植物生理學實驗操作部分第1頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五實驗一淀粉酶的提取及作用原理：

1.淀粉淀粉酶水解藍色糊精紅色糊精無色糊精麥芽糖葡萄糖

2.葡萄糖+斐林試劑Cu2O↓(磚紅色）第2頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五植物材料與實驗器具：植物材料：

萌動的小麥實驗器具：

試管；玻棒；量筒；研缽；漏斗；電爐；水浴鍋試劑：

2%淀粉溶液；稀I-KI溶液（原液稀釋5倍）；斐林試劑

第3頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：1.

取5-10粒萌動的小麥種子放入研缽中，用量筒取10ml蒸餾水作為淀粉酶提取液總量（包括研缽清洗、種子研磨），分三次加入，將小麥研成漿狀，用脫脂棉過濾于試管中,搖勻。濾液靜置5-10min,上清液為淀粉酶的提取液。第4頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：2.

取2只刻度試管做標記A管、B管A管：2ml2%淀粉液+2ml蒸餾水38℃

B管：2ml2%淀粉液+2ml淀粉酶提取液20min加I-KI2~3滴觀察并比較兩管顏色變化。

第5頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五

3.B管+3ml斐林試劑沸水浴

2~5min

觀察顏色變化作業(yè)：

1.記錄觀察結(jié)果并作必要的分析。

操作步驟：第6頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五實驗二植物組織水勢的測定原理：

根據(jù)滲透作用的原理，用小液滴法測得蔗糖溶液與植物組織中之間的等滲濃度，根據(jù)公式ΨW(細胞水勢)=Ψs=—CRT求得溶液的水勢，從而得知植物組織的水勢。第7頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五材料與實驗器具：植物材料：女貞葉片實驗器具：細滴管；試管及指形管；燒杯；鑷子、剪刀；移液管；標簽紙試劑：1mol/L蔗糖溶液；甲烯藍溶液

第8頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：1.用短滴管吸取1M蔗糖溶液取0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml分別放入10ml刻度試管中，加蒸餾水至10ml，蓋上塞子上下倒轉(zhuǎn)混勻，配成0.05M、0.1M、0.2M、0.3M、0.4M的糖液。第9頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：2.用移液管從濃度各試管中吸出1ml注入對應的指形管內(nèi)，各管均加塞，并貼上標簽。第10頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：3.將女貞葉片在疊在一起，沿中脈兩邊用鉆孔器打取10片小圓片，分別放入小指形管內(nèi)，蓋上木塞，放置20min(期間搖動2~3次）后，加甲烯藍2滴搖勻。第11頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：4.用長滴管吸取著色溶液放入原相應的蔗糖溶液中，慢慢放出一滴藍色溶液，在白色紙片上觀察小液滴升降情況，并作記錄。第12頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五

作業(yè)：1.記錄小溶液濃（mol/L）0.050.10.20.30.4小液流方向

解釋

第13頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五作業(yè)：2.按下列公式計算組織的水勢：ΨW(細胞水勢)=Ψs=—CRT式中：Ψs——

溶液的滲透勢，以MPa為單位。R——氣體常數(shù)，為0.008314MPa·L/（mol·K）。T——絕對溫度，即273+t℃,單位為K。C——溶液的摩爾濃度，以mol/L為單位。第14頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五

思考題：1.用小液流法測定植物組織水勢時，為什么應強調(diào)所用試管、毛吸管應保持干燥2.打取小圓片并投入試管中時動作應迅速，加入甲烯藍不能太多？第15頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五實驗三葉綠素含量的測定原理：根據(jù)朗伯—比爾定律，某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比。葉綠素在652nm(混合）、663nm、645nm有最大吸收峰。根據(jù)在分光光度計下測定的吸光度，求得葉綠素的含量。第16頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五材料與實驗器具：植物材料：

女貞、海桐葉片

實驗器具：

分光光度計；電子天平；研缽；試管；小漏斗；濾紙；吸水紙；移液管；量筒；剪刀試劑：

95％乙醇（或80％丙酮）；石英砂；碳酸鈣粉第17頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：1.稱取剪碎的新鮮樣品0.1g左右，放入研缽中，加少量石英砂和碳酸鈣粉及3～5ml95％乙醇，研成均漿，繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3～5min。第18頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：2.

取濾紙1張，置漏斗中，用乙醇濕潤，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，過濾到10ml試管中，用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘渣數(shù)次，最后連同殘渣一起倒入漏斗中。第19頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：

3.用滴管吸取乙醇，將濾紙上的葉綠體色素全部洗入漏斗中。直至濾紙和殘渣中無綠色為止。最后用乙醇定容至10ml，搖勻。第20頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：4.把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95％乙醇為空白，在波長663nm、645nm下或652nm測定吸光度。

第21頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：5.計算公式：葉綠素的含量（mg/g）=[O.D652/34.5×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重（或干重）。Ca=13.95A663－6.88A645；Cb=24.96A645－7.32A663

第22頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五作業(yè)：1.計算并比較兩種植物葉綠素含量。思考題：

為什么提取葉綠素時干材料一定要用80％的丙酮，而新鮮的材料可以用無水丙酮提??？

第23頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五實驗六過氧化氫酶活力測定原理：

過氧化氫酶（catalase）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化H2O2分解為水和O2

，可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶的活力大小。用標準高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的過氧化氫。即可求出消耗的H2O2的量。

第24頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五KMnO4與H2O2反應方程式如下：

5H2O2+2KMnO4+3H2SO4→K2SO4+MnSO4+8H2O+5O2第25頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五材料與實驗器具：植物材料：海桐莖、葉片等

實驗器材：

研缽；電爐；水浴鍋；酸式滴定管；量筒；錐形瓶；漏斗；試管；移液管試劑：

0.1mol/L高錳酸鉀標準液；1%H2O2；10%H2SO4；CaCO3

粉第26頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：1.

酶液提?。喝∪~片0.5g（或莖）加入少量蒸餾水，加CaCO3

粉及石英砂少許，研磨成勻漿，再加蒸餾水至總量25ml，在室溫下浸提10分鐘，不時搖動，用脫脂棉過濾于小燒杯中,靜置上清液即為過氧化氫酶的粗提液。第27頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：2.吸取5ml酶提取液放入一試管中，置沸水中加熱5分鐘，使酶失活。3.取50ml三角瓶2個（1個測定,另1個為對照）失活酶液(對照)CAT酶液+20ml蒸餾水+1%1mlH2O2

搖勻40度水浴反應（10min）+2ml10%H2SO4終止反應0.1mol/LKMnO4滴定第28頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：4.滴定終點以瓶中溶液保持淺紅色20秒不消失為準,記錄所用的高錳酸鉀的量。5.酶活性用每g鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的mg數(shù)表示：

過氧化氫酶活性（H2O2mg/g.min）＝（A－B）×VT×1.7/(W×VS×t)

第29頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五操作步驟：

式中：A對照KMnO4滴定ml數(shù)；B酶反應后KMnO4滴定ml數(shù)；VT提取酶液總量（ml）；VS反應時所用酶液量（ml）；W樣品鮮重（g）；t反應時間（min）；1.7為1ml0.1mol/LKMnO4相當于1.7mgH2O2。

第30頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五作業(yè)：計算CAT活性的大小。查找資料測定CAT其它的方法。思考題：實驗中加碳酸鈣的作用是什么？第31頁，共34頁，2023年，2月20日，星期五實驗四葉綠素的提取、分離

及化學性質(zhì)鑒定實驗目的：

掌握植物中葉綠體色素的成分分離和定性、定量分析的原理和方法。一、提取、分離原理：1、溶解性。