體液、腦脊液、血液、骨髓、羊水

22、、胸水經(jīng)離心后，沉淀物作涂片，或采用活組織穿刺物涂片，經(jīng)姬氏染色后，鏡檢弓形蟲滋養(yǎng)體。此法簡便，但陽性率不高易漏檢。此外也可切片用免疫酶或熒光染色法，觀察特異性反應，可提高蟲體的檢出率。 動物接種分離法：采用敏感的實驗動物小白鼠，樣本接種于腹腔內(nèi)，一周后剖殺取腹腔液鏡檢，陰性需盲目傳代至少3次，樣本亦可接種于離體培養(yǎng)的單層有核細胞。動物接種和細胞培養(yǎng)是目前常用的病原查診方法。五、弓形蟲的臨床診斷2、抗原檢測用免疫學方法檢測宿主細胞內(nèi)的病原（速殖子或包囊）或循環(huán)抗原。循環(huán)抗原（CAg）為弓形蟲在宿主體內(nèi)增殖過程中的代謝和裂解產(chǎn)物，在弓形蟲感染早期、急性期或活動期的血清及體液中有較高的含量。因此，

23、CAg的檢測可作為弓形蟲現(xiàn)癥感染的輔助診斷方法，認為它有助于診斷人類弓形蟲感染，特別是對于免疫受損患者。但是弓形蟲病的蟲血癥短暫，所以檢測抗原血癥的實用性還有待研究。3、抗體檢測（IgA IgM IgG）間接血凝試驗(Indirect Haemagglutination Test IHA) 間接免疫熒光試驗(Indirect Immunofluores-cent Test,IFT) 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 1、形態(tài)結(jié)構(gòu)單純皰疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）屬于皰疹病毒科亞科，呈球形，完整病毒由核心、衣殼、被膜(Tegument)及囊膜組成。核心含雙股DNA，纏

24、繞成纖絲卷軸。衣殼呈二十面體對稱，由162個殼微粒組成，直徑為100nm。衣殼外被一層被膜覆蓋，厚薄不勻，最外層為典型的脂質(zhì)雙層囊膜，上有突起。囊膜表面含gB、gC、gD、gE、gG、gH糖蛋白，與病毒對細胞吸附/穿入（gB gC gD gE）、控制病毒從細胞核膜出芽釋放(gH)及誘導細胞融合（gB gC gD gH）有關(guān)。并有誘生中和抗體(gD 最強)和細胞毒作用（已知的HSV糖蛋白均可）。單純皰疹病毒（HSV）一、病原體2、培養(yǎng)特性HSV可在多種細胞中生長，常用的細胞系有BHK細胞，Vero細胞、 Hep-2細胞等。病毒初次分離時，原代乳兔腎細胞、人胚肺細胞較敏感。HSV感染動物范圍廣泛，

25、多種動物腦內(nèi)接種可引起皰疹性腦炎，小白鼠足墊接種可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)致死性感染，家兔角膜接種引起皰疹性角膜炎，豚鼠陰道內(nèi)接種可引起宮頸炎和宮頸癌。接種雞胚絨毛尿囊膜上，形成增殖性白色斑塊。3、耐受性因為單純皰疹病毒的囊膜為典型的脂質(zhì)雙層，所以它對乙醚及脂溶劑特別敏感，對高溫和低PH都不穩(wěn)定，在低溫下可生存數(shù)月，濕熱50或干燥9030分鐘滅活。單純皰疹病毒分為1型和2型，兩者有50%的同源性，其形態(tài)結(jié)構(gòu)基本一致，很難區(qū)分，但其感染途徑、感染率和引起的癥狀有很大不同。HSV-1主要是通過呼吸道、皮膚和粘膜密切接觸傳播，感染腰以上部位的皮膚粘膜和器官，人感染非常普遍，發(fā)展中國家成人抗HSV-1抗體陽性

26、率為95-100，其中原發(fā)性感染中8090為隱性感染。新生兒HSV感染發(fā)病率為0.05-1/萬例，其中絕大多數(shù)為母親生殖道HSV上行播散或分娩時經(jīng)產(chǎn)道感染所致。常見的臨床表現(xiàn)是粘膜或皮膚局部集聚的皰疹，偶而也可發(fā)生嚴重的全身性疾病，累及內(nèi)臟。如引起皰疹性口腔炎（herpetic stomatitis ）、皰疹性角膜炎（herpes simplex keratitis，HSK） 、皰疹性腦炎（Herpes Simplex Virus Encephalitis，HSE）等。HSV-2主要是通過性接觸傳播和母嬰傳播，感染腰以下部位的皮膚粘膜和器官，可以引起生殖器皰疹、也是宮頸癌、陰莖癌的協(xié)同誘因，同

27、時會增加感染包括艾滋病在內(nèi)的病毒性疾病的幾率。生殖器感染HSV-2較HSV-1易活化，常出現(xiàn)復發(fā)性感染。目前生殖器HSV感染發(fā)生率不斷上升，在某些西方國家已躍居性病常見病因的第二位，我國成人HSV-2的抗體陽性率為3-5%。二、流行病學 原發(fā)感染半歲以后的嬰兒，因為來自母體的抗體消失，此時容易發(fā)生HSV-1的原發(fā)感染。HSV-1原發(fā)感染常發(fā)生于115歲，最常引起齦口炎，在牙齦、咽頰部黏膜產(chǎn)生成群皰疹，皰疹破裂后形成潰瘍，病灶內(nèi)含有大量病毒。此外，還可以引起皰疹性角膜結(jié)膜炎、皮膚皰疹性濕疹、皰疹性甲溝炎或皰疹性腦炎。初次感染約90%無臨床癥狀，多為隱性感染。皰疹性口炎(herpeticstoma

28、titis)是小兒容易發(fā)生的單純皰疹病毒1型IgG（HSV-1）引起的急性口腔粘膜感染，也可能單獨發(fā)生在唇及口周皮膚。本病多見于6歲以下兒童，尤其是6個月至2歲的兒童更多。本病潛伏期約47天，開始多有發(fā)燒、咽痛、頭痛、全身不適等先兆，23天后口腔開始出現(xiàn)癥狀，先是出現(xiàn)散在紅色斑疹，很快斑疹上形成散在或成叢的小水泡，周圍有紅邊。初起時發(fā)癢，繼而有痛感。水泡很快潰破，形成淺潰瘍迅即結(jié)痂，數(shù)日即脫落自愈。全身癥狀或輕或重，所屬淋巴結(jié)有時略腫大。三、臨床感染單純皰疹病毒性角膜炎(herpes simplex keratitis ,HSK)，簡稱單皰角膜炎，是由單純皰疹病毒1型IgG(herpes si

29、mplex virus,HSV-1)引起的角膜感染，是一種嚴重的世界性致盲眼病，其發(fā)病率和致盲率均占角膜病的首位。HSK原發(fā)感染常見于幼兒，有全身發(fā)熱和耳前淋巴結(jié)腫痛，唇部和皮膚單皰感染，眼部受累表現(xiàn)為急性濾泡性結(jié)膜炎、膜性結(jié)膜炎、眼瞼皮膚皰疹，大約2/3患者出現(xiàn)點狀或樹枝狀角膜炎，不到10%的患者發(fā)生角膜基質(zhì)炎和葡萄膜炎；HSK復發(fā)感染包括樹枝狀和地圖狀角膜炎、非壞死性和壞死性角膜基質(zhì)炎等，感染的病毒株及機體的遺傳體質(zhì)，與疾病類型及復發(fā)的嚴重程度有關(guān)。單純皰疹病毒性腦炎(Herpes Simplex Virus Encephalitis，HSE)是一種由于單純皰疹病毒感染腦實質(zhì)引起的，以發(fā)熱

30、、口唇皰疹、頭痛嘔吐、意識障礙、偏癱、抽搐、精神異常為主要表現(xiàn)、腦脊液可檢出單純皰疹病毒抗原或特異性抗體陽性的腦部感染性疾病，又稱急性壞死性腦炎、急性包涵體腦炎，是臨床較為常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病，其中95以上為HSV-1感染。本病呈散發(fā)性，見于世界各地，無季節(jié)性傾向，任何年齡均可發(fā)病，也無性別差異，病情險惡，病死率高，據(jù)報道為30%70%。 潛伏感染和復發(fā)感染HSV原發(fā)感染產(chǎn)生免疫力后，將大部分病毒清除，部分病毒可沿神經(jīng)髓鞘到達三叉神經(jīng)節(jié)（HSV-1）和脊神經(jīng)節(jié)（HSV-2）細胞中或周圍星形神經(jīng)膠質(zhì)細胞內(nèi)，以潛伏狀態(tài)持續(xù)存在，與機體處于相對平衡，不引起臨床癥狀。當機體發(fā)熱、受寒、日曬、月

31、經(jīng)、情緒緊張，使用垂體或腎上腺皮質(zhì)激素，遭受某些細菌病毒感染等，潛伏的病毒會被激活增殖，沿神經(jīng)纖維索下行至感覺神經(jīng)末梢，至附近表皮細胞內(nèi)繼續(xù)增殖，引起復發(fā)性局部皰疹。其特點是每次復發(fā)病變往往發(fā)生于同一部位，最常見在唇鼻間皮膚與粘膜交界處出現(xiàn)成群的小皰疹。皰疹性角膜炎、皰疹性宮頸炎等亦可反復發(fā)作。 先天性及新生兒感染妊娠期婦女因HSV原發(fā)感染或潛伏的病毒被激活，病毒可經(jīng)過胎盤感染胎兒，誘發(fā)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎或先天性畸形。孕婦生殖器有皰疹病損者，分娩時病毒可傳給嬰兒而發(fā)生新生兒皰疹感染，感染危險性在40-60%，其中60-70%致死，幸存而無后遺癥只有15%。一般有四種感染類型：無癥狀型、皰疹型、中

32、樞神經(jīng)系統(tǒng)型及全身播散型感染。大多數(shù)病兒于產(chǎn)后1-3周出現(xiàn)臨床癥狀，其中80%首先顯現(xiàn)皮膚損害，約20%不出現(xiàn)皮膚損害，只表現(xiàn)為播散性或中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。 1、直接檢查單純皰疹病毒常采用皰疹液、皮膚粘膜病灶刮取物、活檢組織在免疫電鏡下特異性地檢查感染細胞和組織標本，可發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)有不成熟的病毒顆粒。也可將標本涂片用姬姆薩染色，于光學顯微鏡下觀察多巨細胞和細胞內(nèi)嗜酸性包涵體。上述方法受取樣部位和病變時機的影響，敏感性和特異性不高，不適于臨床大規(guī)模檢測之用。2、病毒分離培養(yǎng)病毒培養(yǎng)是實驗室診斷HSV 感染較為敏感的方法，HSV-1和HSV-2能產(chǎn)生典型的CPE(致細胞病變作用)。如鏡檢發(fā)現(xiàn)細胞腫脹、

33、變圓、有巨細胞或融合細胞出現(xiàn)等典型的細胞病變和細胞核內(nèi)包涵體說明病毒存在。細胞培養(yǎng)的病毒分離率常受感染的特異部位不同而有差異。據(jù)報道腦脊液(CSF)中單純皰疹病毒培養(yǎng)的陽性率很低，一般不超過5。生殖器皰疹標本細胞培養(yǎng)HSV的陽性率則較高。但也有文獻報道培養(yǎng)分離生殖器標本易于污染，操作復雜。無法檢測亞臨床型、潛伏性生殖器皰疹。3、核酸檢測中山大學達安基因已有熒光PCR試劑盒上市。4、抗體檢測主要通過酶聯(lián)免疫法檢測血清標本內(nèi)的HSV抗體(IgM及IgG)。目前市場上的檢測試劑盒有分型（HSV-1 HSV-2）和不分型（HSV-1+2）試劑盒兩種。四、單純皰疹病毒的診斷TORCH的診斷意義孕婦在懷孕

34、期間原發(fā)性感染TORCH，可引起胎兒的先天性感染，造成出生缺陷，TORCH IgG和IgM抗體的檢測可以區(qū)分孕婦是否在懷孕期間感染了五種病原體，并可結(jié)合其他診斷方法確定胎兒是否受到先天性感染。再次感染和懷孕后期感染對胎兒的危害比較小，最好在孕前檢查免疫狀態(tài)以了解孕期血清學的轉(zhuǎn)化?；蛟趹言衅陂g檢查以確定感染時間。多數(shù)母親感染后無特殊癥狀或無癥狀，因此臨床診斷的意義不大。病毒感染可產(chǎn)生特異性抗體，但并不總能提供免疫力。所以可發(fā)生再次感染并傳播給胎兒。孕早期應識別易感孕婦，提供相關(guān)高危因素的咨詢。早期證實母親的感染，能幫助及早確定采取侵入性或非侵入性的產(chǎn)前診斷方法。為有效評估胎兒的風險及制訂合理的處

35、理方案，應準確掌握：流行病學情況、高危因素、自然病程、后遺癥的發(fā)生率、產(chǎn)前診斷的方法和其局限性、預防和治療的措施。檢查結(jié)果意 義危險性處理措施IgM +IgG +早期感染過體內(nèi)有抗體；近期復發(fā)感染或體內(nèi)潛伏的病毒被激活。高同時采取其它檢測方法進一步確診，若近期感染指標仍舊為陽性或胎兒情況不佳，應終止妊娠。IgM +IgG -急性期初次感染極高臨床上少見。處理方法與上相同。IgM -IgG +早期感染過，體內(nèi)有抗體，有一定免疫力；無近期感染。低無需進一步處理。IgM -IgG -無感染史，體內(nèi)無抗體，無免疫力。視為易感人群無嚴格監(jiān)控，有條件應進行人工免疫。IgG抗體4倍升高近期復發(fā)感染或體內(nèi)潛伏

36、的病毒被激活。高同時采取其它檢測方法進一步確診，若近期感染指標仍舊為陽性或胎兒情況不佳，應終止妊娠。TORCH檢測的臨床診斷意義IgM抗體、IgG抗體出現(xiàn)時間 IgM抗體在感染后23天出現(xiàn)，7-14天達到最大值，此后維持一段時間的平衡。在愈合期IgM抗體水平快速下降，8周左右基本檢測不到抗體。潛伏感染、無癥狀感染和復發(fā)感染時基本檢測不到IgM抗體，所以IgM抗體是近期感染的指標。 IgG抗體在感染后7天左右出現(xiàn)，2周左右達到最大值，此后緩慢下降，至愈合期基本維持平衡。一旦病毒再次復發(fā)，IgG抗體水平再次快速升高并于1周內(nèi)達到高峰，此后快速恢復到正常值，所以IgG抗體是繼往感染的指標。一般來說，

37、感染后IgM抗體的滴度會在一個月內(nèi)達到高峰，2-4個月基本消失，這段時期也稱急性或近期感染，隨后抗體滴度開始下降，但是有些人IgM抗體會持續(xù)陽性或存在半年以上，所以僅從IgM抗體的檢測結(jié)果還并不能完全判定孕婦是否為急性感染。更加準確的臨床意義還應結(jié)合IgG親和力測定來區(qū)分是否為急性感染，因為低親和力的IgG抗體出現(xiàn)在感然后的第一個月，既往和復發(fā)感染才會出現(xiàn)高親和力的IgG抗體。親和力的高低以親和指數(shù)表示，感染后3個月內(nèi)的血清樣本CMV-IgG親和指數(shù)一般為21%13%，既往感染的親和指數(shù)一般為78%10%。所以高IgM抗體滴度的同時IgG親和指數(shù)較低則預示著初次急性感染 。 羊水的病原體培養(yǎng)和

38、PCR檢測可以確認胎兒是否受到先天性感染。僅IgM抗體的檢測存在缺陷IgG抗體親和力的檢測作為補充確診方法以CMV和RV為例對臨床檢測結(jié)果進行解釋和進一步處理初次感染后的17周內(nèi)IgG抗體為低親和力抗體（AI40%），25周后完全成熟為高親和力抗體（AI60%）。臨檢中心引用以巨細胞病毒為例說明孕婦原發(fā)感染與新生兒的先天性感染和有癥狀感染的關(guān)系19941999 意大利出現(xiàn)癥狀沒有癥狀n=18 (46.2%)n=21 (53.8%)未感染 病毒分離培養(yǎng)陰性 IgG-/IgM-; IgG+/IgM- (高親和力)原發(fā)感染 病毒分離培養(yǎng)陽性或陰性 IgG-/IgM+; IgG+/IgM+ (低親和力

39、)復發(fā)感染 病毒分離培養(yǎng)陽性/陰性 IgG+/IgM+ (高親和力)感染狀態(tài)不明 病毒分離培養(yǎng)陰性 未檢測IgM抗體，IgG親和力中等 經(jīng)進一步檢測分成4組611 個有垂直傳播巨細胞病毒風險的孕婦未感染者n=300 (49.1%)沒有出現(xiàn)先天性感染原發(fā)感染者n=161 (26.3%)出現(xiàn)先天性感染復發(fā)感染者n=125 (20.5%)沒有出現(xiàn)先天性感染感染狀態(tài)不明n=25 (4.1%)沒有出現(xiàn)先天性感染病毒分離培養(yǎng)和PCR在胎兒和新生兒CMV感染診斷中靈敏度和特異性比較結(jié)果顯示： PCR靈敏度100%，可以作為初篩實驗。 病毒分離培養(yǎng)特異性100%，可以作為確診實驗。TORCH感染嚴重程度的影響

40、因素病原體 種類、數(shù)量、毒力、是否持續(xù) 孕婦免疫力 初染/再染，孕母免疫力下降 胎兒孕周/成熟度 孕周小，成熟度低者病變嚴重TORCH先天性感染的途徑經(jīng)胎盤感染 經(jīng)羊水感染 經(jīng)產(chǎn)道感染 經(jīng)母乳感染標本采集： 孕 婦：血液、尿液、乳汁、宮頸分泌物 胎 兒：胎盤組織、絨毛、羊膜、羊水 新生兒：臍血、鼻咽/外耳道分泌物、胃液、 腦脊液、尿液。檢測方法： 形態(tài)學：光鏡下檢查 病原學：分離培養(yǎng)/接種 血清學：IHA、IFA、ELISA 分子生物學：PCRTORCH綜合癥的診斷TORCH-IgG和TORCH-IgM抗體檢測方法間接ELISA法檢測TORCH-IgG抗體包被抗原血清中特異性IgG抗體酶標記抗

41、人IgG抗體底物終止液間接ELISA法檢測TORCH-IgM抗體包被抗原酶標記抗人IgM抗體底物終止液血清中特異性IgM抗體血清中特異性IgG抗體血清需用吸附劑去除特異性IgG和RF因子的干擾包被抗人IgM抗體捕獲ELISA法檢測TORCH-IgM抗體（中和抗原法）酶標記特異性抗原的抗體底物終止液血清中人IgM抗體此反應模式被國內(nèi)外普遍采用特異性中和抗原包被抗人IgM抗體捕獲ELISA法檢測TORCH-IgM抗體（酶標記抗原法）底物終止液血清中人IgM抗體目前國內(nèi)已上市產(chǎn)品均采用此法酶標記特異性抗原間接法和捕獲法檢測TORCH-IgM方法的優(yōu)劣間接法優(yōu)點：方法簡單，原材料容易制備。間接法缺點：

42、易受特異性IgG競爭性結(jié)合固相抗原的干擾，造成假陰性。易受類風濕因子的干擾，造成假陽性。為去除以上兩因素的干擾，需要對樣本用吸附劑處理，操作復雜。本底較高，陰陽性樣本反差不明顯。包被抗原間接法檢測TORCH-IgM抗體的干擾因素酶標記抗人IgM抗體血清中特異性IgM抗體血清中特異性IgG抗體血清中特異性IgG抗體IgM型RF因子包被抗原RF因子酶標記抗人IgM抗體血清中特異性IgG抗體 捕獲法優(yōu)點：有效地去除了特異性IgG的干擾，降低了類風濕因子的干擾。不需要實驗前對樣本進行預處理，操作簡便。陰性本底干凈，陰陽性樣本反差明顯。酶標記抗原的方法較中和抗原的方法更具優(yōu)勢。捕獲法缺點：原材料要求高。

43、TORCH國內(nèi)外產(chǎn)品介紹項目生產(chǎn)廠家批準文號批準日期CMV-IgM北京現(xiàn)代高達國藥準字S20060070 2006-11-22北京貝爾國藥準字S20060003 2006-1-28達安基因（熒光PCR)國藥準字S20060056 2006-6-23普生(天津)科技有限公司食藥監(jiān)械(準)字2008第3401004號2008-8-19上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400148號2009.01.22意大利DIESSE Diagnostica Senese 國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400167號2009.01.22CMV-IgG上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)

44、械(進)字2008第3403565號2008.12.15RV-IgM北京現(xiàn)代高達國藥準字S20070008 2007-4-2北京貝爾國食藥監(jiān)械（準）字第2007第3401343號2007-12-29上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2008第3403562號2008.12.15DIESSE Diagnostica Senese國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400165號2009.01.22珠海經(jīng)濟特區(qū)海泰生物制藥有限公司國食藥監(jiān)械(準)字2008第3401414號2008.12.24RV-IgG上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2008第3403564號2008.1

45、2.15美國美德聲科學技術(shù)公司北京代表處國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400305號2009.02.18國內(nèi)批準上市的TORCH試劑盒目錄項目生產(chǎn)廠家批準文號批準日期TOX- IgM珠海海泰國藥準字S20020001 2002-1-4北京現(xiàn)代高達國藥準字S20060099 2006-12-31北京貝爾國食藥監(jiān)械(準)字2008第3400988號2008.08.19上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2008第3403561號2008.12.15索林診斷（集團）有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2007第3402146號2007.12.29康乃格診斷公司國食藥監(jiān)械(進)字2005第34013

46、39號2005.05.23TOX-IgG珠海海泰國藥準字S200400192004-3-17TOX-CA浙江醫(yī)學科學院國藥準字S20030029 2003-2-13HSV-2 IgM北京貝爾生物工程有限公司國食藥監(jiān)械(準)字2008第3400990號2008.08.19北京現(xiàn)代高達國食藥監(jiān)械（準）字第2007第3401094號2007-11-12HSV IgM(1+2)上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400306號2009.02.18意大利DIESSE Diagnostica Senese國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400168號2009.01.22HSV-IgG

47、(1+2)上海中信亞特斯診斷試劑有限公司國食藥監(jiān)械(進)字2009第3400307號2009.02.18HSV-2 PCR中山大學達安基因股份有限公司國食藥監(jiān)械(準)字2008第3400443號2008.03.31項目國外廠家檢測方法RV-IgGAbbott微粒子酶聯(lián)免疫熒光法(MEIA)RV-IgMAbbott微粒子酶聯(lián)免疫熒光法(MEIA)CMV-IgGAbbott微粒子酶聯(lián)免疫熒光法(MEIA)CMV-IgMAbbott微粒子酶聯(lián)免疫熒光法(MEIA)TOX-IgGAbbott微粒子酶聯(lián)免疫熒光法(MEIA)TOX-IgMAbbott微粒子酶聯(lián)免疫熒光法(MEIA)HSV-1 IgGBi

48、oCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)HSV-1 IgMBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)HSV-2 IgGBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)HSV-2 IgMBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)RV-IgGBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)RV-IgMBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)CMV-IgGBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)CMV-IgMBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)TOX-IgGBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)TOX-IgMBioCheck酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)國外有代表性的TORCH試劑盒

49、目錄項目國外廠家檢測方法RV-IgGBio-Rad酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)RV-IgMBio-Rad酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)CMV-IgGBio-Rad酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)CMV-IgMBio-Rad酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)RV-IgGBECKMAN磁珠酶免(間接)RV-IgMBECKMAN磁珠酶免(捕獲)TOX-IgGBECKMAN磁珠酶免(間接)TOX-IgMBECKMAN磁珠酶免(捕獲)HSV1-IgG/-IgM/-IgAViro Immun酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)HSV2-IgG/-IgM/-IgAViro Immun酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)RV-IgGViro Immun酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)RV-IgMViro Immun酶聯(lián)免疫捕獲法(immunocaptureassay)CMV-IgG/-IgM/-IgAViro Immun酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)TOX-IgAViro Immun酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)TOX-IgGViro Immun酶聯(lián)免疫間接法(ELISA)TOX-IgMViro Immun酶聯(lián)免疫捕獲法(immunocapture