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1310廊 坊 市 地 方 標 準DB1310/T272—2022蛋禽H72022-08-10發(fā)布 2022-09-10實施廊坊市市場監(jiān)督管理局??發(fā)布DB1310/T272DB1310/T272—2022II前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由廊坊市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出。本文件起草單位：三河市金源禽業(yè)有限公司、三河市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局。本文件主要起草人：劉佳、張海燕、張凌鳳、陳雪梅、李玉瑩、張軍英、馬振剛、司文輝、王萃、于明輝。DB1310/T272DB1310/T272—2022PAGEPAGE3H7技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了蛋禽H7本文件適用于廊坊市轄區(qū)內(nèi)采用卵黃進行蛋禽（雞、鴨、鵝）H7亞型禽流感滅活疫苗免疫抗體檢測。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單適用于本文件。GB/T18936高致病性禽流感診斷技術(shù)GB/T30642食品抽樣檢驗通用導則DB13/T946-2008蛋禽H5亞型禽流感免疫抗體卵黃檢測技術(shù)規(guī)程術(shù)語和定義DB13/T946—2008界定的術(shù)語和定義適用于本文件。樣本抽取人員要求抽樣人員不少于2人，并經(jīng)過專業(yè)培訓，掌握抽樣程序和技術(shù)要求。抽樣時需穿工作服、一次性鞋套、口罩、手套，做好人員防護。樣本要求抽取的禽蛋要具有代表性，以一棟禽舍或同一批次禽群為抽樣單元，隨機抽取蛋禽免疫接種H5+H7亞型禽流感滅活疫苗21d后所產(chǎn)的新鮮禽蛋。抽樣方式籠養(yǎng)蛋禽禽舍的首端、中端、尾端，雞籠的每一層多點抽樣。非籠養(yǎng)蛋禽和蛋庫抽樣按照GB/T30642規(guī)定的程序和方法執(zhí)行，確保抽樣的公正性、真實性。樣品的標記、保存和運輸樣品的標記樣品的保存和運輸將抽取的樣品放置蛋托內(nèi)避免樣品破損，應貯藏在陰涼、干燥、通風、良好的場所。不得與有毒、實驗準備材料準備儀器設備96孔90°V100-1000ul5-50ul300ul1000ul滴頭、微量振蕩器、低速離心機、液體快速混合器、1.5ml離心管、30ml容量瓶、60ml容量瓶。試劑0.9%生理鹽水、SPF（1%）H7HIH7檢樣制備卵黃直接稀釋在樣品管中加入0.5ml生理鹽水（0.9%），再吸取0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻制成卵黃檢樣備用。卵黃氯仿萃取取5.2.1制備好的卵黃檢樣0.4ml30min，3000r/min離心5min，取上清液備用。實驗方法抗原血凝效價測定(HA操作方法按GB/T18936執(zhí)行。血凝抑制(HI)試驗(微量法)卵黃直接稀釋測定法操作方法按GB/T18936執(zhí)行。用5.2.1中制備的卵黃檢樣代替血清進行檢測。檢測時設標準陽性血清和陰性血清對照。卵黃氯仿萃取測定法適用范圍在卵黃直接稀釋測定法檢測出現(xiàn)跳管或測不出抗體時，采用卵黃氯仿萃取法檢測。方法操作方法按GB/T18936執(zhí)行。用5.2.2中制備的檢樣代替血清進行檢測。檢測時設標準陽性血清和陰性血清對照。結(jié)果判定試驗結(jié)果成立條件只有陰性對照孔血清滴度不大于22，陽性對照孔血清誤差不超過1個滴度，試驗結(jié)果才有效。HI以完全抑制4個HAU抗原的樣本最高稀釋倍數(shù)作為HI判定方法卵黃直接稀釋測定法結(jié)果判定將“檢樣制備”過程中樣本的稀釋倍數(shù)計入終點滴度判定，即:微最反應板上血凝抑制的終點滴度加一個滴度為該樣本的HI度是2H8。卵黃氯仿萃取測定法結(jié)果判定將“檢樣制備”過程中樣本的稀釋倍數(shù)計入終點滴度判定，即:微量反應板上血凝抑制的終點滴度加兩個滴度為該樣本的HI抗體效價，終點滴度為零時則不再加。舉例:微量反應板上血凝