第二講多克隆抗體制備Polycloneantibody

用常規(guī)的方法免疫動(dòng)物，制備的抗體一、免疫動(dòng)物主要是哺乳動(dòng)物和禽類(lèi)，如兔、綿羊、山羊、鼠、馬等。動(dòng)物選擇根據(jù)抗體的用途和量來(lái)決定，也與抗原的性質(zhì)有關(guān)。如需要大量的抗體，則用大動(dòng)物；如要獲得直接標(biāo)記診斷的抗體，則用本種動(dòng)物；如要獲得間接標(biāo)記診斷的抗體，則用異源動(dòng)物；如抗原量少，且難獲得，則用純系小鼠；一般實(shí)驗(yàn)室用抗體，多用兔或鼠。對(duì)于用于診斷的抗體，最好用SPF級(jí)動(dòng)物通常選年輕、健康的雄性動(dòng)物，懷孕的雌性動(dòng)物一般不用于制備抗體。二、免疫用抗原1抗原的選擇依所需抗體而定2抗原劑量：依據(jù)動(dòng)物的種類(lèi)、免疫周期以及所要求的抗體的特性等不同而不同。量太低，不能產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答，抗體水平低量太高，則會(huì)產(chǎn)生免疫耐受。免疫劑量與免疫途徑有關(guān)，靜脈注射劑量大于皮下注射；皮下注射劑量比掌內(nèi)和趾內(nèi)皮下注射大；不加佐劑劑量比加佐劑劑量大；對(duì)于兔，加福氏佐劑，500ug/kg/次；不加佐劑，則加大5倍劑量三、佐劑（adjuvant)增強(qiáng)可溶性抗原的免疫原性或改變免疫反應(yīng)的類(lèi)型，或節(jié)約抗原1類(lèi)型鹽佐劑：如鋁膠、明礬等油佐劑：如白油、福氏佐劑脂質(zhì)體2福氏不完全佐劑（incompleteFreund’sadjuvant)羊毛脂：1份石蠟油：5份混合，高壓滅菌后保存3福氏完全佐劑加卡介苗：10-200mg可100℃滅菌處理10分鐘4油佐劑10號(hào)白油（石蠟油）100ml硬脂酸鋁2g司本6ml混合加熱融化，分裝。應(yīng)用時(shí)按下列配方進(jìn)行乳化：油相：3份水相（加2%吐溫80）1份在攪拌機(jī)內(nèi)，油相先攪拌，后慢慢加入水相抗原乳化。乳化檢驗(yàn)：取一滴乳化劑滴入水中，如果呈球型不分散，則成功；如果出現(xiàn)平展擴(kuò)散，則不成功；在保存期內(nèi)如果分層，也是未乳化好五、抗體的鑒定1效價(jià)鑒定即抗體的滴度，鑒定方法有：試管凝集實(shí)驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)、ELISA等。2特異性鑒定通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制實(shí)驗(yàn)來(lái)測(cè)定。六、IBDV高免卵黃抗體的制備1材料IBDV弱毒苗、IBDV組織苗、IBDV瓊擴(kuò)抗原2選健康雞群（無(wú)雞白痢等）若干只，分別在14、28日齡免疫IBDV弱毒疫苗90天后以IBDV組織苗加強(qiáng)免疫，14天后采血，進(jìn)行瓊擴(kuò)實(shí)驗(yàn)，1：16為合格。不合格，重復(fù)（3）效價(jià)合格，收獲雞蛋，4-8℃保存?zhèn)溆?檢驗(yàn)物理性狀：呈均一的橙黃色帶膠體的液體，放置一定時(shí)間后，下沉多量的黃白色絮狀沉淀效價(jià)：大于1：8安全檢查：取3ml卵黃液皮下注射雛雞，無(wú)任何影響效力檢驗(yàn)：對(duì)IBD患雞，肌肉或皮下注射1ml，2天后80%以上好轉(zhuǎn)或痊愈七、SFV抗體制備1材料SFV弱毒疫苗2操作方法（1）基礎(chǔ)免疫選健康育肥豬若干，以SFV疫苗肌肉注射免疫，做為基礎(chǔ)免疫（2）加強(qiáng)免疫基礎(chǔ)免疫10天后，進(jìn)行加強(qiáng)免疫，肌肉注射20頭份（3）7天后進(jìn)行第二次強(qiáng)化免疫（4）10-14天后，收集血液，讓血液自然凝固，分離血清。按0.3%加石炭酸，無(wú)菌分裝，冰箱內(nèi)保存檢驗(yàn)（1）物理性狀血清清亮、透明，呈草黃色或金黃色（2）無(wú)菌檢查取血清樣進(jìn)行肉湯、瓊脂斜面檢查，觀(guān)察1-3天，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)（3）安全檢查