第十六章呼腸孤病毒科（Reoviridae）概述二、正呼腸孤病毒屬（一）哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒（二）禽呼腸孤病毒三、環(huán)狀病毒屬（一）藍(lán)舌病病毒（二）非洲馬瘟病毒（三）鹿流行性出血病病毒（四）茨城病病毒（五）馬器質(zhì)性腦病病毒四、輪狀病毒屬五、COLTI病毒屬科羅拉多蜱傳熱病毒六、水生呼腸孤病毒屬草魚出血病病毒主要參考文獻(xiàn)

一、概述同義名：雙股核糖核酸病毒科本科的命名是取自3個(gè)英文單詞的詞頭組合而成，全稱是呼吸道（respiratory）、腸道（enteric）和孤兒（orphan）病毒。于50年代早期，當(dāng)乳鼠和靈長(zhǎng)類的細(xì)胞培養(yǎng)開(kāi)始廣泛應(yīng)用于病毒學(xué)實(shí)驗(yàn)室時(shí)，從人的呼吸道和胃腸道分離出這類病毒，但與任何疾病都不相關(guān)，分類鑒定為小RNA病毒。幾年以后，發(fā)現(xiàn)該病毒的基因組為雙股RNA，并分節(jié)段。1959年建議命名為呼腸孤病毒，強(qiáng)調(diào)了其與疾病的不相關(guān)性。但是隨后發(fā)現(xiàn)，這些病毒也有一定的病原性，一些成員還是某些特定疾病的病原體，因此建議改稱呼腸病毒。本書照顧習(xí)慣，仍稱呼腸孤病毒，也與英文“Reo”相應(yīng)。在證明呼腸孤病毒的基因組是由若干片段組成的雙股RNA后，接著又發(fā)現(xiàn)三葉草的傷瘤病毒（Cloverwoundtumourvirus,WTV）也含雙股RNA，而且病毒粒子的形態(tài)結(jié)構(gòu)極像呼腸孤病毒，從而引起病毒學(xué)工作者對(duì)雙股RNA病毒的極大興趣。此后，相繼在脊椎動(dòng)物、無(wú)脊椎動(dòng)物、細(xì)菌、高等植物和真菌等宿主體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了60種以上的雙股RNA病毒（雖其形態(tài)結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性不盡一致）。呼腸孤病毒基因組是雙鏈ＲＮＡ這一重要發(fā)現(xiàn)，第一次說(shuō)明了雙鏈ＲＮＡ可作為穩(wěn)定的生命形式存在于自然界。1968年，Verwoerd等建議成立一個(gè)新的分類學(xué)類群，稱為“雙股核糖核酸病毒”（亦即雙股RNA病毒）。1971年，Borden等在原來(lái)的呼腸孤病毒群中的某些病毒的負(fù)染標(biāo)本上，發(fā)現(xiàn)病毒殼粒呈短粗中空的環(huán)狀，建議成立環(huán)狀病毒屬。1974年，F(xiàn)lewett等根據(jù)犢牛腹瀉病毒和嬰兒腹瀉病毒的形態(tài)類似車輪的特點(diǎn)，又提出了“輪狀病毒”這一新的病毒名稱。1975年，國(guó)際病毒命名委員會(huì)正式采用這一名稱，并于1978年將其列為一個(gè)病毒屬，而將原來(lái)的呼腸孤病毒屬提升為科，從而在呼腸孤病毒科下包括呼腸孤病毒屬、環(huán)狀病毒屬和輪狀病毒屬等三個(gè)病毒屬。1991年，國(guó)際病毒分類委員會(huì)（ICTＶ）第5次病毒分類報(bào)告中新增科州蜱傳熱（ＣＯＬＴＩ）病毒屬及水生呼腸孤病毒屬，將呼腸孤病毒科分為呼腸孤病毒亞群（正呼腸孤病毒屬、環(huán)狀病毒屬、輪狀病毒屬、COLTI病毒屬、水生動(dòng)物呼腸孤病毒屬)、胞質(zhì)多角體病毒群（胞質(zhì)多角體病毒屬Cypovirus）、植物呼腸孤病毒亞群1（植物病毒屬Phytovirus）、植物呼腸孤病毒亞群2（斐濟(jì)病毒屬Fijivirus）及植物呼腸孤病毒亞群3（建議）。１９９４年ＩＣＴＶ第６次病毒分類報(bào)告中，取消了第５次分類報(bào)告中的群，統(tǒng)一定位為屬，即呼腸孤病毒科下設(shè)正呼腸孤病毒屬、環(huán)狀病毒屬、輪狀病毒屬、ＣＯＬＴＩ病毒屬、水生呼腸孤病毒屬、斐濟(jì)病毒屬Fijivirus、植物呼腸孤病毒屬Ｐhytoreovirus及水稻矮縮條葉枯病毒屬Oryzavirus。其中正呼腸孤病毒屬、環(huán)狀病毒屬、輪狀病毒屬、COLTI病毒屬（科州蜱傳熱病毒屬）及水生呼腸孤病毒屬有一些重要的動(dòng)物病原，本書將分節(jié)介紹。本科其它屬如胞質(zhì)多角體病毒屬的成員多達(dá)150種以上，均是昆蟲病毒，代表種為家蠶胞質(zhì)多角體病毒，是家蠶的重要致病病毒。植物呼腸孤病毒屬及斐濟(jì)病毒屬是植物的病毒。此外，還從真菌發(fā)現(xiàn)一些結(jié)構(gòu)與呼腸孤病毒類似的病毒，但RNA只有1～3個(gè)節(jié)段，這些內(nèi)容不再予以討論。該科大多數(shù)成員的病毒粒子呈廿面體對(duì)稱，無(wú)囊膜，有雙層衣殼，內(nèi)衣殼結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，含32個(gè)殼粒，呈廿面體對(duì)稱，但外衣殼結(jié)構(gòu)差異明顯（見(jiàn)正呼腸孤病毒屬、環(huán)狀病毒屬和輪狀病毒屬等）。病毒核酸為線性雙股RNA，有10～12個(gè)節(jié)段，單個(gè)節(jié)段的分子量02×103～30×103kDa，總分子量為12×103～20×103kDa，大約為病毒粒子總重的14%%～22%。每個(gè)RNA節(jié)段有一個(gè)閱讀開(kāi)放框架，編碼一種蛋白質(zhì)（不需要進(jìn)一步加工，這區(qū)別于雙ＲＮＡ病毒科）。病毒粒子有6～10種蛋白質(zhì)（分子量15×103～155×103Da），包括與核心相關(guān)的轉(zhuǎn)錄酶和mRNA帽化酶，其中一些蛋白質(zhì)是糖基化的。完整的病毒粒子的分子量約為120×106Da，在CsCl2中浮密度為136～139g/cm3。病毒在胞漿內(nèi)復(fù)制，有時(shí)在感染細(xì)胞的胞漿內(nèi)看到病毒粒子呈類結(jié)晶狀排列。病毒復(fù)制前，胞飲的病毒粒子首先受細(xì)胞溶酶體水解酶的作用致使病毒粒子部分脫殼，成為亞病毒顆粒（subviralparticle）。這一過(guò)程活化了病毒子攜帶的轉(zhuǎn)錄酶和帽化酶，從而轉(zhuǎn)錄出在3'末端沒(méi)有多聚腺苷酸化而在5'端帽化的mRNA分子，這點(diǎn)是獨(dú)特的。在病毒粒子轉(zhuǎn)錄酶作用下，首先合成正股ＲＮＡ。并不是所有呼腸孤病毒基因組在起始過(guò)程中都能轉(zhuǎn)錄，只是某些基因（節(jié)段）才能起始轉(zhuǎn)錄，而其它基因隨著病毒早期蛋白的合成而被抑制。每種蛋白的合成分別與每個(gè)mRNA分子相聯(lián)系，并合成反義RNA鏈，從而產(chǎn)生雙股子代RNA分子。這些RNA分子又作為模板轉(zhuǎn)錄出更多的mRNA；然而此時(shí)的mRNA不被帽化，通過(guò)一種未知的機(jī)制，這些未帽化的呼腸孤病毒mRNA能優(yōu)先合成大量的病毒結(jié)構(gòu)蛋白。最后，這些亞病毒顆粒與一些附加蛋白一起完成病毒粒子的成熟。在環(huán)狀病毒的合成過(guò)程中，胞漿內(nèi)形成規(guī)則性的微管樣結(jié)構(gòu)。輪狀病毒的成熟涉及到單層衣殼進(jìn)入粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上囊泡的這一不尋常的出芽過(guò)程。因此而形成的偽膜隨后移至它處，外衣殼加到囊泡上，由于病毒的主要外衣殼蛋白是糖基化的，它的合成只有當(dāng)它通過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜時(shí)才能完成。由于該科病毒核酸是多節(jié)段的，很容易出現(xiàn)基因重組現(xiàn)象，重組頻率一般為３%～５%。二、正呼腸孤病毒屬（Orthoreovirus）同義名：呼腸孤病毒，呼吸道腸道孤兒病毒，肝腦脊髓膜炎病毒。代表株為呼腸孤病毒3型，成員包括從人、猴、犬、牛分離的呼腸孤病毒１、２、３型以及家禽分離株和納爾遜海灣病毒（NelsonBayvirus,NBV）。呼腸孤病毒可由許多脊椎動(dòng)物體內(nèi)分離到，包括馬、牛、豬、綿羊、豚鼠、犬、貓、貂、禽類、蝙蝠以及人、黑猩猩和猴，除了感染嚙齒動(dòng)物和禽外，一般不引起明顯的疾病，特別是對(duì)成年動(dòng)物。呼腸孤病毒在動(dòng)物和人類的某些呼吸道及消化道疾病的發(fā)生上，呈現(xiàn)一定的輔助或促進(jìn)作用。病毒粒子直徑約76nm，有92個(gè)殼粒，核心直徑約52nm，由兩層致密的蛋白質(zhì)衣殼所包裹。在電鏡下，核心上具有12個(gè)呈5度對(duì)稱的棘狀突起（約5nm），分別從廿面體對(duì)稱的12個(gè)頂上延伸出來(lái)，基因節(jié)段的轉(zhuǎn)錄酶就從該部位釋放出來(lái)。病毒有三組不同大小的RNA，通過(guò)聚丙烯酰胺凝膠電泳分成10個(gè)分散的節(jié)段，編碼10種蛋白質(zhì)，在翻譯過(guò)程中再一一裂解。完整病毒的浮密度為1.37g/cm（一）哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒1.形態(tài)具有特征的廿面體對(duì)稱的雙層衣殼結(jié)構(gòu)。病毒粒子的核心由核酸基因組及其密切連接的內(nèi)衣殼構(gòu)成，其外還有一層外衣殼，無(wú)囊膜。完整的病毒粒子直徑76nm左右，核心的直徑52nm左右，電子顯微鏡下很容易看到病毒粒子表面的殼粒，外衣殼共92個(gè)殼粒，分別由五鄰體和六鄰體組成，其中80個(gè)為六鄰體，12個(gè)為5鄰體，殼粒為長(zhǎng)10nm、寬8nm的中空棱狀結(jié)構(gòu)。內(nèi)衣殼呈廿面體5度對(duì)稱排列。正呼腸孤病毒的外衣殼比較脆弱，易被熱和胰凝乳蛋白酶（chymotrypsin）等蛋白水解酶破壞，正是由于這種特性，一般說(shuō)來(lái)，蛋白水解酶能增強(qiáng)病毒在腸道中的感染性，這是由于脫去病毒外衣殼的緣故。內(nèi)衣殼卻很穩(wěn)定，不僅對(duì)熱和胰凝乳蛋白酶處理具有較大的抵抗力，而且能耐高濃度的尿素、二甲亞砜（ＤＭＳＯ）和SDS的處理。呼腸孤病毒可在體外培養(yǎng)的敏感細(xì)胞內(nèi)形成胞漿內(nèi)包涵體，包涵體內(nèi)具有許多結(jié)晶狀排列的病毒粒子。將提純的病毒粒子置于蒸餾水中，可使外衣殼結(jié)構(gòu)疏松，病毒粒子的直徑增大。也常見(jiàn)到呼腸孤病毒的空衣殼，這是病毒粒子中缺乏核酸的緣故。2.理化學(xué)特性早在1962年，Gomatos等就已證明呼腸孤病毒具有雙股RNA，因?yàn)楦腥竞裟c孤病毒的L細(xì)胞的胞漿內(nèi)包涵體在DNA酶和RNA酶處理后依然保持感染性，F(xiàn)eulgen染色呈陰性反應(yīng)，而且這種包涵體在用吖啶橙染色時(shí)呈蘋果綠色。5氟脫氧尿核苷（FUDR）和5溴脫氧尿核苷（BUDR）等DNA合成抑制劑，不能抑制呼腸孤病毒的增殖。但在病毒增殖的后期，吖啶橙染色可能呈橘紅色[ZW(]應(yīng)用pH4.95的001%吖啶橙液進(jìn)行染色，雙股DNA和雙股RNA病毒呈蘋果綠色，單股DNA和單股RNA病毒呈橘紅色，詳見(jiàn)本書第十四章。[ZW)]，從而證明呼腸孤病毒除雙股RNA外，同時(shí)還有單股RNA的存在。后者是一些低分子量的寡核苷酸，一般認(rèn)為是病毒不完全轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物，約占病毒核酸總量的15%%～20%。這些單股RNA主要分布在病毒粒子核心的外面。正呼腸孤病毒的整個(gè)基因組由10個(gè)片段的雙股RNA組成，節(jié)段分子量為05×103～27×103kDa，RNA的總分子量14×103～15×103kDa。在氯化銫中的浮密度為161g/cm3。S20W≈730。RNA含量約占病毒粒子總重的14%，病毒共含3000個(gè)寡核苷酸，其長(zhǎng)度在2%～20核苷間，核心含44%RNA。G+C含量為44%。雙股RNA在78～85℃溫度中發(fā)生變性，成為對(duì)RNA酶敏感的單股RNA，說(shuō)明其中存在不耐熱的結(jié)合鍵。病毒粒子分子量130×106Da，本屬病毒的基因組與呼腸孤病毒科其它屬成員無(wú)同源性序列。正呼腸孤病毒的蛋白質(zhì)占病毒粒子總重的86%，分布于兩層衣殼內(nèi)，一共有9種蛋白質(zhì)，分子量33×103～155×103Da，７種主要多肽，即λ1、λ2、μ1、μ2、δ1、δ2、和δ3。外衣殼由μ2、δ1和δ3等三種蛋白質(zhì)組成。Astell等（1972）由感染細(xì)胞中提取“亞病毒單位”，也就是除掉外衣殼的病毒粒子，隨后加入δ3蛋白，結(jié)果成功地在試管內(nèi)組裝成完整的呼腸孤病毒粒子，從而證明δ3蛋白是外衣殼的主要成分。但在仔細(xì)研究胰凝乳蛋白酶降解外衣殼的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)與衣殼穩(wěn)定性和病毒粒子感染性有關(guān)的主要成分是μ2而不是δ3。胰凝乳蛋白酶可將δ3完全除去，但病毒粒子仍保持高度感染性。但在將μ2降解時(shí)，病毒粒子的感染性明顯下降。最后除去的是δ1，結(jié)果遺留52nm直徑的內(nèi)衣殼，即核心。λ1、λ2、μ1和δ2等幾種蛋白質(zhì)存在于內(nèi)衣殼內(nèi)。正呼腸孤病毒不含糖類和脂質(zhì)，對(duì)乙醚有抵抗力。正呼腸孤病毒含有轉(zhuǎn)錄酶、復(fù)制酶、核苷酸磷酸水解酶、帽化酶。正呼腸孤病毒對(duì)去氧膽酸鹽、醚和氯仿具有很大抵抗力，能耐56℃2小時(shí)或60℃30分鐘的加熱，在4℃，其傳染性至少可維持2個(gè)月。在有1～2mol/LMgCl正呼腸孤病毒在pH22～80的廣泛酸堿范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。在室溫條件下，能耐1%H2O2、3%福爾馬林、5%來(lái)蘇兒和1%石炭酸1小時(shí)。但70%乙醇在較長(zhǎng)時(shí)間作用后使其滅活，過(guò)碘酸鹽也可迅速殺死呼腸孤病毒。3.抗原性正呼腸孤病毒具有共同的群特異性抗原λ2和δ3，另外還有型特異型抗原δ1。哺乳動(dòng)物的呼腸孤病毒共有一個(gè)補(bǔ)體結(jié)合性抗原，應(yīng)用血清中和試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)，則可將其區(qū)分為3個(gè)不同的血清型。2型呼腸孤病毒更進(jìn)一步區(qū)分為4個(gè)亞型。這些血清型與禽呼腸孤病毒沒(méi)有血清學(xué)關(guān)系。奇怪的是，哺乳動(dòng)物的呼腸孤病毒竟與三葉草的傷瘤病毒具有一個(gè)共同的抗原成分，而且這種植物病毒與哺乳動(dòng)物的呼腸孤病毒具有同樣的形態(tài)結(jié)構(gòu)以及雙股RNA構(gòu)型。呼腸孤病毒的3個(gè)哺乳動(dòng)物血清型都能凝集人的O型紅細(xì)胞，這種紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象發(fā)生于4～37℃溫度中。564.培養(yǎng)呼腸孤病毒可在許多種類的培養(yǎng)細(xì)胞中增殖，包括原代猴腎細(xì)胞、KB細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、人羊膜細(xì)胞以及L細(xì)胞等，并于7～14天內(nèi)產(chǎn)生細(xì)胞病變，主要是在感染細(xì)胞內(nèi)形成嗜伊紅性胞漿內(nèi)包涵體。這些包涵體特征地形成于胞核附近的胞漿內(nèi)，并在感染過(guò)程增進(jìn)時(shí)散布于整個(gè)胞漿內(nèi)。電子顯微鏡檢查，可在包涵體內(nèi)看到完全和不完全的病毒粒子。這些病毒粒子經(jīng)常呈結(jié)晶狀排列，并常連結(jié)于胞漿內(nèi)的梭形微管上。感染細(xì)胞最后崩解，病毒被釋于細(xì)胞外。不同于禽呼腸孤病毒，哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒雖可在雞胚內(nèi)增殖，但不呈現(xiàn)規(guī)律性。來(lái)源于人的呼腸孤病毒株通常不能在雞胚卵黃囊內(nèi)增殖。正呼腸孤病毒在L細(xì)胞內(nèi)的增殖過(guò)程已被充分研究。于37℃，接種入的病毒可在30分鐘內(nèi)吸附65%。病毒借細(xì)胞吞飲作用侵入細(xì)胞。吞飲泡與溶酶體融合而形成吞噬體。電子顯微鏡觀察，?？稍谶@種吞噬體內(nèi)見(jiàn)到完整的病毒粒子。病毒粒子的外衣殼由溶酶體的水解酶除去，剩下“亞病毒顆粒”，亦即核心。核心中的轉(zhuǎn)錄酶和帽化酶原來(lái)呈“不活動(dòng)”正呼腸孤病毒的一個(gè)特點(diǎn)，就是在沒(méi)有脫去內(nèi)衣殼的病毒核心內(nèi)，就能進(jìn)行部分轉(zhuǎn)錄過(guò)程。每個(gè)病毒核心含有許多酶活動(dòng)點(diǎn)，初期的mRNA分子即由此釋出。5.病原性鼠類能發(fā)生3型呼腸孤病毒的自然感染，有時(shí)稱肝腦脊髓炎，其臨床表現(xiàn)為黃疸、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、油性被毛、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等。給乳幼鼠作滴鼻感染，也可使其發(fā)生呼吸道疾病而死亡。將1型呼腸孤病毒給小鼠作腹腔內(nèi)接種，可于5～7天內(nèi)致死，并可由死亡小鼠的各器官分離到呼腸孤病毒。對(duì)新生倉(cāng)鼠、雪貂、大鼠也會(huì)引起同樣病變。將3型病毒直接注入乳鼠腦內(nèi)，可以使其發(fā)生壞死性腦炎和死亡。剖檢中樞系統(tǒng)，可見(jiàn)病毒主要在神經(jīng)原細(xì)胞內(nèi)增殖，膠質(zhì)細(xì)胞和室管膜細(xì)胞內(nèi)顯然不發(fā)生病毒增殖。此外，呼腸孤病毒對(duì)大鼠、小鼠還有致畸變作用。1和2型呼腸孤病毒感染小鼠，病毒可通過(guò)懷孕鼠的子宮垂直傳播，致胎兒或新生兒死亡。其它哺乳動(dòng)物和人的呼腸孤病毒感染大多呈無(wú)癥狀經(jīng)過(guò)。第1株牛呼腸孤病毒是由健康牛的糞便中分離獲得的，至今已分離到50多個(gè)牛呼腸孤病毒株，包括1、2、3等三個(gè)血清型。1型最為常見(jiàn)。在某些國(guó)家的牛群中，陽(yáng)性抗體率達(dá)57%。一般認(rèn)為，牛在一歲以內(nèi)普遍發(fā)生呼腸孤病毒感染，但不出現(xiàn)癥狀，牛在發(fā)生呼吸道疾病后，呼腸孤病毒抗體的效價(jià)經(jīng)常上升。1型與2型混合感染對(duì)牛地方性支氣管肺炎的流行起重要作用。給牛作呼吸道感染試驗(yàn)，雖然沒(méi)有癥狀，但肺和其它組織中含有高滴度病毒，鼻液中也出現(xiàn)病毒，隨后則可測(cè)出血清中較高效價(jià)的抗體。給不吃初乳的新生犢牛作人工感染，?？僧a(chǎn)生輕微的肺炎病變，但不象組織培養(yǎng)細(xì)胞那樣形成胞漿內(nèi)包涵體。馬呼腸孤病毒的3種血清型均有發(fā)現(xiàn)，調(diào)查表明其抗體陽(yáng)性率分別為1型29%，2型19%，3型61%。1型與3型可致馬上呼吸道疾患，此外還可與馬流感病毒一起引起咳嗽綜合征。綿羊也存在3個(gè)型的呼腸孤病毒，但抗體檢測(cè)以3型為主。用豬株呼腸孤病毒給6周齡幼豬作經(jīng)鼻接種，幼豬體溫升高，血清中的血凝抑制抗體可增高4倍以上。犬呼腸孤病毒只分離到1型，2型與3型的抗體亦有陽(yáng)性。用1型實(shí)驗(yàn)感染幼犬時(shí)發(fā)生間質(zhì)性肺炎，抗體效價(jià)上升。貓呼腸孤病毒分離率最高的是3型，人工感染可致溫和的呼吸道癥狀。1型是從貓的腫瘤細(xì)胞中分離所得的。人類的呼腸孤病毒感染十分普遍，3種血清型均有發(fā)現(xiàn)，血清學(xué)調(diào)查的陽(yáng)性率很高，最重要的是1型，但大多呈無(wú)癥狀經(jīng)過(guò)。曾從普通感冒、腦炎、肝炎、腦膜炎、腦脊髓膜炎以及致死性肺炎患者體內(nèi)分離到不同血清型的呼腸孤病毒。6.診斷和防制應(yīng)用敏感的組織培養(yǎng)細(xì)胞從發(fā)病早期的糞便、呼吸道分泌物、滑液或其它組織樣品中分離病毒。為消除細(xì)菌和其它病毒的干擾，應(yīng)視情況先將病料作50～55℃加熱或用乙醚、丙酮處理。根據(jù)特征性細(xì)胞病變——核周圍包涵體的出現(xiàn)，人工感染乳鼠致病，初步判定病料中是否有呼腸孤病毒存在。應(yīng)用已知抗體進(jìn)行鑒定：先以補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)檢測(cè)群抗原，隨后再用中和試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)檢測(cè)型特異性抗原。鑒于癥狀及病理剖解變化都不具特征性，診斷通常有賴于抗體的檢測(cè)，現(xiàn)癥病例的診斷，則需發(fā)病期及康復(fù)期的雙份血清。ELISA的敏感性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于瓊脂擴(kuò)散和間接血凝試驗(yàn)，以純化病毒為抗原，并且用高嶺土處理血清，以排除非特異性反應(yīng)，其結(jié)果與中和試驗(yàn)一致。對(duì)某些由呼腸孤病毒參與所致的疾病，可用滅活的呼腸孤病毒與其它抗原混合而成的聯(lián)合疫苗進(jìn)行預(yù)防。（二）禽呼腸孤病毒1.病毒特征禽呼腸孤病毒具有典型的呼腸孤病毒形態(tài)，純化的禽呼腸孤病毒只含有RNA和蛋白質(zhì)，平均含量分別為187%和813%。RNA中既有ss又有ds，其中ssRNA約占RNA總量的30%。禽株RNA的含量高于哺乳動(dòng)物株（14%），這種差別歸因于禽株含有ssRNA。根據(jù)SDS電泳遷移率的不同，可將禽呼腸孤病毒的10個(gè)RNA節(jié)段分為三類，依次為L(zhǎng)、M和S。其中大節(jié)段L（L1、L2和L3）分子量為24×103～27×103kDa；中節(jié)段M（M1、M2和M3）分子量為13×103～17×103kDa；小節(jié)段S（S1、S2、S3和S4）分子量為0.68×103～1.2×103kDa，與哺乳動(dòng)物株比較稍有差異，但禽株S1的分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于哺乳動(dòng)物株。不同分離株（包括不同血清型和同型不同毒株）的dsRNA核酸電泳遷移有明顯多樣性，但與致病力無(wú)相關(guān)性。嗜關(guān)節(jié)性的S1133株及其無(wú)致病力的疫苗株P(guān)100，它們的dsRNA節(jié)段在SDSPAGE中的遷移型式完全相同，但蛋白質(zhì)卻有差別，推測(cè)蛋白質(zhì)的改變與毒力強(qiáng)弱和生長(zhǎng)特性有關(guān)。應(yīng)用更靈敏的核酸雜交試驗(yàn)表明疫苗株P(guān)100的dsRNA至少有4個(gè)節(jié)段發(fā)生了變化。不同于哺乳動(dòng)物呼腸孤病毒，禽呼腸孤病毒不能凝集雞、火雞、鴨、鵝、人O型、牛、綿羊、兔、豚鼠、大鼠或小鼠的紅細(xì)胞。只有兩個(gè)例外報(bào)道。禽呼腸孤病毒對(duì)熱有抵抗力，能耐受60℃8～10小時(shí)，56℃22～24小時(shí)，37℃15～16周，22℃48～51周，4℃3年以上，-20℃4年以上，-63℃10年以上。半純化病毒于60℃5小時(shí)條件下尚不能完全滅活，MgCl2能增強(qiáng)病毒對(duì)熱的穩(wěn)定性，但濃度太大反而促進(jìn)其滅活。對(duì)乙醚不敏感，對(duì)氯仿輕度敏感，對(duì)pH3有抵抗力，室溫下過(guò)氧化氫作用1小時(shí)不能使其滅活；2%苯酚部分滅活病毒，2%甲醛在低溫（4℃）無(wú)效。對(duì)2%來(lái)蘇爾、3%福爾馬林、DNA代謝抑制物、放線菌素D、阿糖胞苷、5氟2.抗原性禽呼腸孤病毒各毒株之間具有共同的群特異抗原，而與哺乳動(dòng)物株和納爾遜海灣病毒無(wú)交叉，這種共同的沉淀抗原可用瓊擴(kuò)或補(bǔ)結(jié)試驗(yàn)檢測(cè)。使用血清學(xué)方法可對(duì)呼腸孤病毒進(jìn)行分類，或根據(jù)對(duì)雞的相關(guān)致病性分群。Kawamura等將日本禽呼腸孤病毒77個(gè)株應(yīng)用蝕斑減數(shù)試驗(yàn)分為5個(gè)血清型，Wood等（1980）統(tǒng)計(jì)了來(lái)自美國(guó)、英國(guó)、德國(guó)和日本呼腸孤病毒的相關(guān)性，雖然在異源型毒株間有很大程度的交叉中和關(guān)系，但仍發(fā)現(xiàn)了11個(gè)血清型。至目前為止憑借中和試驗(yàn)將禽呼腸孤病毒分為11個(gè)血清型。由于交叉反應(yīng)大量存在，因此有些群只能作為亞型而不作為獨(dú)立血清型。Hieronymus等（１９８３）將5個(gè)吸收不良綜合征的分離物分為3個(gè)血清型，而Robertson和Wilcox

（１９８4）將10個(gè)澳大利亞分離物分為三個(gè)有很大程度交叉反應(yīng)的群。顯然，呼腸孤病毒經(jīng)常以抗原亞型，而不是以獨(dú)特的血清型存在。3培養(yǎng)禽呼腸孤病毒很容易從禽源細(xì)胞培養(yǎng)物中分離。常用的細(xì)胞培養(yǎng)是禽原代細(xì)胞，包括雞胚成纖維細(xì)胞、肝、肺、腎、巨噬細(xì)胞和睪丸細(xì)胞。最常用的是雛雞腎細(xì)胞（2～6周齡），分離火雞株時(shí)可用火雞腎細(xì)胞。Barta（1984）等一些學(xué)者認(rèn)為，做蝕斑和分離病毒時(shí)，應(yīng)選擇雞胚肝細(xì)胞。用各種方法分離本病毒的比較結(jié)果表明，以雞肝細(xì)胞最敏感，其次為雞腎細(xì)胞，而成纖維細(xì)胞敏感性最差。感染呼腸孤病毒的雞源細(xì)胞培養(yǎng)物能夠形成合胞體（一般在合胞體形成前細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生空泡），細(xì)胞漿內(nèi)有包涵體（初期嗜酸性，后變嗜堿性）。某些毒株亦可適應(yīng)于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞系，如在綠猴腎（Vero）、乳倉(cāng)鼠腎（BHK21）、貓腎（CRFK）、Georgia牛腎（GBK），兔腎（RK）和豬腎（PK）細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)，但大多數(shù)毒株只有在Vero細(xì)胞中產(chǎn)生CPE。經(jīng)卵黃囊或絨毛尿囊膜接種，呼腸孤病毒容易在雞胚內(nèi)生長(zhǎng)。初次分離選用卵黃囊接種，一般在接種后3～5天雞胚死亡，胚體因皮下出血而呈淡紫色。絨毛尿囊膜接種，通常在7～8天后雞胚死亡，絨毛膜上有隆起的、分散的痘瘡樣病灶，未死胚胎生長(zhǎng)滯緩，肝淡綠色，脾腫大，心臟有病損。4病原性1954年，F(xiàn)ahey和Crawley首次從有慢性呼吸道疾病的雞呼吸道內(nèi)分離到禽呼腸孤病毒，后來(lái)由Peter（１９６７）進(jìn)一步證實(shí)。當(dāng)時(shí)用這種被稱為FaheyCrawley病毒，接種于易感雞后，表現(xiàn)為溫和性呼吸道疾病，病雞的肝臟壞死并出現(xiàn)腱和滑膜的炎癥。禽呼腸孤病毒流行于雞、火雞、鴨、鸚鵡和其它禽類，可水平傳遞亦可經(jīng)卵垂直傳遞。已由多種疾病分離出該類病毒，包括病毒性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎、矮小綜合征（Stuntingsyndrome）、呼吸道病、腸?。‥ntericdisease）、吸收障礙綜合征（Malabsorptionsyndrome）和骨質(zhì)疏松征（Osteoporosis）等。患禽生長(zhǎng)受阻，發(fā)生心包炎、心肌炎、心包積水、腸炎、肝炎，腔上囊和胸腺萎縮，骨短粗或出現(xiàn)急慢性呼吸道病。某些呼腸孤病毒株的致病作用，由于柔嫩艾美爾球蟲或巨型艾美爾球蟲的協(xié)同感染而加強(qiáng)。雞感染傳染性法氏囊病病毒或在特殊的飼養(yǎng)環(huán)境下，能增高由WVV2937株感染所致腱鞘炎的嚴(yán)重性。呼腸孤病毒也能加劇由其它病原引起的疾病，如雞貧血因子、大腸埃希氏桿菌和新城疫病毒。由于感染了呼腸孤病毒，使機(jī)體的免疫功能降低，導(dǎo)致對(duì)其它傳染性病因的易感性增加。此外，在臨床上未感染的雞也常發(fā)現(xiàn)病毒。由禽呼腸孤病毒所致的最重要和常見(jiàn)的疾病是病毒性關(guān)節(jié)炎、腱鞘炎和吸收障礙綜合征。三、環(huán)狀病毒屬（Orbivirus）本屬在某些形態(tài)、理化和生物學(xué)特性上不同于正呼腸孤病毒。正呼腸孤病毒經(jīng)常含有兩層衣殼，對(duì)熱及酸性環(huán)境（pH30）具有強(qiáng)大抵抗力，不發(fā)生蟲媒傳播方式，而環(huán)狀病毒雖有雙層衣殼，外衣殼結(jié)構(gòu)模糊，內(nèi)衣殼由32個(gè)大的環(huán)狀殼粒組成，故稱環(huán)狀病毒。對(duì)熱和pH3.0的抵抗力不高，多數(shù)成員可在節(jié)肢昆蟲和脊椎動(dòng)物體及其細(xì)胞內(nèi)增殖。病毒粒子呈二十面立體對(duì)稱，直徑為65～80nm，核衣殼的直徑為54～60nm，但無(wú)棘狀突起，衣殼由32個(gè)大型殼粒組成。病毒粒子的分子量為80×106Da，S20W為550，在pH6～8穩(wěn)定，感染性在pH30喪失。在蛋白質(zhì)存在下，病毒非常穩(wěn)定，如由室溫存放的血液中25年后仍能重新分離出藍(lán)舌病病毒。病毒基因組由10個(gè)節(jié)段的雙股RNA組成，節(jié)段分子量大小為0.5×103～2.8×103kDa，總分子量約15×103kDa，占病毒粒子重量20%，G+C含量為42%～44%。有七條結(jié)構(gòu)多肽，分子量為35×103～150×103Da，占整個(gè)病毒粒子重量的80%。主要核心蛋白是Vp3和Vp7，分子量分別為103Da和38×103Da，其中Vp7是存在于核心表面上殼粒的主要成分，核心也含有Vp1、Vp4和Vp6。外衣殼層含Vp2（MW=111×103Da）和Vp5（MW=59×103Da）。有三種非結(jié)構(gòu)蛋白NS1、NS2和NS3，分子量分別為644×103、41×103和256×103Da，其中NS2是磷蛋白。目前已知的成員根據(jù)其血清學(xué)的親緣關(guān)系可分為12個(gè)群，其中藍(lán)舌病病毒、非洲馬瘟病毒、鹿流行性出血病病毒、茨城病病毒及科羅拉多蜱傳熱病毒5個(gè)群對(duì)家畜致?。ū?9-1）。沒(méi)有檢測(cè)到屬特異性抗原，但可通過(guò)熒光抗體、免疫擴(kuò)散和補(bǔ)結(jié)反應(yīng)證實(shí)群內(nèi)有共同的抗原。個(gè)別毒株呈現(xiàn)低水平交叉反應(yīng)，通常被報(bào)道為血清群中的獨(dú)特成員。表19-1環(huán)狀病毒病的分群群的名稱血清型生物媒介非洲馬瘟病毒1～9庫(kù)蠓藍(lán)舌病病毒1～24庫(kù)蠓鹿流行性出血癥病毒1～7蚊馬腦器質(zhì)性腦病病毒1～5庫(kù)蠓Eubenangee病毒1～3白蛉Palyam病毒1～6蚊Changuinola病毒1～7蜱Corriparta病毒1～3庫(kù)蠓Kemerovo病毒1～20Warrego病毒1～2Wallal病毒1～2環(huán)狀病毒在宿主細(xì)胞的胞漿內(nèi)合成和增殖，進(jìn)入宿主細(xì)胞脫去外殼需要依賴RNA的RNA聚合酶活化。感染細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫大，出現(xiàn)顆粒性近核包涵體，線粒體變形，同時(shí)常在胞漿內(nèi)形成微管樣構(gòu)造。這種微管樣構(gòu)造可在蔗糖密度梯度上提純；電子顯微鏡下觀察，直徑約50nm，表面還有線狀周圈性的微細(xì)結(jié)構(gòu)，使整個(gè)微管樣構(gòu)造呈樓梯樣外觀。據(jù)生化學(xué)和抗原性分析，這種微管樣構(gòu)造由病毒特異的非衣殼性多肽組成，至少有一種以上。成熟的病毒粒子也常與之粘附。敏感細(xì)胞感染病毒后，胞漿內(nèi)形成包涵體。病毒粒子釋出是擠出式而不是芽生。本屬代表種為藍(lán)舌病病毒，其它成員包括１１個(gè)血清群見(jiàn)表19-1。還有一些未分群的毒株，包括Ife，Japanant，Lebombo，LLanoSeco，Orunga，ParooRiver，Vmatillam，T50616（分離自臭鼬）。藍(lán)舌病病毒（Bluetonguevirus）同義名：綿羊卡他熱病毒，嘴疼病病毒，草原強(qiáng)直癥病毒藍(lán)舌病是綿羊的一種急性傳染病，其特征是頰粘膜和胃腸道粘膜嚴(yán)重的卡他性炎癥。病羊發(fā)熱，大量流涎，并由鼻孔流出多量漿液性或粘液性鼻涕，干涸后結(jié)痂于鼻孔周圍。舌、齒板、齒齦和頰粘膜充血腫脹，并出現(xiàn)瘀點(diǎn)，此后變?yōu)榍嘧仙?，藍(lán)舌病的名稱即由此而來(lái)。乳房和蹄冠等部位也常出現(xiàn)病變——上皮脫落，但不發(fā)生水皰。死亡率5%～30%不等。除綿羊外，牛及其它反芻獸也罹患本病，但癥狀較輕，死亡率也低。藍(lán)舌病最早于1876年發(fā)現(xiàn)于南非的綿羊，1940年前本病僅限于撒哈拉以南的非洲大陸。到40年代已蔓延至中東一些國(guó)家和地區(qū)，例如塞浦路斯、敘利亞、伊拉克、土耳其、以色列和巴勒斯坦。其它國(guó)家亦已相繼發(fā)現(xiàn)本病的存在。1948年美國(guó)報(bào)道此病。1952年西半球首次在美國(guó)加州從綿羊體內(nèi)分離到病毒，1959年在俄勒岡首次從牛中分離到病毒，70年代后期廣泛分布于熱帶、亞熱帶國(guó)家。1956～1957年歐洲尤其是西班牙和葡萄牙流行。1978年，Davies報(bào)道在澳大利亞的庫(kù)蠓體內(nèi)分離到藍(lán)舌病病毒。目前在熱帶和亞熱帶地區(qū)的絕大多數(shù)國(guó)家的易感動(dòng)物中都可能感染藍(lán)舌病病毒或與之密切相關(guān)病毒。我國(guó)的藍(lán)舌病于1980年在云南首先發(fā)現(xiàn)，并相應(yīng)分離出藍(lán)舌病病毒，從而確定了本病在國(guó)內(nèi)的存在。1.形態(tài)特征核衣殼的直徑為53～60nm，但因衣殼外面還有一個(gè)細(xì)絨毛狀外層，使病毒粒子的總直徑提高到70～80nm。病毒粒子在氯化銫中離心沉淀以后，絨毛層消失，原因不明。于電子顯微鏡下仔細(xì)觀察，可見(jiàn)絨毛層中的絨毛似乎是由衣殼殼粒上延伸出來(lái)的。成熟的病毒粒子經(jīng)常包圍于一個(gè)外層囊膜樣結(jié)構(gòu)中。這種囊膜樣結(jié)構(gòu)可被醚或吐溫80除去，但病毒活性不受影響。因此人們認(rèn)為，它們并非藍(lán)舌病病毒必要的組成成分，而是由細(xì)胞膜“搶來(lái)”的細(xì)胞性物質(zhì)，故又稱為“假囊膜”。圖16-2藍(lán)舌病病毒（橫杠=100nm）自Smale等藍(lán)舌病病毒的衣殼由32個(gè)大型殼粒組成。殼粒直徑為8～11nm，呈中空的短圓柱狀。2.理化學(xué)特性藍(lán)舌病病毒含有20%的RNA，由10個(gè)片段的雙股RNA組成。RNA的分子量為118×103kDa。在吖啶橙著染感染細(xì)胞時(shí)，特別是在感染后期，?？砂l(fā)現(xiàn)橘紅色的包涵體，說(shuō)明除雙股RNA外，還有部分單股RNA的存在。G+C含量為43%。藍(lán)舌病病毒含有7種結(jié)構(gòu)多肽，包括4種主要多肽和3種次要多肽，組成外殼的Vp2和Vp5由RNA第2及第5節(jié)段編碼，內(nèi)殼Vp1、Vp3、Vp4及Vp6由RNA第1、3、4、9節(jié)段編碼，核衣殼內(nèi)Vp7由RNA第7節(jié)段編碼。[FQ(11。20,Y-WZ]3.抗原性應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)或敏感實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行中和試驗(yàn)和RNA雜交試驗(yàn)，已經(jīng)證明藍(lán)舌病病毒至少有24個(gè)血清型。Vp7是群特異性抗原，可用補(bǔ)結(jié)、瓊擴(kuò)或熒光抗體檢測(cè)，Vp2是型特異性抗原。藍(lán)舌病病毒血清型在世界不同地區(qū)的分布見(jiàn)表19-2。5.病原性藍(lán)舌病病毒主要感染綿羊，特別是羔羊。潛伏期約一周。病羊發(fā)熱，高達(dá)42℃，精神沉郁，食欲喪失，隨后出現(xiàn)口鼻部典型的“藍(lán)舌”病變。在發(fā)熱后5～7天檢查口腔，可見(jiàn)粘膜上有多數(shù)糜爛，并常因胃腸道發(fā)生病變而出現(xiàn)血樣下痢。頭、耳和頷間組織和喉部經(jīng)常發(fā)生水腫，并常因蹄部知覺(jué)層發(fā)生病變而出現(xiàn)跛行。病羊被毛斷裂，甚至全部被毛脫落。急性期的死亡率為20%～30%，該病的嚴(yán)重性依據(jù)病毒毒株、綿羊品種和局部生態(tài)學(xué)條件而不同。在非洲和歐洲的某些嚴(yán)重暴發(fā)中，死亡率有時(shí)高達(dá)99%。但在美國(guó)，死亡率一般不超過(guò)1%～7%。美利奴品種的綿羊，特別是其羔羊，似乎對(duì)本病最為敏感，病死率在70%以上。藍(lán)舌病病毒可經(jīng)胎盤感染胎兒，引起流產(chǎn)、死胎或胎兒先天性異常，嚴(yán)重時(shí)甚至可使整個(gè)羊群?jiǎn)适б粋€(gè)產(chǎn)羔期的全部羔羊。Bwangamoi給57頭母羊接種強(qiáng)毒力的藍(lán)舌病病毒均在其妊娠第35～42天之間發(fā)現(xiàn)病毒于接種后6～7天侵入胎兒，10～12天后胎兒死亡。病理組織學(xué)檢查證明藍(lán)舌病病毒在肝上皮細(xì)胞和血管上皮細(xì)胞復(fù)制，成年綿羊毒血癥有時(shí)超過(guò)28天。病毒在牛體存在的時(shí)間還要長(zhǎng)，但僅當(dāng)公牛發(fā)生病毒血癥時(shí)，能從公牛精液中分離到病毒，并經(jīng)交配傳播給母牛和犢牛。用含病毒的血液、血清或磨碎組織給綿羊接種，很易引起人工感染。Pini用10型藍(lán)舌病病毒給綿羊作耳部皮下接種，隨后每天撲殺1頭，檢查組織中的病毒量，共11天。平均潛伏期為66.生態(tài)學(xué)藍(lán)舌病多呈地方性流行，病的發(fā)生、流行與媒介昆蟲的分布、習(xí)性和生活史密切相關(guān)，有明顯的季節(jié)性，即以晚夏與早秋發(fā)病率最高。庫(kù)蠓是藍(lán)舌病病毒的主要傳播媒介。當(dāng)雌庫(kù)蠓吸吮患畜的帶毒血液后，其生活史長(zhǎng)達(dá)70天，每3～4天吸血一次。病毒在感染的庫(kù)蠓唾液腺和血腔細(xì)胞內(nèi)增殖。在外環(huán)境中孵化7～10天，病毒就能在唾液腺中排泌，通過(guò)叮咬感染易感動(dòng)物。庫(kù)蠓多喜溫濕泥區(qū)或牛糞，濕度對(duì)其生活史非常重要，但也發(fā)現(xiàn)一些種的庫(kù)蠓存在于干燥區(qū)域，另外一些蠓在高濃度鹽水中繁殖。南非淡翅庫(kù)蠓（CPallidepennis）、美國(guó)變翅庫(kù)蠓（C.Varripennis）為主要傳播媒介。應(yīng)用膜飼法或胸內(nèi)接種，很易使庫(kù)蠓發(fā)生藍(lán)舌病病毒感染。Jennings等（1980）應(yīng)用胸內(nèi)接種法使庫(kù)蠓感染藍(lán)舌病病毒，應(yīng)用熒光抗體法可在頭、胸和腹部檢出病毒。病毒效價(jià)在9天內(nèi)逐漸增高，在接種后第5天就能可靠檢出。有謂藍(lán)舌病病毒可在庫(kù)蠓體內(nèi)增殖10000倍。Luedke等（1976）應(yīng)用庫(kù)蠓作為媒介昆蟲，在綿羊與綿羊之間連續(xù)傳了15代，共13個(gè)月。庫(kù)蠓的感染率為37%，而且由庫(kù)蠓叮咬引起的感染，其臨床癥狀甚至比用人工接種的綿羊更為嚴(yán)重。尚未證實(shí)庫(kù)蠓經(jīng)卵垂直傳播。已有羊蜱蠅（Melophagusovinus）可以攜帶并傳播藍(lán)舌病病毒的報(bào)道，但尚未證實(shí)藍(lán)舌病病毒能在羊蜱蠅體內(nèi)增殖。牛、山羊和鹿以及羚羊等野生反芻獸可能長(zhǎng)期攜帶病毒，并在疾病流行的間歇期內(nèi)扮演病毒儲(chǔ)主的角色。Luedke等（1977）通過(guò)庫(kù)蠓叮咬的方法使妊娠60天和120天的小母牛發(fā)生藍(lán)舌病，隨后采血進(jìn)行病毒分離。結(jié)果在感染50天和100～102天后可由1/3～2/3的感染母牛血液中發(fā)現(xiàn)病毒（此時(shí)已出現(xiàn)中和抗體?。?。10頭母牛中，2頭流產(chǎn)，1頭產(chǎn)出死胎，其它7頭正常分娩，但7頭犢牛均有不同程度的結(jié)構(gòu)或功能上的異常。4頭犢牛（包括1頭死胎）在出生時(shí)血液中含有病毒（此時(shí)尚無(wú)中和抗體和沉淀抗體）。某些犢牛在6個(gè)月內(nèi)發(fā)生病毒血癥。Luedke等還曾用庫(kù)蠓傳播方法由1頭隱性帶毒牛將藍(lán)舌病病毒傳給綿羊，使其臨床發(fā)病。7.免疫病后康復(fù)動(dòng)物對(duì)同型病毒具有很強(qiáng)免疫力，且持續(xù)幾年。接種疫苗是防治本病的有效方法，目前普遍應(yīng)用凍干的雞胚化弱毒疫苗。這類疫苗分單價(jià)和多價(jià)兩種，可根據(jù)各地流行的病毒血清型選用相應(yīng)的疫苗。在非洲地區(qū)，由于幾乎存在所有的血清型，因此必須應(yīng)用多價(jià)疫苗。疫苗引起的免疫期可達(dá)1年左右。多價(jià)疫苗中各毒株之間的相互干擾，在一定程度上影響疫苗的免疫效力。而疫苗株在免疫原性上的差異和動(dòng)物個(gè)體反應(yīng)性的不同，可能也是疫苗接種效果不一致的原因。綿羊在接種弱毒疫苗后，經(jīng)常發(fā)生病毒血癥，例如Sawyer等（1977）應(yīng)用組織培養(yǎng)細(xì)胞從疫苗接種羊的組織和胎兒中分離到疫苗株病毒。疫苗接種羊的病毒血癥的滴度，有時(shí)高達(dá)足以感染媒介昆蟲的程度。雞胚化弱毒疫苗不能用于妊娠母羊，因其可能導(dǎo)致死胎、胎兒腦及其它組織產(chǎn)生病變。這種疫苗還可能影響母羊發(fā)情，所以通常是在母羊發(fā)情前幾周接種。每年注射1次。于接種后10天左右出現(xiàn)免疫性。由于羔羊可經(jīng)初乳獲得母源抗體，故羔羊需在出生后3個(gè)月以上才能進(jìn)行疫苗接種，以免母源抗體影響自動(dòng)免疫的效果。因?yàn)樗{(lán)舌病病毒是一種抗原多變的蟲媒病毒，多價(jià)弱毒疫苗的廣泛使用，可能導(dǎo)致基因型重組和毒力變異增強(qiáng)，所以滅活疫苗列為首選。Parker等（1975）應(yīng)用BHK21細(xì)胞培養(yǎng)藍(lán)舌病病毒，并用β丙內(nèi)酯滅活，制成滅活細(xì)胞培養(yǎng)疫苗。試用于羊，據(jù)云可以引起良好的抗體反應(yīng)。Shipham等（1976）應(yīng)用亞硝酸、5氟尿嘧啶、硝酸胍和原黃素誘變，于28℃非洲馬瘟病毒（Africanhorsesicknessvirus）同義名：馬瘟病毒。1.形態(tài)特征馬瘟病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)極象藍(lán)舌病病毒。超薄切片中的病毒粒子直徑為75nm，內(nèi)有一個(gè)致密的核心，直徑約50nm。于負(fù)染標(biāo)本內(nèi)，病毒粒子的總直徑為60～80nm，衣殼的直徑約55nm，由32個(gè)殼粒組成。有時(shí)看到帶有細(xì)胞性囊膜的病毒粒子。所謂細(xì)胞性囊膜，是指囊膜全部來(lái)自細(xì)胞，不含病毒成分。甚至可在一個(gè)細(xì)胞源性膜樣結(jié)構(gòu)中看到大量病毒粒子的堆集。2.理化學(xué)特性馬瘟病毒含有雙股RNA。病毒粒子在氯化銫中的浮密度為125～133g/cm3。馬瘟病毒對(duì)乙醚、氯仿和去氧膽酸鹽有一定抵抗力，抗胰蛋白酶。在pH6～10之間穩(wěn)定，但在pH30迅速滅活。血液或血清中的病毒可以長(zhǎng)期存活，在4℃甚至室溫條件下存活多年。將其混入等量的草酸鹽石炭酸甘油保存液中，保存時(shí)間更長(zhǎng)。血液或血清即使腐敗，也不明顯影響馬瘟病毒的存活。60℃于30分鐘內(nèi)使其滅活。保存病毒的適宜溫度是4℃或-70℃，馬瘟病毒在-20%～-50℃溫度中較易滅活。加入5%蔗糖、5%乳白蛋白或蛋白胨以及健康血清，均有利于馬瘟病毒的活存。01%福爾馬林能在22℃條件下在48小時(shí)內(nèi)殺死馬瘟病毒。在制備馬瘟病毒的滅活抗原時(shí)，經(jīng)常應(yīng)用01%～04%3.抗原性應(yīng)用中和試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)可將馬瘟病毒分為9個(gè)血清型，推測(cè)在非洲其它地方還存在其它血清型。但是這些血清型并不彼此涇渭分明，經(jīng)常在血清學(xué)反應(yīng)或免疫保護(hù)力上呈現(xiàn)某種程度的交叉反應(yīng)，因此有人認(rèn)為，各型馬瘟病毒可能具有同樣的抗原成分，僅其含量明顯不同而已。已在非洲發(fā)現(xiàn)所有的9個(gè)血清型，但在某一地區(qū)，則常以1個(gè)或2個(gè)血清型為主，例如阿爾及利亞的馬瘟流行暴發(fā)，主要是由第9型引起的。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)呈群特異性，可以測(cè)出各型馬瘟病毒共有的特異性抗原。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)也是群特異的，通常出現(xiàn)2條或2條以上的沉淀線，因此必須應(yīng)用同樣制備的對(duì)照陰性抗原進(jìn)行對(duì)比觀察。4.病原性馬、騾、驢是馬瘟的主要自然感染者，能使感染的動(dòng)物９５％死亡。馬最敏感，騾次之，發(fā)病率高，致死率低。驢有一定抵抗力，僅出現(xiàn)溫和的發(fā)熱反應(yīng)。斑馬則完全不易感，可能系隱性帶毒者。皮下注射０01%毫升的含毒血液，即可引起感染。靜脈、腦內(nèi)、腹腔和乳房?jī)?nèi)注射的結(jié)果相同。實(shí)驗(yàn)感染的潛伏期通常為5～7天，自然感染的潛伏期為3～10天，但也可能稍為縮短或延長(zhǎng)至半個(gè)月以上。馬瘟在臨床上習(xí)慣地分為四個(gè)類型，即發(fā)熱型、肺型、心型和混合型。[ZZ(]發(fā)熱型[ZZ)]為輕癥感染，體溫升高，最高可達(dá)41℃，持續(xù)5～8天，隨即恢復(fù)正常。最常見(jiàn)于驢和未完全免疫馬群受到同種病毒的感染時(shí)。只有部分病馬呈現(xiàn)輕度癥狀，如食欲不振，結(jié)膜潮紅，呼吸困難和脈搏增快。[ZZ(]肺型[ZZ)]為最嚴(yán)重的病型，體溫急驟上升，高達(dá)41℃或以上，呼吸加快，每分鐘70次左右，并出現(xiàn)急性肺水腫的癥狀：前腿分開(kāi)、頭頸伸長(zhǎng)、鼻孔擴(kuò)大、大汗淋漓、陣咳后排出淡黃色和泡沫狀鼻涕。病畜可在數(shù)小時(shí)內(nèi)死亡。主要病變是肺水腫和胸腔積水6.生態(tài)學(xué)馬瘟不直接由病馬傳染給健康馬，必須通過(guò)媒介昆蟲叮咬病馬、騾等動(dòng)物才能傳播。庫(kù)蠓是馬瘟病毒的主要傳播者，曾多次從庫(kù)蠓體內(nèi)分離到病毒。Mellor等（1975）應(yīng)用胸內(nèi)接種和喂飼含毒血液的方法使庫(kù)蠓發(fā)生人工感染，并能傳播病毒，證明庫(kù)蠓是生物學(xué)帶毒者。在土耳其，虻和螯蠅被認(rèn)為是馬瘟病毒的傳播者。Ozawa等（1965）應(yīng)用按蚊和庫(kù)蚊成功地傳播了馬瘟病毒。雖然病后恢復(fù)馬可能帶毒90天，但在沒(méi)有蚊、蠓等媒介昆蟲存在的季節(jié)，馬瘟病毒是怎樣持續(xù)存在和越冬的?這是至今沒(méi)有闡明的問(wèn)題。有人推測(cè)可能存在一種或幾種可以作為病毒儲(chǔ)主的野生脊椎動(dòng)物。于春夏季節(jié)，新羽化的庫(kù)蠓或其它媒介昆蟲在叮吸這些儲(chǔ)主的血液時(shí)遭受感染。經(jīng)庫(kù)蠓等媒介昆蟲越冬的可能性，尚未獲得實(shí)驗(yàn)證據(jù)。傳染媒介的控制，可用殺蟲劑在馬匹安定而吸血昆蟲最活躍的夜間進(jìn)行。7.免疫四、輪狀病毒屬（Rotavirus）同義名：雙層病毒（Duoviruses）輪狀病毒是各種幼齡動(dòng)物非菌性腹瀉的主要病原之一。最早于1968年由Mebus等在美國(guó)內(nèi)布拉斯加州一農(nóng)場(chǎng)犢牛腹瀉病例中發(fā)現(xiàn)，歐、美洲各國(guó)以及澳大利亞、新西蘭和日本等都發(fā)現(xiàn)了牛輪狀病毒引起的犢牛腹瀉，澳大利亞和英、美等國(guó)均報(bào)道有輪狀病毒引起的仔豬腹瀉。此外，在綿羊、山羊、幼駒、鹿以及兔和小鼠等也有發(fā)生輪狀病毒性腹瀉的報(bào)道。小鼠的流行性腹瀉就是輪狀病毒引起的。雞和火雞等多種禽類中亦有輪狀病毒感染的存在。我國(guó)亦有豬、牛、羊、犬和多種禽類等輪狀病毒感染的報(bào)道，并已發(fā)現(xiàn)或分離鑒定了病毒。輪狀病毒感染引起嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。以英國(guó)為例，犢牛輪狀病毒性腹瀉的發(fā)病率為60%～80%，死亡率為0%～50%，1%～4周齡仔豬群的發(fā)病率超過(guò)80%，死亡率7%～20%。輪狀病毒感染引起的腹瀉是一種世界性傳染病。據(jù)初步統(tǒng)計(jì)，全世界幼兒發(fā)生的腸炎至少有50%是由輪狀病毒引起的。該屬代表種為人輪狀病毒，其它成員包括從人、牛、小鼠（EDIM）、豚鼠、綿羊、山羊、豬、猴（SA11）、馬、羚羊、北美野牛（Bison）、鹿、家兔、犬、禽的分離株。1.形態(tài)特征病毒粒子略呈圓形，具有雙層衣殼。直徑為65～75nm。中央為一個(gè)電子致密的六角形核心，直徑37～40nm。周圍繞有一個(gè)電子透明層。輪狀病毒曾被描述為類呼腸孤病毒，但可根據(jù)它們清晰明確的光滑外緣與呼腸孤病毒相區(qū)別。殼粒由此向外呈輻射狀排列，構(gòu)成內(nèi)衣殼。外周為一層由光滑薄膜構(gòu)成的外衣殼，厚約20nm，外衣殼可能是在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上芽生時(shí)獲得的。以核心為轂，以呈輻射狀排列的內(nèi)衣殼為輪輻，以外衣殼為輞，構(gòu)成了特征性的輪狀結(jié)構(gòu)。輪狀病毒這一名稱，就由此而來(lái)。有關(guān)輪狀病毒的超微結(jié)構(gòu)，學(xué)者們的意見(jiàn)尚不一致。曾提出過(guò)內(nèi)衣殼有３２個(gè)、１３２個(gè)、１６２個(gè)、１８０個(gè)、３２０個(gè)殼粒構(gòu)成呈２０面體排列的多種模型。Martin等（1975）認(rèn)為輪狀病毒與環(huán)狀病毒一樣，也有32個(gè)大的環(huán)形殼粒，且其180個(gè)三聯(lián)亞單位按T=9方式組成20個(gè)三角面體。每個(gè)三聯(lián)亞單位包含3個(gè)結(jié)構(gòu)單位，所以一共有540個(gè)結(jié)構(gòu)單位。但據(jù)Esparza（1978）報(bào)道，輪狀病毒表面有162個(gè)孔，由320個(gè)三聯(lián)亞單位按T=9方式組成20個(gè)三角面體。因每個(gè)三聯(lián)亞單位包含三個(gè)結(jié)構(gòu)單位，所以一共有960個(gè)結(jié)構(gòu)單位。圖69-3輪狀病毒（橫杠=100nm）-自楊盛華出現(xiàn)上述不同的觀察結(jié)果，也許是標(biāo)本制作方法不同的緣故?，F(xiàn)公認(rèn)輪狀病毒為二十面體，三角剖分?jǐn)?shù)T=13。Stannard等（1977）對(duì)乳鼠流行性腹瀉輪狀病毒和猴輪狀病毒SA11株進(jìn)行了細(xì)致的電子顯微鏡觀察，發(fā)現(xiàn)其內(nèi)衣殼有180個(gè)形態(tài)亞單位，排列成晶格狀。12個(gè)頂各為一個(gè)空隙，由5個(gè)殼粒圍繞，另外80個(gè)空隙各由6個(gè)殼粒圍繞。外衣殼由蜂窩樣的晶格組成，且與內(nèi)衣殼的晶格排列相符。Stannard還繪制了一幅有關(guān)輪狀病毒衣殼結(jié)構(gòu)的模式圖，見(jiàn)圖1９-4。除完整的病毒粒子（稱為光滑型，即S顆粒）外，還?？梢砸?jiàn)到?jīng)]有外衣殼的病毒粒子，稱為粗糙型，即R顆粒。形成無(wú)感染性的或感染性差的單層衣殼殼粒，這種顆粒，比完整病毒粒子小，其出現(xiàn)的相對(duì)頻率甚低，但已發(fā)生在雞、仔豬、犢牛和人類的感染中，約占仔豬輪狀病毒感染的５％，而在牛則低至１％。此外還有空衣殼。在已感染的小腸上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，常有無(wú)定形的毒漿（viroplasm）和微管樣結(jié)構(gòu)（其表面形態(tài)與病毒粒子相同），可能是病毒衣殼異常合成的產(chǎn)物。圖16-4輪狀病毒衣殼結(jié)構(gòu)模式(自Stannard)2.理化學(xué)特性輪狀病毒粒子和核心在氯化銫密度梯度中的浮密度分別為136～138g/cm3和144g/cm3。S20w=525。病毒由11個(gè)節(jié)段的雙鏈RNA組成，大小為06×103～33×103kDa。以Nebraska株輪狀病毒為例，各節(jié)段的分子量分別為221、185、170、155、100、082、051、051、026、020和020×103kDa。RNA占病毒粒子重量的12%～15%。短的保守序列全在5′末端。輪狀病毒ＲＮＡ的１１個(gè)節(jié)段，在聚丙烯酰胺凝膠電泳后，易于分開(kāi)，形成特定的電泳帶組合模式，即電泳圖型模式，簡(jiǎn)稱電泳型。這１１條帶分為４個(gè)區(qū)段。常見(jiàn)的動(dòng)物和人的輪狀病毒的４個(gè)區(qū)段中，各帶的排列位置為４∶2∶3∶2，統(tǒng)稱Ａ群。根據(jù)第１０和第１１節(jié)段之間距離的長(zhǎng)短，又分長(zhǎng)型和短型。后來(lái)又發(fā)現(xiàn)了一些新的輪狀病毒，其電泳型與Ａ群不同，稱為Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ和Ｆ群，見(jiàn)表19-3和圖19-5。表19-3輪狀病毒分群特征群群特異性抗原電泳型宿主ABCDEF[]ABCDEF[]4∶2∶3∶24∶2∶2∶34∶3∶2∶25∶2∶2∶24∶2∶2∶33∶3∶3∶2[]多種動(dòng)物和人豬、牛、大鼠、中國(guó)成人、小兒小兒、豬禽豬禽盡管不同的血清型可能呈現(xiàn)相似的電泳型，而同一血清型又可能顯示不同的電泳型，但國(guó)內(nèi)外迄今還常應(yīng)用電泳分型法作為鑒定輪狀病毒的主要手段。圖19-5輪狀病毒RNA的電泳型A.常見(jiàn)輪狀病毒，長(zhǎng)型，4∶2∶3∶2B.常見(jiàn)輪狀病毒，短型，4∶2∶3∶2C.非典型輪狀病毒，5∶2∶2∶2應(yīng)用聚丙烯酰胺凝膠電泳，可在不同毒株間發(fā)現(xiàn)RNA節(jié)段的電泳遷移圖譜有一定程度的差異，不同種動(dòng)物的輪狀病毒之間的差異更明顯。其中最重要的是根據(jù)第10和11節(jié)段之間距離的長(zhǎng)短劃分的所謂長(zhǎng)型與短型。一些A群輪狀病毒具有血凝性，例如牛NCDV株能凝集人O型以及豚鼠、馬、綿羊等紅細(xì)胞。綿羊和人株能凝集雞、綿羊、兔、豚鼠及人的紅細(xì)胞。我國(guó)江蘇省的分離株能凝集豚鼠、馬、人O型、綿羊及犢牛紅細(xì)胞。最適pH72～74，溫度為37℃，血細(xì)胞濃度為05%。血凝和血凝抑制試驗(yàn)亦可提供一種毒株分類方法。輪狀病毒對(duì)環(huán)境因子和許多常見(jiàn)消毒劑如碘附和次氯酸鹽有較強(qiáng)的抵抗力，能耐受乙醚、氯仿和去氧膽酸鈉處理而不影響其感染性。對(duì)酸（pH30）和胰酶穩(wěn)定，56℃30分鐘使其感染力降低2個(gè)對(duì)數(shù)。1mol/LMgCl2不能增高其對(duì)56℃60分鐘的穩(wěn)定性。糞便中的病毒在18～203.抗原性病毒粒子表面有３種抗原，即群抗原、中和抗原及血凝素抗原。群抗原與多種結(jié)構(gòu)蛋白有關(guān)，主要是由第6節(jié)段編碼的內(nèi)殼蛋白Vp6；中和抗原主要是由第9節(jié)段編碼的外殼糖蛋白Vp7；血凝素抗原是由第4節(jié)段編碼的外殼蛋白Vp4，可被蛋白水解酶水解。不是所有的輪狀病毒都有血凝素。根據(jù)群抗原的差異及病毒RNA末端指紋圖的分析將輪狀病毒分為A～F6個(gè)群。絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物輪狀病毒，具有一種相同的群抗原。這些輪狀病毒被命名為A群或典型輪狀病毒，包括大多數(shù)哺乳動(dòng)物和禽A群輪狀病毒，是研究的主要對(duì)象。B～F群只在原代宿主上生長(zhǎng)，為非典型輪狀病毒或副輪狀病毒(pararotavirus），缺乏共同抗原，其基因片段只有第5、7、9節(jié)段RNA；其中B群出現(xiàn)在人、豬、牛、綿羊和大鼠，在我國(guó)發(fā)現(xiàn)的成人輪狀病毒是重要代表；C群在豬，很少見(jiàn)于人，D群和F群在禽，E群在豬。禽輪狀病毒與哺乳動(dòng)物無(wú)抗原相關(guān)性。盡管用免疫熒光、ELISA、補(bǔ)結(jié)試驗(yàn)、瓊擴(kuò)等方法檢測(cè)群抗原，但同群輪狀病毒仍有不同的抗原。此種抗原可用血清中和試驗(yàn)或蝕斑減數(shù)中和試驗(yàn)鑒別。根據(jù)中和抗原Vp7的差異可將A群輪狀病毒分為14個(gè)血清型，分別用阿拉伯?dāng)?shù)字G1～11標(biāo)記；依據(jù)Vp4差異大約有８?jìng)€(gè)血清型，標(biāo)記為p1～8，它們間有部分抗原交叉。5.病原性小日齡的幼畜最為易感，癥狀也較嚴(yán)重。成年人、畜血清中的抗體檢出率高達(dá)40%～100%，大多呈隱性感染。畜、禽群一旦發(fā)生本病，隨后將每年連續(xù)發(fā)生，這是因?yàn)檩啝畈《驹隗w外具有較強(qiáng)的抵抗力，而且隱性感染的成年動(dòng)物不斷排出病毒的緣故。腹瀉是本病的主要癥狀，嚴(yán)重者帶有粘液和血液，部分病例因嚴(yán)重脫水和酸堿平衡失調(diào)而死亡。病毒感染主要局限于小腸，特別是其下2/3處，即空腸和回腸部。病毒對(duì)小腸上皮細(xì)胞有極強(qiáng)的偏嗜性，幼畜在感染數(shù)小時(shí)后小腸絨毛萎縮、柱狀上皮細(xì)胞脫落，從而使腸道分泌和吸收機(jī)能失調(diào)。利用輪狀病毒實(shí)驗(yàn)感染雞和火雞進(jìn)行的免疫熒光研究表明，病毒增殖的主要部位是小腸成熟絨毛吸收上皮細(xì)胞的胞漿。絨毛的上1/3感染細(xì)胞較多。少量感染的細(xì)胞也見(jiàn)于結(jié)腸上皮、盲腸和某些絨毛的固有層。腺胃、肌胃、脾、肝或腎中未見(jiàn)到免疫熒光。輪狀病毒宿主范圍甚廣，已知的有人、小鼠、牛、牦牛、豬、綿羊、山羊、馬、犬、貓、猴、羚羊、鹿、兔、雞、火雞、雉雞、鴨、珍珠雞、鵪鶉、鴿和情侶鸚鵡等。各種動(dòng)物的輪狀病毒都對(duì)各自的幼齡動(dòng)物呈現(xiàn)明顯的病原性。成年動(dòng)物大多呈隱性感染經(jīng)過(guò)。人的輪狀病毒能夠?qū)嶒?yàn)感染犢牛、猴、仔豬、羔羊，并可能引起臨床發(fā)?。坏荒苁剐∈蠛图彝酶腥景l(fā)病。牛輪狀病毒和鹿輪狀病毒也能感染仔豬。豬輪狀病毒似乎只能使仔豬感染發(fā)病。分離自火雞和雉的輪狀病毒可感染雞。沒(méi)有跡象表明，禽類輪狀病毒可感染哺乳動(dòng)物，反過(guò)來(lái)也是一樣。Woode等（1978）用無(wú)菌豬作試驗(yàn)，豬輪狀病毒引起的新生仔豬死亡率為100%，5～7日齡仔豬的死亡率為5%～30%。犢牛最早在出生后12小時(shí)發(fā)病，遲的數(shù)周，一般以1～7日齡犢牛發(fā)病最多。有趣的是，盡管發(fā)生于火雞、雞、雉雞和鴨的絕大多數(shù)自然感染者是6周齡以下的禽類，但較大的雞（56～119日齡）和火雞（112日齡）對(duì)實(shí)驗(yàn)感染的敏感性卻較初生幾周的雛禽高。感染動(dòng)物可產(chǎn)生血液循環(huán)抗體及腸道分泌抗體，血清中的抗體水平和對(duì)感染的抵抗力并不相關(guān)。而在感染中起保護(hù)作用的是腸道局部的SIgA，能中和輪狀病毒。在大多情況下，腸道感染后的回憶應(yīng)答時(shí)間短。如人工感染豬１４～２１天后用同樣的豬輪狀病毒攻毒，可獲得完全保護(hù)，但２８天后不能抵抗重復(fù)感染。人輪狀病毒感染后很快出現(xiàn)特異性抗體，IgM在感染后5～10天效價(jià)最高，IgG則在感染后15～20天時(shí)達(dá)高峰。犢牛在感染后第3天即可檢出腸道的分泌抗體，能維持約40～50天，再次感染時(shí)可再分泌30～40天。豬感染后５～１０天就能檢測(cè)到輪狀病毒糞抗體（Coproantibody）。雞和火雞口服接種輪狀病毒時(shí)，早在感染后4～6天即出現(xiàn)血清抗體的應(yīng)答。母乳中的抗體滴度及持續(xù)時(shí)間因動(dòng)物的種類及免疫狀況而異。6.免疫人用口服輪狀病毒活疫苗可使兒童獲得保護(hù)。美國(guó)已有用于犢牛的凍干弱毒疫苗。弱毒毒株是牛輪狀病毒經(jīng)牛胎腎細(xì)胞傳200代以上（最后60代培養(yǎng)于29℃～30℃）減毒培育而成的。對(duì)剛出生而尚未吮吸初乳的新生犢牛，經(jīng)口給予融化后的疫苗4ml，可使發(fā)病率明顯降低，即或發(fā)病，癥狀也較輕微?？赡苁且蛞呙缰瓴《臼紫雀腥玖诵∧c粘膜上皮細(xì)胞，從而能夠阻止隨后的強(qiáng)毒感染，而在疫苗接種后5～7天，又將產(chǎn)生局部抗體。但學(xué)者們對(duì)于輪狀病毒弱毒疫苗對(duì)其它血清型的感染是否有保護(hù)作用？是否會(huì)轉(zhuǎn)變成強(qiáng)毒株？頗為關(guān)注。但據(jù)輪狀病毒免疫的現(xiàn)有知識(shí)表明，口服活的致弱疫苗或許會(huì)比經(jīng)非腸給予滅活疫苗更為有效。另一種免疫方法是用滅活疫苗給母畜作免疫注射，通過(guò)乳汁免疫，保護(hù)新生仔畜。已經(jīng)明確，初乳抗體能夠防止腹瀉或降低其劇烈程度。據(jù)測(cè)定，牛羊在產(chǎn)后第1天，初乳中抗體含量最高，產(chǎn)后3天迅速下降至不可測(cè)出的水平。用甲醛滅活的牛輪狀病毒疫苗5ml給分娩前60～90天的母牛作皮下注射，分娩前30天再作第2次注射，也可降低新生犢牛的發(fā)病率。Gastrucci等（1989）采用油包水佐劑疫苗免疫注射妊娠最后一月的母牛，測(cè)得母牛初乳中的中和抗體效價(jià)為1∶2560，直至產(chǎn)犢后5天牛奶抗體水平仍未明顯下降，而未免疫母牛在初乳中含有極低效價(jià)的抗體（1∶40以下）。與牛、羊乳中抗體持續(xù)時(shí)間很短的情況相反，Bohl（1978）發(fā)現(xiàn)，豬的初乳和常乳中具有相當(dāng)高的抗體效價(jià)，即使是在泌乳后期采集的乳標(biāo)本中，中和抗體效價(jià)也常超過(guò)1∶1000。測(cè)定67個(gè)農(nóng)場(chǎng)的268頭母豬，除1頭外，抗輪狀病毒的中和抗體效價(jià)均高于1∶64。由此證明，多數(shù)母豬的初乳和常乳能給未斷乳仔豬提供不同程度的被動(dòng)保護(hù)。仔豬的輪狀病毒性腹瀉大多發(fā)生于10～23日齡幼豬，更小的豬可能因有充分的乳源性免疫力而較少發(fā)病。許多學(xué)者建議給母豬作免疫注射，通過(guò)提高初乳免疫的途徑，預(yù)防仔豬的輪狀病毒性腹瀉。就單胃動(dòng)物來(lái)說(shuō)，乳中的IgA抗體可能比IgG更為有效。因?yàn)槿橹蠭gA的濃度較高，且對(duì)酶的降解作用具有較大以G6號(hào)玻璃濾器或孔徑為02２μ（１０）病毒核酸電泳法〓用于直接檢測(cè)輪狀病毒感染，并同時(shí)能鑒定出病毒基因組的電泳型，是研究輪狀病毒分類學(xué)和流行病學(xué)的最常見(jiàn)方法。通常將病料或感染的培養(yǎng)物凍融處理后，經(jīng)差速離心、蔗糖密度梯度離心制備病毒樣品后，從輪狀病毒中提?。遥危吝M(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳（ＰＡＧＥ），銀染，根據(jù)病毒ＲＮＡ節(jié)段的數(shù)目及圖式即可作出判斷。血清學(xué)分析一般檢查不出同一型輪狀病毒的微小差異，但ＰＡＧＥ法可以檢出。如果糞樣中病毒含量高，應(yīng)用下述簡(jiǎn)單的核酸提取方法，也可獲得滿意的電泳鑒定結(jié)果。取糞液025ml，加入Eppendorf管中，再加等量２％ＳＤＳ溶液，振蕩混合３０秒鐘，立即加入苯酚氯仿混合液05ml，如上振蕩混合。１００００r/min離心沉淀５分鐘，吸取上層水相，即為核酸樣品，立即進(jìn)行電泳。加樣時(shí)，取核酸樣品２０～４０μl，加樣品稀釋液３０～６０μl，混勻后即將Eppendorf管放入９０℃水浴加熱２分鐘，隨后滴加凝膠板。電泳電壓為３００～５００Ｖ或用７０～１００ＭＡ電流量，電泳１小時(shí)后用１０％乙醇、０五、COLTI病毒屬(Coltivirus)科羅拉多蜱傳熱病毒（Coloradotickfevervirus)科羅拉多蜱傳熱病毒為COLTI病毒屬的代表種，原屬于環(huán)狀病毒屬。由于其對(duì)人有致病性，病毒核心的衣殼表面結(jié)構(gòu)不同于典型的環(huán)狀病毒，尤其是病毒基因組由１２個(gè)雙鏈ＲＮＡ節(jié)段而不是環(huán)狀病毒的１０個(gè)節(jié)段組成，核酸總分子量２７kDa，遠(yuǎn)比環(huán)狀病毒（１８kDa）大，故單列為一屬。該屬成員除科羅拉多蜱傳熱病毒外，還包括Eyach和Eyach血清型的變異株Ar５７７和Ar５７８。可能的成員有印度尼西亞的JKT6433、JKT6969、JKT7041、JKT7075分離株以及中國(guó)分離株M14、HN59、HN131、HN199、HN295。本病毒能致山區(qū)和高原地區(qū)人類的輕型熱病，表現(xiàn)為體溫升高、顫抖、頭痛及背部肌肉疼痛，惡心和嘔吐，患者能完全康復(fù)。急性期有病毒血癥。潛伏期一般為４～６天，病程５～６天。近年來(lái)從我國(guó)云南西雙版納無(wú)名熱及病毒性腦炎病人中分離的ＢＡＮＮＡ病毒（１９９０）以及從海南省三帶喙庫(kù)蚊中分離的ＨＮ１３１株和麻翅庫(kù)蚊中分離的ＨＮ２９５株（１９９０）等分離株，經(jīng)核酸電泳，其ＲＮＡ分１２節(jié)段。此外，從當(dāng)?shù)刎i、牛血清中也分離到病毒，且在我國(guó)熱帶、亞熱帶分布廣泛，初步鑒定這些分離株很可能是ＣＯＬＴＩ病毒屬成員。本病毒見(jiàn)于美國(guó)和歐洲，但也可能存在于印尼和中國(guó)。1.形態(tài)和理化學(xué)特性科羅拉多蜱傳熱病毒為球形顆粒，由致密的核心和包圍著核心的雙層衣殼組成，直徑為８０nm。病毒對(duì)酸（pH３０）和熱（５６℃，３０秒種）均敏感，pH30能使病毒感染性喪失，乙醚等脂溶劑能降低其感染性。病毒核酸由１２個(gè)節(jié)段的雙股ＲＮＡ組成，0分子量分別在024×103～25×103kDa，總分子量為18×102.抗原性在迄今分離到的所有病毒株中，已知有兩個(gè)血清型，分別代表美國(guó)北部的分離株和歐洲分離株（Eyach）。１９８５年從美國(guó)科羅拉多、洛基山等地蜱和病人血液分離到多株不同基因型變異株，在１９８６年分離的３株病毒有兩株的基因帶型不同于１９８５年分離株。由于本病毒具有多節(jié)段雙鏈ＲＮＡ基因組，易于發(fā)生不同基因型病毒ＲＮＡ的重組，從而產(chǎn)生不同的變異株。3.培養(yǎng)和生態(tài)學(xué)本病毒可在多種脊椎動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞中復(fù)制。已報(bào)道的有人、鹿、倉(cāng)鼠、吮乳或成年小鼠、硬蜱、蚊子以及多種人類細(xì)胞系。從牛、豬體內(nèi)也分離到中國(guó)株。安德遜革蜱是主要生物傳播媒介，蚊子也可能有傳播病毒的作用（印度尼西亞分離株）。松鼠和金花鼠是病毒貯主。六、水生呼腸孤病毒屬（Aquareovirus）同義名：水生動(dòng)物呼腸孤病毒（Aquaticanimalreovirus）1979年Meyers從美國(guó)牡蠣中分離出呼腸孤病毒（1３p２），１９８１年Winto等從大馬哈魚分離出呼腸孤病毒（CSV），１９８３年Nagabayashi等從日本牡蠣中分離出JOV1病毒，１９８７年Winton等再次從３種魚類（NotemigonusCrysoleueas，Oncorhynchusketa和Ictaluruspunctatus）以及美國(guó)牡蠣中分離出４種呼腸孤病毒。我國(guó)學(xué)者（１９８3）從草魚出血病中分離出一株草魚出血病病毒，并鑒定為呼腸孤病毒科中的新成員。這些從魚類及貝類發(fā)現(xiàn)的呼腸孤病毒，它們有一些共性，即病毒外觀相似于正呼腸孤病毒，粒子直徑７５nm左右，核心約５０nm。在氯化銫中浮密度１３６g／cm3，能抵抗乙醚和蛋白酶處理而感染性不受影響。雙股ＲＮＡ基因組有１１個(gè)節(jié)段，分子量為03×103～25×103kDa，總分子量15×103kDa。分３類，即３個(gè)L，３個(gè)Ｍ，５個(gè)Ｓ。有５種主要結(jié)構(gòu)蛋白，分子量３４×103～１３５×103Da。至少還有２種次要的病毒蛋白存在。病毒在胞漿內(nèi)復(fù)制，可能類似于正呼腸孤病毒復(fù)制方式。病毒宿主范圍包括變溫脊椎動(dòng)物和無(wú)脊椎動(dòng)物（貝殼類）。能在魚類細(xì)胞系中有效增殖，在某些魚類細(xì)胞上能形成蝕斑或合胞體。病毒呈水平傳播，尚未發(fā)現(xiàn)任何生物傳播媒介。鑒于上述特點(diǎn)，它們不同于已知呼腸孤病毒科中任何一屬，曾建議提名為水生動(dòng)物呼腸孤病毒屬（Aquaticanimalreovirus），現(xiàn)正式歸為一屬。該屬代表種金體美鳊魚病毒（Goldenshinervirus）。此外，還包括１３p２呼腸孤病毒、大馬哈魚呼腸孤病毒（Chumsalmonvirus）、鲇魚呼腸孤病毒（Channelcatfishreovirus）。還可能包括有鯉屬魚呼腸孤病毒（Tenchreovirus）、圓鰭雅羅魚呼腸孤病毒（Chubreovirus）、銀大馬哈魚呼腸孤病毒（Cohosalmonreovirus）、文蛤呼腸孤病毒（Hardclamreovirus）、草魚呼腸孤病毒（Grasscarpreovirus）即草魚出血病病毒、大菱魚呼腸孤病毒（Turbotreovirus）。屬中除草魚呼腸孤病毒（草魚出血病病毒）外，其它均無(wú)重要的致病意義。(一)草魚出血病病毒（Grasscarphemorrhagevirus）同義名：草魚呼腸孤病毒（Grasscarpreovirus），魚呼腸孤病毒。草魚出血病主要危害10cm左右的當(dāng)年草魚（４～５月齡），死亡率可達(dá)７０％，二齡草魚也易感，成年草魚則為無(wú)癥狀感染。感染魚游泳異常，繼而離群獨(dú)處，或漂游水面，或沉臥池底，或劇轉(zhuǎn)打圈，多在出現(xiàn)上述癥狀后一天內(nèi)死亡。病死魚體色深暗，眼球突出，全身出血、充血。臨床表現(xiàn)通?？煞秩停杭匆约∪獬溲獮橹鞯摹凹t肌肉型”；以鰭基及鰓瓣充血為主的“紅鰭紅鰓型”；以腸道嚴(yán)重出血為主要特征的“腸炎型”。以上三型往往混合出現(xiàn)。本病是我國(guó)最主要的魚病之一，遍及我國(guó)南方各省，當(dāng)水溫超過(guò)２０℃1.形態(tài)和理化學(xué)特性草魚出血病病毒直徑６５～７０nm，雙層衣殼，外衣殼厚約９nm,內(nèi)衣殼52nm。超薄切片可見(jiàn)病毒粒子在胞漿中呈晶格狀排狀?；蚪M為雙股ＲＮＡ，分11個(gè)節(jié)段，總分子量約15×103kDa；聚丙烯酰胺凝膠電泳圖型為3∶3∶3∶2，可因毒株不同有所差異，分子量在03×103～31×103kDa。有５種主要結(jié)構(gòu)多肽，分子量32×103～137×103Da。蔗糖浮密度130g/cm3，氯化銫浮密度137g/cm3。病毒對(duì)酸（pH3）、堿（pH10）及熱（56℃，３０min）均穩(wěn)定，對(duì)氯仿和乙醚不敏感。組織中的病毒在-２０2.抗原性草魚出血病病毒與其它已知國(guó)外分離的魚類呼腸孤病毒，如大馬哈魚呼腸孤病毒、金體美鳊魚病毒等無(wú)抗原性交叉。至于毒株間是否存在著抗原性差異尚待研究，用特定毒株制備的疫苗對(duì)不同地區(qū)的免疫效果可有差異，提示可能存在著不同的血清型。毒株血清型與電泳型之間的關(guān)系及其在流行病學(xué)上的意義同樣有待闡明。呼腸孤病毒科（Reoviridae）導(dǎo)源于呼腸孤兒病毒（Respiratoryentericorphanvirus），意即既能感染呼吸道，也能感染胃腸道的一類病毒，它們的致病性尚不清楚。這類病毒原先歸于ECHO病毒，為ECHO10。但是，進(jìn)一步研究表明它的毒粒不僅比ECHO病毒要大，而且能形成特征性的胞漿內(nèi)包含體。這種含有病毒特異性抗原的包含體用丫啶橙染色時(shí)，與細(xì)胞DNA一樣呈綠黃色，而不是象通常的單鏈RNA呈紅色。由于這一現(xiàn)象導(dǎo)致了呼腸孤病毒基因組是雙鏈RNA這一重要發(fā)現(xiàn)，第一次說(shuō)明雙鏈RNA可作為穩(wěn)定的生命形態(tài)存在于自然界。迄今，已知呼腸孤病毒科是一個(gè)龐大的病毒科，它有150個(gè)以上成員，在自然界廣泛存在于脊椎動(dòng)物、非脊椎動(dòng)物和植物。一、呼腸孤病毒科的分類呼腸孤病毒科包括6個(gè)屬以及1個(gè)未定名的屬。（一）呼腸孤病毒屬（Reovirus），或正呼腸孤病毒（Orthoreovirus）代表株為呼腸孤病毒I型。其它成員包括從人、猴、狗和牛分離的呼腸孤病毒1、2、3型，以及從禽分離的Crawley、NelsonBay等。（二）環(huán)狀病毒屬（Orbirirus）代表株為蘭舌病毒（Bluetonguevirus）。其它成員包括11個(gè)血清型：1.蘭舌病毒亞屬（Bluetonguesubgroup）（庫(kù)蠓屬）。蘭舌病毒有21個(gè)血清型。2.Eubenangee亞屬。包括Eubenangee（蚊）；Pata（蚊）；Tilligerry（NB7080）蚊。3.Corriparta亞屬。包括Acado（蚊）；Bambari；Corriparta（蚊）；Jacareacanga。4.Changuinola亞屬。包括BeAr35646（白蛉）；BeAr41067（白蛉）；BeAr54342（白蛉）；Changguinola（白蛉）；Irituia。5.Kemerovo亞屬。包括Baku（壁虱）；Bauline（壁虱）；CapeWrath（壁虱）；Chenuda（壁虱）；Fin,GreatIsland（壁虱）；Huacho（壁虱）；Kemerovo（壁虱）；Kena;Lipovnik（壁虱）；MonoLake（壁虱）;Mykenes（壁虱）；Nugget（壁虱）；Okhotskiy（壁虱）；Poovoot;Seletar（壁虱）；Sixguncity（壁虱）；Tindholmur（壁虱）；Tribec（壁虱）；WadMedani（壁虱）；aquinaHead（壁虱）。6.Palyan亞屬。包括Abadina（庫(kù)蠓）；D’Aguilar（庫(kù)蠓）；Kasba（蚊）；Nyabira;Palyam（蚊）；Vellore（蚊）。7.流行性鹿病亞屬（Epizooticdiseaseofdeersubgroup）。包括EHD,NewJersey;EHD,CanAlberta;IbAr22619;IbAr33853;Ibaraki。8.Warrego亞屬。包括MitchellRiver（MRM10343）（庫(kù)蠓）；WarregoCh9935（庫(kù)蠓）。9.Wallal亞屬。包括Mudginbarry；Wallal（CH12048）。10.非洲馬病亞屬（Africanhorsesickness）。包括9個(gè)血清型。11.馬退行性腦病（Equineencephalosis）。包括5個(gè)血清型。12.未分屬的。包括Ife,Japanant,Lebombo,LlanoSeco,Orunga,ParooRiver,T—50616（臭鼬分離），Umatilla?？赡艹蓡T還有家兔融合細(xì)胞病毒（Rabbitsyncytiumvirus）。（三）輪狀病毒屬（Rotavirus）代表株為人輪狀病毒（Humanrotavirus）。其它成員包括從人，牛，小鼠（EDIM），豚鼠，綿羊，山羊，豬，猴（SA11），馬，羚牛，北美野牛（Bison），鹿，家兔，狗和鴨的分離物。按抗原性大約可分為A~G等7個(gè)組（洪濤1988）。（四）植物呼腸孤病毒屬（PhytoreovirusPlantreovirussubgroup1）代表株為傷瘤病毒（Woundtumorvirus,WTV）。其它成員有水稻矮縮病毒（Ricedwarfvirus,RDV）?？赡艹蓡T有水稻癭矮病毒（Ricegalldwarfvirus）。（五）斐濟(jì)病毒屬（FijiPlantreovirussubgroup2）代表株為斐濟(jì)病病毒（FDV）。其它成員根據(jù)形態(tài)、抗原性可分為以下3組：1組：谷類植物分蘗病病毒（Cerealtilleringdiseasevirus）；玉米組縮病毒（Maizeroughdwarfvirus）：馬唐矮化病毒（Pangolastuntvirus）；水稻黑條矮縮病毒（Riceblackstreakeddwarfvirus）。2組：斐濟(jì)病病毒（Fijidiseasevirus）。3組：Arrhenatherum蘭矮病毒（Arrhenatherumbluedwarfvirus）；Lolium耳突病毒（Loliumenationvirus）；燕麥不孕矮縮病毒（Oatsteriledwarfvirus）。（六）胞漿多角體病毒屬（CypovirusCytoplasmicpolyhedrosisviruses）代表株為家蠶胞漿多角體病毒（Bombymoricytoplasmicpolyhedrosisvirus）。其它成員根據(jù)RNA基因組節(jié)段的電泳圖相可以分為12個(gè)型別：1型：從Bombymori分離2型：從Inachisio分離3型：從Spodopteraexempta分離4型：從Actiasselene分離5型：從Trichoplusiani分離6型：從Bistonbetularia分離7型：從Triphenapronuba分離8型：從Abraxasgrossulariata分離9型：從Agrotissegetum分離10型：從Aporophyllalutulenta分離11型：從Spodopteraexigua分離12型：從Spodopteraexempta分離可能成員還包括從大約150種