生化分析儀的基礎(chǔ)與應(yīng)用第1頁(yè)/共89頁(yè)生化分析離不開(kāi)生化分析儀。所謂生化分析一般是指以吸光光度分析為基礎(chǔ)的（有的包含離子選擇電極等測(cè)定方法）、具有樣品取樣及加試劑、混合、保溫反應(yīng)等測(cè)定。分析過(guò)程監(jiān)控和數(shù)據(jù)處理及輸出能力的半自動(dòng)或全自動(dòng)儀器。它們的分析方法都以儀器和試劑為基礎(chǔ)，以方法學(xué)為指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)規(guī)范，以試驗(yàn)參數(shù)來(lái)聯(lián)系體現(xiàn)。所以，首先必須了解儀器、試劑和方法學(xué)的原理及特點(diǎn)，其次是利用方法學(xué)評(píng)價(jià)對(duì)儀器、試劑及參數(shù)在實(shí)踐中作評(píng)價(jià)，以保證分析的精密度和準(zhǔn)確度，提高成本效益。第2頁(yè)/共89頁(yè)實(shí)驗(yàn)證明，單色光經(jīng)過(guò)有色溶液時(shí)，透過(guò)溶液的光強(qiáng)度不僅與溶液的濃度有關(guān)，而且還與溶液的厚度以及溶液本身對(duì)光的吸收性能有關(guān)。其規(guī)律可用下式表示為

A＝KCL

式中：A（E）——吸光度（或叫做光密度，也可用D表示）；

K——某溶液的消光（吸收）系數(shù)；

C——溶液的濃度；

L——光程，即溶液的厚度?？梢?jiàn)、收光譜法的定量基礎(chǔ)是朗伯比爾（Lambert-Beer）定律：

A=lgIo/It=-lgT=lg1/T第3頁(yè)/共89頁(yè)即當(dāng)一束強(qiáng)度為L(zhǎng)的平行單色光通過(guò)一個(gè)含有濃度為C的吸光物質(zhì)、厚度為L(zhǎng)的吸收他時(shí)，光的一部分被吸收，光強(qiáng)度從IO減小至It。當(dāng)吸光系數(shù)k一定時(shí)，透過(guò)光與濃度或厚度呈指數(shù)函數(shù)關(guān)系，但吸光度（absorbance，A）與濃度或厚度呈簡(jiǎn)單的正比關(guān)系。在濃度、厚度、單色光波長(zhǎng)、溶劑及其溫度等相同條件下，不同吸光物質(zhì)的吸光度不同，即它們的吸光系數(shù)不同。第4頁(yè)/共89頁(yè)是物質(zhì)的特性常數(shù)，它只和該物質(zhì)分子在基態(tài)和激發(fā)態(tài)之間的躍遷幾率有關(guān)。它的物理意義是吸光物質(zhì)在單位濃度及單位厚度時(shí)的吸光度，常用的表示方式是摩爾吸光系數(shù)（molarabsorptivity）。摩爾吸光系數(shù)即1摩爾濃度的溶液在厚度為1cm時(shí)的吸光度。在吸光度與濃度之間的直線關(guān)系中，吸光系數(shù)是斜率，其值愈大，測(cè)定靈敏度愈高。第5頁(yè)/共89頁(yè)應(yīng)用注意點(diǎn)：

1．由于物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的光有不同的吸光系數(shù)，Beer定律成立的重要前提之一是單色光，即只有一種波長(zhǎng)的光。但在實(shí)際測(cè)定中，入射光常常并非嚴(yán)格的單色光，常有不同波長(zhǎng)的輻射同時(shí)存在。此種多色輻射是使測(cè)定中吸光度的變化偏離Beer定律（常為負(fù)偏離）的主要光學(xué)影響因素。單色光的純度可用譜帶寬度（bandwidth）衡量。第6頁(yè)/共89頁(yè)單色光源是用分光光度計(jì)由單色器或?yàn)V光片從連續(xù)光譜的多色光中選擇的、最大吸收波長(zhǎng)λmax在內(nèi)的一小段波長(zhǎng)范圍的復(fù)合光。以譜帶寬度較小、吸收峰較寬的λmax作為測(cè)定條件。

2．Beer定律一般適用于稀溶液的測(cè)定有兩層含義：被測(cè)物的濃度不宜過(guò)大，其吸光度應(yīng)在相對(duì)測(cè)量誤差較小的區(qū)域；溶液在反應(yīng)中存在化學(xué)平衡，受濃度、pH、溶劑和溫度等因素的影響。第7頁(yè)/共89頁(yè)3．介質(zhì)不均勻引起偏離當(dāng)待測(cè)試液是膠體溶液、乳濁液或懸浮液時(shí)，入射光因一部分散射損失，使透光率減小，實(shí)測(cè)吸光度增加。比濁法及免疫濁度反應(yīng)的特點(diǎn)比濁法與可見(jiàn)、紫外吸收光譜法不同，它們不是測(cè)定澄清溶液而是測(cè)定懸浮液或膠體溶液中物質(zhì)的濃度，分析的光學(xué)基礎(chǔ)是分散顆粒對(duì)光的反射、折射、散射和吸收等多種作用。生化分析儀通過(guò)免疫比濁法等技術(shù)，架起臨床生化與現(xiàn)代免疫技術(shù)的橋梁，免疫化學(xué)法的應(yīng)用日益廣泛。第8頁(yè)/共89頁(yè)1．比濁法的分類(lèi)及原理在光源的光路方向上測(cè)量透射光（實(shí)際包括透射光和散射光）強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度的比值和被檢溶液中顆粒濃度間的關(guān)系，稱為透射比濁法（turbidimetry）。在光路的一定角度（一般為5o－90o）方向上測(cè)量散射光強(qiáng)度和被檢溶液中顆粒濃度間的關(guān)系，稱為散射比濁法（nephelometry）。透射比濁法的計(jì)算公式是：

In（IO／I）＝τb令τ=2．3kclgIo/I＝kbc第9頁(yè)/共89頁(yè)

即當(dāng)一束強(qiáng)度為Io的平行光通過(guò)一個(gè)散射顆粒濃度為c混濁介質(zhì)厚度為b的稀的懸浮液后，人射光被吸收和散射，光強(qiáng)度衰減至I，在濁度系數(shù)為τ時(shí)，透過(guò)率與顆粒濃度呈線性關(guān)系。散射光強(qiáng)度與懸浮液或膠體溶液中的顆粒質(zhì)點(diǎn)大小、入射光波長(zhǎng)大小及二者的比例有關(guān)。顆粒直徑接近或大于光源波長(zhǎng)時(shí)，常呈透射光和光路上的向前散射光，其散射光強(qiáng)度與入射光強(qiáng)度的關(guān)系遵從Mie散射理論，光散射隨波長(zhǎng)的變化小。顆粒遠(yuǎn)小于光源波長(zhǎng)（d小于0．05λ）時(shí)常呈偏離光路方向、900對(duì)稱分布的散射光，其散射光強(qiáng)度與人射光強(qiáng)度的關(guān)系符合Rayleigh散射定律，波長(zhǎng)愈短，散射光愈強(qiáng)。第10頁(yè)/共89頁(yè)

一般比濁法的靈敏度不如可見(jiàn)、紫外吸收光譜法，但免疫濁度法的敏感度約為50ng／rnl。聚合劑（如聚乙二醇6000－10000）可提高免疫復(fù)合物的形成速度。膠乳增強(qiáng)免疫濁度法（latexenhancedturhidimetricimmunoassay）由于采用顆粒較大、折光性強(qiáng)的膠乳，將抗體經(jīng)吸附或共價(jià)交聯(lián)反應(yīng)固定于膠乳表面，增加抗原抗體凝聚體積，減少透過(guò)光，使靈敏度提高到近1ng／ml水平。散射比濁法的靈敏度比透射比濁法高，但干擾因素較多。比濁法的精密度相近，變異系數(shù)為1％－5．5％。目前，由于技術(shù)發(fā)展，兩種比濁法的靈敏度和特異性已接近，而全自動(dòng)生化儀的自動(dòng)化程度和精密度要?jiǎng)儆趯Ｓ蒙⑸浔葷醿x，故透射免疫比濁法在臨床上的應(yīng)用日益廣泛。速率法的靈敏度和特異性都優(yōu)于終點(diǎn)法，但終點(diǎn)法的穩(wěn)定性較好。第11頁(yè)/共89頁(yè)2．免疫濁度反應(yīng)的特點(diǎn)抗原抗體反應(yīng)與其他化學(xué)反應(yīng)不同，在免疫濁度反應(yīng)中，抗原抗體復(fù)合物的生成量和生成顆粒的大小，與反應(yīng)體系中抗原抗體的比例關(guān)系極大抗原相對(duì)不足時(shí)，生成的免疫復(fù)合物沉淀量少；抗原抗體比例合適時(shí)，復(fù)合物生成量達(dá)到峰值；抗原過(guò)量時(shí)，復(fù)合物反而再溶解，沉淀量下降。臨床上免疫比濁法多用抗體測(cè)定抗原，保證抗體足量、防止抗原過(guò)量是基本的方法學(xué)條件。要使在臨床常見(jiàn)的高抗原濃度范圍內(nèi)（至少高于正常參考上限50％）抗體也足以與之反應(yīng)，只有這樣，抗原抗體復(fù)合物的生成量才隨抗原的增加而遞增，光散射的強(qiáng)度才與抗原量成比例。抗體不足時(shí)，測(cè)定結(jié)果往往偏低。第12頁(yè)/共89頁(yè)3．應(yīng)用注意點(diǎn)（l）若懸浮顆粒本身具有特征吸收，則吸收作用是主要的，宜選擇最大吸收波長(zhǎng)作比濁測(cè)定；若懸浮顆粒本身無(wú)特征吸收而介質(zhì)對(duì)人射光有吸收，則測(cè)定必須選擇在高透光度的波長(zhǎng)區(qū)。若懸浮顆粒?。叫∮?5nm），溶液濁度小，透射比大于90%，不宜選用透射比濁法，應(yīng)選擇散射比濁法測(cè)定。第13頁(yè)/共89頁(yè)（2）透射比濁時(shí)，35－100nm大小的微粒在波長(zhǎng)290－410nrn下有最大吸收峰，免疫復(fù)合物的大小大致在此范圍。散射比濁時(shí)，較大的散射光角度適用于35－100nrn大小的微粒，較小的散射光角度適用于100－800nrn間的微粒。血漿中的白蛋白、β脂蛋白、免疫球蛋白等微粒直徑多在50nrn以下，其散射光是對(duì)稱的。IgM、乳糜顆粒、免疫反應(yīng)初期產(chǎn)生的抗原抗體復(fù)合物等顆粒的直徑在50-400nrn，都屬顆粒直徑接近或大于光源波長(zhǎng)這一類(lèi)，其散射光是不對(duì)稱的。第14頁(yè)/共89頁(yè)

（3）非特異性光散射的影響：免疫濁度法常受內(nèi)源性光散射的干擾。血清中的乳糜微粒、VLDL、LDL以及反應(yīng)體系中的顆粒都會(huì)產(chǎn)生雜散光，影響比濁靈敏度。為避免上述影響，樣品組分的比例，透射比濁法宜在3％以下，散射比濁法應(yīng)在0．5％以下。所用的試劑要澄清，必要時(shí)經(jīng)0．22μm濾膜過(guò)濾。應(yīng)作試劑空白和樣品空白。第15頁(yè)/共89頁(yè)（4）帶現(xiàn)象（zonephenomenon）的影響：抗原或抗體過(guò)剩使免疫復(fù)合物部分或全部解離的現(xiàn)象，稱為帶現(xiàn)象。免疫濁度測(cè)定中常表現(xiàn)為抗原過(guò)剩時(shí)免疫復(fù)合物形成的量反而下降，又稱鉤狀效應(yīng)（hookeffect）?？朔k法主要是：采用高質(zhì)量試劑，設(shè)置儀器監(jiān)測(cè)，減少血清用量。（5）偽濁度的影響：即不是特異性抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)生的免疫復(fù)合物形成的濁度。形成原因復(fù)雜，主要是抗血清存在的非特異性交叉反應(yīng)性雜抗體成分，增濁劑濃度過(guò)高和反應(yīng)時(shí)間掌握不當(dāng)，樣品本身的濁度處理不當(dāng)，試劑污染和變質(zhì)，比色杯不潔，等等。第16頁(yè)/共89頁(yè)（6）校準(zhǔn)與計(jì)算：應(yīng)選用適當(dāng)?shù)男?zhǔn)品及濃度作劑量反應(yīng)曲線。曲線往往有截距或呈S形，不成直線。自動(dòng)生化分析儀多推薦5點(diǎn)或6點(diǎn)定標(biāo)，然后選擇適當(dāng)?shù)臄?shù)學(xué)模型作曲線擬合，如Ingit－Log變換或y＝d＋cx＋bx2＋ax3的3次方程回歸曲線。更換試劑批號(hào)時(shí)也必須重新校準(zhǔn)曲線。第17頁(yè)/共89頁(yè)（三）均相酶免疫分析酶聯(lián)免疫分析利用免疫反應(yīng)的高度特異性和酶促反應(yīng)的高度敏感性對(duì)抗原或抗體進(jìn)行測(cè)定，均相酶免疫分析（homogeneousenzymeimmunoassay）是其中的一類(lèi)。在均相酶免疫分析中，最常用的是酶放大免疫分析（enzymemultipliedimmunoassay，EMIT）。其原理是：當(dāng)酶標(biāo)抗原（半抗原）與相應(yīng)抗體結(jié)合，生成酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物后，對(duì)標(biāo)記酶產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，使酶的構(gòu)象改變，酶活性抑制、恢復(fù)或增強(qiáng)，酶催化的信號(hào)隨之發(fā)生改變；第18頁(yè)/共89頁(yè)酶標(biāo)抗原抗體復(fù)合物與游離酶標(biāo)抗原同處一相，不需分離步驟就可測(cè)定酶活性，計(jì)算出被檢抗原（半抗原）的含量。常采用酶標(biāo)抗原與未知抗原對(duì)特異性抗體的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)：抗原與標(biāo)記酶結(jié)合使酶的活性抑制或激活，再與相應(yīng)抗體結(jié)合后其酶活性被激活或抑制，未知抗原和酶標(biāo)抗原與抗體形成競(jìng)爭(zhēng)體系。第19頁(yè)/共89頁(yè)

均相酶免疫分析目前主要用于檢測(cè)小分子半抗原，如某些激素、藥物或代謝產(chǎn)物，也逐漸用于大分子物質(zhì)，如血清IgG測(cè)定。測(cè)定藥物的靈敏度一般為0．5－2μg／ml。方法簡(jiǎn)便、快速，準(zhǔn)確性和重復(fù)性好，但影響酶活性的因素也必然影響酶聯(lián)免疫分析?？寺∶腹w免疫分析（clonedenzy。donorimmunoassay，CEDIA）是有發(fā)展前途的均相酶免疫技術(shù)，靈敏度比一般酶免疫法高。其原理為：用基因工程技術(shù)制備稱為酶供體（ED）和酶受體（EA）的兩肽段。第20頁(yè)/共89頁(yè)ED和EA獨(dú)立存在時(shí)無(wú)酶活性，但在合適條件下可以自動(dòng)裝配并聚合成具有酶活性的四聚體。ED標(biāo)記申抗原小分子或抗原大分子后，不影響其與EA的裝配，但當(dāng)相應(yīng)抗體存在時(shí)，抗原抗體結(jié)合后形成的空間位阻使酶的裝配受阻，使用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合模式即可檢測(cè)末知的半抗原或抗原。第21頁(yè)/共89頁(yè)(四)酶促反應(yīng)的特點(diǎn)：由酶催化的反應(yīng)稱為酶促反應(yīng)。以酶作為試劑來(lái)進(jìn)行分析測(cè)定，或通過(guò)酶促反應(yīng)測(cè)定待測(cè)酶的活性，具有高效、專一、溫和、靈敏的特點(diǎn)，廣泛用于生化分析。試劑中的酶活性（濃度）在反應(yīng)過(guò)程中始終不變。下面僅對(duì)酶活性測(cè)定知識(shí)作介紹。

1．酶活性測(cè)定生物體內(nèi)含有成千種酶，存在于細(xì)胞中。當(dāng)細(xì)胞通透性增加或細(xì)胞破裂時(shí)，會(huì)使體液中酶濃度增加，第22頁(yè)/共89頁(yè)因此測(cè)定體液中特別是血液中酶濃度的變化有助于臨床診斷疾病、判斷預(yù)后和觀察療效。血液中的酶含量甚微，一般每毫升含量在微微克（Pg）到毫微克（ng）水平，因此要直接測(cè)定酶含量是非常困難的。雖然近年免疫學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，可以對(duì)某些酶直接進(jìn)行測(cè)定，但目前臨床仍以測(cè)定酶活性間接推算酶的含量。酶活性的大小，是在一定條件下通過(guò)測(cè)定酶促反應(yīng)過(guò)程中單位時(shí)間內(nèi)底物的減少量或產(chǎn)物的生成量引起的吸光度變化，即測(cè)定酶促反應(yīng)的速率來(lái)獲得的。第23頁(yè)/共89頁(yè)一般情況下，產(chǎn)物和底物的濃度變化是一致的，但測(cè)定產(chǎn)物的生成要比測(cè)定底物的減少為好。這是由于反應(yīng)體系中使用的底物往往是過(guò)量的，反應(yīng)時(shí)間通常又很短，尤其在酶活性很低時(shí)，底物減少量?jī)H占加入量的很小比例，因此測(cè)定不易精確；反之，產(chǎn)物從無(wú)到有，只要測(cè)定方法靈敏，準(zhǔn)確度可以很高。所以，酶活性測(cè)定大多數(shù)采用測(cè)定產(chǎn)物生成速率的方法。2．酶促反應(yīng)三階段酶促反應(yīng)是一個(gè)可逆反應(yīng)，其反應(yīng)全過(guò)程的速率并不都與酶活性成正比。將酶促反應(yīng)過(guò)程中測(cè)得的產(chǎn)物或底物的變化量對(duì)時(shí)間作圖，得到酶促反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線，第24頁(yè)/共89頁(yè)

圖2-1第25頁(yè)/共89頁(yè)圖中產(chǎn)物P或底物S的濃度變化曲線的斜率就代表酶反應(yīng)速率。酶促反應(yīng)一般分為三階段。（1）延滯期（lagphase）：底物與酶混合、反應(yīng)啟動(dòng)后的一段短時(shí)間內(nèi)，產(chǎn)物從零開(kāi)始逐漸生成，處于較低水平，反應(yīng)速度較低，未達(dá)到待測(cè)酶最大反應(yīng)速度；另外，在酶偶聯(lián)反應(yīng)中，指示酶的反應(yīng)必須有一定量測(cè)定酶的產(chǎn)物堆積才能進(jìn)行；這些都使酶反應(yīng)要稍待一定時(shí)期后，吸光度才有明顯的線性變化，這一時(shí)期稱為延滯期。延滯期的長(zhǎng)短不一，當(dāng)反應(yīng)體系中存在抑制劑或有干擾物質(zhì)參與的副反應(yīng)時(shí)，延滯期可延長(zhǎng)；當(dāng)樣品酶活性過(guò)高或反應(yīng)體系中存在激動(dòng)劑時(shí)，延滯期可縮短。第26頁(yè)/共89頁(yè)在開(kāi)始酶反應(yīng)（即待測(cè)樣品與基質(zhì)混合）之前，應(yīng)有一個(gè)預(yù)孵育期（pre－Incubationperiod），讓所有可能干擾測(cè)定的反應(yīng)充分進(jìn)行，避免干擾待測(cè)酶活性。內(nèi)源性產(chǎn)物被工具酶催化消耗，內(nèi)源性底物也通過(guò)偶聯(lián)反應(yīng)充分消耗，然后加入底物啟動(dòng)反應(yīng)。（2）線性期（linear。base）：在反間應(yīng)體系中底物大于酶飽和濃度的情況下，產(chǎn)物或底物的變化量隨反應(yīng)時(shí)間呈線性增減，即反應(yīng)速度（單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)物或底物的變化量）恒定不變，這一時(shí)期稱為線性期或恒態(tài)期，亦稱零級(jí)反應(yīng)期。在此期，反應(yīng)速度不受底物和產(chǎn)物濃度的影響，只與酶活性濃度呈線性關(guān)系。測(cè)定酶活性都在零級(jí)反應(yīng)期進(jìn)行。第27頁(yè)/共89頁(yè)(3）偏離線性期：隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，反應(yīng)體系中的底物不斷消耗，酶不能被其飽和，以及可逆反應(yīng)、產(chǎn)物抑制、酶變性失活等原因，致酶促反應(yīng)速度下降，產(chǎn)物或底物的變化曲線漸趨平坦，這一時(shí)期稱為偏離線性期，亦稱一級(jí)反應(yīng)期。在此期，反應(yīng)速度不僅與酶活性濃度有關(guān)，還受底物濃度影響，與底物濃度成正比，因此不能準(zhǔn)確反映酶的真正活性，產(chǎn)物濃度與反應(yīng)時(shí)間不呈線性關(guān)系。第28頁(yè)/共89頁(yè)

二、自動(dòng)生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)及工作原理

(基本結(jié)構(gòu))1．按照反應(yīng)裝置的結(jié)構(gòu)，自動(dòng)生化分析儀主要分為流動(dòng)式（flowsystem）、分立式（discretesystem）兩大類(lèi)。（l）流動(dòng)式：指測(cè)定項(xiàng)目相同的各待測(cè)樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)在同一管道流動(dòng)的過(guò)程中完成，這是第一代自動(dòng)生化分析儀。（2）分立式：指各待測(cè)樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)都是在各自的反應(yīng)杯中完成的，其中有幾類(lèi)分支。第29頁(yè)/共89頁(yè)l）典型分立式自動(dòng)生化分析儀：此型儀器應(yīng)用最廣。

2）離心式自動(dòng)生化分析儀：每個(gè)待測(cè)樣品都是在離心力的作用下，在各自的反應(yīng)槽內(nèi)與試劑混合，完成化學(xué)反應(yīng)并測(cè)定。由于混合、反應(yīng)和檢測(cè)幾乎同時(shí)完成，它的分析效率較高。

3）袋式自動(dòng)生化分析儀：是以試劑袋來(lái)代替反應(yīng)杯和比色杯，每個(gè)待測(cè)樣品在各自的試劑袋內(nèi)反應(yīng)并測(cè)定。

4）固相試劑自動(dòng)生化分析儀：亦稱為子化學(xué)式自動(dòng)分析儀，是將試劑固相干膠片或?yàn)V紙片等載體上，每個(gè)待測(cè)樣品搞加在相應(yīng)試紙條上進(jìn)行反應(yīng)及測(cè)定。操作快捷、便于攜帶是它的優(yōu)點(diǎn)。第30頁(yè)/共89頁(yè)生化分析儀的正確應(yīng)用只是掌握了測(cè)定技術(shù)原理還不夠，還需要對(duì)具體儀器的工作流程及測(cè)定計(jì)算方法有足夠了解。1．一般工作流程工作流程可以通過(guò)儀器的測(cè)定周期來(lái)考察。重點(diǎn)關(guān)注比色杯空白讀數(shù)點(diǎn)（CB）、加樣品點(diǎn)（S）、各試劑加液點(diǎn)（R、R2、…）、試劑空白讀數(shù)點(diǎn)（RB）、各測(cè)定讀數(shù)點(diǎn)（P）、各點(diǎn)時(shí)間間隔及周期總時(shí)間等。每個(gè)儀器一般都在反應(yīng)轉(zhuǎn)盤(pán)的固定位置和反應(yīng)測(cè)定周期的固定時(shí)間設(shè)置樣品、試劑和稀釋的加液位，以及（始點(diǎn)測(cè)定吸光度一始點(diǎn)空白吸光度）。如HITACHI7170在P1至P34周期為10分鐘具體工作流程如圖2-2所示第31頁(yè)/共89頁(yè)

圖2-2第32頁(yè)/共89頁(yè)2．?dāng)?shù)據(jù)處理計(jì)算方法儀器在各個(gè)吸光度讀數(shù)點(diǎn)讀取的吸光度數(shù)據(jù)，并不一定都納入濃度計(jì)算。儀器往往根據(jù)儀器定義和操作者設(shè)定的要求，對(duì)吸光度原始數(shù)據(jù)作計(jì)算處理，轉(zhuǎn)換成所謂的反應(yīng)數(shù)據(jù)，再按系數(shù)或公式作濃度計(jì)算。舉例如下：（1）HITACHI7170的終點(diǎn)法：測(cè)定點(diǎn)（AX）吸光度計(jì)算為（AX＋AX-l）／2，實(shí)際吸光度=吸光度數(shù)據(jù)×10000。第33頁(yè)/共89頁(yè)（2）OLYMPUSAU600試劑空白數(shù)據(jù)：PO點(diǎn)試劑空白（RB）＝PO點(diǎn)吸光度一比色杯水空白（WB）；任一測(cè)定點(diǎn)試劑空白（RBX）=該點(diǎn)吸光度一比色杯水空白（WB）。（3）Monarch1000兩點(diǎn)終點(diǎn)法的反應(yīng)數(shù)據(jù)=（終點(diǎn)測(cè)定吸光度一終點(diǎn)空白吸光度）－（始點(diǎn)測(cè)定吸光度一始點(diǎn)空白吸光度）（4）AU600終點(diǎn)法（帶試劑空白，END法）的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點(diǎn)吸光度一PO點(diǎn)吸光度（試劑空白，RB）。終點(diǎn)法（不帶試劑空白，ENDI法）的反應(yīng)數(shù)據(jù)=終點(diǎn)吸光度一比色杯空白（WB）。第34頁(yè)/共89頁(yè)（5）AU600兩點(diǎn)法（自身空白）的反應(yīng)數(shù)據(jù)二（加第二試劑后測(cè)定點(diǎn)讀數(shù)-PO點(diǎn)讀數(shù)）－（加第二試劑前測(cè)定點(diǎn)讀數(shù)-Po點(diǎn)讀數(shù)）。

1．儀器運(yùn)行前操作程序主要進(jìn)行儀器的基本設(shè)置。

(1)試驗(yàn)項(xiàng)目設(shè)置：對(duì)試驗(yàn)名稱、編碼、試驗(yàn)組合（profile）、試驗(yàn)輪次（round）、必要時(shí)包括試驗(yàn)順序等設(shè)置。（2）各試驗(yàn)的參數(shù)設(shè)置：包括試驗(yàn)間比值、結(jié)果核對(duì)等參數(shù)的設(shè)定。（3）試劑設(shè)置：根據(jù)有關(guān)試驗(yàn)參數(shù)設(shè)置各試驗(yàn)的試劑位、試劑瓶規(guī)格，必要時(shí)設(shè)定試劑批號(hào)、失效期等。第35頁(yè)/共89頁(yè)

（4）校準(zhǔn)品設(shè)置：對(duì)校準(zhǔn)品的位置、濃度和數(shù)量等進(jìn)行設(shè)置。（5）質(zhì)控設(shè)置：根據(jù)質(zhì)控要求設(shè)置質(zhì)控物個(gè)數(shù)、質(zhì)控規(guī)則、質(zhì)控項(xiàng)目及相應(yīng)質(zhì)控參數(shù)等。

3．測(cè)定結(jié)果的檢查分析

(1)要了解和熟悉儀器的各種警示符號(hào)的含義與作用：在正確設(shè)定參數(shù)的前提下利用各種警示符號(hào)能提高我們發(fā)現(xiàn)問(wèn)題和解決問(wèn)題的效率。第36頁(yè)/共89頁(yè)（2）要熟悉和靈活運(yùn)用儀器的相關(guān)操作屏（界面）：如用反應(yīng)過(guò)程監(jiān)測(cè)觀察反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線；用校準(zhǔn)追蹤（calibrationtrace）回顧分析校準(zhǔn)曲，利用統(tǒng)計(jì)（statistics）了解不同日期段病人測(cè)定均值及數(shù)據(jù)分布；運(yùn)用分析數(shù)據(jù)編輯察看和校正測(cè)定數(shù)據(jù)。

第37頁(yè)/共89頁(yè)（3）校準(zhǔn)的檢查：要充分利用儀器設(shè)置的功能檢測(cè)校正曲線圖形、各校準(zhǔn)點(diǎn)吸光度值（不能忽略試劑空白值及空白速率值）計(jì)算K值等的波動(dòng)情況，以及以往的比較。必要時(shí)應(yīng)進(jìn)一步檢查反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線。必須結(jié)合質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)來(lái)把握實(shí)踐條件。（4）病人結(jié)果的檢查：除了目測(cè)觀察或用血清指數(shù)了解標(biāo)本性狀、注意和了解臨床及診斷外，學(xué)會(huì)分析反應(yīng)時(shí)間進(jìn)程曲線及數(shù)據(jù)是重要的基本功。第38頁(yè)/共89頁(yè)四基本測(cè)定方法終點(diǎn)法一旦樣本中加入試劑，反應(yīng)就發(fā)生了：起初是吸光率短暫的變化（通常是在樣本孵育階段）；最后是反應(yīng)的顏色（和由此得到吸光率）的趨向恒量，被定義為穩(wěn)定狀態(tài)。通常，吸光率（A）是從樣本孵育的第一點(diǎn)讀數(shù)。然后該值乘以在定標(biāo)中得到樣本的分析濃度所計(jì)算的因數(shù)。

樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—

試劑空白）第39頁(yè)/共89頁(yè)

等待時(shí)間孵育時(shí)間讀數(shù)時(shí)間第40頁(yè)/共89頁(yè)固定時(shí)間法這種方法的反應(yīng)中，在孵育和讀數(shù)兩個(gè)階段都有增加和減少變化。但是，在這兩個(gè)階段線的傾斜度可能不一樣。而且，呈現(xiàn)給用戶的反應(yīng)圖也非總是線性，但總是分段地產(chǎn)生線性。這是因?yàn)樵撉€圖是從不總是排列成行的讀數(shù)點(diǎn)組合中得到的。復(fù)位線是在孵育和讀數(shù)兩個(gè)階段中計(jì)算出來(lái)的。它們給用戶提供了反應(yīng)正確演變的有關(guān)信息。在讀數(shù)過(guò)程中，也計(jì)算出吸光率變化率（△A），計(jì)算樣本中的最后分析濃度要求有△A值。第41頁(yè)/共89頁(yè)由于自然的延遲，會(huì)產(chǎn)生儀器完全定時(shí)且測(cè)試項(xiàng)目根據(jù)所設(shè)置的參數(shù)在不同的時(shí)期讀數(shù)。在這種情況下，分析儀執(zhí)行多個(gè)讀數(shù)，在最后點(diǎn)數(shù)之間描繪復(fù)位線，移動(dòng)至精確的讀數(shù)時(shí)間，從而得到正確的吸光率值。濃度是用吸光率變化率（讀數(shù)過(guò)程中）乘以定標(biāo)過(guò)程中所計(jì)算出來(lái)的因數(shù)。樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A第42頁(yè)/共89頁(yè)等待時(shí)間孵育時(shí)間讀數(shù)時(shí)間等待時(shí)間孵育時(shí)間讀數(shù)時(shí)間第43頁(yè)/共89頁(yè)動(dòng)力學(xué)法這種方法的反應(yīng)與前一種非常相似，所不同的是該種反應(yīng)和曲線圖是從兩條復(fù)位線計(jì)算中得到的：一條在孵育階段，一條在讀數(shù)階段。如果反應(yīng)良好的話這兩條總是一樣的。讀數(shù)階段的復(fù)位線以分鐘來(lái)計(jì)算吸光率變化率（△A/分鐘）。然后這個(gè)值乘以因數(shù)來(lái)計(jì)算樣本中分析濃度：

樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—A2）（A3—A2）=△A/分鐘第44頁(yè)/共89頁(yè)延遲時(shí)間孵育時(shí)間讀數(shù)時(shí)間延遲時(shí)間孵育時(shí)間讀數(shù)時(shí)間第45頁(yè)/共89頁(yè)起始速率法（I.R.）這種方式的反應(yīng)與動(dòng)力法反應(yīng)十分相似。如果初始階段穩(wěn)定的話，那么它就含有與動(dòng)力法反應(yīng)完全一樣的反應(yīng)。如果初始階段不穩(wěn)定的話，復(fù)位線就是將外部點(diǎn)除去49%至100%計(jì)算得來(lái)的。因此除按分鐘計(jì)算外，這種計(jì)算方法與動(dòng)力法反應(yīng)的計(jì)算方法一樣。樣本中Conc.=因數(shù)x（△A）第46頁(yè)/共89頁(yè)樣本空白（A）法當(dāng)需要清除樣本干擾（例如混濁的血清）時(shí)就使用這種方法。這種是雙試劑終點(diǎn)法反應(yīng)。這種反應(yīng)和計(jì)算是在兩種截然不同的階段執(zhí)行的：第一階段（樣本空白）是在第一種試劑和樣本（R1+S）中產(chǎn)生反應(yīng)的；第二階段是在第一種試劑和樣本和第二種試劑（R1+S+R2）中產(chǎn)生反應(yīng)的。用來(lái)計(jì)算濃度的最后吸光率在兩階段的數(shù)值差中得到：樣本中Conc.=因數(shù)x[A2—

（A1xk）]第47頁(yè)/共89頁(yè)第48頁(yè)/共89頁(yè)樣本空白（B）法這種方法的反應(yīng)與前一種非常相似。反應(yīng)總是在兩個(gè)階段產(chǎn)生：第一階段（樣本空白）儀器從第一種試劑和樣本（R1+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A1），從第二種試劑和樣本（R2+S）所產(chǎn)生反應(yīng)的中讀出最后的吸光率（A2）。這兩種反應(yīng)是截然不同和獨(dú)立的，在兩個(gè)不同的正在讀數(shù)的比色杯取樣。在計(jì)算中所使用的最后吸光率是從兩個(gè)階段的數(shù)值差中得到：樣本中Conc.=因數(shù)x（A2—A1）第49頁(yè)/共89頁(yè)R1+SR2+S第50頁(yè)/共89頁(yè)兩點(diǎn)終點(diǎn)法這種方法（只用在單試劑測(cè)試中）是在需要清除反應(yīng)中由于血清的干擾中使用的。最后的值減去孵育階段的吸光率讀數(shù)：樣本中Conc.=因數(shù)x（A3—A1）第51頁(yè)/共89頁(yè)

等待時(shí)間孵育時(shí)間讀數(shù)時(shí)間第52頁(yè)/共89頁(yè)只讀法這種方法只在樣本加入試劑空白的終點(diǎn)法反應(yīng)讀數(shù)時(shí)使用。它可被用做讀已（手工）準(zhǔn)備好的溶解液。用作計(jì)算的因數(shù)可從定標(biāo)或用戶自己設(shè)定中得到：樣本中Conc.=因數(shù)x最后的A值。第53頁(yè)/共89頁(yè)乳膠顆粒法使用乳膠顆粒法試劑的儀器要求嚴(yán)格遵循程序設(shè)定過(guò)程的時(shí)限。因此分析儀就不能使取樣和讀數(shù)階段最優(yōu)化，這樣就不可避免地減少所執(zhí)行的每小時(shí)測(cè)試數(shù)目。這種方法與樣本空白（A）法十分相似。當(dāng)需要清除樣本的干擾（例如混濁的血清等）時(shí)就使用這種方法。其中包括雙試劑終點(diǎn)法反應(yīng)。該反應(yīng)和計(jì)算方法在兩個(gè)階段完成：第一階段（樣本空白）反應(yīng)產(chǎn)生于第一種試劑和樣本（R1+S）之間；第二階段反應(yīng)產(chǎn)生于第一種試劑和樣本和第二種試劑（R1+S+R2）之間。在計(jì)算中所使用的最后吸光率是從兩個(gè)階段的吸光率數(shù)值差中得到：

樣本中Conc.=因數(shù)x[A2—

（A1xk）]第54頁(yè)/共89頁(yè)第55頁(yè)/共89頁(yè)

三、自動(dòng)生化分析儀的基本參數(shù)及應(yīng)用

了解生化分析儀基本參數(shù)的原理，有利于儀器、試劑的正確使用，有助于正確分析和處理測(cè)定數(shù)據(jù)。但是，配套系統(tǒng)的原裝分析參數(shù)不宜更改；采用非儀器配套的試劑及校準(zhǔn)品體系時(shí)，參數(shù)修改要慎重。對(duì)于不同儀器、不同類(lèi)型的反應(yīng)分析程序，所顯示的人機(jī)對(duì)話分析參數(shù)的信息有所不同。第56頁(yè)/共89頁(yè)（一）反應(yīng)測(cè)定時(shí)間多數(shù)全自動(dòng)生化分析儀可以在整個(gè)測(cè)定反應(yīng)周期內(nèi)連續(xù)監(jiān)測(cè)（如HITACHI7170常規(guī)測(cè)定周期10分鐘，監(jiān)測(cè)34點(diǎn)，OLYMPUSAU600固定周期8分15秒，監(jiān)測(cè)27點(diǎn)），但反應(yīng)監(jiān)測(cè)時(shí)間是指該時(shí)間內(nèi)的測(cè)定讀數(shù)要用于結(jié)果計(jì)算。它的設(shè)置與加樣點(diǎn)、加試劑點(diǎn)（包括R1、R2……）、監(jiān)測(cè)時(shí)間（讀數(shù)點(diǎn)）、讀數(shù)間隔時(shí)間及試劑樣品比例等有關(guān)，要結(jié)合方法學(xué)兼顧權(quán)衡。1．反應(yīng)時(shí)間（reactfontime）第57頁(yè)/共89頁(yè)指儀器的一個(gè)分析周期中，試劑和樣品混合到最末一點(diǎn)測(cè)定讀數(shù)的時(shí)間。它對(duì)終點(diǎn)法尤其重要，是終點(diǎn)法的瓶頸。有的儀器有多個(gè)反應(yīng)時(shí)間可選（如HITACHI7170），須預(yù)先選定。多數(shù)儀器為10分鐘左右，這對(duì)試劑提出了較高要求。不少終點(diǎn)法試劑（尤其手工法試劑）反應(yīng)時(shí)間常常也在10分鐘上下，測(cè)定時(shí)間沒(méi)有余地，當(dāng)樣品濃度高或試劑質(zhì)量下降時(shí)，均可致測(cè)定結(jié)果偏低。因此，終點(diǎn)法不宜采用標(biāo)明反應(yīng)時(shí)間接近和長(zhǎng)于儀器最大反應(yīng)時(shí)間的試劑盒。不得已時(shí)必須用接近測(cè)定范圍上限的高濃度質(zhì)控血清監(jiān)測(cè)。第58頁(yè)/共89頁(yè)2．監(jiān)測(cè)時(shí)間（讀數(shù)點(diǎn)）和讀數(shù)間隔時(shí)間各類(lèi)型儀器不盡一致。離心式生化儀讀數(shù)間隔時(shí)間短，監(jiān)測(cè)時(shí)間也短。流動(dòng)式生化儀讀數(shù)間隔時(shí)間一般較長(zhǎng)。分立式生化儀一般監(jiān)測(cè)時(shí)間10分鐘左右，間隔10－30秒讀數(shù)一次。有的儀器在整個(gè)測(cè)定反應(yīng)周期全程讀數(shù)，有的只讀取指定時(shí)間（點(diǎn)）的吸光度。3．加試劑點(diǎn)采用雙試劑時(shí)，加R2點(diǎn)決定R1與樣品的反應(yīng)時(shí)間，也決定R2與R1及樣品的反應(yīng)時(shí)間。一般儀器各5分鐘左右。HITACHI7170有四個(gè)加試劑點(diǎn)，若采用雙試劑，各5分鐘，則加R2設(shè)在第3加試劑點(diǎn)。

4．反應(yīng)監(jiān)測(cè)時(shí)間還要考慮延遲時(shí)間的長(zhǎng)短、測(cè)定物質(zhì)的濃度范圍及相關(guān)臨床價(jià)值。工作效率等因素。第59頁(yè)/共89頁(yè)

（二）延遲時(shí)間延遲時(shí)間（delaytime）是指試劑與樣品混合后到監(jiān)測(cè)開(kāi)始之間的時(shí)間。一般用于兩點(diǎn)法和速率法，某些情況下也用于終點(diǎn)法。終點(diǎn)法應(yīng)選擇反應(yīng)趨于平衡的時(shí)間（穩(wěn)定期或平衡期）作測(cè)定，測(cè)定點(diǎn)前即所謂的孵育期。速率法的線性反應(yīng)期之前即延遲期。正確選擇延遲時(shí)間的長(zhǎng)短，有利于準(zhǔn)確測(cè)定，減少試驗(yàn)誤差。設(shè)置一般根據(jù)試劑盒的說(shuō)明書(shū)，還應(yīng)考慮本室的儀器特點(diǎn)和工作程序。第60頁(yè)/共89頁(yè)1．儀器特點(diǎn)比如半自動(dòng)生化儀多為流動(dòng)比色池，要考慮泵速、進(jìn)樣管長(zhǎng)短。反應(yīng)液粘稠度及混合情況，以及室溫、反應(yīng)液溫度同反應(yīng)要求溫度間的溫差，等等。全自動(dòng)生化儀的測(cè)定讀數(shù)設(shè)置方式不同，直接以“秒”設(shè)置，或以測(cè)定點(diǎn)設(shè)置，測(cè)定點(diǎn)間隔時(shí)間不一樣，需要靈活掌握。第61頁(yè)/共89頁(yè)2．試劑及方法學(xué)（l）試劑組成：在酶活性的連續(xù)監(jiān)測(cè)法時(shí)，若試劑含工具酶數(shù)量多、偶聯(lián)反應(yīng)多，則激活反應(yīng)時(shí)間一般較長(zhǎng)，延遲時(shí)間也較長(zhǎng)，如肌酸激酶（NAC法）延遲時(shí)間常設(shè)置120－180秒；若試劑中底物經(jīng)待測(cè)酶催化，其產(chǎn)物可以直接測(cè)定的，則延遲時(shí)間較短，如γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）設(shè)定30－60秒。同一項(xiàng)目同一方法，但試劑配方不同，其反應(yīng)快慢等特征也可能不同，如白蛋白測(cè)定。白蛋白與溴甲酚綠（BCG）為即時(shí)反應(yīng)，10秒鐘內(nèi)已完成，其后α、β球蛋白等也將與BCG發(fā)生反應(yīng)，所以孵育時(shí)間不能延長(zhǎng)。但在同一測(cè)定時(shí)間，BCG濃度、緩沖液種類(lèi)、pH和表面活性劑不同的試劑，測(cè)定結(jié)果可能差異明顯。第62頁(yè)/共89頁(yè)（2）樣品異常成分干擾：有的試驗(yàn)項(xiàng)目需要用工具酶將內(nèi)源性代謝產(chǎn)物耗盡，比如丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測(cè)定試劑中須有足量的乳酸脫氫酶（LDH）。如果使用單試劑，正常血清樣品延遲時(shí)間60秒即可；但當(dāng)內(nèi)源性酮酸增多（如酮癥酸中毒）時(shí)，試劑內(nèi)LDH常常不能在60秒內(nèi)完全將其清除，剩余酮酸會(huì)進(jìn)入監(jiān)測(cè)期干擾測(cè)定，使測(cè)定結(jié)果偏高，所以延遲時(shí)間應(yīng)增至90－120秒。采用雙試劑，則可在加入R1后即進(jìn)入預(yù)孵育期。第63頁(yè)/共89頁(yè)（3）方法學(xué)要求：比如肌酐（Jaffe氏法）測(cè)定的特異性不強(qiáng)，一般認(rèn)為反應(yīng)前20秒左右為乙酰乙酸等快反應(yīng)干擾物呈色，后約80－100秒為蛋白質(zhì)等慢反應(yīng)假肌酐呈色，20－60秒肌酐呈色反應(yīng)占主導(dǎo)地位。采用兩點(diǎn)法或速率法可減少干擾，但具體取多長(zhǎng)的延遲時(shí)間，應(yīng)根據(jù)試劑和儀器讀數(shù)特點(diǎn)來(lái)評(píng)價(jià)決定。第64頁(yè)/共89頁(yè)3．工作程序要在保證準(zhǔn)確性的前提下，合理設(shè)置參數(shù)，提高工作效率。最突出的例子是半自動(dòng)生化儀上酶活性連續(xù)監(jiān)測(cè)法的延遲時(shí)間設(shè)定。由于只能單份樣品逐一測(cè)定，若延遲時(shí)間全部設(shè)置在儀器內(nèi)，每個(gè)延遲時(shí)間加監(jiān)測(cè)時(shí)間至少1分鐘以上，守候時(shí)間較長(zhǎng)。工作量大時(shí)，可以根據(jù)儀器控溫、加樣及讀數(shù)和試劑特點(diǎn)以及室溫情況，將延遲時(shí)間挪一部分到機(jī)外，套式操作，但要確保機(jī)內(nèi)延遲時(shí)間未需進(jìn)入線性反應(yīng)期。第65頁(yè)/共89頁(yè)4．要兼顧延遲時(shí)間和監(jiān)測(cè)時(shí)間反應(yīng)時(shí)間是有限制的。在速率法和兩點(diǎn)法中，延長(zhǎng)延遲時(shí)間必然縮短線性監(jiān)測(cè)期，減小測(cè)定的線性范圍，也易發(fā)生底物耗盡。（三）樣品量、試劑量與稀釋量有關(guān)參數(shù)包括樣品量、試劑量、稀釋（水）量、最小反應(yīng)體積和最大比色杯容量等。如HITACHI7170反應(yīng)體積180－380μl，最大體積570μl。BT224半自動(dòng)生化儀流動(dòng)比色池容積33μl，吸液量200－990μl，最適體積500μl。第66頁(yè)/共89頁(yè)最小反應(yīng)體積在儀器光度讀數(shù)要用于結(jié)果計(jì)算時(shí)，反應(yīng)液液面高度不低于光度計(jì)光徑的最小體積。它保證儀器的正確讀數(shù)和計(jì)算，也是儀器測(cè)定精度和經(jīng)濟(jì)性的指針之一。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的下限表示，有的則專門(mén)標(biāo)明最小反應(yīng)體積。在單試劑測(cè)定中，樣品與試劑的總體積不得少于此參數(shù)。在雙試劑測(cè)定中，若R1與樣品的反應(yīng)讀數(shù)不納入結(jié)果計(jì)算，R1的加液量可不考慮此參數(shù)，如連續(xù)監(jiān)測(cè)法；第67頁(yè)/共89頁(yè)否則應(yīng)考慮它對(duì)結(jié)果的影響，如終點(diǎn)法在加R2之前讀數(shù)，并以此來(lái)扣除試劑或樣品空白時(shí)。在半自動(dòng)生化儀中，最適吸入量相當(dāng)于最小反應(yīng)體積。它與進(jìn)液管道長(zhǎng)度、流動(dòng)比色池容積、吸液泵抽吸力大小和液體粘稠度有關(guān)，它要保證光度檢測(cè)不受空泡和前后樣品攜帶污染的干擾。因此，吸入體積不能任意降低，必要時(shí)應(yīng)加大反應(yīng)液量和吸入量。第68頁(yè)/共89頁(yè)2．最大比色杯容量這個(gè)參數(shù)含義明確。在有的儀器中，它以反應(yīng)體積的上限表示，有的則專門(mén)標(biāo)明最大比色杯容量。反應(yīng)液超過(guò)此體積，將致液體外溢，儀器測(cè)定系統(tǒng)被污損。3．樣品試劑比例樣品與試劑的比例（SV：RV），也可表示為樣品體積分?jǐn)?shù)-樣品體積與反應(yīng)液總體積的比值（SV／TV），是方法學(xué)基本參數(shù)。酶活力測(cè)定中，樣品在總體積中的比例應(yīng)在10％以下。一般說(shuō)來(lái)，待測(cè)物質(zhì)在樣品中含量低的、生理波動(dòng)范圍大的，樣品用量較大。第69頁(yè)/共89頁(yè)如Trinder反應(yīng)測(cè)定血清葡萄糖、膽固醇等，樣品試劑比例多為1：100，測(cè)定血尿酸或高密度脂蛋白膽固醇，常增加為1：50；ALT和AST的樣品試劑比例多為1：10至1：20。方法靈敏、吸光度高的實(shí)驗(yàn)方法，樣品試劑比例小，如白蛋白BCG法，樣品試劑比例常為1：200。肌酐Jaffe氏法監(jiān)測(cè)時(shí)間短，吸光度值較低，樣品試劑比例多為1：10。一般應(yīng)以試劑說(shuō)明為準(zhǔn)，不宜輕易改動(dòng)。第70頁(yè)/共89頁(yè)主要分析參數(shù)“初始參數(shù)”

“測(cè)試方法學(xué)”：在這個(gè)領(lǐng)域測(cè)試所使用的反應(yīng)原理可以是特定的（例如：Jaffe，IFCC等等）。在“數(shù)據(jù)資料處理”中，根據(jù)不同的原理，當(dāng)測(cè)試與質(zhì)控檔案有出入時(shí)該選項(xiàng)非常有用。第71頁(yè)/共89頁(yè)終點(diǎn)法動(dòng)力法固定時(shí)間法起始速率法（I.R.）樣本空白（A）法樣本空白（B）法只讀法兩點(diǎn)終點(diǎn)法乳膠顆粒法第72頁(yè)/共89頁(yè)處理種類(lèi)線性法”：在線性反應(yīng)中使用，它假設(shè)分析測(cè)試定標(biāo)值為處理計(jì)算因子?！耙蜃臃ā保翰还苡?jì)算因子是否已知都在線性反應(yīng)中使用?！扒€法”：非線性測(cè)試，分為：--多項(xiàng)式：在非線性反應(yīng)中使用。在極遠(yuǎn)的點(diǎn)間缺乏無(wú)窮大近似值時(shí)產(chǎn)生一條近乎理想的立方近似值曲線第73頁(yè)/共89頁(yè)立方栓：在非線性反應(yīng)中使用。在一些特定情況下產(chǎn)生一立方添加以解決非多項(xiàng)式曲線；在點(diǎn)上近似值為零，無(wú)拐點(diǎn)。--LOG-LOGIT4和LOG-LOGIT5：在非線性反應(yīng)中使用，它是一個(gè)在四點(diǎn)或五點(diǎn)的對(duì)數(shù)近似值。--多點(diǎn)法：一些標(biāo)準(zhǔn)濃度的線性添加函數(shù)最大值為6；它對(duì)超過(guò)0定標(biāo)限定進(jìn)行外推數(shù)學(xué)數(shù)據(jù)。第74頁(yè)/共89頁(yè)“最小平方法”：在非線性反應(yīng)中使用，產(chǎn)生一個(gè)最小平方近似值以在某些情況下解決非多項(xiàng)式和栓曲線。有拐點(diǎn)。第75頁(yè)/共89頁(yè)濾光器常用的檢測(cè)波長(zhǎng)有：340nm,380nm,405nm,436nm,480nm,510nm,546nm,578nm,630nm,700nm等。第76頁(yè)/共89頁(yè)反應(yīng)趨勢(shì)在反應(yīng)中選擇吸光率變化來(lái)檢測(cè)。具有下列選擇：（●）“漸增”（●）“漸減”第77頁(yè)/共89頁(yè)試劑數(shù)量按方法學(xué)要求輸入試劑數(shù)量，在最大值為4時(shí)，使用“▲”或▼第78頁(yè)/共89頁(yè)第二分析參數(shù)“比色杯清洗次數(shù)”通常清洗一次就足夠了。但在非常活躍的測(cè)試中有必要多

次清洗。根據(jù)反應(yīng)物的污染力設(shè)置所需的清洗次數(shù)第79頁(yè)/共89頁(yè)試劑空白檢測(cè)時(shí)間”這個(gè)參數(shù)用作自動(dòng)測(cè)定試劑的空白吸光度。每次運(yùn)行：每次運(yùn)行都檢測(cè)試劑的空白吸光度。每天：每個(gè)工作日第一次分析時(shí)檢測(cè)試劑的空白每一：儀器按“小時(shí)”和“分鐘”欄所設(shè)定的時(shí)間跨度檢測(cè)