滅菌鍋的使用第1頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一為什么要滅菌?

組織培養(yǎng)

組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的第一步就是清洗與滅菌。組織培養(yǎng)中工作量最大，也是最基本的步驟。體外培養(yǎng)細(xì)胞所使用的各種玻璃或塑料器皿對(duì)清潔和無菌的要求程度很高。細(xì)胞養(yǎng)不好與清洗不徹底有很大關(guān)系。

一、滅菌鍋的使用第2頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一滅菌和消毒的種類1．物理消毒法

(1)射線消毒滅菌主要使用60Co、X射線進(jìn)行消毒滅菌，可用于小牛血清和塑料制品的滅菌。

(2)紫外線消毒用于消毒空氣、操作臺(tái)面和一些不能用干熱、濕熱滅菌的培養(yǎng)器皿，如塑料培養(yǎng)皿、培養(yǎng)板等。這是常使用的消毒方法之一。

(3)干熱滅菌主要用于玻璃器皿的滅菌。將用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿放入干燥箱內(nèi)，加熱至160℃，保溫90－120min。用于RNA提取實(shí)驗(yàn)的用品則需180℃，保溫5－8h。

滅菌手段的選擇十分重要，對(duì)不同的物品需采用不同的滅菌方法。假如選用的方法不對(duì)，即使達(dá)到了無菌，滅菌藥品喪失了營養(yǎng)價(jià)值、生物學(xué)特性或其他使用價(jià)值。第3頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一(4)濕熱滅菌此方法也稱為高壓蒸汽滅菌，是最有效的一種滅菌方法。主要應(yīng)用范圍是布類、橡膠制品(如膠塞)、金屬器械、玻璃器皿、某些塑料制品以及加熱后不發(fā)生沉淀的無機(jī)溶液(如Hanks液、PBS、20×SSC等)。(5)濾過除菌用于培養(yǎng)用液和各種不能高壓滅菌的溶液的滅菌。采用金屬濾器和小型的塑料濾器，配上可以更換的微孔濾膜，極大地方便了操作。第4頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一2．化學(xué)消毒法(1)75％酒精：超凈臺(tái)里常備75％酒精棉球(醫(yī)用級(jí)酒精)，用于手和一些金屬器械或工作臺(tái)面的消毒。(2)84消毒液：主要用于無菌室桌椅、墻壁、地面的消毒和清洗，以及空氣噴撒消毒，特別是污染細(xì)胞的消毒處理。使用濃度請(qǐng)按瓶上說明。第5頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一3．煮沸消毒

急性消毒可用煮沸法，器械等煮沸15min后用。第6頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一第7頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一全自動(dòng)立式電熱壓力蒸汽滅菌器第8頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一1．用橡皮管連接在放氣管上，然后沒到一個(gè)裝有冷水的容器里。

2．打開蓋子加水（蒸餾水）到滅菌室，直到水位指示處，每次滅菌前都應(yīng)及時(shí)補(bǔ)充水，并關(guān)緊放氣閥和放水閥，防止缺水干燒。3．將待滅菌的物品放在不銹鋼網(wǎng)籃中，放入滅菌室并仔細(xì)檢查，把密封圈嵌入槽內(nèi)，然后順時(shí)針用力旋緊蓋子，直到不能旋動(dòng)為止。4.打開電源開關(guān)，設(shè)定滅菌的溫度和時(shí)間。使用方法及注意事項(xiàng)第9頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一5．按下“工作”鍵，進(jìn)入自動(dòng)控制滅菌過程。6．不要在滅菌過程中或剛滅菌完畢時(shí)觸摸內(nèi)膽和蓋子，以免燙傷。7.在滅菌過程中或內(nèi)膽內(nèi)壓力較高，嚴(yán)禁打開蓋子，也不要打開排水閥，一定要等到壓力顯示為0MPa時(shí)，才能打開蓋子。8.在滅菌過程中，不要把臉和手靠近安全閥，以免熱的水蒸氣突然從安全閥中噴出，造成傷害。第10頁，共12頁，2023年，2月20日，星期一9．不要把物品放在安全閥上面阻礙它的打開。10.在使用中，當(dāng)壓力表指示超過0.212MPa時(shí)，安全閥還沒有自動(dòng)開啟，應(yīng)立即斷開電源，放盡蒸汽，冷卻后及時(shí)