3/3藥物研發(fā)完成小試研究以后，進(jìn)入預(yù)中試或者中試生產(chǎn)階段，這一階段通常需要在藥廠完成，并遵守GMP關(guān)于設(shè)備的使用和清潔要求，清潔符合標(biāo)準(zhǔn)的基本原則是證明清潔方法能夠去除污染物或?qū)⑽廴窘档椭量山邮艿乃?。?dāng)單品種單獨(dú)生產(chǎn)線時(shí)，只要目視潔凈就可以，當(dāng)多產(chǎn)品共線生產(chǎn)時(shí)，則需要考慮上一品種在下一品種中的殘留，因?yàn)檫@些殘留可能產(chǎn)生副反應(yīng)或者毒副作用。所以在進(jìn)行清潔驗(yàn)證前要計(jì)算允許殘留限度（即檢驗(yàn)清潔是否合格的標(biāo)準(zhǔn)），有三個(gè)比較常用的計(jì)算殘留的方法，分別是基于毒理的限度、基于濃度的10ppm的限度和基于最低日治療劑量的千分之一的限度。1、基于毒理的限度標(biāo)準(zhǔn)2、基于濃度的10ppm的限度標(biāo)準(zhǔn)3、基于最低日治療劑量的千分之一的限度標(biāo)準(zhǔn)在計(jì)算清潔限度的時(shí)候需要注意所討論產(chǎn)品的日標(biāo)準(zhǔn)治療劑量（有效成分）和下一產(chǎn)品的日標(biāo)準(zhǔn)治療劑量（制劑）的區(qū)別，例如某制劑規(guī)格2ml:200mg，日治療劑量20mg/kg，成年標(biāo)準(zhǔn)體重50kg，那么日標(biāo)準(zhǔn)治療劑量（有效成分）為20mg/kg×50kg=1000mg，日標(biāo)準(zhǔn)治療劑量（制劑）為1000mg÷200mg×2ml=10g。清潔限度確定以后，進(jìn)行清潔方法驗(yàn)證，可根據(jù)《化學(xué)藥物質(zhì)量控制分析方法驗(yàn)證技術(shù)指導(dǎo)原則》和《中國(guó)藥典202x年版》9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則等制定驗(yàn)證內(nèi)容，驗(yàn)證指標(biāo)主要包括專屬性、檢測(cè)限、定量限、線性與范圍、儀器精密度、重復(fù)性、中間精密度、準(zhǔn)確度、溶液穩(wěn)定性和耐用性。1.溶液配制：1.1空白溶液：水1.2空白棉簽溶液：取2個(gè)棉簽放入具塞試管中，精密加入水10ml，密封，超聲10分鐘，取超聲后溶液過濾即得。1.3對(duì)照品溶液：精密稱取xxxx對(duì)照品xxmg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為擦拭限度對(duì)照品溶液。1.4供試品溶液：精密稱取xxxx（含量約為100%）約xxmg，置于100ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，在10*10cm的區(qū)域均勻涂布0.5ml，待溶劑揮干后，用2個(gè)棉簽擦拭，每個(gè)棉簽分別先橫向蛇形擦拭，再翻轉(zhuǎn)棉簽縱向蛇形擦拭，之后將2根擦拭棉簽放入具塞試管中，精密加入水10ml，密封，超聲10分鐘，取超聲后溶液過濾即得。2.方法學(xué)驗(yàn)證2.1專屬性取xxxx對(duì)照品溶液作為定位溶液。取空白溶液、定位溶液、空白棉簽溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。要求空白溶液及空白棉簽溶液對(duì)待測(cè)峰無干擾。待測(cè)峰與相鄰峰分離度大于1.5。2.2定量限取xxxx對(duì)照品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，根據(jù)測(cè)出的信號(hào)與基線噪音比，將對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，至信噪比(S/N)約為10時(shí)的濃度為定量限。按定量限濃度，重復(fù)配制6份溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。要求6次所得的色譜圖中待測(cè)物峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不得大于15%。2.3檢測(cè)限取xxxx對(duì)照品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，根據(jù)測(cè)出的信號(hào)與基線噪音比，將對(duì)照溶液逐級(jí)稀釋，至信噪比(S/N)約為3時(shí)的濃度為檢測(cè)限。2.4線性與范圍精密稱取xxxx對(duì)照品約xxmg，置10ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為xxxx對(duì)照品貯備液，分別精密量取0.2ml、0.5ml、1ml、1.5ml、2.0ml對(duì)照品貯備液置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，配制成20%、50%、100%、150%、200%擦拭限度的線性溶液，取各線性溶液與定量限溶液共同組成系列線性溶液。以對(duì)照品溶度為橫坐標(biāo)，以對(duì)照品溶度對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，要求相關(guān)系數(shù)R2數(shù)值不低于0.9900，y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子(A/C)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不得大于10.0%。2.5儀器精密度精密量取xxxx對(duì)照品溶液注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖。待測(cè)物峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不得大于10%。2.6準(zhǔn)確度在10*10cm的區(qū)域內(nèi)均勻涂布擦拭限度值80%、100%、120%的xxxx供試品溶液，每個(gè)溶液3份，待溶劑揮干后，用2個(gè)棉簽擦拭，每個(gè)棉簽分別先橫向蛇形擦拭，再翻轉(zhuǎn)棉簽縱向蛇形擦拭，之后將2根擦拭棉簽放入具塞試管中，精密加入水10ml，密封，超聲10分鐘，取超聲后溶劑過濾，作為回收率溶液；取回收率溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖，計(jì)算樣品的回收率，要求待測(cè)物回收率不低于70%，9個(gè)回收率相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不大于20%。2.7重復(fù)性取供試品溶液，共六份，分別進(jìn)樣。以儀器精密度中對(duì)照品溶液計(jì)算供試品溶液中待測(cè)成分的擦拭回收率。要求待測(cè)物擦拭回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不得大于15%。2.8中間精密度取供試品溶液，共六份，分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。以儀器精密度中對(duì)照品溶液計(jì)算供試品溶液中待測(cè)成分的擦拭回收率。要求換人、換儀器測(cè)定，要求連同重復(fù)性12份待測(cè)物擦拭回收率的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）不得大于20%。2.9溶液穩(wěn)定性取對(duì)照品溶液于室溫放置0、1、2、4、8、12h分別進(jìn)樣，記錄色譜圖。要求各時(shí)間點(diǎn)峰面積的