生活飲用水微生物指標(biāo)檢驗第1頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月檢測依據(jù)：GB5750-2006《生活飲用水衛(wèi)生檢驗規(guī)范》第2頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗?zāi)康呐c要求掌握水樣采集規(guī)則及注意事項。熟悉常用水衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)。熟悉菌落總數(shù)、大腸菌群、耐熱大腸菌群的測定方法及檢測意義。學(xué)會對所檢測的水樣作綜合分析。第3頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月生活飲用水中微生物指標(biāo)項目單位限值說明總大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出一般性污染耐熱大腸菌群MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染大腸埃希氏菌MPN/100mL或CFU/100mL不得檢出指示糞便污染菌落總數(shù)CFU/mL100一般性污染賈第鞭毛蟲個/10L<1腸道原蟲隱孢子蟲個/10L<1腸道原蟲第4頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月水微生物檢測的意義水體的微生物污染問題日趨嚴(yán)重。在各種水體，特別是污染水體中存在有大量的有機(jī)物質(zhì)，適于各種微生物的生長。水體中微生物污染的來源：土壤，以及人類、動物的排泄物污染。水體中少數(shù)致病微生物（主要來自人或動物的糞便污染）可導(dǎo)致某些腸道傳染病傳播。水微生物檢測可用于評價水質(zhì)情況，預(yù)報水質(zhì)的污染趨勢，以保證水質(zhì)的衛(wèi)生安全。第5頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月在實際工作中，對水質(zhì)衛(wèi)生質(zhì)量的評價和控制，是無法對水體中各種可能存在的致病微生物一一進(jìn)行檢測。一般選擇有代表性的一種或一類微生物作為指示菌，通過對指示菌的檢測，來了解水體是否受到過的微生物污染，是否有腸道病原微生物存在的可能。第6頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月水微生物的檢測指標(biāo)菌落總數(shù)(aerobicbacterialcount)是指1ml水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37℃經(jīng)48h培養(yǎng)后，所生長的細(xì)菌菌落的總數(shù)。檢測意義：作為一般性污染的指標(biāo)，即評價被檢樣品的微生物污染程度和安全性。水樣菌落總數(shù)越多，說明水被微生物污染程度越嚴(yán)重，病原微生物存在的可能性越大，但不能說明污染的來源。第7頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月水質(zhì)微生物的檢測指標(biāo)總大腸菌群(coliformbacteria)是指一群需氧及兼性厭氧的，37℃生長時能使乳糖發(fā)酵，在24h內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。檢測意義：作為糞便污染的指標(biāo)。水樣總大腸菌群數(shù)的含量，表明水被糞便污染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。第8頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月耐熱大腸菌群

耐熱大腸菌群（thermotoletantColiformOrganisms）：在44～44.5℃下具有與大腸菌群相同發(fā)酵及生物化學(xué)性能的菌群。注意：我國習(xí)慣上把耐熱大腸菌群稱為“糞大腸菌群”。第9頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第10頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗內(nèi)容水樣采集；菌落總數(shù)的測定；總大腸菌群的測定;耐熱大腸菌群的測定。第11頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月微生物指標(biāo)常規(guī)檢驗流程水樣總大腸菌群菌落總數(shù)報告報告陰性耐熱大腸菌群或大腸埃希氏菌陽性報告第12頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月一、水樣采集第13頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月水樣采集采樣原則所采集的樣品具有代表性。采樣容器：選擇無菌硼硅玻璃瓶和聚乙烯塑料瓶。不能是新的污染源；不吸收或吸附某些待測組分；不與待測組分發(fā)生反應(yīng)。保證從采樣到分析期間，樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。微生物樣品必須按一般無菌操作的基本要求采集，并保證在運(yùn)送、貯存過程中不受污染。第14頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月水樣采集自來水水樣：先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌，再開放水龍頭使水流5min（經(jīng)常用水的水龍頭放水1～3min）后，采集水樣于無菌玻璃瓶，約占瓶容量80%，以便搖勻水樣。水源水水樣：選有代表性的地點(diǎn)及可疑地方，一般距水面下10～15cm采樣。采樣后，將瓶塞蓋好，再從水中取出。第15頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月水樣采集注意事項嚴(yán)格無菌操作。做好標(biāo)記：采得水樣后應(yīng)立即記錄水樣名稱、地點(diǎn)、時間等內(nèi)容。從速送檢。水樣從采集到檢驗不應(yīng)超過2h，在4℃下保存不應(yīng)超過24h。第16頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月實驗前準(zhǔn)備1、滅菌吸管

10mL、1mL刻度吸管分別包好，160℃干烤2h滅菌2、9mL滅菌生理鹽水3、相應(yīng)的滅菌培養(yǎng)基4、檢驗前，無菌室及超凈臺用紫外線燈照射30min第17頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落總數(shù)定義：是指水樣在營養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含細(xì)菌菌落的總數(shù)。培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂設(shè)備：放大鏡/菌落計數(shù)器第18頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落總數(shù)平板計數(shù)法第19頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落總數(shù)平板計數(shù)法[方法]水樣搖勻20次左右，使細(xì)菌分散。傾注培養(yǎng)：無菌吸取1ml水樣分別置于2個空平皿，另一個作空白對照。再傾注15ml瓊脂（約45℃）于平皿中旋轉(zhuǎn)，混勻待瓊脂凝固后倒置37℃48h。菌落計數(shù)：用肉眼或放大鏡檢查，計數(shù)平皿內(nèi)菌落數(shù)目。第20頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落總數(shù)平板計數(shù)法[結(jié)果分析與報告]計算平均菌落數(shù)：報告方式：菌落總數(shù)(cfu/ml)。cfu：colonyformingunits當(dāng)檢樣的菌落數(shù)為l~100時，按實有數(shù)報告；大于100時，采用二位有效數(shù)字報告。國家標(biāo)準(zhǔn)（GB5749-2006）規(guī)定生活飲用水菌落總數(shù)每毫升不得超過100個。第21頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）水源水[器材與試劑]

無菌1ml吸管6支/組，無菌10ml吸管1支/組。無菌平皿9個/組，營養(yǎng)瓊脂。90ml滅菌鹽水1瓶（內(nèi)置適量玻璃珠），9ml滅菌鹽水管3支。第22頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月[方法]

稀釋水樣：無菌吸10ml混勻水樣注入90ml滅菌水瓶中,混勻成1:10水樣。取1:10水樣1ml注入9ml滅菌試管中混勻成1:100水樣。同法稀釋成1:1000,1:10000水樣。第23頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月[方法]

傾注培養(yǎng)：用1ml無菌吸管吸取2~3個適當(dāng)濃度的稀釋液1ml,分別注入無菌平皿中，每個稀釋度應(yīng)同時做2個平皿，另取一平皿作空白對照。再做傾注培養(yǎng)(方法同飲用水)。菌落計數(shù)：方法同飲用水。第24頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月菌落總數(shù)測定第25頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月[結(jié)果分析與報告]計算不同稀釋度的平均菌落數(shù)：稀釋度的選擇和菌落總數(shù)報告方式：首先選擇平均菌落在30～300之間者進(jìn)行計算。計算方法和報告方式如表1所示。菌落總數(shù)平板計數(shù)法第26頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月表1稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式例次不同稀釋度的平均菌落數(shù)兩稀釋度菌落總數(shù)之比

菌落總數(shù)

(cfu／m1)

報告方式

(cfu／m1)10-110-210-312345678136527602890150多不可計27多不可計01642952713046501l305020466085135120—1.62.22————164003775027100150051300027030500<1×1016000或1.6×10438000或3.8×10427000或2.7×1041500或1.5×103510000或5.1×105270或2.7×10231000或3.1×104<10第27頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月由表2可判定水質(zhì)被污染的程度。表2一般水源水中菌落總數(shù)與水清潔程度的關(guān)系

水的類別最清潔水清潔水不太清潔水不清潔水極不清潔水菌落總數(shù)

cfu／m110~100100~

10001000~

1000010000~

100000＞100000第28頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月[注意事項]菌落總數(shù)測定中，應(yīng)選擇合適的稀釋度進(jìn)行。（生活飲用水，國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定每毫升不得超過100個，因此可以直接吸取1毫升到平板進(jìn)行培養(yǎng)）各稀釋管、相應(yīng)平皿做好標(biāo)記。包括：水樣名稱、稀釋度、時間、小組。嚴(yán)格無菌操作。進(jìn)行水樣稀釋時，每一稀釋度均需更換吸管。傾注時，要注意營養(yǎng)瓊脂的溫度。傾入瓊脂后要混勻，待瓊脂凝固后倒置培養(yǎng)。第29頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月三、總大腸菌群的測定

—多管發(fā)酵法分為三步：初發(fā)酵試驗平板分離復(fù)發(fā)酵證實試驗第30頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月多管發(fā)酵法定義：總大腸菌群指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基設(shè)備：顯微鏡第31頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月第32頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月初發(fā)酵試驗：采用乳糖蛋白胨培養(yǎng)液37℃培養(yǎng)24h，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況。平板分離：對陽性管培養(yǎng)物，接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基，觀察菌落特征，并進(jìn)行革蘭氏染色和鏡檢。復(fù)發(fā)酵證實試驗：對典型和可疑菌落，接種于乳糖蛋白胨培養(yǎng)液，進(jìn)行復(fù)發(fā)酵證實試驗.，結(jié)果報告（MPN）：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)所附檢索表報告結(jié)果（MPN—”最可能數(shù)”）。第33頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月產(chǎn)氣初發(fā)酵、復(fù)發(fā)酵試驗結(jié)果第34頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月多管發(fā)酵法結(jié)果大腸菌群在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上的典型菌落特征大腸菌群革蘭氏染色顯微鏡下的形態(tài)第35頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月耐熱大腸菌群多管發(fā)酵法耐熱大腸菌群（thermotoletantColiformOrganisms）：在44～44.5℃下具有與大腸菌群相同發(fā)酵及生物化學(xué)性能的菌群。第36頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月耐熱大腸菌群的測定

1.1基本性質(zhì)培養(yǎng)溫度提高到44～44.5℃，在此條件下仍能生長和發(fā)酵乳糖的菌群。

埃希氏菌屬：糞源特異性耐熱大腸菌群克雷伯菌屬

腸桿菌屬總大腸菌群檸檬酸菌屬其它(陰溝腸桿菌和弗氏檸檬酸桿菌)

注意：耐熱大腸菌在配水系統(tǒng)中是不能繁殖的，除非管網(wǎng)中有充足的營養(yǎng)物質(zhì)（升華需氧量超過10/mgL）,以及管網(wǎng)中沒有余氯。第37頁，課件共41頁，創(chuàng)作于2023年2月耐熱大腸菌群的測定

1.2主要用途埃希氏大腸菌是最準(zhǔn)確和專一的糞便污染指示。耐熱大腸菌的檢出，可認(rèn)為近期水體直接或者間接地受到了糞便污染。注意：GB/5749-2006規(guī)定，如果飲用水檢出總大腸菌群，就必須檢測耐熱大腸菌或者埃希氏大腸菌。第38頁，課