顯微鏡下識(shí)別細(xì)菌污染細(xì)胞培養(yǎng)的污染及控制（二）顯微鏡下識(shí)別細(xì)菌污染細(xì)胞培養(yǎng)的污染及控制（二）1判斷培養(yǎng)基污染的一般經(jīng)驗(yàn)判斷污染的一般經(jīng)驗(yàn)：如果是細(xì)菌污染，應(yīng)該很快培基就渾濁了，常見為明顯或不明顯的成串狀，生長(zhǎng)很快，培養(yǎng)基很快變得似泥沙狀混濁，黑點(diǎn)移動(dòng)速度非?？?/p>

如果是真菌感染，特別是初期污染，在低倍鏡下可以看到小黑點(diǎn)，特別是成團(tuán)的小黑點(diǎn)，要特別注意。如果無(wú)法確定，就換高倍鏡，如果是死細(xì)胞，高倍鏡下就可以分辨，而真菌高倍鏡下仍然是小黑點(diǎn)判斷培養(yǎng)基污染的一般經(jīng)驗(yàn)判斷污染的一般經(jīng)驗(yàn)：如果是細(xì)菌污染，2鑒別判斷事實(shí)上，判斷早期的細(xì)菌污染并不容易。特別是某些細(xì)菌生長(zhǎng)比較緩慢，量比較少時(shí)，容易和細(xì)胞碎片相混淆遇到上述情況有多種鑒別判斷方法，常見的方法及其優(yōu)缺點(diǎn)見下表：鑒別判斷事實(shí)上，判斷早期的細(xì)菌污染并不容易。特別是某些細(xì)菌生3常用鑒別方法的對(duì)比常用方法基本操作優(yōu)缺點(diǎn)持續(xù)培養(yǎng)觀察法把疑似培養(yǎng)物單獨(dú)標(biāo)示出來(lái)，繼續(xù)培養(yǎng)，24或48小時(shí)后再進(jìn)行大體和鏡下的觀察，對(duì)比混濁度變化優(yōu)：穩(wěn)妥、不容易誤判和漏判；缺：耗時(shí)、容易耽誤細(xì)胞換液或傳代以及發(fā)放時(shí)機(jī)取樣培養(yǎng)或涂片法通過無(wú)菌操作取出部分培養(yǎng)物進(jìn)行菌培養(yǎng)，或取出進(jìn)行革蘭氏染色鏡下識(shí)別優(yōu)：客觀、可以識(shí)別某些污染類型，利于排查缺：相對(duì)繁瑣，易在操作中引入新的污染、存在一定的假陽(yáng)性或假陰性直接鏡下識(shí)別法運(yùn)用高倍鏡（400倍）對(duì)疑似污染的培養(yǎng)物進(jìn)行觀察，從黑點(diǎn)的分布、運(yùn)動(dòng)特征、外觀形態(tài)綜合判斷優(yōu)：高效、無(wú)須對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行額外操作缺：需要豐富經(jīng)驗(yàn)，主觀性強(qiáng)，有一定的誤判率常用鑒別方法的對(duì)比常用方法基本操作優(yōu)缺點(diǎn)持續(xù)培養(yǎng)觀察法把疑似4直接鏡下識(shí)別法以上方法往往不是單一運(yùn)用，請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室結(jié)合本地實(shí)際情況綜合應(yīng)用任何方法之目的只有一個(gè)：不讓污染的細(xì)胞流入臨床應(yīng)用注：本幻燈主要介紹直接鏡下識(shí)別法的一些注意事項(xiàng)和提供一些圖例進(jìn)行交流直接鏡下識(shí)別法以上方法往往不是單一運(yùn)用，請(qǐng)實(shí)驗(yàn)室結(jié)合本地實(shí)際5直接鏡下識(shí)別法1、選用40倍物鏡，相差調(diào)到適合400倍觀察的檔位，亮度不要太強(qiáng)或太暗，以便于觀察疑是污染的小黑點(diǎn)2、觀察過程中保持放置顯微鏡的實(shí)驗(yàn)臺(tái)平穩(wěn)，培養(yǎng)物先在載物臺(tái)上靜置片刻后再觀察，期間請(qǐng)勿晃動(dòng)培養(yǎng)物3、觀察中合理應(yīng)用顯微鏡的微調(diào)，隨時(shí)進(jìn)行調(diào)節(jié)，以觀察小黑點(diǎn)不同平面的影像，以便對(duì)小黑點(diǎn)的整體外觀形態(tài)進(jìn)行判定直接鏡下識(shí)別法1、選用40倍物鏡，相差調(diào)到適合400倍觀察的6直接鏡下識(shí)別法4、注意觀察小黑點(diǎn)與細(xì)胞的大小比例，通常細(xì)菌是針尖大小，分布相對(duì)均勻，而細(xì)胞碎片則大小不一；除部分桿菌外，細(xì)菌鏡下呈小圓點(diǎn)狀，可呈鏈狀、串珠狀或團(tuán)簇狀排列5、小黑點(diǎn)的運(yùn)動(dòng)狀態(tài)是該識(shí)別法的關(guān)鍵，一般來(lái)說(shuō)，有鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)劇烈，常見的有大腸桿菌；無(wú)鞭毛的細(xì)菌運(yùn)動(dòng)相對(duì)較慢，但可以在較短時(shí)間內(nèi)游動(dòng)一定距離，而細(xì)胞碎片只做原地的不規(guī)則運(yùn)動(dòng)（布朗運(yùn)動(dòng)）直接鏡下識(shí)別法4、注意觀察小黑點(diǎn)與細(xì)胞的大小比例，通常細(xì)菌是7直接鏡下識(shí)別法經(jīng)驗(yàn)分享：觀察可疑黑點(diǎn)時(shí)，可以在鏡下選擇黑點(diǎn)附近的三個(gè)細(xì)胞或團(tuán)塊形成一個(gè)三角座標(biāo)，觀察可疑黑點(diǎn)的運(yùn)動(dòng)情況，通常如果是細(xì)菌的話，其運(yùn)動(dòng)會(huì)比較劇烈，可能很快就“游”出三角座標(biāo)的范圍，如果是一般的細(xì)胞碎片，通常運(yùn)動(dòng)比較緩慢，不容易離開該三角區(qū)域。（如下圖所示）細(xì)胞

細(xì)胞細(xì)胞可疑黑點(diǎn)直接鏡下識(shí)別法經(jīng)驗(yàn)分享：觀察可疑黑點(diǎn)時(shí)，可以在鏡下選擇黑點(diǎn)附8練習(xí)方法：直接鏡下識(shí)別法使用六孔板或者培養(yǎng)皿，盛少量培養(yǎng)液，再使用干凈棉簽沾染少量外界細(xì)菌與培養(yǎng)液內(nèi)，然后分時(shí)間段進(jìn)行觀察，通常為每隔4~8小時(shí)觀察一次，可觀察到菌量增加的過程注意：上述方法觀察到的微生物較雜，如希望觀察單一細(xì)菌，可對(duì)瓊脂板上的菌落進(jìn)行挑克隆培養(yǎng)觀察。同時(shí)，該練習(xí)方法最好在凈化間以外進(jìn)行，以免污染環(huán)境或培養(yǎng)物練習(xí)方法：直接鏡下識(shí)別法使用六孔板或者培養(yǎng)皿，盛少量培養(yǎng)液，9圖例：未被細(xì)菌污染的貼壁細(xì)胞圖例：未被細(xì)菌污染的貼壁細(xì)胞10圖例：細(xì)菌污染的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)液泥沙樣改變，細(xì)胞皺縮。未見明顯的鏈條樣菌類或長(zhǎng)桿菌。圖例：細(xì)菌污染的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)液泥沙樣改變，細(xì)胞皺縮。未見明顯11圖例：細(xì)菌污染的貼壁細(xì)胞鏈狀細(xì)菌殘留的細(xì)胞圖例：細(xì)菌污染的貼壁細(xì)胞鏈狀細(xì)菌殘留的細(xì)胞12圖例：綠色濾鏡下觀察的細(xì)菌污染圖例：綠色濾鏡下觀察的細(xì)菌污染13圖例：綠色濾鏡下觀察的細(xì)菌污染圖例：綠色濾鏡下觀察的細(xì)菌污染14圖例：綠色濾鏡下觀察的細(xì)菌污染圖例：綠色濾鏡下觀察的細(xì)菌污染15注意事項(xiàng)在現(xiàn)實(shí)工作中，您是否也成看到過類似上面三張圖片的情況？可是在放置繼續(xù)培養(yǎng)后，卻發(fā)現(xiàn)不是污染。事實(shí)上，早期的污染不容易觀察，從圖片中往往不易判斷是細(xì)菌污染還是細(xì)胞碎片。單純鏡下細(xì)菌污染的判斷是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)積累的過程，需要在不斷的練習(xí)過程中找到相應(yīng)的識(shí)別技巧，也要不斷的補(bǔ)充相關(guān)的微生物知識(shí)，才能幫助您有效的辨別是否細(xì)菌污染。如何單純的鏡下觀察無(wú)法判斷，請(qǐng)根據(jù)您實(shí)驗(yàn)室的具體情況，綜合應(yīng)用各種輔助檢測(cè)方法，以確保污染被排除在細(xì)胞發(fā)放之前，保證臨床安全。注意事項(xiàng)在現(xiàn)實(shí)工作中，您是否也成看到過類似上面三張圖片的情況16附1：值得交流的發(fā)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)原則（臍血）1、培養(yǎng)液顏色與平常不一樣的，暫時(shí)不發(fā)，留觀察。出現(xiàn)培養(yǎng)液顏色不尋常的原因可能是：紅細(xì)胞多（紅）；細(xì)胞生長(zhǎng)不良（紅）；微生物污染（混紅或黃）2、細(xì)胞狀態(tài)不同尋常的不發(fā)，留觀察。細(xì)胞狀態(tài)不同尋?？赡苁牵何⑸锪可?，難以辨別出來(lái)，但其毒素已經(jīng)使細(xì)胞形狀發(fā)生改變；病毒或支原體污染，容易無(wú)法觀察，但通過細(xì)胞形態(tài)可以間接判斷其可能性3、細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間太短的不發(fā)。通常為四天以上，培養(yǎng)體系才會(huì)表現(xiàn)出一些較為明顯的特殊性狀附1：值得交流的發(fā)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)原則（臍血）1、培養(yǎng)液顏色與平常不17附2：當(dāng)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞出現(xiàn)污染情況時(shí)，您將采取什么措施進(jìn)行處理？常規(guī)處理指導(dǎo)原則：1、立即封存使用過的物品、耗材2、啟用警示信號(hào)，通知相應(yīng)實(shí)驗(yàn)