72型分光光度計(jì)原理72型分光光度計(jì)是可見光分光光度計(jì)，波長范圍為420nm?700nm，它由三大部分組成:磁飽和穩(wěn)壓器、光源、單色光器和測光機(jī)構(gòu)、微電計(jì)。其光學(xué)系統(tǒng)如圖5-11所示。72型分光光度計(jì)的基本依據(jù)是朗伯—比耳定律，它是根據(jù)相對測量原理工作的，即先選定某一溶劑作為標(biāo)準(zhǔn)溶液，設(shè)定其透光率為100%，被測試樣的透光率是相對于標(biāo)準(zhǔn)溶液而言的，即讓單色光分別通過被測試樣和標(biāo)準(zhǔn)溶液，二者能量的比值就是在一定波長下對于被測試樣的透光率。如圖所示，白色光源經(jīng)入射狹縫、反射鏡和透光鏡后，變成平行光進(jìn)入棱鏡，色散后的單色光經(jīng)鍍鋁的反射鏡反射后，再經(jīng)過透鏡并聚光于出射狹縫上，狹縫寬度為0.32nm。反射鏡和棱鏡組裝在一可旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)盤上并由波長調(diào)節(jié)器的凸輪所帶動(dòng)，轉(zhuǎn)動(dòng)波長調(diào)節(jié)器便可以在出光狹縫后面選擇到任一波長的單色光。單色光透過樣品吸收池后由一光量調(diào)節(jié)器調(diào)節(jié)為適度的光通量，最后被光電電池吸收，轉(zhuǎn)換成電流后由微電計(jì)指示，從刻度標(biāo)尺上直接讀出透光率的值。分光光度計(jì)已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。常用于核酸，蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。分光光度計(jì)的簡單原理分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光源透過測試的樣品后，部分光源被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。核酸的定量核酸的定量是分光光度計(jì)使用頻率最高的功能?？梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一，因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸，事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如：OD的吸光值分別相當(dāng)于50pg/ml的dsDNA,37pg/ml的ssDNA，40》g/ml的RNA，30pg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算，從而得出相應(yīng)的樣品濃度。測試前，選擇正確的程序，輸入原液和稀釋液的體積，爾后測試空白液和樣品液。然而，實(shí)驗(yàn)并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實(shí)驗(yàn)者最頭痛的問題。靈敏度越高的儀器，表現(xiàn)出的吸光值漂移越大。事實(shí)上，分光光度計(jì)的設(shè)計(jì)原理和工作原理,允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化，即儀器有一定的準(zhǔn)確度和精確度。如EppendorfBiophotometer的準(zhǔn)確度W1.0%(1A)。這樣多次測試的結(jié)果在均值1.0%左右之間變動(dòng)，都是正常的。另外，還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值，離子濃度等：在測試時(shí)，離子濃度太高，也會(huì)導(dǎo)致讀數(shù)漂移，因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液，如TE,可大大穩(wěn)定讀數(shù)。樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素：由于樣品中不可避免存在一些細(xì)小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了最大程度減少顆粒對測試結(jié)果的影響，要求核酸吸光值至少大于0.1A，吸光值最好在0.1T.5A。在此范圍內(nèi)，顆粒的干擾相對較小，結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低，或者過高(超過光度計(jì)的測試范圍)。最后是操作因素，如混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現(xiàn)負(fù)值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數(shù)漂移劇烈；必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品，否則濃度差異太大；換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致；不能采用窗口磨損的比色杯；樣品的體積必須達(dá)到比色杯要求的最小體積等多個(gè)操作事項(xiàng)。除了核酸濃度，分光光度計(jì)同時(shí)顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因?yàn)榈鞍椎奈辗迨?80nm。純凈的樣品，比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。A320檢測溶液的混濁度和其他干擾因子。純樣品，A320一般是0。蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。選擇Warburg公式，光度計(jì)可以直接顯示出樣品的濃度，或者是選擇相應(yīng)的換算方法，將吸光值轉(zhuǎn)換為樣品濃度。蛋白質(zhì)測定過程非常簡單，先測試空白液，然后直接測試蛋白質(zhì)。由于緩沖液中存在一些雜質(zhì)，一般要消除320nm的“背景”信息，設(shè)定此功能“開”。與測試核酸類似，要求A280的吸光值至少大于0.1A，最佳的線性范圍在1.0-1.5之間。實(shí)驗(yàn)中選擇Warburg公式顯示樣品濃度時(shí)，發(fā)現(xiàn)讀數(shù)“漂移”。這是一個(gè)正常的現(xiàn)象。事實(shí)上，只要觀察A280的吸光值的變化范圍不超過1%，表明結(jié)果非常穩(wěn)定。漂移的原因是因?yàn)閃arburg公式吸光值換算成濃度，乘以一定的系數(shù)，只要吸光值有少許改變，濃度就會(huì)被放大，從而顯得結(jié)果很不穩(wěn)定。蛋白質(zhì)直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質(zhì)的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。比色法蛋白質(zhì)定量蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物，比色法測定的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)構(gòu)成成分：氨基酸(如酪氨酸，絲氨酸)與外加的顯色基團(tuán)或者染料反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應(yīng)的氨基酸數(shù)目直接相關(guān)，從而反應(yīng)蛋白質(zhì)濃度。比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry等幾種方法。Lowry法：以最早期的Biuret反應(yīng)為基礎(chǔ)，并有所改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2+反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色的反應(yīng)物。但是與Biuret相比，Lowry法敏感性更高。缺點(diǎn)是需要順序加入幾種不同的反應(yīng)試劑；反應(yīng)需要的時(shí)間較長；容易受到非蛋白物質(zhì)的影響；含EDTA，Tritonx-100，ammoniasulfate等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。BCA(Bicinchoninineacidassay)法：這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應(yīng)產(chǎn)生Cu+，后者與BCA形成螯合物，形成紫色化合物，吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關(guān)系極強(qiáng)，反應(yīng)后形成的化合物非常穩(wěn)定。相對于Lowry法，操作簡單，敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質(zhì)之間以及去污劑的干擾。Bradford法：這種方法的原理是蛋白質(zhì)與考馬斯亮蘭結(jié)合反應(yīng)，產(chǎn)生的有色化合物吸收峰595nm。其最大的特點(diǎn)是，敏感度好，是Lowry和BCA兩種測試方法的2倍；操作更簡單，速度更快；只需要一種反應(yīng)試劑；化合物可以穩(wěn)定1小時(shí)，方便結(jié)果；而且與一系列干擾Lowry,BCA反應(yīng)的還原劑（如DTT,巰基乙醇）相容。但是對于去污劑依然是敏感的。最主要的缺點(diǎn)是不同的標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)導(dǎo)致同一樣品的結(jié)果差異較大，無可比性。某些初次接觸比色法測定的研究者可能為各種比色法測出的結(jié)果并不一致，感到迷惑，究竟該相信哪種方法？由于各種方法反應(yīng)的基團(tuán)以及顯色基團(tuán)不一，所以同時(shí)使用幾種方法對同一樣品得出的樣品濃度無可比性。例如：Keller等測試人奶中的蛋白，結(jié)果Lowry，BCA測出的濃度明顯高于Bradford，差異顯著。即使是測定同一樣品，同一種比色法選擇的標(biāo)準(zhǔn)樣品不一致，測試后的濃度也不一致。如用Lowry測試細(xì)胞勻漿中的蛋白質(zhì)，以BSA作標(biāo)準(zhǔn)品，濃度1.34mg/ml，以a球蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品，濃度2.64mg/ml。因此，在選擇比色法之前，最好是參照要測試的樣本的化學(xué)構(gòu)成，尋找化學(xué)構(gòu)成類似的標(biāo)準(zhǔn)蛋白作標(biāo)準(zhǔn)品。另外，比色法定量蛋白質(zhì)，經(jīng)常出現(xiàn)的問題是樣品的吸光值太低，導(dǎo)致測出的樣品濃度與實(shí)際的濃度差距較大。關(guān)鍵問題是，反應(yīng)后的顏色是有一定的半衰期，所以每種比色法都列出了反應(yīng)測試時(shí)間，所有的樣品（包括標(biāo)準(zhǔn)樣品），都必須在此時(shí)間內(nèi)測試。時(shí)間過長，得到的吸光值變小，換算的濃度值降低。除此，反應(yīng)溫度、溶液PH值等都是影響實(shí)驗(yàn)的重要原因。此外，非常重要的是，最好是用塑料的比色法。避免使用石英或者玻璃材質(zhì)的比色杯，因?yàn)榉磻?yīng)后的顏色會(huì)讓石英或者玻璃著色，導(dǎo)致樣品吸光值不準(zhǔn)確。細(xì)菌細(xì)胞密度（OD600）實(shí)驗(yàn)室確定細(xì)菌生長密度和生長期，多根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和目測推斷細(xì)菌的生長密度。在遇到要求較高的實(shí)驗(yàn)，需要采用分光光度計(jì)準(zhǔn)確測定細(xì)菌細(xì)胞密度。OD600是追蹤液體培養(yǎng)物中微生物生長的標(biāo)準(zhǔn)方法。以未加菌液的培養(yǎng)液作為空白液，之后定量培養(yǎng)后的含菌培養(yǎng)液。為了保證正確操作，必須針對每種微生物和每臺(tái)儀器用顯微鏡進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，做出校正曲線。實(shí)驗(yàn)中偶爾會(huì)出現(xiàn)菌液的OD值出現(xiàn)負(fù)值，原因是采用了顯色的培養(yǎng)基，即細(xì)菌培養(yǎng)一段時(shí)間后，與培養(yǎng)基反應(yīng)，發(fā)生變色反應(yīng)。另外，需要注意的是，測試的樣品不能離心，保持細(xì)菌懸浮狀態(tài)。比色杯按照材質(zhì)大致分為石英杯、玻璃杯以及塑料杯。根據(jù)不同的測量體積，有比色杯和毛細(xì)比色杯等。一般測試核酸和紫外定量蛋白，均采用石英杯或者玻璃杯，但是不適合比色法測定。因?yàn)榉磻?yīng)中的染料（如考馬斯亮蘭）能讓石英和玻璃著色，所以必須采用一次性的塑料杯。而塑料杯一般不適合用于在紫外范圍內(nèi)測試樣品。由于另外測試的樣品量不同，所以一般分光光度計(jì)廠家提供不同容積的比色杯以滿足用戶不同的需求。目前市場已經(jīng)存在一種既可用于核酸、紫外蛋白質(zhì)定量，亦可用于蛋白比色法測定的塑料杯，樣品用量僅需50“1,比色杯單個(gè)無菌包裝，可以回收樣品。如EppendorfUVette?塑料比色杯，是目前比色杯市場上一個(gè)革新。隨著生命科學(xué)以及相關(guān)學(xué)科發(fā)展，對此類科學(xué)的實(shí)驗(yàn)研究提出更高的要求，分光光度計(jì)將是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室不可缺少的儀器,也成為微生物、食品、制藥等相關(guān)實(shí)驗(yàn)室的必備設(shè)備之一。首先本質(zhì)區(qū)別是：紫外分光光度計(jì)主要做定量分析，通常用作物質(zhì)鑒定、純度檢查，有機(jī)分子結(jié)構(gòu)的研究。紅外分光光度計(jì)主要做定性分析，推測化合物的類型和結(jié)構(gòu)。檢測波長范圍完全不一樣。紅外分光光度計(jì)一般指的是指2.5-50微米（對應(yīng)波數(shù)4000--200厘米-1）之間的中紅外光譜，這是研究研究有機(jī)化合物最常用的光譜區(qū)域。紅外光譜法的特點(diǎn)是：快速、樣品量少（幾微克-幾毫克），特征性強(qiáng)（各種物質(zhì)有其特定的紅外光譜圖）、能分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的試樣以及不破壞樣品。紅外光譜儀是化學(xué)、物理、地質(zhì)、生物、醫(yī)學(xué)、紡織、環(huán)保及材料科學(xué)等的重要研究工具和測試手段，而遠(yuǎn)紅光譜更是研究金屬配位化合物的重要手段。原子吸收是利用原子或者離子外層電子對特定波長的光可以吸收，從而發(fā)生能級躍遷的原理。因?yàn)椴煌踊蛘唠x子的不同的電子躍遷要吸收特定波長的光，所以發(fā)射光經(jīng)過分光以后形成的單色光如果被吸收，則溶液中含有特定的原子或者離子。吸收的強(qiáng)度可以用來標(biāo)定溶液的濃度。紫外分光光度計(jì)的原理利用分子軌道上電子的能級躍遷。分子軌道上的電子能級躍遷也要吸收一定波長的光。因而將入射光分光以后檢測吸光的波長和吸光強(qiáng)度就可以用來定性和定量分析含有什么分子。利用的是分子軌道上電子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級的躍遷。一般只用來定性分析，定量分析效果不好。原理就是說分子軌道上電子的振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級的躍遷要吸收特定波長的光。722s分光光度計(jì)的工作原理Q最佳答案1、儀器的主要用途：在近紫外和可見光譜區(qū)域內(nèi)對樣品物質(zhì)作定性和定量的分析，是理化實(shí)驗(yàn)室常用分析儀器之一。2、儀器的工作環(huán)境：該儀器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5°C~35°C。使用時(shí)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺(tái)上，而且避免強(qiáng)烈震動(dòng)或持續(xù)震動(dòng)。室內(nèi)照明不宜太強(qiáng)，且避免日光直射。電風(fēng)扇不宜直接吹向儀器，以免影響儀器的正常使用。盡量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。2.6供給儀器的電源為220伏±10%,49.5—50Hz，并須裝有良好的接地線。宜使用100W以上的穩(wěn)壓器，以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。2.7避免在有硫化氫、亞硫酸氟等腐蝕性氣體的場所使用。3、主要技術(shù)性能及規(guī)格：光學(xué)系統(tǒng)：單光束、衍射光柵。波長范圍：330nm~800nm.。光源：鎢鹵素?zé)?2V30W。3.4接收元件：端窗式G1030光電管。3.5波長精度：±2nm。波長重現(xiàn)性：0.5nm。光譜帶寬：6nm。雜散光：1%（T）（在360nm處）。3.9透過率測量范圍：OTOO%(T)。3.10吸光度測量范圍：0-1.999(A)。3.11濃度直讀范圍：0-2000。3.12光度精度：3.12.1透過率線性精度土0.5%(T)。3.12.2吸光度精度土0.004A(在0.5A處)。3.13透過率重現(xiàn)性：0.5%(T)。噪聲：0.5%(T)(在550nm處)。電源：220伏±10%49.5-50HZ。外形尺寸：552mmX400mmX230mm。3.17凈重：22.5公斤。4、 儀器的工作原理4.1分光光度計(jì)的基本原理是溶液中的物質(zhì)在光的照射激發(fā)下，產(chǎn)生了對光吸收的效應(yīng)，物質(zhì)對光的吸收是具有選擇性的，各種不同的物質(zhì)都具有其各自的吸收光譜，因此當(dāng)某單色光通過溶液時(shí)，其能量就會(huì)被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系，也即符合于比色原理---比耳定律。T=I/ILogI0/I=KCLA=KCL其中：T透射比I0入射光強(qiáng)度I透射光強(qiáng)度A吸光度K吸收系數(shù)L溶液的光徑長度C溶液的濃度從以上的公式可以看出，當(dāng)入射光、吸收系數(shù)和溶液的光徑長度不變時(shí)，透過光是根據(jù)溶液的濃度而變化的，分光光度計(jì)的基本原理是根據(jù)上述之物理光學(xué)現(xiàn)象而設(shè)計(jì)的。5、 儀器的光學(xué)系統(tǒng)：722型光柵分光光度計(jì)采用光柵自準(zhǔn)式色散系統(tǒng)和單光束結(jié)構(gòu)光路。鎢燈發(fā)出的連續(xù)幅射經(jīng)濾色片選擇聚光鏡聚光后投向單色器進(jìn)狹縫,此狹縫正好處于聚光鏡及單色器內(nèi)準(zhǔn)直鏡的焦平面上，因此進(jìn)入單色器的復(fù)合光通過平面反射鏡反射及準(zhǔn)直鏡準(zhǔn)直變成平行光射向色散元件光柵，光柵將入射的復(fù)合光通過衍射作用形成按照一定順序均勻排列的連續(xù)單色光譜，此單色光譜重新回到準(zhǔn)直鏡上，由于儀器出射狹縫設(shè)置在準(zhǔn)直鏡的焦平面上，這樣，從光柵色散出來的光譜經(jīng)準(zhǔn)直鏡后利用聚光原理成象在出射狹縫上，出射狹縫選出指定帶寬的單色光通過聚光鏡落在試樣室被測樣品中心，樣品吸收后透射的光經(jīng)光門射向光電管陰極面。6、儀器的結(jié)構(gòu)：722型光柵分光光度計(jì)由光源室、單色器、試樣室、光電管暗盒、電子系統(tǒng)及數(shù)字顯示器等部件組成。光源室部件：氫燈燈架，鎢燈燈架，聚光鏡架，截止濾光片組架及氫燈接線架等各通過兩個(gè)螺絲固定在燈室部件底座上。氫燈及鎢燈燈架上裝有氫燈與鎢燈，分別作為紫外和可見區(qū)域的能量幅射源。氫燈、鎢燈的裝卸更換請參閱光源燈的更換章節(jié)。聚光鏡安裝在聚光鏡架上通過鏡架邊緣兩個(gè)定位螺絲及后背部的拉緊彈簧，角度校正頂針使其定值。當(dāng)需要改變聚焦光斑在單色器入射狹縫上下位置，可通過角度校正頂針進(jìn)行調(diào)整。聚光鏡下有一定位梢，旋轉(zhuǎn)鏡架可改變光斑在單色器入射狹縫左、右位置。為了消除光柵光譜中存在著級次之間的光譜重疊問題及當(dāng)在紫外區(qū)域使紫外幅射能量進(jìn)入單色器，在燈室內(nèi)安置了截止濾光片組。截止濾光片組通過柱頭螺絲固定在一聯(lián)動(dòng)軸上，改變?yōu)V光片組的前后位置可改變紫外能量幅射傳輸在聚光鏡上的方位。軸的另一端裝有一齒輪，用以齒合單色器部件波長傳動(dòng)機(jī)構(gòu)大滑輪上的齒輪，使截止濾光片組的選擇與波長值同步。單色器部件：單色器是儀器的心臟部分，布置在光源與試樣室之間，用三個(gè)螺絲固定在燈室部件上。單色器部板內(nèi)裝有狹縫部件，反光鏡組件、準(zhǔn)直鏡部件，光柵部件波長線性傳動(dòng)機(jī)構(gòu)等。狹縫部件：儀器入射、出射狹縫均采用寬度為0.9mm的等寬度雙刀片狹縫,通過狹縫固定螺絲固定在狹縫部件架上，狹縫部件是用兩個(gè)螺絲安裝在單色器架上。安裝狹縫時(shí)注意狹縫雙刀片斜面必須向著光線傳播方向，否則會(huì)增加儀器的雜散光。反光鏡組件安裝在入射狹縫部件架上，反光鏡采用一塊方形小反光鏡，通過組件架上的調(diào)節(jié)螺釘可改變?nèi)肷涔獾姆瓷浣嵌?，使光斑打在?zhǔn)直鏡上。準(zhǔn)直鏡部件：準(zhǔn)直鏡是一塊凹形玻璃球面鏡，裝在鏡座上，后部裝有三套精密的細(xì)牙調(diào)節(jié)螺釘。用來調(diào)整出射光聚焦于出射狹縫，以及出射于狹縫時(shí)光的波長與波長盤上所指示波長相對應(yīng)。光柵部件與波長傳動(dòng)機(jī)構(gòu)：光柵在單色器中主要起色散作用，由于光柵的色散是線性的，因此光柵可采用線性的傳動(dòng)機(jī)構(gòu)。722儀器采用扇形齒輪與波長轉(zhuǎn)動(dòng)軸上的齒輪相吻合，達(dá)到波長刻度盤帶動(dòng)光柵轉(zhuǎn)動(dòng)，改變儀器出射狹縫的波長值。另外在單色器由轉(zhuǎn)盤大、小滑輪及尼龍繩組成了一套波長聯(lián)動(dòng)機(jī)構(gòu)，大滑輪上的齒輪與截止濾光片轉(zhuǎn)軸上的齒輪齒合，使波長值與截止濾光片組同步。光柵安裝在光柵底座上，通過光柵架后的三個(gè)螺釘可改變光柵的色散角度。試樣室部件：試樣室部件由比色皿座架部件及光門部件組成。比色皿座架部件：整個(gè)比色皿座連滑動(dòng)座架通過底部三個(gè)定位螺絲全部裝在試樣室內(nèi)，滑動(dòng)座架下裝有彈性定位裝置，拉動(dòng)拉桿能正確地使滑動(dòng)座架帶動(dòng)四檔比色皿正確處于光路中心位置。光門部件：在試樣室的右側(cè)通過三個(gè)定位螺絲裝有一套光門部件，其頂桿露出盒右小孔，光門擋板依靠其本身重量及彈簧作用向下垂落至定位螺母，遮住透光孔，光束被阻擋不能進(jìn)入光電管陰極面，光路遮斷，儀器可以進(jìn)行零位調(diào)節(jié)。當(dāng)關(guān)上試樣室蓋時(shí)，頂桿便向下壓緊，此時(shí)頂住光門擋板下端。在杠桿作用下，使光門擋板上抬，打開光門，可調(diào)整100%進(jìn)行測量工作。光電管暗盒部件：整個(gè)光電管暗盒部件通過四個(gè)螺釘固定在儀器底座上。部件內(nèi)裝有光電管、干燥劑筒及微電流放大器電路板。光電管采用插入式G1030型端窗式光電管，其管腳共有14個(gè)，其中4、8兩腳為光電陰極，1、6、10、12四腳為陽極。7、儀器的安裝使用與維護(hù)使用儀器前，使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個(gè)操作旋鈕之功能。在未接通電源前，應(yīng)該對于儀器的安全性進(jìn)行檢查，電源線接線應(yīng)牢固。接地要良好，各個(gè)調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確，然后再接通電源開關(guān)。儀器在使用前先檢查一下，放大器暗盒的矽膠干燥筒（在儀器的左側(cè)），如受潮變色，應(yīng)更換干燥的藍(lán)色矽膠式或者倒出原矽膠，烘干后再用。儀器經(jīng)過運(yùn)輸和搬運(yùn)等原因，會(huì)影響波長精度，吸光度精度，請根據(jù)儀器調(diào)校步驟進(jìn)行調(diào)整，然后投入使用。將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔（放大倍率最?。?.3開啟電源，指示燈亮，選擇開關(guān)置于“T”，波長調(diào)置測試用波長，儀器預(yù)熱20分鐘。打開試樣室蓋（光門自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié)“0”旋鈕，使數(shù)字顯示為“00.0”蓋上試樣室蓋,將比色皿架處于蒸餾水校正位置,使光電管受光，調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕，使數(shù)字顯示為“100.0”如果顯示不到“100.0”，則可適當(dāng)增加微電流放大器的倍率檔數(shù)，但盡可能倍率置低檔使用，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性，但改變倍率后必須按（4）重新校正“0”和“100%”。預(yù)熱后，按（4）連續(xù)幾次調(diào)整“0”和“100%”，儀器即可進(jìn)行測定工作。7.7吸光度A的測量按（4）調(diào)整儀器“00.0”和“100%”，將選擇開關(guān)置于“A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)節(jié)器調(diào)零旋鈕，使得使得數(shù)字顯示為“．000”，然后將被測樣品移入光路，顯示值即為被測樣品的吸光度的值。7.8濃度C的測量：選擇開關(guān)由“A”旋置“C”，將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路,調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值，將被測樣品放入光路，即可讀出被測樣品的濃度值。如果大幅度改變測試波長時(shí)，在調(diào)整“0”和“100%”后稍等片刻，（因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間），當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“0”和100%即可工作。每臺(tái)儀器所配套的變色皿，不能與其它儀器上的比色皿單個(gè)調(diào)換。7.11本儀器數(shù)字表后蓋，有信號(hào)輸出0-1000MV,插座1腳為正，2腳為負(fù)接地線。7.12儀器的維護(hù)：7.12.1為確保儀器穩(wěn)定工作在電壓波動(dòng)較小的地方，220V電源預(yù)先穩(wěn)壓，宜備220V穩(wěn)壓器一只（磁飽和式或電子穩(wěn)壓式）。7.12.2當(dāng)儀器工作不正常時(shí)，如數(shù)字表無亮光，光源燈不亮，開關(guān)指示燈無信號(hào)，應(yīng)檢查儀器后蓋保險(xiǎn)絲是否損壞，然后查電源線是否接通，再查電路。7.12.3儀器要接地良好。7.12.4儀器左側(cè)下角有一只干燥筒，應(yīng)保持其干燥性，發(fā)現(xiàn)變色立即更新或加以烘干再用。7.12.5另外有二包硅膠放在樣品室內(nèi)，當(dāng)儀器停止使用后，也應(yīng)該定期更新烘干。當(dāng)儀器停止工作時(shí)，切斷電源，電源開關(guān)同時(shí)切斷。為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時(shí)間內(nèi)，用塑料套子罩住整個(gè)儀器，在套子內(nèi)應(yīng)放數(shù)袋防潮硅膠，以免燈室受潮、反射鏡鏡面發(fā)霉點(diǎn)或沾污，影響儀器能量。7.12.8儀器工作數(shù)月或搬動(dòng)后，要檢查波長精度和吸光度A精度等方面，以確保儀器的正常使用和測定精度。8、儀器的調(diào)校和故障修理儀器使用較長時(shí)間后，與同類型的其它儀器一樣，可能發(fā)生一些故障，或者儀器的性能指標(biāo)有所變化，需要進(jìn)行調(diào)校或修理，現(xiàn)分別簡單介紹如下，以供使用維護(hù)者參考。儀器的調(diào)整鎢燈的更換和調(diào)整：光源燈是易損件，當(dāng)損件更換或由于儀器搬運(yùn)后均可能偏離正常位置，為了使儀器有足夠的靈敏度，如何正確地調(diào)整光源燈的位置則顯得更為重要，用戶在更換光源燈時(shí)應(yīng)帶上手套，以防沾污燈殼而影響發(fā)光能量。722儀器的光源燈采用12V30W插入式鎢鹵素?zé)簦鼡Q鎢燈時(shí)應(yīng)先切斷電源，然后用附件中的扳手旋松鎢燈架上的二個(gè)緊固螺絲，取出損壞的鎢燈，換上鎢燈后，將波長選擇在550mm左右，開啟主機(jī)電源開關(guān)，移動(dòng)鎢燈上、下、左、右位置，直到成象在入射狹縫上。選擇適當(dāng)?shù)撵`敏度開關(guān)，觀察數(shù)字表讀數(shù)，經(jīng)過調(diào)整至數(shù)字表讀數(shù)為最高即可。最后將二緊固螺絲旋緊。注意：二緊固螺絲為鎢燈穩(wěn)壓電源的輸出電壓，當(dāng)鎢燈點(diǎn)亮?xí)r，千萬不能短路，否則會(huì)損壞鎢燈穩(wěn)壓電源電路元件。波長精度檢驗(yàn)與校正：采用鐠釹濾色片529納米及808納米二個(gè)特征吸收峰，通過逐點(diǎn)測試法來進(jìn)行波長檢定與校正。本儀器的分光系統(tǒng)采用光柵作為色散元件，其色散是線性的，因此波長分度的刻度也是線性的。當(dāng)通過逐點(diǎn)測試法記錄下的刻度波長與鐠釹濾色片特征吸收.波長值超出誤差，則可卸下波長手輪