血凝檢測(cè)原理儀器檢測(cè)原理

凝固法(凝塊形成)

發(fā)色底物法(吸光度變化)

免疫比濁法(乳膠粘合)

凝固法PT,APTT,TT,FIB(PT-Based&FIB-Clauss),FactorsII,V,VII,X,VIII,IX,XI,XII, ProteinC,ProteinS,APC-R,LAC,PCX,HPX

發(fā)色底物法

Anti-thrombin,Heparin(普通&低分子),Plasminogen,PlasminInhibitor,

免疫比濁法

D-Dimer,vWF（活性及含量）,FreeProteinS，VIII含量，HS-CRP

正在研發(fā)的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：······

儀器檢測(cè)項(xiàng)目Photo-opticmethod:

ILinstrumentation

FromACL100 ACLFutura ACLTop toACL10000 ACLAdvance toACLElite凝固法 660 880 671

散射比濁 透射比濁透射比濁發(fā)色底物法 405 405 405

吸光率 吸光率吸光率乳膠 凝集試驗(yàn)405 405 405or671

Electra=550forclottingand405forchromogenic測(cè)量濁度的變化它并不是一種由于顏色變化引起的吸收值的變化（區(qū)別于發(fā)色底物法)為了避免干擾（膽紅素，血紅蛋白），通常選擇高波長(zhǎng)進(jìn)行檢測(cè)凝固反應(yīng)光學(xué)檢測(cè)法凝固法檢測(cè)史手工法檢測(cè)反應(yīng)在試管內(nèi)發(fā)生(37°C水)凝塊形成，操作人員肉眼可見(jiàn)操作人員記錄時(shí)間血凝常規(guī)檢測(cè)

血漿或稀釋血漿(37°C孵育) +試劑(預(yù)加熱37°C)

-> 纖維凝塊形成 -> 纖維凝塊形成所需時(shí)間所有的凝固反應(yīng)均為纖維凝塊形成過(guò)程的檢測(cè)如:PT,APTT,FibrinogenClauss,因子檢測(cè),等纖維蛋白凝塊檢測(cè)持續(xù)檢測(cè)光密度變化(透射法或散射法）凝固時(shí)間由數(shù)學(xué)運(yùn)算法則決定(域值,第一演算法,第二演算法等)光學(xué)法檢測(cè)運(yùn)算法則:閾值法Time凝固點(diǎn)濁度或光散射值閾值法（凝固起始點(diǎn)）濁度閾值法用于(曲線delta的絕對(duì)值或百分比)允許識(shí)別凝固點(diǎn)

應(yīng)用于下列情況:Example:纖維蛋白原Clauss;delta信號(hào)弱,當(dāng)FIB濃度高時(shí)，曲線上升快，而濃度低時(shí)曲線上升緩慢。在某些標(biāo)本中逆向檢測(cè)的閾值用于曲線的末端是非常平坦的。閾值法運(yùn)算法則:閾值法一階導(dǎo)數(shù)的真實(shí)表現(xiàn)運(yùn)算法則:一階導(dǎo)數(shù)法

用于以下情況:基線不總是平坦的通常情況下，反應(yīng)速度快凝固曲線信號(hào)清晰，纖維蛋白形成過(guò)程中沒(méi)有起伏凝固的時(shí)間較長(zhǎng)(與閾值法或二階導(dǎo)數(shù)法比較)一階導(dǎo)數(shù)運(yùn)算法則:一階導(dǎo)數(shù)法

應(yīng)用于以下情況:Example:Recombiplastin;凝固曲線上升很快,凝固曲線的形狀清晰,凝固時(shí)間較長(zhǎng)(與閾值法或二階導(dǎo)數(shù)法比較)一階導(dǎo)數(shù)的曲線總是正的(orzero)一階導(dǎo)數(shù)運(yùn)算法則:一階導(dǎo)數(shù)法Time凝固點(diǎn)二階導(dǎo)數(shù)反應(yīng)的最大加速度點(diǎn)運(yùn)算法則:二階導(dǎo)數(shù)法濁度或光散射值二階導(dǎo)數(shù)法的真實(shí)表現(xiàn)運(yùn)算法則：二階導(dǎo)數(shù)法

用于以下情況:基線不總是平坦的通常情況下反應(yīng)加速度快凝固曲線信號(hào)清晰，在基線和凝塊形成期無(wú)起伏該運(yùn)算法則主要應(yīng)用于凝固反應(yīng)試驗(yàn)(i.e.APTTtype)二階導(dǎo)數(shù)法運(yùn)算法則:二階導(dǎo)數(shù)法實(shí)際上，大部分凝固反應(yīng)運(yùn)算使用的是二階導(dǎo)數(shù)。少許情況下使用一階導(dǎo)數(shù)。其它一些反應(yīng)使用閾值法更合適。不同的運(yùn)算法則由不同的試驗(yàn)所選擇。一種完善的算法是否存在?凝固曲線發(fā)色底物法

發(fā)色底物試驗(yàn)的基本反應(yīng)是：

未稀釋血漿或稀釋后血漿(incubatedat37°C) +試劑(酶)

->中間復(fù)合物 +試劑(底物)

剩余的酶能水解特殊的底物，

去除pNA分子，產(chǎn)生顏色反應(yīng)。發(fā)色底物試驗(yàn)ChromogenicMethod

pNA呈黃色，隨后被分光光度計(jì)測(cè)量(at405nm).

測(cè)量值與定標(biāo)曲線比較得出濃度值。發(fā)色底物法Antithrombin:Neatplasma100%,dilutedat50%and25%發(fā)色底物法ATLinearity免疫比濁法，Ｄ－二聚體檢測(cè)

免疫學(xué)方法D-DimerCurve典型的曲線像一個(gè)大的 S有一個(gè)初始的基線，一個(gè)上升階段和一個(gè)終點(diǎn)(平臺(tái)期)反應(yīng)曲線

反應(yīng)曲線時(shí)間初期;凝血因子激活期纖維蛋白原正在轉(zhuǎn)化為纖維蛋白平臺(tái)期;所有的纖維蛋白原均已轉(zhuǎn)化為纖維蛋白吸光度變化凝固曲線和反應(yīng)曲線是一個(gè)良好的工具。這種工具為確保可靠的結(jié)果提供保障，既節(jié)省時(shí)間，又節(jié)省費(fèi)用。

結(jié)論：abg纖維蛋白的形成過(guò)程abgFibrinogeniscomposedof3chains纖維蛋白原分子的每一條鏈由兩部分組成theformulais:2(a,b,g)纖維蛋白的形成過(guò)程纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白通過(guò)三個(gè)步驟1.蛋白水解(通過(guò)凝血酶)ThrombinFibrinogenThrombinFibrinopeptideAThrombinFibrinopeptideB凝血酶水解纖維蛋白肽纖維蛋白單體纖維蛋白的形成過(guò)程2.纖維蛋白單體自發(fā)聚合纖維蛋白的形成過(guò)程2.纖維蛋白單體自發(fā)聚合纖維蛋白的形成過(guò)程2.纖維蛋白單體自發(fā)聚合纖維蛋白的形成過(guò)程Fibrinfibre2.纖維蛋白單體自發(fā)聚合纖維蛋白的形成過(guò)程2.纖維蛋白形成纖維蛋白網(wǎng)Fibrinnet纖維蛋白的形成過(guò)程3.通過(guò)鉸鏈形成穩(wěn)定的纖維蛋白XIIIThrombin纖維蛋白的形成過(guò)程XIIIThrombin3.通過(guò)鉸鏈形成穩(wěn)定的纖維蛋白纖維蛋白的形成過(guò)程XIIIaThrombinXIIIaThrombinactivatesFXIII3.通過(guò)鉸鏈形成穩(wěn)定的纖維蛋白纖維蛋白的形成過(guò)程XIIIa3.通過(guò)鉸鏈形成穩(wěn)定的纖維蛋白纖維蛋白的形成過(guò)程XIIIa3.通過(guò)鉸鏈形成穩(wěn)定的纖維蛋白XIIIaFXIIIastabilisesfibrinbyintroducingcovalentbonds3.通過(guò)鉸鏈形成穩(wěn)定的纖維蛋白纖維蛋白的形成過(guò)程PT衍生纖維蛋白原（PTbasedFIB）Clauss法纖維蛋白原（ClaussFIB）ACL系列凝血儀纖維蛋白原檢測(cè)FIB的檢測(cè)方法PTbasedFIB的基本原理基于PT反應(yīng)曲線光學(xué)差值與FIB濃度的線性關(guān)系ODOD1OD2OD3250mg/dl125mg/dl62mg/dlOD3OD2OD1062125250mg/dl[FIB]時(shí)間ODPTPTPTODx[FIB]濃度FIB的檢測(cè)方法Clauss法FIB的基本原理時(shí)間:S濃度：mg/dL525105101520IntrinsicExtrinsicCommon濃縮凝血酶纖維蛋白原纖維蛋白［FIB］∝凝固時(shí)間1

首選Clauss方法—NCCLS推薦如考慮測(cè)試成本，可選用PTbasedFIB做常規(guī)篩查，超出200-400mg/dL范圍樣品及OAT病人樣品用Clauss法復(fù)查FIB方法使用建議Clause方法與PT衍生法結(jié)果比較

口服抗凝藥病人標(biāo)本:411正常人,50位口服抗凝藥病人方法:Clauss和PT