大豆異黃酮脂質體的包封率測定及其物理性質檢測大豆異黃酮脂質體的包封率測定及其物理性質檢測

基金工程：吉林農業(yè)科技學院青年基金工程〔工程編號：吉農院合字[2022]第231號〕；吉林農業(yè)科技學院省級大學生科技《《新科研工程〔工程編號：吉農院合字[2022]第013號〕

中圖分類號：R927文獻標識碼：ADOI編號：10.14025/jki.jlny.2022.10.021

大豆異黃酮〔soybeanisoflavone〕是從豆科植物大豆中提取的一類化學物質，屬于黃酮類化合物中的異黃酮類成分，具有苦澀味和收斂性[1]。大豆異黃酮在常溫下性質穩(wěn)定，可溶于醇類、酯類和酮類，難溶于石油醚、正己烷等[2]。大豆異黃酮與雌激素結構類似，可與雌激素受體α、β結合，具有類雌激素活性和抗雌激素活性，可降低骨質疏松發(fā)生，預防乳腺癌，預防心血管疾病，改善婦女絕經期綜合癥的作用[3]。

脂質體〔liposome〕是采用磷脂及膽固醇等原料，通過合適的制備辦法形成一種類似生物膜結構的包裹藥物的雙分子小囊[4]。脂質體結構能夠降低藥物的打消速率，延長藥物作用時間，增加藥物的體內外穩(wěn)定性，而且藥物被包封于脂質體內，能夠降低藥物毒性，增強藥理作用[5]。鑒于此，本實驗選用脂質體作為大豆異黃酮的載體，將其制備成脂質體，從而發(fā)揮藥物的最正確治療作用。

1材料

1.1藥品與主要試劑

大豆苷元規(guī)范品，純度98%〔美國Sigma公司〕。大豆異黃酮〔含量為80%，大連綠峰食品有限公司〕。高純度大豆磷脂〔德國德固賽公司〕。膽固醇〔上海東尚實業(yè)有限公司〕。乙醇〔分析純〕。

1.2主要儀器

SP-756P紫外可見分光光度計〔上海光譜儀器有限公司〕。Scientz-ⅡD型超聲波細胞粉碎機〔寧波新芝生物科技股份有限公司〕。SartoriusBT25S電子天平〔德國Sartorius公司〕。HJ-6A型數(shù)顯恒溫多頭磁力攪拌器〔江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司〕。TECNAIG2型透射電子顯微鏡〔荷蘭飛利浦公司〕。

2辦法

2.1大豆異黃酮脂質體的制備

稱取處方量的大豆磷脂、膽固醇和大豆異黃酮，置于燒杯中，參加乙醚溶液15.0毫升，攪拌使其溶解，最后參加pH值為7.4的PBS緩沖液3.0毫升，形成兩相系統(tǒng)。將燒杯放入超聲波細胞粉碎機內冰浴超聲7分鐘，倒入茄型瓶中，置于旋轉蒸發(fā)儀上，在水浴25℃環(huán)境下，減壓旋轉蒸發(fā)除去乙醚，再參加pH值為7.4的PBS緩沖液10.0毫升，置于旋轉蒸發(fā)儀上旋轉2小時，以分散脂質體，制得溶液用0.22μm微孔濾膜過濾即可。

2.2脂質體粒子形態(tài)察看

用pH值為7.4的PBS緩沖液將大豆異黃酮脂質體稀釋50倍，然后滴加到有支持膜的銅網上，再用2%磷鎢酸進行染色，晾干，用透射電子顯微鏡察看粒子形態(tài)。

2.3脂質體pH值的測定

大豆磷脂為不飽和磷脂，易氧化水解，其氧化水解速率受pH值的影響較大，文獻報道磷脂成分均在pH值為6.5時最穩(wěn)定，用pH值測定儀測定大豆異黃酮脂質體的pH值，評價其穩(wěn)定性。

2.4包封率的測定

2.4.1規(guī)范品溶液的配制取大豆苷元規(guī)范品6.0毫克，置于50毫升容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度，得到濃度為120μg《mL-1規(guī)范品儲藏液，備用。

2.4.2規(guī)范曲線的制備用移液管量取規(guī)范品儲藏液0.5毫升、1.0毫升、1.5毫升、2.0毫升、2.5毫升、3.0毫升，分別置于10毫升容量瓶中，用50%乙醇稀釋并定容，得到濃度分別為6μg《mL-1、12μg《mL-1、18μg《mL-1、24μg《mL-1、30μg《mL-1、36μg《mL-1的溶液。用紫外分光光度計在260nm波長下[6]分別測其吸光度，以濃度〔C〕為橫坐標，吸光度〔A〕為縱坐標繪制規(guī)范曲線。

2.4.3加樣回收率的測定取大豆異黃酮樣品4.0毫克，置于100毫升容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度。取1.0毫升該溶液置于10毫升容量瓶中，分別加規(guī)范品儲藏液0.5毫升、1.0毫升、2.0毫升混勻后定容至刻度，在260nm下測定吸光度，計算加樣回收率。

2.4.4重復性實驗取大豆異黃酮樣品4.0毫克，置于100毫升容量瓶中，用50%乙醇溶解并定容至刻度。在260nm下測定吸光度，重復測定6次，計算RSD。

2.4.5脂質體包封率測定將大豆異黃酮脂質體1.0毫升置于已處理過的透析袋中，封口，將其置于100毫升pH值為7.4的PBS緩沖液中，室溫下磁力攪拌透析4.5小時，透析結束后，將透析袋內樣品全部取出，轉移至50毫升容量瓶中，參加1.0毫升10%TritonX-100乙醇溶液，充沛震蕩，然后再參加50%乙醇定容至刻度，用紫外分光光度計測其吸光度，計算被包裹的大豆異黃酮含量。另取1.0毫升大豆異黃酮脂質體，置于50毫升容量瓶中，參加1.0毫升10%TritonX-100乙醇溶液，充沛震蕩，然后再參加50%乙醇定容至刻度，用紫外分光光度計測其吸光度，測定大豆異黃酮的投藥量。按計算大豆異黃酮的包封率。

計算公式：包封率%=被包裹大豆異黃酮含量/大豆異黃酮總投藥量×100%

2.5穩(wěn)定性的測定

取大豆異黃酮脂質體3批樣品，分別于4℃和25℃條件下保留30天，以包封率為主要指標，同時察看外觀狀態(tài)變化，考察大豆異黃酮脂質體的穩(wěn)定性。3結果

3.1大豆異黃酮脂質體的外觀形態(tài)

制備的大豆異黃酮脂質體為乳白色的澄清液體，無沉淀及粒子存在，圖1為大豆異黃酮脂質體的外觀。

3.2大豆異黃酮脂質體的粒子形態(tài)

用透射電子顯微鏡察看制備的脂質體，粒子為類球形，分布較為均勻，圖2為脂質體顯微照片。

3.3大豆異黃酮脂質體的pH值測定

測得大豆異黃酮脂質體的pH值為6.18，根本合乎要求。

3.4大豆異黃酮脂質體的包封率測定結果

3.4.1規(guī)范曲線的繪制規(guī)范曲線見圖3，經計算得線性回歸方程A=0.0878C+0.2985，R2=0.9994說明大豆異黃酮在6～36μg《mL-1范圍內與吸光度具有良好的線性關系。

3.4.2加樣回收率結果經測定平均回收率104.0%，RSD為2.84%，說明此辦法可靠。

3.4.3重復性實驗結果樣品中大豆異黃酮平均百分含量為78.76%，RSD為0.27%，說明對樣品中大豆異黃酮的測定辦法穩(wěn)定。

3.4.4大豆《《黃酮脂質體的包封率測定結果脂質體的平均包封率為41.25%±0.30%。

3.5大豆異黃酮脂質體的穩(wěn)定性測定結果

脂質體在30天內外觀均勻，無絮凝和沉淀產生。在4℃和25℃條件下寄存前15天，包封率幾乎沒有變化，15天以后包封率逐漸下降，30天內4℃時脂質體包封率累計下降