HIV抗體檢測快速試劑的原理和方法界首市CDC常用HIV抗體檢測方法:

ELISA

快速HIV檢測免疫印記法（WesternBlot）其他方法：免疫熒光法（IFA）、放射免疫沉淀實驗HIV抗體檢測HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩和復(fù)檢）和確認(rèn)試驗（WB)。（一）檢測試劑篩查試劑必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良、在有效期內(nèi)的試劑。目前常用的篩查試劑有酶聯(lián)免疫、顆粒凝集和其它快速診斷試劑。采供血機構(gòu)進行血液篩查應(yīng)采用HIV-1/2混合型酶聯(lián)免疫試劑。自采自供血的單位必須進行HIV抗體檢測。酶聯(lián)免疫吸附試驗

EnzymelinkedimmunosorbentassayELISA的原理

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗體或抗原的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。ELISA的原理

用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。ELISA的原理加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達(dá)到很高的敏感度。ELISA的類型

雙抗原夾心法測抗體

雙抗體夾心法測抗原

間接法測抗體

競爭法、捕獲包被法等包被了HIV抗原的檢測板患者的抗體酶顯色劑+ve-ve酶聯(lián)免疫吸附試驗HIV

檢測的介紹ELISA（1）明膠顆粒凝集試驗（PA）：PA是HIV血清抗體檢測的一種簡便方法，是將HIV抗原致敏明膠顆粒作為載體，與待檢樣品作用，混勻后保溫（一般為室溫）。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時，經(jīng)抗原致敏的明膠顆粒與抗體發(fā)生抗原-抗體反應(yīng)，根據(jù)明膠顆粒在孔中的凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種，HIV-1和HIV-2抗原共同致敏的PA試劑（AFDHIV-1/2PA），已經(jīng)我國食品藥品監(jiān)督管理局（SFDA）注冊批準(zhǔn)；HIV-1、HIV-2抗原分別致敏的PA試劑（SERODIA-HIV-1/2）可初步區(qū)分HIV-1型和HIV-2型，目前我國尚未引進。（PA）檢測結(jié)果的判定（2）斑點EIA或稱斑點ELISA（dot-EIA）：以硝酸纖維膜為載體，將HIV抗原滴在膜上成點狀，即為固相抗原。加血清樣品作用，以后步驟同ELISA。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點。反應(yīng)時間在10min以內(nèi)，使用抗原量少。（3）斑點免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗金標(biāo)紙條采用雙抗原夾心法免疫測定原理，選擇經(jīng)純化的基因工程制備的gp36、gp41、p24抗原作為包被抗原和gp41、gp36基因工程抗原和p24合成肽作為膠體金結(jié)合抗原。當(dāng)待檢標(biāo)本中含有HIV抗體時，先和金標(biāo)記抗原結(jié)合，由于層析作用反應(yīng)復(fù)合物沿硝酸纖維膜向前移動，當(dāng)遇到包被抗原時，形成Ag-Ab-Ag-Au復(fù)合物而富集在包被線上，形成紅色沉淀線。同時在包被膜上還有一條質(zhì)控線對照，故當(dāng)有兩條紅線時判為陽性，只有一條紅線時，判為陰性。

金標(biāo)法試劑試劑穩(wěn)定，可室溫長期保存。試驗時不需任何設(shè)備，迅速、簡便、特異性較好，敏感性約相當(dāng)于中度敏感的ELISA，適用于應(yīng)急檢測、門診急診個體檢測。目前已有在國內(nèi)被SFDA批準(zhǔn)注冊的國外進口試劑和國內(nèi)產(chǎn)品。一般可在1030min內(nèi)判讀結(jié)果。無反應(yīng)無意義無意義金標(biāo)法（膠體硒法）結(jié)果判定（4）艾滋病唾液檢測卡：在硝酸纖維膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同時檢測含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗體，原理為酶免疫間接法。主要檢測唾液中的HIVIgA與IgG抗體，敏感性特異性與ELISA相近，可避免靜脈穿刺。但樣品預(yù)處理時間長且售價較高。以唾液為樣品測定HIV抗體的ELISA、免疫印跡法（WB）試劑已經(jīng)美國FDA批準(zhǔn)。（5）其它快速篩查試驗方法：家庭HIV檢測（HomeAccessSystem）等?？焖僭噭┑木窒扌砸话悴挥糜谘汉Y查（除5年行動計劃）有一定的假陽性反應(yīng)，如作為臨床診斷，要復(fù)檢和確認(rèn)有一定的假陰性反應(yīng)（尤其暴露時間<3個月）隨訪檢測（解釋檢測前后咨詢必要性）檢測要點1、篩查試驗陽性不能出陽性報告2、嚴(yán)格按照試劑說明書操作，不得擅自更改。3、注意防止交叉污染。4、嚴(yán)格遵守實驗室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）。檢測程序及流程圖1、篩查試驗標(biāo)本驗收合格后，用篩查試劑進行檢測，如呈陰性反應(yīng)，報告HIV抗體陰