生防微生物內(nèi)生細(xì)菌生防微生物內(nèi)生細(xì)菌1黃瓜內(nèi)生菌分離菌株對蘋果腐爛病菌的抑制效果分離菌株對棉花枯萎病菌的抑制效果小麥內(nèi)生菌菌株對小麥全蝕病菌的抑制作用菌株的革蘭氏染色情況（G-）黃瓜內(nèi)生菌分離菌株對蘋果腐爛病菌的抑制效果分離菌株對棉花枯萎植物內(nèi)生細(xì)菌普遍存在于高等植物中，木本、草本植物，單子葉植物和雙子葉植物內(nèi)均有內(nèi)生細(xì)菌。已在水稻、小麥、玉米、馬鈴薯、花生、甜菜、黃瓜、番茄、棉花、三葉草、檸檬、葡萄等30多種植物的不同器官中分離到了個(gè)80屬的內(nèi)生細(xì)菌。內(nèi)生細(xì)菌以假單胞菌屬（Pesudomonas）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、腸桿菌屬（Enterobacter）和土壤桿菌屬（Agrobacterium）為主。馬鈴薯內(nèi)生細(xì)菌包括假單孢菌屬（Pesudomonas），芽孢菌屬（Bacillus），黃單孢菌屬（Xanthomonas），黃桿菌屬（Flavobacterium），棒桿菌屬（Corynebacterium），不動桿菌屬（Acinetobacter），氣桿菌屬（Aerobacter），微球菌屬（Micrococcus），農(nóng)桿菌屬（Agrobacterium）等。植物內(nèi)生細(xì)菌普遍存在于高等植物中，木從花生中分離的內(nèi)生菌有細(xì)菌和真菌。內(nèi)生細(xì)菌以巨大芽孢桿菌（B.megaterium）、蠟樣芽孢桿菌（B.cereus）和枯草芽孢桿菌（B.subtilis），還有黃單胞菌(Xanthomonasspp.)和歐文氏菌(Erwiniaspp.)。內(nèi)生真菌以叢梗孢屬(Monilia)、鏈格孢屬(Alternaria)和黑烏霉屬（Memmoniella）、曲霉菌（Aspergillusflavus）為主，未分離到放線菌。從花生中分離的內(nèi)生菌有細(xì)菌和真菌。3．作用

內(nèi)生細(xì)菌在植物體內(nèi)具有穩(wěn)定的生存空間，不易受環(huán)境條件的影響，可以在植物體內(nèi)獨(dú)立的分裂繁殖和傳遞，使之成為生物防治中有潛力的微生物農(nóng)藥、增產(chǎn)菌或作為潛在的生防載體菌而加以利用。A.植物保護(hù)劑。與根圍、葉圍細(xì)菌相比，內(nèi)生細(xì)菌作為生防制劑具有二者不可替代的優(yōu)勢，如系統(tǒng)分布于植物體內(nèi)、所處環(huán)境比較穩(wěn)定、營養(yǎng)來源可靠且豐富等，從而更有利于其發(fā)揮作用。B.促生作用。同根際促生細(xì)菌一樣，內(nèi)生細(xì)菌既可以產(chǎn)生促生物質(zhì)，直接促進(jìn)植物生長，也可以通過與病原菌競爭空間或產(chǎn)生拮抗物質(zhì)從而間接起促生作用，因此內(nèi)生菌完全有可能作為增產(chǎn)菌用于生產(chǎn)實(shí)踐。3．作用C.內(nèi)生細(xì)菌可起固氮作用。D.外源基因載體。

植物內(nèi)生細(xì)菌是一種良好的外源基因載體，通過基因工程技術(shù)將Bt殺菌或殺蟲基因?qū)雰?nèi)生菌中，構(gòu)建成抗菌或抗蟲的工程菌，用于生物防治。目前將Bt殺蟲基因?qū)胍恍﹥?yōu)良的內(nèi)生菌，用于害蟲的生物防治。C.內(nèi)生細(xì)菌可起固氮作用。內(nèi)生菌控制植物病害的機(jī)理1.產(chǎn)生抗生素類物質(zhì)內(nèi)生菌產(chǎn)生的抗生素類物質(zhì)存在植物體內(nèi)，在植物體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，利于發(fā)揮防病作用。根際內(nèi)生菌產(chǎn)生的抗生素物質(zhì)包括2,4-二乙酞藤黃酚(PHL)、吩嗪羧酸(PCA)、藤黃綠膿菌(pyoluterin,PLT)、硝吡咯菌素(pyrrolnitrin,PRN)、膿青素(PYO)、HCN和一類丁酰內(nèi)酯(butyrolactones)。其中，PHL和PCA的研究最為深入，它們對小麥全蝕病菌有較強(qiáng)的抑制作用，對黃瓜枯萎病也有一定的生防作用。香港城市大學(xué)Urijmoed教授等從中國南海紅樹中分離出來的內(nèi)生真菌能產(chǎn)生灰黃霉素A和多種醌類抗生素，對酵母菌和霉菌等均有抑制作用。2.產(chǎn)生水解酶植物內(nèi)生真菌和內(nèi)生細(xì)菌另一個(gè)重要的生防機(jī)制是產(chǎn)生水解酶類，如幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶。這些水解酶與植物抗真菌能力有密切關(guān)系，因?yàn)檎婢?xì)胞壁的主要組成成份是幾丁質(zhì)和葡聚糖。這些水解酶可以降解真菌的細(xì)胞壁或其它致病因子如毒素等，達(dá)到防病效果。一種用于防治水稻稻瘟病的內(nèi)生細(xì)菌Pseudomonasfluorescens產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶的水平與它的防病效果有密切的關(guān)系。某些生防菌的幾丁質(zhì)酶基因己經(jīng)被克隆，可以將這些基因轉(zhuǎn)化到內(nèi)生菌中,發(fā)揮內(nèi)生菌的優(yōu)勢，提高防病效果。一種用于防治棉花黃萎病的內(nèi)生菌，可產(chǎn)生某些蛋白酶降解毒素達(dá)到防病的效果。3.產(chǎn)生植物生長調(diào)節(jié)劑內(nèi)生菌也可產(chǎn)生植物生長激素類物質(zhì)，如IAA、吲哚乙腈等。Lu等[72]發(fā)現(xiàn)大多數(shù)黃花蒿內(nèi)生真菌在體外培養(yǎng)時(shí)能產(chǎn)生對小麥和黃瓜幼苗生長不同程度的抑制或促進(jìn)作用的代謝產(chǎn)物，對其中一種炭疽菌(Colletotrichumsp.)發(fā)酵產(chǎn)物的深入分析表明，該菌能產(chǎn)生植物生長激素IAA。假單胞菌屬、腸桿菌屬、葡萄球菌屬(Staphylococcus)、固氮菌屬(Azotobacter)以及固氮螺菌屬(Azospirillum)內(nèi)生細(xì)菌的一些菌株也可產(chǎn)生植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)如乙烯、生長素、細(xì)胞激動素,對宿主植物的生長起促進(jìn)作用。草生歐文氏菌(Erwiniaherbicola)不僅能產(chǎn)生吲哚乙酸，而且還能產(chǎn)生細(xì)胞分裂素。這些物質(zhì)都能有效地促進(jìn)植物的生長。從墨西哥分離的18株重氮營養(yǎng)醋桿菌(Acetobacterdizotrophicus)都有產(chǎn)生生長素的能力[74]。表明重氮營養(yǎng)醋桿菌在與植物相互作用過程中不僅能固氮，而且還可以通過生長素的調(diào)節(jié)作用影響植物的謝促進(jìn)植物生長[75]。最近的一項(xiàng)研究表明，產(chǎn)酸克雷伯氏菌(Klebsiellaoxytoca)產(chǎn)生的生長素對水稻植株的生長和發(fā)育起著重要的調(diào)節(jié)作用。內(nèi)生菌控制植物病害的機(jī)理4.與病原菌競爭營養(yǎng)物質(zhì)內(nèi)生菌可以與病原菌形成營養(yǎng)競爭的對抗關(guān)系，使病原菌因得不到正常的營養(yǎng)供給而消亡。某些根際定殖內(nèi)生細(xì)菌能產(chǎn)生噬鐵素與病菌競爭鐵元素，而植物并不受其影響。熒光假單胞桿菌能產(chǎn)生一種黃綠色噬鐵素與病菌競爭鐵，導(dǎo)致病菌因得不到鐵元素而死亡，但在鐵充足的情況下，此種競爭引起的病害下降就不明顯[77]。田新莉等[78]證明水稻內(nèi)生真菌在平板頡抗試驗(yàn)中是通過競爭鐵元素來抑制紋枯病菌的生長的。5.促進(jìn)宿主植物生長或增強(qiáng)抵抗力感染內(nèi)生菌的植物一般具有比未感染內(nèi)生菌的植株生長快速的特點(diǎn)。內(nèi)生菌可增進(jìn)宿主植物對N、P、K等營養(yǎng)元素的吸收。內(nèi)生菌幫助植物吸收營養(yǎng)一個(gè)最典型的例子是內(nèi)生固氮菌，1988年從甘蔗的根莖中分離到內(nèi)生固氮營養(yǎng)醋桿菌,后來在其它作物中如玉米、高粱、水稻等分離到內(nèi)生固氮菌草螺菌，從巴基斯坦生長在鹽堿地的Kallar草中分離到固氮弧菌(Azoarcussp.)。人們在研究這些內(nèi)生固氮菌時(shí)發(fā)現(xiàn)有些菌類能提供植物高達(dá)80%的氮量[79]。傅正擎等[80]用內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物與棉花黃萎病菌共培養(yǎng)的方式，證明內(nèi)生菌可通過促生長作用來提高棉株的抗逆性。陳世蘋等[81]證明，在正常條件下，感染內(nèi)生真菌的黑麥草體內(nèi)保護(hù)酶系統(tǒng)如POD、SOD的活性明顯高于未感染內(nèi)生真菌的植株，并認(rèn)為內(nèi)生真菌很可能增強(qiáng)了植物的SOD活性調(diào)節(jié)能力，從而對植物的抗旱性產(chǎn)生有益影響。許多研究表明，感染內(nèi)生菌的植物比未感染內(nèi)生菌的植物具有更強(qiáng)的抗干旱、鹽堿等脅迫的能力。6.誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性對這個(gè)生物防治機(jī)制，VanLoon[82]和VanWees等[83]敘述的較為清楚。他們認(rèn)為根際微生物包括在根內(nèi)定殖的微生物能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生一種抗性，這種抗性不同于傳統(tǒng)的系統(tǒng)獲得性抗性(systemicacquiredresistance,SAR)，命名為誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性(inducedsystemicresistance,ISR)。ISR表型與病菌誘導(dǎo)的SAR相似，都能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生對病菌的廣譜抗性。但I(xiàn)SR中所包含的抗性機(jī)制沒有病程相關(guān)蛋白(PR)的產(chǎn)生。目前對ISR的抗性機(jī)制知道得不如SAR的抗性機(jī)制清楚，一般認(rèn)為ISR的抗性與植保素水平的提高和酚類物質(zhì)積累有關(guān)。ISR和SAR信號傳導(dǎo)途徑是兩種不同的路徑。同時(shí)內(nèi)生菌能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生一些結(jié)構(gòu)方面的抗性，Benhamou等[84]用內(nèi)生菌BacilluspumilusstrainSE34預(yù)接種基因轉(zhuǎn)化豌豆，然后接種病菌，如果病菌的生長限制在木栓層和外皮層內(nèi)，在病菌企圖侵入部位，通過木質(zhì)和酚類物質(zhì)的大量沉積，這些細(xì)胞的胞壁得到加厚，有效阻止了病菌的侵入。7.產(chǎn)生生物堿植物內(nèi)生真菌可以產(chǎn)生多種生物堿，大多生物堿對食草動物和昆蟲具有毒性，其中一些對植物病害也有防治作用。Li等[85]從雷公藤(Tripterygiumwilfordii)中分離到一株內(nèi)生真菌(Cyptosporiopsiscf.quercina)，從其液體發(fā)酵產(chǎn)物中分離到一種新酰胺生物堿(cryptocin)，對稻瘟病菌(Pyriculariaoryzae)有抑制作用。Elmi等[86]推測感染了內(nèi)生真菌的高羊茅植株的抗線蟲性與內(nèi)生真菌產(chǎn)生的生物堿有關(guān)。4.與病原菌競爭營養(yǎng)物質(zhì)二、生態(tài)學(xué)1．寄生方式專性內(nèi)生菌：只能生活在寄主細(xì)胞內(nèi)，而在根際無法分離到。如紅蒼白草螺菌只能生活在高梁和甘蔗組織內(nèi)。兼性內(nèi)生細(xì)菌：如假單胞菌屬（Pesudomonas）、腸桿菌屬（Enterobacter）、沙雷氏軍屬（Sarratia）、產(chǎn)堿菌屬（Alcaligens）、志賀氏菌屬（Shigella）、檬細(xì)菌屬（Citrobacter）以及革蘭氏陽性一些屬的細(xì)菌，他們不僅生活在植物組織內(nèi)部，而且也常見于土壤。二、生態(tài)學(xué)持久性：持久性的植物內(nèi)生的細(xì)菌可以永久存在于植物組織內(nèi)部，也可以在整個(gè)生育期只存在一段時(shí)間。甜菜中的腐爛棒桿菌，存在于整個(gè)生活史中。非持久性：非持久性的細(xì)菌只存在于整個(gè)生活史中的部分生長時(shí)期的植物體內(nèi)。大部分植物內(nèi)生細(xì)菌屬于這一類型。專一性：專一性的植物內(nèi)生細(xì)菌它只專一存在于一種植物體內(nèi)，如重氮營養(yǎng)醋桿菌（Acetobacter），它只存在于甘蔗中。非專一性：非專一性的植物內(nèi)生細(xì)菌，如熒光假單胞可以存在于菜豆、小麥、番茄、檸檬、甜菜和玉米等植物體內(nèi)，均已經(jīng)分離出來。持久性：持久性的植物內(nèi)生的細(xì)菌可以永久存在于植物組織內(nèi)部，也2.入侵途徑植物內(nèi)生細(xì)菌來源于根際，并從根進(jìn)入植物組織內(nèi)部。內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)入植物的途徑是通過自然孔口和傷口進(jìn)入植物的。自然孔口有皮孔、水孔、芽眼、側(cè)根發(fā)生處等。把組織培養(yǎng)的馬鈴薯無菌苗移栽到田間，從中分離出大量與土壤中細(xì)菌種類相同的內(nèi)生細(xì)菌。利用抗菌素標(biāo)記的熒光假單孢菌IS-1的菌懸液浸根，然后移栽，八周后，取根，進(jìn)行表面消毒，結(jié)果重新分離到了IS-1。這不僅說明了內(nèi)生細(xì)菌來源于根際土壤，而且說明了一些細(xì)菌既能存在于根際中，又能進(jìn)入植株體內(nèi)。植物內(nèi)生細(xì)菌可以通過趨化性或趨電性尋找寄主植物。生防微生物內(nèi)生細(xì)菌正式完整版課件3．存在部位內(nèi)生細(xì)菌進(jìn)入植物后，多數(shù)定殖于薄壁組織的細(xì)胞間隙，有些定殖于細(xì)胞質(zhì)中，有些可穿過細(xì)胞壁進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。有些定殖于維管束內(nèi)。塊薯中菌量大，種類多；塊莖和地上莖次之；種子中最少。塊莖的皮層，維管束，內(nèi)韌皮部和中央髓部四個(gè)部位中，內(nèi)生細(xì)菌在維管束環(huán)的出現(xiàn)頻率最高。玉米和雜草的的皮層、外皮層和內(nèi)皮層，以及植株木質(zhì)部中都含有大量的內(nèi)生細(xì)菌。內(nèi)生細(xì)菌具有寄主?；裕以诩闹鞑煌鞴?、生育期和寄主所處的環(huán)境中，其種群數(shù)量的消長動態(tài)各有不同。3．存在部位內(nèi)生細(xì)菌與植物在長期的共同進(jìn)化中，已成為植物微生態(tài)系統(tǒng)的天然組成成份，它促進(jìn)植物對惡劣環(huán)境的適應(yīng)，加強(qiáng)系統(tǒng)的生態(tài)平衡。植物內(nèi)生細(xì)菌可以促進(jìn)植物修復(fù)作用（phytoremediation），針對硝基芳香族、雜酚類等有機(jī)污染。一些內(nèi)生菌具有固氮作用。內(nèi)生細(xì)菌系統(tǒng)地存在于細(xì)胞間隙和細(xì)胞內(nèi)，可從植物體內(nèi)獲得充分的生長營養(yǎng)，具有優(yōu)良的生存環(huán)境，能穩(wěn)定分布于植物體內(nèi)，因此將其作為病害的生防菌具有獨(dú)特的優(yōu)勢。因此內(nèi)生細(xì)菌作為生防因子已從多種植物中分離出來并用于病蟲害的防治。內(nèi)生細(xì)菌與植物在長期的共同進(jìn)化中，已植物內(nèi)生細(xì)菌的遠(yuǎn)距離傳播主要通過種子傳播，也可以通過昆蟲和動物的取食途徑傳播。植物內(nèi)生細(xì)菌的遠(yuǎn)距離傳播主要通過種子4．種群數(shù)量動態(tài)內(nèi)生細(xì)菌在寄主植物中的種群數(shù)量變化與植物的品種、組織、生長階段、和環(huán)境條件有關(guān)。內(nèi)生細(xì)菌在植物根部密度最高，其次是莖和葉。從種子萌發(fā)時(shí)含量開始上升，自花期達(dá)到最高，之后趨于平穩(wěn)或降低。棉花種子萌發(fā)時(shí)，細(xì)菌的種群密度為每克組織含1000個(gè)菌體，成株期達(dá)到10萬～100萬個(gè)菌體。成熟期降到1000個(gè)菌體。棉桃中幾乎沒有內(nèi)生菌。從薯塊最外面所分離的內(nèi)生菌中拮抗菌的數(shù)量多、作用強(qiáng)，越向內(nèi)部，拮抗菌的比例減小，作用變?nèi)?。隨著種薯腐爛，其中內(nèi)生細(xì)菌大量向根圍釋放，從而使根圍的菌量顯著增加，這必然會使更多的細(xì)菌進(jìn)入植株體內(nèi)。4．種群數(shù)量動態(tài)5.內(nèi)生菌起源三種假說：（1）內(nèi)生假說：是由植物細(xì)胞內(nèi)的線粒體或葉綠體演化而來的，因此，它們有與宿主有相同或相近的遺傳背景。（2）外生假說：源于體外，一方面是植物體表，一方面是植物根系通過自然孔或傷口進(jìn)入體內(nèi)。（3）病原菌演化假說：病原菌在與植物長期的共同進(jìn)化中，病原菌的毒性基因發(fā)上了變異，由毒性菌株變化為非毒性菌株。5.內(nèi)生菌起源三、防治機(jī)制防治機(jī)理有三種。1.內(nèi)生菌在病原菌侵染植物之前在植物體內(nèi)搶先聚集占位。主要發(fā)生在利用維管組織的內(nèi)生菌拮抗侵染維管的病原菌如輪枝菌（Verticillium）、鐮刀菌（Fusarium）、青枯菌屬（Ralstonia）的過程中。2.產(chǎn)生抗生素直接拮抗病原菌

產(chǎn)生抗生素類物質(zhì)是內(nèi)生菌在體外進(jìn)行生物控制的機(jī)理之一。馬鈴薯塊莖內(nèi)生菌中拮抗病原菌Phytophthorainfestans，F(xiàn)usariumsambucinumF.avenaceum,F.oxysporum

的抗生素含量不同，從距離表皮越近部位分離到的內(nèi)生菌抗生素含量越高。三、防治機(jī)制從棉株內(nèi)分離出的兩株內(nèi)生細(xì)菌及其代謝物對棉花黃萎病菌的菌絲生長及其毒素的產(chǎn)生均有抑制作用。從水稻體內(nèi)分離出的內(nèi)生細(xì)菌對水稻紋枯病菌絲有抑制作用，對紋枯病菌菌核的萌發(fā)則有強(qiáng)烈的抑制作用。煙草內(nèi)生細(xì)菌抑制了煙草疫霉菌絲生長，游動孢子游動和萌發(fā)。黃瓜的內(nèi)生細(xì)菌可造成黃瓜枯萎病菌絲生長畸形，部分細(xì)胞空泡化。從棉株內(nèi)分離出的兩株內(nèi)生細(xì)菌及其代謝3.誘發(fā)系統(tǒng)抗性誘發(fā)系統(tǒng)抗性是內(nèi)生菌的主要生防機(jī)理。誘導(dǎo)抗性是植物被環(huán)境中的非生物或生物因子激活產(chǎn)生的系統(tǒng)抗性，分為兩類即獲得性系統(tǒng)抗性（SAR）和誘發(fā)性系統(tǒng)抗性（ISR）。

第2種和第3種機(jī)制是內(nèi)生菌和病原菌在侵染位置如根的皮層直接作用時(shí)的生物防治機(jī)理。3.誘發(fā)系統(tǒng)抗性SAR是由病原微生物,二氧化硅（SiO2）、磷酸鹽等無機(jī)物質(zhì)高不飽和脂肪酸等有機(jī)物和植物的物理性損傷引發(fā)。SAR的特征是宿主植物中水楊酸（salycilicacid)濃度增加接著植物細(xì)胞壁木質(zhì)化生成植物體內(nèi)病原相關(guān)蛋白PR。在SAR的誘發(fā)過程中茉莉酸酮酯在第二信號傳導(dǎo)系統(tǒng)中起信號分子的作用ISR主要是由非病原性微生物誘發(fā)不僅宿主植物組織內(nèi)聚集的某類微生物可以引發(fā)ISR根部細(xì)菌產(chǎn)生的鐵載體也可以引發(fā)ISR，salycilicacid信號途徑不參與該過程。SAR是由病原微生物,二氧化硅（Si利用內(nèi)生菌控制植物病害的途徑可以通過人工接種方法將有防病活性的內(nèi)生菌接種到植物體內(nèi)，發(fā)揮內(nèi)生菌的防病作用。目前常用的人工接種內(nèi)生細(xì)菌的方法有3種：①灌根接種法，用內(nèi)生菌懸浮液澆灌植株根際，這種方法可以使內(nèi)生菌進(jìn)入植物根莖內(nèi)[101]。②浸種接種法，在播種前將宿主植物的種子在含有內(nèi)生菌懸浮液中浸泡一定時(shí)間，在生長出的植物體內(nèi)可以檢測到被標(biāo)記的內(nèi)生菌[102]。③涂抹葉片接種法，何紅等[103]采用這種方法可以將枯草芽孢桿菌BS22菌株接種到多種植物體內(nèi)。常用的人工接種內(nèi)生真菌的方法有莖基部注射、人工侵染和愈傷組織培養(yǎng)等方法。中國農(nóng)業(yè)大學(xué)從棉株分離的一種內(nèi)生真菌(Chaetomiumsp.)，經(jīng)人工莖基部注射后有抑制萎蔫鐮刀菌擴(kuò)展的作用。用內(nèi)生真菌人工侵染植物是對其利用的另一種有效手段。Latch和Christensen用5種內(nèi)生真菌進(jìn)行了人工侵染實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在幼苗期侵染能夠?qū)崿F(xiàn)，而成熟植株的侵染沒有成功[104]。Johnson等用愈傷組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行了侵染實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有17%的再生植株被感染[105]。植物內(nèi)生菌分泌的抗生素是抑制和殺死病原菌的直接作用物質(zhì)，內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的應(yīng)用也受到了人們的注意?？梢灾苯永脙?nèi)生菌的代謝產(chǎn)物控制植物病害，內(nèi)生菌產(chǎn)生的抗生素可以作為無公害農(nóng)藥的又一來源。根際內(nèi)生菌Pseudomonasspp.產(chǎn)生的一類鼠李糖脂生物表面活性劑(rhamnolipidbiosurfactants)物質(zhì)，破壞腐霉菌(Pythium)卵孢子的原生質(zhì)膜，引起卵孢子細(xì)胞壁的水解破裂[106]。對小麥全蝕病有防效的P.fluorescensCHAO能產(chǎn)生一些吩嗪類(phenazine)物質(zhì)。Bacillusstrains能產(chǎn)生一些脂多肽(lipopeptide)類抗生素對植物根部病害有顯著的抑制作用[106]。對多種植物病害有防治作用的P.fluorescensCHAO能產(chǎn)生幾種毒性代謝物質(zhì)，包括PCA,HCN和PLT等[107]。PCA和PHL合成的相關(guān)基因簇己經(jīng)被克隆，這就可以將兩者的基因整合到同一個(gè)內(nèi)生細(xì)菌中，大量地合成提高生物防治效果[108]。內(nèi)生菌是構(gòu)建“工程菌”的理想載體。因內(nèi)生菌具有在植物體內(nèi)定殖、繁殖、轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，將某些抗病蟲基因?qū)氲絻?nèi)生菌中，能提高植物的抗病蟲能力，而植物本身的基因并未發(fā)生改變，這樣可以保持植物的天然性狀。Kostaka發(fā)現(xiàn)從百慕大草(Cynodondactylon)中分離的木質(zhì)棍狀桿菌犬齒亞種(Clavbacterxylisubsp.cynodontis)接種到某些植物上后可以很快轉(zhuǎn)移到整個(gè)植物體中。利用這一特點(diǎn)將蘇云金桿菌(bacillusthuringiensis)的伴胞晶體編碼基因轉(zhuǎn)移到這種內(nèi)生細(xì)菌中，實(shí)現(xiàn)了對歐洲玉米螟(Qstrinia.nubilalis)的生物防治[109]，減少了化學(xué)農(nóng)藥的使用。將蘇云金桿菌基因轉(zhuǎn)入蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了對兩種鱗翅目昆蟲的防治[110]。利用內(nèi)生菌控制植物病害的途徑可以通過人工接種方法將有防病活性的內(nèi)生菌接種到植物體內(nèi)，發(fā)揮內(nèi)生菌的防病作用。目前常用的人工接種內(nèi)生細(xì)菌的方法有3種：①灌根接種法，用內(nèi)生菌懸浮液澆灌植株根際，這種方法可以使內(nèi)生菌進(jìn)入植物根莖內(nèi)[101]。②浸種接種法，在播種前將宿主植物的種子在含有內(nèi)生菌懸浮液中浸泡一定時(shí)間，在生長出的植物體內(nèi)可以檢測到被標(biāo)記的內(nèi)生菌[102]。③涂抹葉片接種法，何紅等[103]采用這種方法可以將枯草芽孢桿菌BS22菌株接種到多種植物體內(nèi)。常用的人工接種內(nèi)生真菌的方法有莖基部注射、人工侵染和愈傷組織培養(yǎng)等方法。中國農(nóng)業(yè)大學(xué)從棉株分離的一種內(nèi)生真菌(Chaetomiumsp.)，經(jīng)人工莖基部注射后有抑制萎蔫鐮刀菌擴(kuò)展的作用。用內(nèi)生真菌人工侵染植物是對其利用的另一種有效手段。Latch和Christensen用5種內(nèi)生真菌進(jìn)行了人工侵染實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)在幼苗期侵染能夠?qū)崿F(xiàn)，而成熟植株的侵染沒有成功[104]。Johnson等用愈傷組織培養(yǎng)的方法進(jìn)行了侵染實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)有17%的再生植株被感染[105]。植物內(nèi)生菌分泌的抗生素是抑制和殺死病原菌的直接作用物質(zhì)，內(nèi)生菌代謝產(chǎn)物的應(yīng)用也受到了人們的注意?？梢灾苯永脙?nèi)生菌的代謝產(chǎn)物控制植物病害，內(nèi)生菌產(chǎn)生的抗生素可以作為無公害農(nóng)藥的又一來源。根際內(nèi)生菌Pseudomonasspp.產(chǎn)生的一類鼠李糖脂生物表面活性劑(rhamnolipidbiosurfactants)物質(zhì)，破壞腐霉菌(Pythium)卵孢子的原生質(zhì)膜，引起卵孢子細(xì)胞壁的水解破裂[106]。對小麥全蝕病有防效的P.fluorescensCHAO能產(chǎn)生一些吩嗪類(phenazine)物質(zhì)。Bacillusstrains能產(chǎn)生一些脂多肽(lipopeptide)類抗生素對植物根部病害有顯著的抑制作用[106]。對多種植物病害有防治作用的P.fluorescensCHAO能產(chǎn)生幾種毒性代謝物質(zhì)，包括PCA,HCN和PLT等[107]。PCA和PHL合成的相關(guān)基因簇己經(jīng)被克隆，這就可以將兩者的基因整合到同一個(gè)內(nèi)生細(xì)菌中，大量地合成提高生物防治效果[108]。內(nèi)生菌是構(gòu)建“工程菌”的理想載體。因內(nèi)生菌具有在植物體內(nèi)定殖、繁殖、轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，將某些抗病蟲基因?qū)氲絻?nèi)生菌中，能提高植物的抗病蟲能力，而植物本身的基因并未發(fā)生改變，這樣可以保持植物的天然性狀。Kostaka發(fā)現(xiàn)從百慕大草(Cynodondactylon)中分離的木質(zhì)棍狀桿菌犬齒亞種(Clavbacterxylisubsp.cynodontis)接種到某些植物上后可以很快轉(zhuǎn)移到整個(gè)植物體中。利用這一特點(diǎn)將蘇云金桿菌(bacillusthuringiensis)的伴胞晶體編碼基因轉(zhuǎn)移到這種內(nèi)生細(xì)菌中，實(shí)現(xiàn)了對歐洲玉米螟(Qstrinia.nubilalis)的生物防治[109]，減少了化學(xué)農(nóng)藥的使用。將蘇云金桿菌基因轉(zhuǎn)入蠟狀芽孢桿菌(B.cereus)內(nèi)，實(shí)現(xiàn)了對兩種鱗翅目昆蟲的防治[110]。利用內(nèi)生菌控制植物病害的途徑四、生防菌的分離方法1.內(nèi)生菌的分離（1）材料采集不同地區(qū)、不同品種的苗期、開花期、莢果膨大期的無病株和種子。（2）分離用培養(yǎng)基a．采用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基分離細(xì)菌b．采用PDA培養(yǎng)基分離真菌c．采用高氏1號培養(yǎng)基分離放線菌四、生防菌的分離方法（3）分離方法a.取無病株或種子，先用水沖洗干凈，然后在0.1%十二烷基苯磺酸鈉中浸泡30min，再用水沖洗干凈，然后隨機(jī)稱取根、莖、葉各5g，紗布包裹，以下工作在超凈工作臺上進(jìn)行。b.包裹好的材料浸入0.1%的HgCl2中消毒18min，再用無菌水沖洗3～4次。取0.2ml最后1次無菌水沖洗液涂布接種于3種分離培養(yǎng)基上，每個(gè)處理重復(fù)3次，培養(yǎng)48h，觀察有無菌落產(chǎn)生。據(jù)此驗(yàn)證此消毒方法是否能全部殺死供試材料表面微生物。c.然后供試材料轉(zhuǎn)入無菌研缽中研磨勻漿，加入5ml生理鹽水，攪勻。以此為母液，稀釋10-1、10-2、10-3、10-4、10-55個(gè)梯度菌懸液。然后分別取0.2ml加入3種分離培養(yǎng)基中進(jìn)行內(nèi)生菌的分離，每個(gè)處理重復(fù)3次。（3）分離方法分離方法及步驟不同部分內(nèi)生菌分離純化活性菌株發(fā)酵液和菌絲體提取物生物活性測活性測定活性最高的菌株菌株鑒定活性成分分離活性成分鑒定分離方法及步驟不同部分內(nèi)生菌分離純化活性菌株發(fā)酵液和菌絲（2）分離用培養(yǎng)基這一現(xiàn)象顯示銀杏可能具有某種機(jī)制抵抗病原菌的侵染，這種機(jī)制是否與其體內(nèi)內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物有關(guān)。對多種植物病害有防治作用的P.該菌能夠寄生于立枯絲核菌、終極腐霉(P.內(nèi)生真菌產(chǎn)生細(xì)胞壁分解酶，用來克服寄主防御異物的天然屏障，還可產(chǎn)生果膠酶、脂酶、纖維素酶、酯酶等胞外酶，但對淀粉的利用卻相當(dāng)受限制。綠粘帚菌(Gliocladiumviens)Kostaka發(fā)現(xiàn)從百慕大草(Cynodondactylon)中分離的木質(zhì)棍狀桿菌犬齒亞種(Clavbacterxylisubsp.毛殼霉(Chaetomiumspp.毛殼霉(Chaetomiumspp.根際內(nèi)生菌Pseudomonasspp.根際內(nèi)生菌產(chǎn)生的抗生素物質(zhì)包括2,4-二乙酞藤黃酚(PHL)、吩嗪羧酸(PCA)、藤黃綠膿菌(pyoluterin,PLT)、硝吡咯菌素(pyrrolnitrin,PRN)、膿青素(PYO)、HCN和一類丁酰內(nèi)酯(butyrolactones)。傅正擎等[80]用內(nèi)生菌及其代謝產(chǎn)物與棉花黃萎病菌共培養(yǎng)的方式，證明內(nèi)生菌可通過促生長作用來提高棉株的抗逆性。毛殼霉和木霉一樣能夠產(chǎn)生拮抗物質(zhì)和營養(yǎng)競爭作用對植物病原菌起到有效的抑制作用，但毛殼霉適應(yīng)性更廣，作用更強(qiáng)，特別能夠防治多年生植物病害，如果樹根病等。dahliae)的黃色黃絲曲霉(Talaromycesflavus)等都有大量的報(bào)道，它們都是很有應(yīng)用潛力的生防菌。麥角菌科的系統(tǒng)性草生菌產(chǎn)生強(qiáng)力抗食草動物的生物堿；植物內(nèi)生真菌產(chǎn)生的生理活性物質(zhì)中，生物堿是最重要的一類。植物內(nèi)生真菌和內(nèi)生細(xì)菌另一個(gè)重要的生防機(jī)制是產(chǎn)生水解酶類，如幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶。煙草內(nèi)生細(xì)菌抑制了煙草疫霉菌絲生長，游動孢子游動和萌發(fā)。2.表面消毒效果的常用檢驗(yàn)方法有兩種(1)漂洗液檢驗(yàn)法，即把最后一次漂洗滅菌材料的漂洗液吸取0.2～0.3ml涂布于固體平板上。(2)組織印跡法，即把經(jīng)滅菌、無菌水漂洗過的材料置于固體平板上保留幾分鐘，然后移去樣品。于28℃培養(yǎng)48小時(shí)，檢查表面消毒是否徹底。3.純化與鑒定按常規(guī)方法對分離出的菌落進(jìn)行純化，以供鑒定和保藏。對細(xì)菌和真菌一般要鑒定到屬，常見屬鑒定到種。（2）分離用培養(yǎng)基2.表面消毒效果的常用檢驗(yàn)方法1.小麥內(nèi)生細(xì)菌菌株對小麥全蝕病菌的抑制作用菌株的革蘭氏染色情況（G-）1.小麥內(nèi)生細(xì)菌菌株對小麥全蝕病菌的抑制作用菌株的革蘭氏染色2.黃瓜內(nèi)生菌

病菌的抑制效果分離菌株對蘋果腐爛分離菌株對棉花枯萎病菌的抑制效果2.黃瓜內(nèi)生菌病菌的抑制效果分離菌株對棉花枯菌株產(chǎn)β-1,3葡聚糖酶的皿內(nèi)情況菌株對油菜菌核病菌的抑制效果菌株產(chǎn)β-1,3葡聚糖酶的皿內(nèi)情況菌株對油菜菌核病菌的抑制效第五節(jié)內(nèi)生放線菌一、內(nèi)生放線菌植物內(nèi)生放線菌有：根部結(jié)瘤的弗蘭克氏菌（Frankia）一個(gè)放線菌新屬（Actinosynemma）。玉米根葉中分離出放線菌主要為：小雙孢菌鏈霉菌鏈孢囊菌。鏈霉菌最多(n=482)，鏈輪絲菌(n=2),諾卡氏菌(n=4),小單孢菌(n=1)鏈孢囊(n=1)。第五節(jié)內(nèi)生放線菌一、內(nèi)生放線菌二、分離方法

１.組織表面消毒消毒劑：次氯酸鈉環(huán)氧丙烷氣過氧乙酸升汞硝酸銀等

大多數(shù)的內(nèi)生菌分離采用升汞或次氯酸鈉，但是不同文獻(xiàn)中使用的濃度和處理的時(shí)間不同。目前的內(nèi)生菌分離方法沒有考慮專性內(nèi)生菌以及處于休眠狀態(tài)的內(nèi)生菌。因此，都有一定的局限性。二、分離方法２．培養(yǎng)基使用不同的培養(yǎng)基和在培養(yǎng)基中添加不同的抗生素來實(shí)現(xiàn)，這些選擇劑的添加是必要的。因?yàn)閮?nèi)生真菌的生長一般比內(nèi)生放線菌快，容易在分離培養(yǎng)皿中過量生長。選擇性培養(yǎng)基：主要是以淀粉為碳源，酪蛋白為氮源，加以制霉菌素、放線菌酮等抗真菌化合物以促進(jìn)放線菌的生長，但是多數(shù)研究是為了了解內(nèi)生放線菌的群落生態(tài)組成，因此只選用一種或幾種分離培養(yǎng)基。干熱等用于提高土壤中放線菌分離數(shù)量，預(yù)處理方法也可以用于植物組織。２．培養(yǎng)基３．分離困難的主要原因弗蘭克氏分離困難主要原因在于：（1）一般離體培養(yǎng)需要2～3周或更長時(shí)間（2）土壤中含有快生型的微生物如細(xì)菌腐生放線菌或真菌等弗蘭克氏菌生長緩慢很難獲得純種（3）內(nèi)生菌作為共生菌離體培養(yǎng)后菌體由共生代謝型轉(zhuǎn)變?yōu)楦x型因此營養(yǎng)條件需求很苛刻（4）在離體培養(yǎng)過程中植物組織釋放出抑制菌體生長的多酚化合物使弗蘭克氏菌在體外培養(yǎng)過程中難以生長。３．分離困難的主要原因甜菜中的腐爛棒桿菌，存在于整個(gè)生活史中。內(nèi)生細(xì)菌以假單胞菌屬（Pesudomonas）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、腸桿菌屬（Enterobacter）和土壤桿菌屬（Agrobacterium）為主。菌株產(chǎn)β-1,3葡聚糖酶的皿內(nèi)情況某些根際定殖內(nèi)生細(xì)菌能產(chǎn)生噬鐵素與病菌競爭鐵元素，而植物并不受其影響。菌株產(chǎn)β-1,3葡聚糖酶的皿內(nèi)情況一些內(nèi)生菌具有固氮作用。中國農(nóng)業(yè)大學(xué)從棉株分離的一種內(nèi)生真菌(Chaetomiumsp.取出培養(yǎng)液，用雙層紗布過濾掉菌絲，濾液經(jīng)6000rpm離心，再取上清液高溫滅菌后得無菌濾液備用。內(nèi)生真菌的生物活性代謝產(chǎn)物：從櫟樹（Quercussp.此外，該化合物對一些植物病原真菌辣椒疫霉（Phytophthoracapisici）、禾谷絲核菌（Rhizoctoniacerealis）和禾頂囊殼小麥變種（Gaeumannomycesgraminisvar.2ml加入3種分離培養(yǎng)基中進(jìn)行內(nèi)生菌的分離，每個(gè)處理重復(fù)3次。目前常用的人工接種內(nèi)生細(xì)菌的方法有3種：①灌根接種法，用內(nèi)生菌懸浮液澆灌植株根際，這種方法可以使內(nèi)生菌進(jìn)入植物根莖內(nèi)[101]。第六節(jié)內(nèi)生真菌一、概述1993年，美國化學(xué)家Stierle和植物病理學(xué)家Strobel從短葉紅豆杉（Taxusbrevifolia）的韌皮部分離到一株產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌（Taxomycesandreanae）。通過采用質(zhì)譜、色譜和放射性化學(xué)標(biāo)記等方法,證明分離到的真菌的3周培養(yǎng)物中存在紫杉醇及其類似物，含量為24-50ng/L。隨后，我國陸續(xù)從多種紅豆衫屬植物（Taxusspp．）中分離到許多產(chǎn)紫杉醇的內(nèi)生真菌，對解決紫杉醇嚴(yán)重緊缺開辟了一條新路。自此，人們開始關(guān)注內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物及其生物活性。甜菜中的腐爛棒桿菌，存在于整個(gè)生活史中。第六節(jié)內(nèi)生真菌一1.內(nèi)生真菌主要種類:一類是麥角菌科：系統(tǒng)侵染性草生內(nèi)生菌，多與寄主形成互惠共生；另一類非麥角菌科：樹木、灌木及草本植物上的內(nèi)生菌。相對內(nèi)生細(xì)菌來說,植物內(nèi)生真菌的研究尚缺乏一定的系統(tǒng)性。1.內(nèi)生真菌主要種類:大多數(shù)植物內(nèi)生真菌屬于子囊菌類（Ascomycetes）,包括核菌綱（Pyrenomyetes）盤菌綱（Discomyetes）腔菌綱（Loculoascomyetes）的許多種類以及它們的一些衍生菌。禾草類內(nèi)生真菌與其它無處不在的內(nèi)生真菌的區(qū)別，在于它們和寄主植物形成了非常密切的關(guān)系，至今全世界至少在調(diào)查過的80個(gè)屬290多種的禾草中發(fā)現(xiàn)有與之共生的內(nèi)生真菌。大多數(shù)植物內(nèi)生真菌屬于子囊菌類（Ascomycetes）,2.內(nèi)生真菌存在部位：宿主植物的葉鞘和種子中含量最多，而葉片和根中含量極少。不同組織內(nèi)生真菌的數(shù)量存在差異。老葉的組織分離率為34％，新葉組織分離率為20％，老樹皮為25％，根和果實(shí)的組織分離率最低，分別為16％和14％。2.內(nèi)生真菌存在部位：3.內(nèi)生真菌的生物活性代謝產(chǎn)物：生物堿、萜類、甾體等化合物，在抗癌癥藥物、抗腫瘤類藥物、抗生素類藥物等，且取得了令人振奮的成績。3.內(nèi)生真菌的生物活性代謝產(chǎn)物：1生物堿類植物內(nèi)生真菌產(chǎn)生的生理活性物質(zhì)中，生物堿是最重要的一類。以香柱菌屬（Epichloe）（其無性型為Neotyphodium屬）內(nèi)生真菌研究得較多，如從高羊矛、黑麥草和其它禾本科植物的莖葉中分離到的內(nèi)生真菌Neotyphodiumcoenophialum、N.lolli，Epichloefestucae和E.typhina，對其進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，從發(fā)酵液中分離到Peramine，它具有殺蟲活性，但對哺乳動物無毒性。此外，在Neotyphodium屬內(nèi)生真菌發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)一些麥角生物堿類化合物，這類化合物對昆蟲和食草哺乳動物具有神經(jīng)毒性，如Ergovaline，它與家畜食用內(nèi)生真菌侵染的高羊矛中毒有關(guān)。1生物堿類細(xì)胞生長素吲哚乙酸（IAA）屬于吲哚類生物堿，具有促進(jìn)植物生長的作用，在煙草中分離出來的內(nèi)生真菌麻餅炭團(tuán)菌（Hypoxylonserpens）發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)了這種化合物。6-Isoprenylindole-3-carboxylicacid是一種新發(fā)現(xiàn)的吲哚類生物堿，它對革蘭氏陽性細(xì)菌枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、藤黃八疊球菌（Sarcinalutea）和革蘭氏陰性細(xì)菌假單胞菌（Pseudomonassp.）均具有抑制作用。此外，該化合物對一些植物病原真菌辣椒疫霉（Phytophthoracapisici）、禾谷絲核菌（Rhizoctoniacerealis）和禾頂囊殼小麥變種（Gaeumannomycesgraminisvar.tritici）有抑制活性。細(xì)胞生長素吲哚乙酸（IAA）屬于吲哚類生物堿，具有促進(jìn)植物生在葦狀羊茅（Festucaarundinacea）的內(nèi)生真菌N.coenophialum中發(fā)現(xiàn)黑麥草堿（Loline），它屬于吡咯烷生物堿類化合物，是一種廣譜的殺蟲劑。從香港紅樹（Avicenniamarina）種子中分離出的內(nèi)生真菌2524號，其發(fā)酵液中分離到兩個(gè)神經(jīng)酰胺：(2’，3’-dihydroxytetracosanolyamino)-1，3-dihydroxy-octadecane(4)和(2’，3’-dihydroxydocosanoylamino)-1，3-dihydroxy-octadecane，它們是細(xì)胞內(nèi)重要的第二信使化合物。在葦狀羊茅（Festucaaru從蘇格蘭松樹（PinussylvestrisL.）的莖尖組織中分離到內(nèi)生真菌Rhodotorulaminuta，它可以產(chǎn)生一種腺嘌呤衍生物，這種衍生物是植物細(xì)胞分裂素生物合成的前體，具有恢復(fù)愈傷組織生長并防治褐化的作用。長春花（Catharanthusroseus）內(nèi)生真菌CY3代謝產(chǎn)生長春新堿（Vicristine），長春新堿是一種有效的抗腫瘤藥物。從美登木（Maytenushookeri）中分離篩選到一株球毛殼菌（Chaetomiumglobosum），它可以產(chǎn)生抗癌化合物球毛殼甲素（ChaetoglobosinA）。從蘇格蘭松樹（Pinussylv2萜類內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物中萜類化合物較多。主要包括倍半萜和二萜兩種。在短葉紫杉（Taxusbrevifolia）內(nèi)生真菌Pestalotiopsisspp.發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)五種倍半萜類代謝產(chǎn)物，其中17是第一個(gè)來源于真菌的具有生物活性的葎草烷衍生物。從葉點(diǎn)霉屬（Phyllostictasp.）內(nèi)生真菌中分離得到的Heptelidicacid和Hydroheptelidicacid是倍半萜類化合物，它們對云杉蚜蟲幼蟲具有毒性。雷公藤（Tripterygiumwilfordii）中內(nèi)生真菌串珠鐮孢膠孢變種（Fusariummoniliformevar.subglutinans）代謝物中存在SubglutinolA和SubglutinolB兩種二萜類化合物，它們具有免疫抑制作用，且沒有細(xì)胞毒性。2萜類3甾體類黃花蒿（Artemisiaannua）內(nèi)生真菌炭疽菌（Colletotrichumsp.）的液體培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)3β-Hydroxyergosta-5–ene、3-Oxoergosta-4，6，8，22-tetraene、3β，5α-Dihydroxy-6β-acetoxyergosta-7，22-diene和3β，5α-Dihydroxy-6β-phenyl-caetoxyergosta-7，22-diend四種甾體化合物，它們對植物病原菌禾頂囊殼小麥變種（Gaeumannomycesgraminisvar.tritici）、禾谷絲核菌（Rhizoctoniacerealis）、麥根腐長蠕孢菌（Helminthosporiumsativum）和辣椒疫霉（Phytophthoracapisici）表現(xiàn)出抗菌活性.3甾體類4其它活性物質(zhì)內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物種類較多，其他活性物質(zhì)還包括醌類、環(huán)肽、脂肪酸類等。Rugulosin是一類具有殺蟲活性的苯醌類化合物，它是從冷杉（Abiesbalsamea）內(nèi)生真菌Hormonemadematioides中分離得到的。白灰制菌素A（LeucinostatinA）是一個(gè)具有抗癌和抗菌活性的化合物，最初是從青霉菌（Penicilliumsp）中分離得到的，在歐洲紫杉（Taxusbaccata）的內(nèi)生真菌Acremoniumsp.，發(fā)酵液中也發(fā)現(xiàn)這種細(xì)胞毒素。4其它活性物質(zhì)EchinocandinsA、B、D和H是四種具有抗菌活性的內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物，他們是從Cryptosporiopsissp.和Peziculasp.中發(fā)現(xiàn)的。從櫟樹（Quercussp.）的內(nèi)生真菌Cytonaemasp.中分離到兩種新的異構(gòu)體CytonicacidA和CytonicacidB，它們可以作為人細(xì)胞肥大病毒蛋白酶抑制劑。Cryptocandin是內(nèi)生真菌Cryptosporiopsiscf.quercina的代謝產(chǎn)物，具有抗真菌的活性。從來自不同地方的植物中分離出500株內(nèi)生真菌，其中17株發(fā)酵液提取物具有殺線蟲活性，確定活性最強(qiáng)的成分為3-羥基丙酸（3-Hydroxypropionicacid）。EchinocandinsA、B、D和H是四種具有抗菌紫杉醇(Taxol)：一種頭孢菌素類抗癌藥物，它發(fā)現(xiàn)于植物的樹皮中，其含量非常之小，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。植物內(nèi)生菌次生代謝產(chǎn)物的多樣性為人類突破植物資源周期長、產(chǎn)量低、不可再生等限制，利用植物內(nèi)生菌工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)重要的藥物開辟了新途徑，具有極大的應(yīng)用價(jià)值和開發(fā)潛力。

紫杉醇(Taxol)：一種頭孢菌素類抗癌藥物，它發(fā)現(xiàn)于植物的植物內(nèi)生真菌是應(yīng)用前景非常廣闊微生物的資源：80%的植物內(nèi)生真菌對細(xì)菌，真菌，藻類，雜草等其中一種或多種有作用；而土壤中分離的真菌只有64%的有活性，對135株內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物研究表明，有51%的為新結(jié)構(gòu)，而土壤中分離的為38%。大多數(shù)植物在其生長過程中都會受到幾種甚至幾十種病原菌的侵襲，而銀杏在生長過程中很少發(fā)生病害。這一現(xiàn)象顯示銀杏可能具有某種機(jī)制抵抗病原菌的侵染，這種機(jī)制是否與其體內(nèi)內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物有關(guān)。植物內(nèi)生真菌是應(yīng)用前景非常廣闊微生物的資源：80%的植物內(nèi)生內(nèi)生真菌擬盤多毛孢（Pestalotiopsisspp.）和盤單毛孢（Monochaetiasp.）中得到有抗真菌活性的Ambuic酸，在極低濃度下對多種真菌有強(qiáng)烈的抑制；蒿屬植物（Artermisiaannua）的內(nèi)生炭疽菌中分離到10種抗生物質(zhì)。內(nèi)生真菌（endophyticfungi）：能增強(qiáng)宿主植物抗逆性。從植物的根、莖、葉中分離到了很多植物內(nèi)生真菌（endophyticfungi），通過改良的培養(yǎng)基篩選，其中部分內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生與宿主相同或相似的藥用活性成分。內(nèi)生真菌與植物建立和諧關(guān)系，并不引起明顯的病害癥狀的真菌。內(nèi)生真菌可以從宿主中吸收營養(yǎng)供自己生長需要，同時(shí)也可以促進(jìn)宿主植物的生長發(fā)育，在植物體內(nèi)與宿主互惠共生，協(xié)同進(jìn)化。內(nèi)生真菌擬盤多毛孢（Pestalotiopsisspp.）某些內(nèi)生真菌可產(chǎn)生：吲哚乙酸（IAA）、細(xì)胞分裂素、細(xì)胞松弛素等植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)；麥角菌科的系統(tǒng)性草生菌產(chǎn)生強(qiáng)力抗食草動物的生物堿；許多內(nèi)生真菌在培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生的化合物對人類及植物的病原細(xì)菌和真菌有抗生作用。內(nèi)生真菌可能定殖于非常特殊而敵對的微生境中，作為新的次生代謝產(chǎn)物的潛在來源。木生內(nèi)生真菌（xylotropic）表現(xiàn)抗生活性的比例明顯高于其它類群。內(nèi)生真菌產(chǎn)生細(xì)胞壁分解酶，用來克服寄主防御異物的天然屏障，還可產(chǎn)生果膠酶、脂酶、纖維素酶、酯酶等胞外酶，但對淀粉的利用卻相當(dāng)受限制。某些內(nèi)生真菌可產(chǎn)生：吲哚乙酸（IAA）、細(xì)胞分裂素、細(xì)胞松弛近十年來，在利用植物內(nèi)生真菌開辟抗腫瘤藥物新途徑方面研究進(jìn)展較快。從桃兒七（Sinupodophylumemodi）、四川八角蓮（Dysosmaveitchii）和中華山荷葉（Diphylleiasinensis）中都分離到產(chǎn)鬼臼毒素的內(nèi)生真菌[17-19]；郭波等從長春花莖的韌皮部分離到一株產(chǎn)長春新堿的內(nèi)生真菌--尖孢鐮刀菌（Fusariumoxysporium）；張玲琪等從美登木（Mytenushookeri）的老葉中分離篩選到一株產(chǎn)球毛殼甲素Ａ的內(nèi)生真菌--球毛殼菌（Chaetomiumglobosum）。近十年來，在利用植物內(nèi)生真菌開辟抗腫瘤藥物新途徑方面研究進(jìn)展另外，近年的研究發(fā)現(xiàn)，植物內(nèi)生真菌還能產(chǎn)生其它的具有潛在價(jià)值的活性代謝產(chǎn)物，如產(chǎn)生抑制菌核病菌和灰霉病菌的抗真菌劑--Cryptocandin的內(nèi)生真菌Cryptosporiopsisquercina、產(chǎn)生具有免疫抑制活性物質(zhì)--次粘霉醇的內(nèi)生真菌--亞粘團(tuán)鐮刀菌（Fusariumsubglutinans）。另外，近年的研究發(fā)現(xiàn)，植物內(nèi)生真菌還能產(chǎn)生其它的具有潛在價(jià)值內(nèi)生真菌的生物多樣性為我們提供了一個(gè)巨大的真菌資源庫,這些內(nèi)生真菌必能產(chǎn)生眾多的代謝產(chǎn)物，這些產(chǎn)物可能對我們的工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，人類健康具有重要的價(jià)值，因此，對其代謝產(chǎn)物的研究和利用具有巨大的潛在的經(jīng)濟(jì)效益和社會效益。內(nèi)生真菌的生物多樣性為我們提供了一個(gè)5展望植物種類繁多，還有許多內(nèi)生真菌尚未被研究，相信植物內(nèi)生真菌在合成具生物活性代謝產(chǎn)物方面將具有很大的潛力。我們一方面可以從眾多的內(nèi)生真菌中尋找生物活性化合物；另一方面對已知產(chǎn)生活性成分的內(nèi)生真菌進(jìn)行遺傳改良和代謝調(diào)控的研究，有效地提高活性成分的產(chǎn)量和含量，為大規(guī)模生產(chǎn)創(chuàng)造條件；還可以對內(nèi)生真菌中的生物活性化合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，有效地提高化合物的活性，或者為化學(xué)合成提供先導(dǎo)結(jié)構(gòu)，在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域發(fā)揮更大的作用。5展望第七節(jié)重寄生真菌第七節(jié)重寄生真菌一、重寄生菌的種類

重寄生菌包括：

真菌放線菌。

1.木霉菌

Weindling發(fā)現(xiàn)木霉菌(Trichodermaspp.)能寄生多種土傳植物病原真菌。常見的有哈茨木霉(T.harzianum)和鉤木霉(T.hamatum)。

一、重寄生菌的種類木霉菌可寄生于18個(gè)屬中的29種植物病原真菌：核盤菌屬(Sclerotinia)長孺孢屬(Helminthosporium)鐮刀菌屬(Fusarium)蜜環(huán)菌屬(Armillaria)炭疽菌屬(Colletotrichum)絲核菌屬(Rhizoctonia)輪枝孢屬(Verticillium)黑星菌屬(Venturia)內(nèi)座殼屬(Endothia)腐霉屬(Pythium)疫霉屬(Phytophthora)間座殼屬(Diaporthe)黑星孢屬(Fusicladium)頂囊殼屬(Gaeumannomyces)等。木霉菌可寄生于18個(gè)屬中的29種植物病原真菌：

木霉菌的菌絲可以沿著寄主菌絲生長，或者纏繞在寄主菌絲上生長，從而導(dǎo)致寄主菌絲的死亡。木霉菌從寄主菌絲中吸取營養(yǎng)物質(zhì)而生長繁殖，寄主菌產(chǎn)生的凝集素是木霉菌與寄主菌之間識別的關(guān)鍵物質(zhì)，木霉菌的寄生能力與其分生孢子和凝集素的特異反應(yīng)有關(guān)。國外已經(jīng)登記的木霉菌制劑為16種，其中包括哈茨木霉菌(T.harzianum)12個(gè)，多孢木霉菌(T.polysporum)1個(gè)，綠色木霉菌(T.viride)1個(gè)，其它木霉菌2個(gè)。多數(shù)用于植物土傳病害的防治，主要是土壤處理和種子處理。在土壤處理中，與各種肥料混合使用，如各種堆肥和綠肥。在種子處理中，以包衣等處理方式為主。木霉菌的菌絲可以沿著寄主菌絲生長，2.綠粘帚菌(Gliocladiumviens)它可以寄生于多種土傳植物病原菌，如腐霉菌(Pythiumspp.)、立枯絲核菌(R.solani)和齊整小核菌(S.rolfsii)等。綠粘帚菌的菌絲纏繞其寄主菌，然后分泌酶來破壞寄主菌的菌組織，同時(shí)分泌一種廣譜性抗生素——膠霉毒素(gliotoxin)來殺死寄主菌。2.綠粘帚菌(Gliocladiumviens)3.頭狀莖點(diǎn)霉(Phomaglomerata)和白粉寄生孢(Ampelomycesquisqualis)這兩種菌都可以寄生于白粉菌，但寄生方式有所不同。頭狀莖點(diǎn)霉能夠以次生菌進(jìn)入寄主植物組織中腐生，從腐生真菌或植物病原菌上獲得營養(yǎng)，它的分生孢子器直接產(chǎn)生在寄主植物的表面，從而降低了寄主菌分生孢子產(chǎn)生的機(jī)會。白粉寄生孢在寄主菌的分生孢子梗中產(chǎn)生分生孢子器，影響了白粉菌產(chǎn)孢細(xì)胞的形成以及隨后分生孢子的產(chǎn)生，從而降低了致病白粉菌接種體的數(shù)量。白粉寄生孢已作為一種商品生物制劑應(yīng)用于防治葡萄白粉病(Uncinulanecator)和其它白粉病。3.頭狀莖點(diǎn)霉(Phomaglomerata)和白粉寄生孢4.寡雄腐霉(Pythiumoligandrum)該菌能夠寄生于立枯絲核菌、終極腐霉(P.ultimum)、刺腐霉(P.spinosum)和畸雌腐霉(P.irregulare)。寡雄腐霉對立枯絲核菌的寄生以菌絲寄生為主。菌絲產(chǎn)生大量分枝而侵入寄主菌，不形成吸器和附著胞等侵染結(jié)構(gòu)。侵入后部分菌絲在寄主菌的菌絲內(nèi)擴(kuò)展;部分菌絲會穿過寄主菌絲，使其原生質(zhì)釋放出來，受侵染的菌絲頂端停止伸長，最終萎縮死亡。5.銹生座孢菌(Tuberculinavinosa)銹生座孢菌主要寄生于梨膠銹菌(Gymnosporangiumharaeanum)的銹子器及其附近，銹生座孢菌的分生孢子座將梨膠銹菌的銹孢子牢牢地封在銹子器內(nèi)，最終使其消解，從而減少了銹孢子的侵染機(jī)會。4.寡雄腐霉(Pythiumoligandrum)6.念珠鐮刀菌(Fusariummoniliform)可以寄生危害鞘銹菌(Coleosporiumspp.)，以寄生在夏孢子堆上為主。被寄生的夏孢子堆上長滿米黃色的菌絲，用高倍顯微鏡可觀察到夏孢子幾乎無色透明;有些夏孢子殘缺不全，在成堆的孢子內(nèi)，能見到一些菌絲和鐮刀菌的小型分生孢子和大型分生孢子。鐮刀菌的寄主使鞘銹菌的夏孢子失去了活性，從而減少了夏孢子產(chǎn)生的機(jī)會。對寄生于萵苣小菌核菌(Sclerotiumminir)的細(xì)頂棍孢霉(Sclerotiniasclerotiorum)和寄生于大麗輪枝菌(V.dahliae)的黃色黃絲曲霉(Talaromycesflavus)等都有大量的報(bào)道，它們都是很有應(yīng)用潛力的生防菌。兩種重寄生菌對控制由擴(kuò)展青霉(Penicilliumexpansum)、灰葡萄孢(Botrytiscinerea)和梨狀毛霉菌(Mucorpiriformis)3種真菌單獨(dú)或混合引起的蘋果采后腐爛具有很好的效果。6.念珠鐮刀菌(Fusariummoniliform)7.盾殼霉（ConiothyriumintansCompbell）是菌核病菌上一種重要的重寄生菌。最早于1947年由美國學(xué)者Compbell首次發(fā)現(xiàn)。目前美國、澳大利亞等國已成功地將盾殼霉用于生菜、油菜、向日葵等作物的菌核病生物防治。7.盾殼霉（ConiothyriumintansCompb二、存在的問題重寄生菌活細(xì)胞制劑的優(yōu)點(diǎn)：具有無毒、無殘留、不傷害非靶標(biāo)微生物、與環(huán)境兼容性好、防病持效期長等。多數(shù)生物農(nóng)藥沒有很強(qiáng)的市場競爭能力的原因：這些生物農(nóng)藥大都以野生型微生物為基礎(chǔ)。重寄生菌自身種群的繁殖以及作用效果等亦受到環(huán)境條件等諸多因素的影響，防治效果不穩(wěn)定，暫時(shí)不易被人們采納。二、存在的問題三、前景展望重寄生菌作為生防菌的一種，明顯優(yōu)于其它種類，它的篩選比較省時(shí)省力，不需要大量的前期工作，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，分離純化后便可直接用于大田防病試驗(yàn)。重寄生菌一旦寄生于靶標(biāo)病原菌，受環(huán)境條件等外界因素影響的程度隨之降低，在某種程度上可以排除重寄生菌由于生態(tài)障礙，使得從實(shí)驗(yàn)室向大田階段過渡時(shí)被淘汰的厄運(yùn)。三、前景展望第八節(jié)毛殼霉毛殼霉(Chaetomiumspp.)也是自然界廣泛存在的腐生的子囊菌，隸屬子囊菌門、子囊菌綱、糞殼目、毛殼科。共有300多個(gè)種存在于世界各地。它們能夠分解纖維素和其它有機(jī)物。毛殼菌是一類地理分布廣泛的真菌，大多數(shù)營腐生，盡管這一類群在農(nóng)業(yè)上很少引起植物病害，但由于其能產(chǎn)生較強(qiáng)的纖維素酶和抗生素類物質(zhì)，在工業(yè)、醫(yī)藥和植物病害生物防治上卻有十分重要的意義。第八節(jié)毛殼霉毛殼霉(Chaetomiumspp.)也是自菌絲交織，透明有隔。子囊殼表生，球形或瓶狀，頂端有一孔口，子囊殼壁膜質(zhì)，透明或不透明，表面著生有各種形式的附屬絲，通常分化為須根、側(cè)生附屬絲和頂生附屬絲。須根根狀，起固定子囊殼和吸收養(yǎng)分的作用；側(cè)生附屬絲較短，似剛毛；頂生附屬絲長，分枝或不分枝，形態(tài)多樣。子囊基部簇生，具柄，棍棒狀或紡錘形或倒卵形或細(xì)圓柱狀，子囊壁薄，常早期消解，內(nèi)含8個(gè)子囊孢子（偶爾有2或4個(gè)）。子囊孢子無隔，單細(xì)胞，球形、橢圓形或檸檬形等，成熟前多為灰白色，成熟后呈棕色或橄欖綠色，具1～2個(gè)非隆起的芽孔。子囊孢子在子囊內(nèi)為不規(guī)則排列或排成單列。本屬的某些種能產(chǎn)生分生孢子或厚垣孢子。菌絲交織，透明有隔。子囊殼表生，球形或瓶狀，頂端有一孔口，子毛殼屬的形態(tài)分種特征主要通過比較子囊果孔口的有無，附屬絲的變化形態(tài)，子囊的結(jié)構(gòu)和形狀，子囊孢子的形狀、大小和芽孔的特征等來鑒定毛殼菌。球毛殼（C.globosum）菌落日生長速率7—8毫米，有灰白色或橄欖色的氣生菌絲，經(jīng)常有黃色、暗綠色、綠色或紅色滲出物；子囊果7—9天內(nèi)成熟，在反射光下呈橄欖色、灰綠色或棕色，表生，球形、卵形或倒卵形，有孔口；子囊果壁棕色，子囊果附屬絲眾多，經(jīng)常不分叉，有彈性，呈波浪狀或卷成圈，從基部向外逐漸變細(xì)。子囊棍棒狀，有柄，內(nèi)有8個(gè)子囊孢子，不規(guī)則排列；子囊孢子檸檬形，成熟時(shí)深褐色，壁厚，有一個(gè)頂生萌發(fā)孔。毛殼屬的形態(tài)分種特征毛殼霉C.globosum和C.cochlioides可以拮抗多種植物病原菌，如長蠕孢霉菌(Helminthosporium)、鐮刀菌(Fusariumspp.)、交鏈孢菌(Alternariaspp.)、立枯絲核菌(Rhizoctomiasolani)、蘋果黑星病菌(Venturiainequalis)、Fusariumroseumf.sp.cerealis和稻瘟病菌(Magnaporthegrisea)。還有一種毛殼霉C.cupreum，以拮抗擬針點(diǎn)霉菌(Phompsisspp.)、炭疽病菌(Colletotrichumspp.)和稻瘟病菌(M.grisea)。毛殼霉在泰國還可以抑制白絹病菌等，它具有廣譜的殺菌活性。在堆肥過程中毛殼霉經(jīng)常出現(xiàn)，并在堆肥中可以穩(wěn)定地存在。毛殼霉C.globosum和C.cochlioides可以拮毛殼霉和木霉一樣能夠產(chǎn)生拮抗物質(zhì)和營養(yǎng)競爭作用對植物病原菌起到有效的抑制作用，但毛殼霉適應(yīng)性更廣，作用更強(qiáng)，特別能夠防治多年生植物病害，如果樹根病等。它作為堆肥中添加生防菌有很大優(yōu)勢?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有些毛殼菌可預(yù)防谷物秧苗的枯萎病、甘蔗猝倒病、降低番茄枯萎病、蘋果斑點(diǎn)落葉病等的發(fā)病率，且對立枯病絲核菌、鏈格孢菌、擬莖點(diǎn)霉菌、毛盤飽菌和葡萄飽屬致病菌等均有一定的抑制作用。毛殼霉和木霉一樣能夠產(chǎn)生拮抗物質(zhì)和營養(yǎng)競爭作用對植物病原菌起毛殼菌可作為多種植物病害的生防菌。巴西的各種燕麥的種子被球毛殼chaetomiumglobsum和螺卷毛殼chaetomiumcichliodes傳染后，則對維多利亞長蠕飽毒素的作用產(chǎn)生了抵抗力，從而使谷物、燕麥、大麥的幼苗免受鐮刀菌的侵染。另外，葉面噴灑球毛殼制劑能控制由venturiainaegulis所引起的蘋果黑星病。從油菜大豆等植株上分離獲得兩株內(nèi)生毛殼菌，經(jīng)試驗(yàn)證明在油菜體內(nèi)可系統(tǒng)性傳導(dǎo)。系統(tǒng)性內(nèi)生毛殼菌用來防治植物病害在國內(nèi)尚未見報(bào)道，其成功有望開辟一條新的植物病害防治途徑——兼具預(yù)防及持久防病作用。毛殼菌可作為多種植物病害的生防菌。巴西的各種燕麥的種子被球毛培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基（去皮馬鈴薯200g，葡萄糖15g，進(jìn)口瓊脂粉10g，水1000ml）馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基PA（去皮馬鈴薯200g，葡萄糖15g，水1000ml）馬鈴薯草酸液體培養(yǎng)基PDA-NA（草酸代替葡萄糖，含草酸3克/升，PH2.7左右）培養(yǎng)基內(nèi)生球毛殼菌抑菌活性測定平皿對峙作用于PDA平板距離中心2cm的兩點(diǎn)上分別接種25℃下恒溫培養(yǎng)一周的同質(zhì)等量的毛殼菌和供試病原菌的菌絲塊，每處理重復(fù)3次，并以不接生防菌為對照，置于25℃培養(yǎng)箱內(nèi)中培養(yǎng)，逐日觀察抑菌作用，并用毫米刻度尺測量毛殼與病菌菌落生長的相向半徑:r毛、r病、以及對照半徑r0。菌核的生長抑制率%=（對照半徑r0-對峙培養(yǎng)的菌核菌落半徑r）/對照半徑r0×100內(nèi)生球毛殼菌抑菌活性測定載玻片對峙培養(yǎng)法在消毒的載玻片上均勻涂布2mm厚的PDA培養(yǎng)基，在距其中央1.5厘米處分別接種毛殼菌和油菜核盤菌菌絲塊，置于25℃下培養(yǎng)，并以只接病菌的為對照。待兩菌將要相交和完全相交時(shí)，分別在光學(xué)顯微鏡下觀察直接觀察兩菌絲纏繞，穿透、菌絲消解、細(xì)胞質(zhì)變稀薄等現(xiàn)象。

載玻片對峙培養(yǎng)法內(nèi)生球毛殼菌的液體培養(yǎng)于50ml的三角瓶中加入40ml的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)液，用接種針各挑取篩選出來的適量毛殼菌絲于三角瓶培養(yǎng)液中，置于25℃的搖床（150r/min）振蕩培養(yǎng)7天即可。取出培養(yǎng)液，用雙層紗布過濾掉菌絲，濾液經(jīng)6000rpm離心，再取上清液高溫滅菌后得無菌濾液備用。內(nèi)生球毛殼菌的液體培養(yǎng)活性測定：將油菜核盤菌用無菌水配成一定濃度的菌絲懸浮，均勻地涂在直徑9cm的PDA平板上，再取直徑1cm的濾紙圓片滅菌后，將其浸入上述無菌培養(yǎng)濾液中，取出晾干后，再將其移放到平板中心，重復(fù)3皿，然后置于25℃溫箱培養(yǎng)，觀察是否在濾紙片周圍出現(xiàn)抑菌圈。從銀杏（GinkgobilobaL）的根、莖、葉和果實(shí)中分離獲得522株內(nèi)生真菌，通過對七種植物病原真菌菌絲（小麥赤霉、棉花枯萎、油菜菌核、大豆疫霉、玉米大斑、水稻稻瘟、蘋果炭疽。）抑制作用的測定，發(fā)現(xiàn)其中有302株有抗菌活性，占總數(shù)的57.85%。活性測定：內(nèi)生螺旋毛殼ND35菌株對立枯絲核菌的重寄生：菌絲相互作用的超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞化學(xué)光學(xué)顯微鏡觀察內(nèi)生螺旋毛殼ND35菌株對立枯絲核菌的重寄生：菌絲相互作用的透射電鏡（TEM）觀察內(nèi)生螺旋毛殼ND35菌株對立枯絲核菌的重寄生：菌絲相互作用的超微結(jié)構(gòu)和細(xì)胞化學(xué)透射電鏡（TEM）觀察內(nèi)生螺旋毛殼ND35菌株對立枯絲核菌的圖2-2C圖2-2C圖2-3A圖2-3BN-乙?；咸前窔埢◣锥≠|(zhì)）的細(xì)胞化學(xué)定位圖2-3A圖2-3BN-乙?；咸前窔埢◣锥≠|(zhì)）的細(xì)胞水解酶粗提液對楊樹腐爛病菌(A)、蘋果樹腐爛病菌(B)和蘋果炭疽病菌(C)菌絲生長的抑制作用。Glu,β-1,3-葡聚糖酶的粗提液；CK,對照。內(nèi)生菌螺旋毛殼產(chǎn)生的抗生素和水解酶的協(xié)同抗菌作用水解酶粗提液對楊樹腐爛病菌(A)、蘋果樹腐爛病菌(B)水解酶和抗生素對楊樹腐爛病菌菌絲生長的協(xié)同作用。A,抗生素；P,酶蛋白；A+P,抗生素和酶蛋白混合；CK,對照。水解酶和抗生素對楊樹腐爛病菌菌絲生長的協(xié)同作用。水解酶和抗生素對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的抑制作用。A,菌絲在沒有抗生素和水解酶的對照處理(CK)中正常生長；B,經(jīng)水解酶處理(P)的菌絲顯示腫脹，畸形變暗；C,經(jīng)抗生素處理(A)菌絲顯示液泡化；D,用水解酶和抗生素混合物處理(A+P)的菌絲顯示嚴(yán)重扭曲。Bars=10m(A和D),7.5m(B和C)

水解酶和抗生素對蘋果樹腐爛病菌菌絲生長的抑制作用。ABCDEF抗生素培養(yǎng)濾液對不同病原菌分生孢子萌發(fā)抑制作用的光學(xué)顯微照片。A,對照處理的玉米彎孢葉斑病菌。B,用抗生素處理的玉米彎孢葉斑病菌的分生孢子。C,對照處理的楊樹腐爛病菌的分生孢子。D,用抗生素處理的楊樹腐爛病菌。E,對照處理的蘋果炭疽病菌分生孢子；F,用抗生素處理的蘋果炭疽病菌分生孢子。Bars=20m(A,DandE),25m(BandF),40m(C).ABCDEF抗生素培養(yǎng)濾液對不同病原菌分生孢子萌發(fā)抑制作用的Directcounts1Goodforbacteria,fungalsporesandmyceliaandactinomycetemyceliaSpatialarrangmentsandassociationsastheyexistinsoilDeadandlivecellsarenotdistinguishableDifferentiationbetweenorganismsisveryproblematicCharacterizationoforganismsisreducedSinglecellsincoloniesarenotenumerableSoilparticulescanbecountedascellsDirectcounts1GoodforbacterDirectcounts2In-situidentification:DNAprobes,hybridizationAntibodiesGram+,Gram-Live/DeadcellsDirectcounts2In-situidentifMostprobablenumberTableofresultsQuantificationoforganismsperformingaspecificfunctionEnrichment/isolationfromtubesispossibleInaccurateHeavytoimplementMostprobablenumberTableofr(Dehydrogenases,phosphatases,reductases,proteases)Carbohydrates,aminoacids,proteinspH,pechanges,intermediatemetabolism(Dehydrogenases,phosphatases,毛殼菌是子囊菌門、子囊菌綱、糞殼目、毛殼科一類真菌的總稱。毛殼菌是一類重要的資源真菌，世界性分布，廣布于土壤內(nèi)各種腐朽植物殘?bào)w、紙、木材等纖維質(zhì)材料上及種子、皮革和動物的排泄物上，近年來還陸續(xù)在多種植物組織內(nèi)分離到該種群。毛殼菌的大多數(shù)種類都有降解纖維素的能力，特別是耐溫或嗜熱種類，目前國內(nèi)外已有利用毛殼菌降解玉米秸等纖維材料生產(chǎn)發(fā)酵飼料的成功事例。毛殼菌是子囊菌門、子囊菌綱、糞殼目、毛殼科一類真菌的總稱。謝謝觀看謝謝觀看89生防微生物內(nèi)生細(xì)菌生防微生物內(nèi)生細(xì)菌90黃瓜內(nèi)生菌分離菌株對蘋果腐爛病菌的抑制效果分離菌株對棉花枯萎病菌的抑制效果小麥內(nèi)生菌菌株對小麥全蝕病菌的抑制作用菌株的革蘭氏染色情況（G-）黃瓜內(nèi)生菌分離菌株對蘋果腐爛病菌的抑制效果分離菌株對棉花枯萎植物內(nèi)生細(xì)菌普遍存在于高等植物中，木本、草本植物，單子葉植物和雙子葉植物內(nèi)均有內(nèi)生細(xì)菌。已在水稻、小麥、玉米、馬鈴薯、花生、甜菜、黃瓜、番茄、棉花、三葉草、檸檬、葡萄等30多種植物的不同器官中分離到了個(gè)80屬的內(nèi)生細(xì)菌。內(nèi)生細(xì)菌以假單胞菌屬（Pesudomonas）、芽孢桿菌屬（Bacillus）、腸桿菌屬（Enterobacter）和土壤桿菌屬（Agrobacterium）為主。馬鈴薯內(nèi)生細(xì)菌包括假單孢菌屬（Pesudomonas），芽孢菌屬（Bacillus），黃單孢菌屬（Xanthomonas），黃桿菌屬（Flavobacterium），棒桿菌屬（Corynebacterium），不動桿菌屬（Acinetobacter），氣桿菌屬（Aerobacter），微球菌屬（Micrococcus），農(nóng)桿菌屬（Agrobacterium）等。植物內(nèi)生細(xì)菌普遍存在于高等植物中，木從花生中分離的內(nèi)生菌有細(xì)菌和真菌。內(nèi)生細(xì)菌以巨大芽孢桿菌（B.megaterium）、蠟樣芽孢桿菌（B.cereus）和枯草芽孢桿菌（B.subtilis），還有黃單胞菌(Xanthomonasspp.)和歐文氏菌(Erwiniaspp.)。內(nèi)生真菌以叢梗孢屬(Monilia)、鏈格孢屬(Alternaria)和黑烏霉屬（Memmoniella）、曲霉菌（Asper