腺病毒解析的學習教案第1頁/共22頁

是一群分布十分廣泛，能引起呼吸道、腸粘膜上皮細胞溶解性感染；可在淋巴樣和腺樣細胞中引起潛伏感染，在嚙齒動物細胞中引起轉化感染。少數(shù)幾種腺病毒對實驗動物→致癌（12、18型），有潛在致癌性。

因該病毒最初來自腺體，故命名為腺病毒(Adenovirus)。

第2頁/共22頁型別多，約110個血清型，根據(jù)宿主可分鳥腺病毒屬和哺乳類腺病毒,其中至少42個血清型能引起人類疾病。目前，把人腺病毒的42個血清型分為A-F6個組：A-E組：各型病毒均能在人的組織細胞(如腎細胞)常規(guī)培養(yǎng)中增殖，稱為普通腺病毒；F組（40和41型）：是從糞便中發(fā)現(xiàn)，用常規(guī)細胞培養(yǎng)不能增殖的腺病毒，稱為腸道腺病毒。

在基因治療的實驗研究中常用腺病毒作為基因載體。第3頁/共22頁腺病毒(adenovirus,Ad)作為基因表達載體的研制起始于20世紀60年代初，當時病毒學家觀察到腺病毒基因組可與猴類病毒40（SV40）基因組雜交，說明腺病毒基因組可承載異源性基因。此后腺病毒逐步發(fā)展成一種重要的載體系統(tǒng)，并成功地用于基因治療的體內(nèi)外實驗和臨床試驗。目前運用最廣的腺病毒載體。是血清5型腺病毒。

第4頁/共22頁腺病毒載體的特點①用它制備成疫苗或表達載體安全性好；②對其結構及特性的研究較深入，容易復制，操作簡單；③重組的腺病毒載體可獲得較高的滴度；④腺病毒無需整合進宿主細胞基因組中，目的基因在宿主細胞基因組外游離狀態(tài)下表達，整合突變致癌可能性小，基因毒性低；⑤有較大的宿主范圍，可感染分裂期及非分裂期細胞；⑥腺病毒載體可以插入7.5kb的外源基因，容量較大；⑦相對穩(wěn)定，經(jīng)得起純化、濃縮。由于腺病毒載體以上特點，其作為外源基因轉染機體細胞的表達載體，廣泛應用于各種腫瘤的基因治療。

第5頁/共22頁球形，無包膜，直徑70-80nm。一、生物學性狀

第6頁/共22頁

第7頁/共22頁

第8頁/共22頁

二、病毒的復制核酸：線狀dsDNA，不分節(jié)段，基因組長約36kb，編碼30多種蛋白——“調(diào)控基因”。衣殼：20面體立體對稱，由252個顆粒組成，衣殼含有240個六聯(lián)體（hexon）、12個五聯(lián)體（penton）纖維狀刺突：12根纖毛（fiber）以五聯(lián)體蛋白為基底由衣殼表面伸出，纖毛頂端形成頭節(jié)區(qū)（knob）。五聯(lián)體和纖毛的頭節(jié)區(qū)可與細胞表面的病毒受體結合，在病毒感染細胞過程中起著非常重要的作用。第9頁/共22頁

第10頁/共22頁

（一）粘附和進入細胞腺病毒纖毛的頭節(jié)區(qū)粘附到細胞表面的特異性受體病毒纖毛基底部五鄰體與細胞表面結合通過內(nèi)吞作用將腺病毒內(nèi)化到細胞質(zhì)中病毒在含內(nèi)體的酸性環(huán)境中部分降解通過核孔將病毒DNA釋放到細胞核內(nèi)二、病毒的復制第11頁/共22頁（二）轉錄與復制1、腺病毒除了卵細胞以外幾乎在所有已知細胞中都不整合到染色體中，不會干擾宿主基因。

病毒基因獨立、高效復制“以量取勝”第12頁/共22頁

第13頁/共22頁

置換第14頁/共22頁2、引物

病毒復制所用的引物為蛋白質(zhì)引物?？蓮娜我荒┒碎_始

第15頁/共22頁

第16頁/共22頁3、原料（操縱蛋白和核苷酸）

腺病毒在感染宿主細胞后即產(chǎn)生一種蛋白（E1A蛋白），使感染細胞從“休息狀態(tài)”進入到DNA復制周期，為病毒復制儲備原料。

綜上，腺病毒mRAN的選擇傳遞和翻譯都是嚴格按照時間日程完成的。第17頁/共22頁三、病毒的傳播傳播途徑：“糞——口”途徑（胃腸道）感染對象：兒童為主。所致疾?。何改c炎與腹瀉。

第18頁/共22頁1、在病毒感染早期，病毒的兩種蛋白阻斷激活死亡程序的細胞基因轉錄。在感染后期，腺病毒合成一種“腺病毒死亡蛋白”使被感染細胞破裂，快速釋放出新病毒。2、病毒產(chǎn)生誘捕RNA分子，騙過干擾素系統(tǒng)。3、干擾MHC分子對病毒抗原的提呈。4、能中和天然殺傷細胞中的一種。5、抗原漂移。四、病毒對宿主防衛(wèi)的逃逸

第19頁/共22頁五、病毒感染的結果及其免疫性

免疫性：感染后獲得中和抗體