構(gòu)的或而使用過(guò)的材料。我承諾，（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)。（設(shè)計(jì)）作者（簽名 I-II前 儀器與試 儀 試劑與材 樣品測(cè)定和計(jì)算方法及方法學(xué)溶液的測(cè)定方 計(jì)算方 方法學(xué)相思子中濱薊黃苷提取工 單因素響應(yīng)面 相思子中不同部位濱薊黃苷含量及其動(dòng)態(tài)變 溶液的樣品含量測(cè)定及其結(jié) 相思子濱薊黃苷含量動(dòng)態(tài)變 6和結(jié) 參考文 綜 致 附 ：目的（葉（分含量動(dòng)態(tài)變化的分析，為相思子用藥部位及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)和依據(jù)。方法含量，分析相思子不同部位以及不同時(shí)期的葉的濱薊黃苷成分動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果50%40:130min2結(jié)論：相思子；濱薊黃苷；動(dòng)態(tài)變化；高效液相色譜StudyontheExtractionProcessandtheContentDynamicChangesofCirsimarininAbrusprecatoriusL.:ObjectiveInordertoestablishtheoptimumprocessingconditionsofcirsimarinextractionfromAbrusprecatoriusL.andyzethedynamicchangesofcirsimarinindifferentparts(roots,stems,andleaves)ofAbrusprecatoriusL.,thisexperimentemployedHPLCtodeterminethecirsimarincontentindifferentpartsofAbrusprecatoriusL.,andinitsleaves(youngleaves,tinyleaves,bigleaves,yellowleaves)atdifferenttimes,providingthebasisandfoundationsformedicationsiteandqualityevaluationofAbrusprecatoriusL..MethodsTherefluxmethodwasusedtoextractdifferentpartsofAbrusprecatoriusL.anditsleavesatdifferenttimes.Singlefactormethodwasappliedtodeterminetheeffectoffourvariables:Ethanolconcentration,solid-liquidratio,extractiontime,andextractiontimesoncirsimarinextraction.Responsesurfacemethodology(RSM)wasemployedtooptimizetheextractionparameters.HPLCwasusedtodeterminethecirsimarincontentinAbrusprecatoriusL.andyzethedynamicchangesofcirsimarincontentindifferentpartsofAbrusprecatoriusL.anditsleavesatdifferenttimes.ResultsTheresultsrevealedthattheoptimumprocessingconditionsofcirsimarinextractionfromAbrusprecatoriusL.wereasfollows:ethanolconcentration50%,solid-liquidratio1:40,extractiontime30min,andextractiontimes2.ThedynamicchangesofthecirsimarinindifferentpartsofAbrusprecatoriusL.wereasfollows:bigleaves>tinyleaves>yellowleaves>youngleaves>roots>stems,inwhichthedifferencebetweenrootsandstemswassmallandnotsignificant,whilethecirsimarininleaveswasfarmorethanthatinrootsandstems.ConclusionTheextractionmethodissimpleandquick.Theresultisaccurate,reliableandreproducible,anditcanbeusedtoextractthecirsimarinfromAbrusprecatoriusL..ThecontentofcirsimarinintheleavesofAbrusprecatoriusL.ismuchhigherthanthatofrootsandstems.Therefore,whenthecontentofcirsimarinisprimarystudied,itissuggestedtopickorchoosetheleavesofAbrusprecatoriusL.asexperimentalanddrugsites.Keywords:AbrusprecatoriusL.;cirsimarin;dynamicchanges;（（相思子用藥部位及質(zhì)量評(píng)價(jià)提供基礎(chǔ)和依據(jù)，為相思子中濱薊黃苷成分的研究提供參考。，—，—恒科學(xué)儀器司）、濱薊黃苷對(duì)照品（，HPLC測(cè)定，含量以峰面積百分比計(jì)算為99%）、超純（怡寶飲料中國(guó)）材料：相思子根、莖、葉（ 學(xué)藥圃采摘）942mg/L2.0g50%60mL50mL0.22μm分別精密吸取提取液各10μL，置高效液相色譜儀進(jìn)定。由文獻(xiàn)[8]可知，色譜HypersilBDSC18色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇（A）1.0mL·min-1。計(jì)算含量。由文獻(xiàn)[8]可知，濱薊黃苷的回歸方：Y=1933.4X+57.897（r=為峰面積，X為進(jìn)樣量/μg）3.110μL3.2項(xiàng)下色800003-1。3-1濱薊黃苷對(duì)照品(A)和相思子葉供試品(B)的精密度10μL3.26次，測(cè)得濱薊黃苷峰面積RSD0.28%3-1。3-11 平均 峰面 穩(wěn)定性精密吸取供試品溶液進(jìn)樣10μL，分別于0，2，4，6，8，12，24h3.2項(xiàng)下色譜3-2。3-2024681224重復(fù)性18.75mg/g，測(cè)得濱薊黃苷峰面積RSD2.61%3-3。3-3123456加樣回收率試取同一批已知含量(18.75mg/g)0.25g6加入3.1.1項(xiàng)下濱薊黃苷對(duì)照品溶液適量，按3.1.2項(xiàng)下方法分別供試品溶液，精密10μL99.53%和RSD0.90%，證明該方法可行。3-4。3-4取樣量樣品含量對(duì)照品加入量測(cè)得量回收率平均回收率乙醇濃52.0g30:10%30%50%、70%、95%30min250mL3.23.3的方4-1乙醇濃度0含量4-14-14-1可以看出隨著乙醇濃度的提高，濱薊黃苷含量逐漸增加，在乙醇30%30%左右時(shí)，10%～50%。50:1、60:150%30min2次。提取液經(jīng)棉花50mL3.23.3的方4-2含量4-24-24-2可以看出隨著液料比的增加，濱薊黃苷含量略微增加，但是整體20:1～40:1。提取時(shí)52.0g30:150%乙30min、45min、60min、75min、90min2次。50mL3.2的方法測(cè)定，3.34-3提取時(shí)間含量4-3由表4-34-3可以看出隨著提取時(shí)間的延濱薊黃苷含量逐漸增加45min45min30～60min。提取次取同一批次相思子葉5份，各2.0g，精密稱(chēng)定，分別加入液料比為30:150%乙30min1、2、3、4次。提取液經(jīng)棉花過(guò)濾后，50mL3.23.3的方法計(jì)算濱4-4 含量 4-44-44-4121～3次。4-5。4-5X1乙醇濃度X2X3提取時(shí)間X4提取次數(shù)/-10213響應(yīng)面試根據(jù)Box-Benhnken的中心組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，以濱薊黃苷含量(Y)432924個(gè)為析因試驗(yàn)，52910μL3.2的方法測(cè)定，并3.34-6。4-6乙醇濃度提取時(shí)間1-0-021010310-0401-050-0-6-10071-008001-90000-010-00-1100100000-10110000110-01--0000000000-00101010--00000-0100000100-0110采用響應(yīng)面對(duì)表4-2-2中29個(gè)濱薊黃苷含量數(shù)據(jù)進(jìn)行線(xiàn)性回歸擬合得到濱薊黃苷含量（Y）對(duì)上述4 個(gè)因素的二次多項(xiàng)回歸方：004X1X3+0.064125X1X4-3.50000E-003X2X3-0.050750X2X4-0.023500X3X4-2.77042E-2+1.08083E-003X22-8.41852E-004X32-2.28067X42。對(duì)該回歸模型進(jìn)行方差分析，結(jié)果4-度FP111111111111114-4-7（P＜0.0說(shuō)明各因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系（P＞0.05模型的校正復(fù)相關(guān)系數(shù)R20.5382信噪比5.533＞4說(shuō)明回方程擬合度和度均較高所以本響面試驗(yàn)所得的二次回歸方程能較好地對(duì)響應(yīng)值進(jìn)行。響應(yīng)曲面的分4-5。濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量

液料

乙醇濃度

提取時(shí)間

乙醇濃度 提取次數(shù)(次乙醇濃度濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量

提取時(shí)間

液料 提取次數(shù)(次液料濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量濱薊黃苷提取量

提取次數(shù)(次

提取時(shí)間E.液料比和提取次 F.提取時(shí)間和提取次4-5C中兩因素交互作用DEBF中兩因素交互作用不算顯著。由響應(yīng)面design-expert8.0.6進(jìn)行分析，模擬得到相思子中濱薊黃苷成分的最佳提取工藝為：乙醇濃度48.47%，液料比40:1，提取時(shí)間30min，提取次數(shù)2.53次。最佳方案中的濱薊黃苷含量為22.13mg/g。結(jié)合實(shí)際情況，將最佳提取工藝確定為：50%40:130min2次。4-8平均含量123結(jié)果表明，實(shí)際中的濱薊黃苷含量（平均值：19.34mg/g）取濱薊黃苷對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加乙醇溶解，制成942mg/L62.0g，精密稱(chēng)定，4.2.5中的濱薊黃苷最佳提取工藝方案（50%40:1，提取時(shí)間30min2次）進(jìn)行提取，提取液經(jīng)棉花過(guò)濾后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至適量，50mL5-1。高效液相色譜圖見(jiàn)附錄。5-1樣品名 嫩 小 大 黃 5.25-15-2。5-15-25-2可以較為直觀地看出，隨著相思子植物的生長(zhǎng)（根-莖-葉），其中的濱薊苷成分含量會(huì)逐漸增加；而隨著相思子葉子的衰葉-黃葉），其中的濱薊黃苷成6和結(jié)本課題實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)不同乙醇濃（0%30%50%70%95%）90min）、提取次數(shù)（1、2、3、4次）對(duì)提取效果的影響，為后續(xù)的響應(yīng)面試驗(yàn)提供科10%～50%、最佳液料比范圍確定為20:1～40:130～60min1～3次。通過(guò)單因素，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)提供較為科學(xué)且合理的范圍，既明確了實(shí)驗(yàn)方向，根據(jù)前期的單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，由響應(yīng)面Design-Expert8.0.6進(jìn)行分析，模擬得到相思子中濱薊黃苷成分的最佳提取工藝參數(shù)為：乙醇濃度48.47%，液料比40:1，提取時(shí)間30min，提取次數(shù)2.53次。最佳方案中的濱薊黃苷含量為22.13mg/g。結(jié)50%40:1302次。響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法利用合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì)方法，并通過(guò)試驗(yàn)得到一定數(shù)據(jù)，來(lái)，可以讓?xiě){借對(duì)響應(yīng)曲面3D圖的直接觀察來(lái)選擇實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的最優(yōu)化條件。而且在分析工具地選擇上，使用響應(yīng)面Design-Expert進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，它簡(jiǎn)單、直接、易操作，功能非常明確，為設(shè)計(jì)試驗(yàn)（design）、回歸分析（ysis）、優(yōu)化的濱薊黃苷成分的最佳提取工藝參數(shù)。最佳提取工藝方案為：乙醇濃度50%，液料比[M]李春陽(yáng)，張平，．HPLC測(cè)定相思子葉中濱薊黃苷含量[J]．中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)DaMJ,JungHA,ChoiJS.ComparativeantioxidantactivityandHPLCprofilesofsomeselectedKoreanthistles[J].ArchivesofPharmacalResearch,2008,31(1):28.HasratJA,BruyneTD,BackerJPD,etal.CirsimarinandCirsimaritin,FlavonoidsofMicroteadebilis(Phytolaccaceae)withAdenosineAntagonisticPropertiesinRats:LeadsforNewTherapeuticsinAcuteRenalFailure[J].JournalofPharmacy&Pharmacology,1997,相思子研究概豆科（Leguminosae）相思子屬（AbrusAdans.）12種，中國(guó)有其中4種，即廣州相思子（AbruscantoniensisHance）、思子（AbrusmollisHance）、美麗相思子（AbruspulcusWall）、相思子（AbrusprecatoriusL.）[1]。而本綜述將對(duì)近年來(lái)相思子（AbrusprecatoriusL.）的相關(guān)研究和報(bào)導(dǎo)進(jìn)行整理和綜述，主要針對(duì)其、、相思子生長(zhǎng)于丘陵地或山間、路旁灌叢中，常栽培于村邊。分布福建、5～73.5～4.52/3處為朱紅色，另一端為黑色，種臍凹陷，橢圓形類(lèi)白色，位于黑色處的側(cè)面。質(zhì)堅(jiān)硬，浸泡后除去種皮可見(jiàn)黃2枚，肥厚。具青草氣，味微苦澀[4]。、、11厘米;8～20對(duì)，具喬短柄；小葉片長(zhǎng)圓5～203～8毫米，先端鈍圓，具細(xì)尖，基部圓形或闊綠色，鐘形，長(zhǎng)約3毫米，先端有4個(gè)短齒，外側(cè)被毛;花冠蝶形，旗瓣闊卵形，基部有三角形的爪；9，成1束；子房上位，闊線(xiàn)形，被毛，花柱短，柱頭具細(xì)。莢2～4.5厘米，先端有彎曲的喙，表面密被菌、抗炎、抗腫瘤等方面具有良好的生物活性，在、和食品方面均有應(yīng)用，一直備受?chē)?guó)內(nèi)外關(guān)注[5]2,8-二羥基-3,4,9,10-四甲氧基紫檀素。N-9-甲基-β-咔啉(1)、異喹啉酮(2)、吲哚-3-羧酸(3)、2,3-二甲李春陽(yáng)等[8]對(duì)相思子(AbrusprecatoriusL.)葉進(jìn)行成分分離和鑒別。方法利用溶劑提取法、萃取法和柱層析法對(duì)相思子葉化學(xué)成分進(jìn)行分離,經(jīng)理化性質(zhì)和NMR、HRMS、HPLC-DAD等方法測(cè)定，分析并鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果從相思子葉中分離并鑒別出5個(gè)化合物分別為β-谷甾醇(Ⅰ)濱薊黃苷(Ⅱ)濱薊(Ⅲ)相思子堿(Ⅳ)下箴刺桐堿(Ⅴ)。Ragasa等[9]從相思子中分離出豆甾醇(stigmasterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)的混黃[10]利用全自動(dòng)氨基酸分析儀和高效液相色譜儀分析比較相思子屬三種藥材172冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸和賴(lài)氨酸的含量相對(duì)較高。羅勝軍等[11]采用硫酸銨沉淀法、辛酸-硫酸銨法和硫酸銨-A親和層析法三種方PAGE化后單抗的回收率以硫酸銨沉淀法及辛酸-硫酸銨法較高，硫酸銨-A親和層析法較低；產(chǎn)物純度以硫酸銨-A親和層析法和辛酸-硫酸銨法較高，硫酸銨沉淀法較差；了研究。首先相思子凝集素粗提物，后通過(guò)酸化Sepharose4B柱層析，半乳糖梯DEAE-SepharoseFF柱層析獲得純度較高的相Sepharose4BSepharose4B親和層析中采DEAE-SepharoseFF離子交換介質(zhì)獲得純度較高的凝集素，凝集素粗提物的0.97﹪，經(jīng)過(guò)酸化Sepharose4BDEAE-SepharoseFF層析，獲得的凝0.38﹪，50﹪。惠等[13]建立相思子毒素（abrin）的酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法，為abrin臨床、中毒治療、法醫(yī)學(xué)鑒定等應(yīng)用領(lǐng)域提供技術(shù)基礎(chǔ)和參考依據(jù)。采抗體夾心ELISA法來(lái)檢測(cè)微量abrin。該法檢測(cè)abrin線(xiàn)性范圍為0.25～125μg/L，線(xiàn)性回歸方Y(jié)=0.51015X+0.4153（r0.9880n10，P＜0.0001），0.25μg/L。不同濃度蓖麻毒素（ricin）、葡萄球菌腸毒素B（SEB）對(duì)檢測(cè)結(jié)果基本無(wú)干擾。該法能用于abrin毒素污染水樣、土樣、食品、血液等模擬樣品的分析，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為3.52%～4.86%，來(lái)，提高檢測(cè)的靈敏度和特異性，可適用于各種微量abrin樣品的分析。張[14]建立了相思子葉中濱薊含量的HPLC測(cè)定方法。方法色譜條件為：采HypersilBDSC18（4.6mm×150mm,5μm），流動(dòng)相為甲醇（A）-0.2%甲酸水溶液（B），330nm1.0Y=241.91X+19.264，r=0.999399.37%（RSD=1.37%）。李春陽(yáng)等[15]HPLC測(cè)定方法。方法色譜條件為：采用高效液相色譜法，HypersilBDSC18色譜柱（4.6mm×150mm，5μm），流動(dòng)相甲nm1.0mL·min-10.327～3.27μg與其峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系線(xiàn)性回歸方Y(jié)=1933.4X＋57.897，r=0.9995，平均加樣回收率為99.46%（RSD=1.78%）黃[10]利用全自動(dòng)氨基酸分析儀和高效液相色譜儀分析比較相思子中氨基酸成分及含量。肝炎，慢性支氣管炎，癰瘡，感冒發(fā)燒，疥癬，濕疹，，[2]。馮嫻婧等[16]提低CCl4和異硫酸萘酯所致肝損傷小鼠中轉(zhuǎn)氨酶活性及膽紅素含量。陳紅霞等[18]分別以CCl4、AP和D-GalN誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷為模型，檢測(cè)其丙轉(zhuǎn)氨酶肽(GSH)和谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-PX)XSTF對(duì)急性化學(xué)性肝損傷的影響。XSTFCCl4、AP及D-GalNAST、ALT活性，并呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系；XSTFSOD、GSHGSH-PX含量，并顯著降低MDA含量(P＜0.05)。得出了結(jié)論：相思藤總黃酮對(duì)小鼠急性化學(xué)性肝損傷具有Georgewill等［19］Anam［20］認(rèn)為相思子葉部分提取物對(duì)巴豆油致大鼠耳部炎癥具候選毒一。Anbu等［22］認(rèn)為相思子石油醚提取物對(duì)艾氏腹水癌(EAC)腫瘤模型小白鼠腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。秦等[23]通過(guò)MTT法觀察相思子蛋白P2對(duì)B16細(xì)B16細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響，JC-1染色法10B16移植性腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。提出相思子蛋白P2于體內(nèi)外均可顯著抑制B16細(xì)胞的生長(zhǎng)，此作用與腫瘤細(xì)胞增殖周期，降低線(xiàn)粒體膜電位,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)。秦等[24]通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)：MTT法檢測(cè)相思子P2HepG2HepG2細(xì)胞周期和TRAP-SYBR-Green染色法檢測(cè)相思子蛋白P2P25075100μg·kg-110d2[25]rin可通過(guò)多種途徑抑制腫瘤細(xì)胞增殖或誘導(dǎo)其凋亡而且還可以激活淋細(xì)胞自然細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞過(guò)增加機(jī)體免疫功能，發(fā)揮殺滅腫瘤細(xì)胞的作用。orgl等[26]研究相思子葉提取物對(duì)四氧嘧啶所致大鼠的血糖水平的影響，發(fā)現(xiàn)口服給藥14天后，大鼠血糖水有所下降。相思子主要毒性成分為相思子毒蛋白，其LD100為0.55μg·kg-1，比粗毒蛋白(LD100=10μg·kg-1)毒性高18倍以上[30]。Adedapo等[31]給予雄性大鼠不同劑量的相思子中國(guó)植物志編輯．中國(guó)植物志第40卷[M]．：科學(xué)[M]ofIntegrativePlantBiology，1998，40(8)：734-739．RAGASACY,LORENAGS,MandiaEH,etal.ChemicalconstituentsofAbrusprecatorius[J].AmJEssentOilsNatProd,2013,1(2):7-10.[J]2010，，，張瑞華，等．相思子凝集素的分離提取及抗癌活性研究[C]中醫(yī)惠，童朝陽(yáng)，郝蘭群，等．雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)相思子毒素[J]．細(xì)胞與，，[J]201330(6)：GeorgewillOA,GeorgewillUO.Evaluationoftheanti-inflammatoryactivityofextractofAbrusprecatorius[J].EasternJournalofMedicine,2009,14(1):23-25.AnamEM.Anti-inflammatoryactivityofcompoundsisolatedfromtheaerialpartsAbrusprecatorius(Fabaceae).[J].Phytomedicine,2001,8(8):24-AnbuJ,RavichandiranV,SumithraM,etal.Anticanceractivityofpetroleumether